PLoS One: hangtompító claudin-11 összefüggésbe hozható a megnövekedett invazív Gyomorrák Cells

absztrakt katalógusa

Háttér katalógusa

A claudinok a membrán fehérjék kritikus szerepet játszanak a tight junction (TJ) kialakulása és funkció. Tagjai claudin gén család már kimutatták, hogy rendellenesen szabályozott, és hogy részt vegyenek a patogenezisében különféle emberi rákos megbetegedések. A jelen tanulmányban azt jelenti, hogy a claudin-11 ( CLDN11 katalógusa) elnémul a gyomorrák via katalógusa hipermetiláció a promoter régióban. Katalógusa

Módszertan /fő eredményei

szintje CLDN11
metiláció és mRNS expressziós mértük primer gyomorrák szövetekben, jóindulatú gyomor- nyálkahártya, és sejtvonalakban a gyomor eredetű kvantitatív metiláció-specifikus PCR-t (qMSP) és kvantitatív reverz transzkriptáz PCR (qRT-PCR), ill. Elemzések páros gyomorrák és szomszédos normál szövetben gyomor kiderült hipermetiláció a CLDN11 katalógusa promoter régió gyomorrák, és ez hipermetiláció szignifikáns korrelációt downregulációját CLDN11 katalógusa kifejezés vs.
normál szövetekben. A CLDN11 katalógusa promoter régiót is hipermetiláltnak minden gyomor vizsgált rákos sejtvonalak képest halhatatlanná normál gyomornyálkahártya-sejtek. Sőt, CLDN11 katalógusa mRNS expressziója fordítottan arányos a metilációs szintje. Kezelése CLDN11 katalógusa -nonexpressing gyomorrák sejtek 5-aza-2'-dezoxicitidin felújított CLDN11 katalógusa kifejezést. Sőt, siRNS-közvetített kiütése CLDN11 katalógusa expresszió normál gyomornyálkahártya-sejtek növelték mozgékonyságát és inváziós. Katalógusa

Következtetések /Jelentés katalógusa

Ezek az adatok arra utalnak, hogy hipermetiláció CLDN11 katalógusa, ami downregulált kifejezés, hozzájárul a gyomor karcinogenezis növelésével sejt mozgékonyságát és inváziós. További megértését a mechanizmusok mögöttes a szerepe a claudin fehérjék gyomor karcinogenezis valószínűleg segít az azonosító az új megközelítések a diagnózis és terápia gyomorrák.

bevezető hivatkozás: Agarwal R, Mori Y, Cheng Y, Jin Z, Olaru AV, Hamilton JP et al. (2009) némító claudin-11 összefüggésbe hozható a megnövekedett invazív gyomorrák sejtek. PLoS ONE 4 (11): e8002. doi: 10,1371 /journal.pone.0008002 katalógusa

Szerkesztő: Fatah Kashanchi, George Washington Egyetem Orvostudományi, Amerikai Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: augusztus 3, 2009; Elfogadva: október 23, 2009; Megjelent: november 24, 2009 katalógusa

Copyright: © 2009 Agarwal et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a munka támogatta az Egyesült Államok Nemzeti egészségügyi Intézete ad CA085069, CA138677 és CA146799 SJ Meltzer. A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

a gyomorrák (GC) továbbra is a második legelterjedtebb oka a rákos halálesetek világszerte. Ez az egyik leghalálosabb rosszindulatú betegségek és a vezető oka a rákos halálesetek a fejlődő országokban, az általános 5 éves túlélési arány 20% alá [1], [2]. Katalógusa

Tanulmányok glükokortikoid és preneoplasztikus prekurzor elváltozások azonosítottak számos genetikai és epigenetikai változások, beleértve a mikroszatellit-instabilitása, pontmutáció, és a veszteség a heterozigótaság (LOH) érintő tumor szupresszor gének (HKT) [3] - [6]. Mindazonáltal a molekuláris patogenezisének GC még nem teljesen tisztázott.

epigenetikai változások rendkívül fontos a rák kifejlődésének és progressziójának [7]. Transzkripciós inaktiválása tumor szupresszor gének keresztül kóros promoter hipermetiláció CpG-szigetek, maradandó géncsendesítéssel, az egyik legfontosabb epigenetikus mechanizmus TSG inaktiválása. Katalógusa

Korábban tanulmány látott napvilágot a promoter hipermetiláció a GC és a humán papillómavírus prekurzorok [ ,,,0],8] - [10]. p16INK4A és p15INK4B az elsők között gének megmutatni hipermetiláció a GC [11]. A csoport és mások később derült hipermetiláció hMLH1 DNS mismatch repair gén GC kiállító gyakori mikroszatellit-instabilitás (MSI-H) [12] - [14]. Azt is kimutatták, hogy hipermetiláció az E-cadherin (Cdh1) gén gyakran előfordul GC [15]. Katalógusa

A kísérleti microarray alapú genomot keresés által végzett csoportunk végzett felfedezni új epigenetikusan hangtompítós gének gyomor carcinogenesis, amely a claudin-11 ( CLDN11 katalógusa), a tight junction (TJ) fehérje, mint potenciális célpont az epigenetikus inaktiválása a gyomorrák (nem közölt adatok). katalógusa

a claudin-11 tartozik a család a claudin fehérjék, amely több mint 23 tagja van. Tagjai claudin család vannak kifejezve erősen szövet-specifikus módon a különböző normál és neoplasztikus szövetekben [16]. Claudinok transzmembrán fehérjék, amelyek döntő szerepet játszanak TJ kialakulását és funkcióját. TJs vannak intercelluláris csomópontok kritikus a paracelluláris oldott anyag, valamint fenntartásában sejt polaritását. Tumor sejtek általánosan mutatnak strukturális és funkcionális hiányosságokat a saját TJs [17].

Az elmúlt években számos tanulmány igazolta, namika claudin fehérjék különböző rák típusok [18], [16]. Több ilyen vizsgálatok során azt találták zavara claudin fehérje expresszió via katalógusa promoter hipermetilációt. Hipermetilációja indukált silencing claudin-7 expresszió korábban beszámoltak mell [19] és a kolorektális [20] karcinómák. A claudin-6 is epigenetikusan hangtompítós emlőrákban [21], míg a claudin -3 és -4 epigenetikusan szabályozott petefészek rákos sejtekben [22], [23]. Katalógusa

A jelenlegi tanulmány azonosítja és jelentéseket, hogy tudásunk először, hogy a CLDN11
promoter régiót hipermetilációja GC szövetekben és sejtvonalakban. Sőt, míg a CLDN11
mRNS expresszálódott az összes elsődleges jóindulatú gyomornyálkahártya szövetekben, valamint immortalizált normál gyomornyálkahártya sejtvonal azt elcsendesült minden GC szövetekben és sejtvonalakban vizsgálni. Érdekes, siRNS-közvetített downregulációját CLDN11 katalógusa CLDN11 katalógusa expresszáló sejtek gyomor is társult rákkal kapcsolatos fenotípusos változásokat, kifejezetten megnövekedett sejtek mozgékonyságát és inváziós. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

sejtvonalak és Klinikai szövetminták katalógusa

halhatatlanná humán normál gyomornyálkahártya-sejtek (HFE145) kaptuk Dr. Duane T. Smoot (Howard Egyetem) és GC sejtvonalak AGS, SIIA, MKN28, KATOIII, és SNU-1 ATCC-től kaptuk. Az összes sejtvonalat tenyésztettünk és fenn RPMI 1640 tápközegben, kiegészítve 10% magzati borjúszérummal és 1% antibiotikum-antimikotikum oldattal (Invitrogen).

Párosított primer gyomor normális és tumoros szövetekben gyűjtöttünk a Johns Hopkins Hospital ( HH). A mintákat lefagyasztottuk közvetlenül a műtét után. Katalógusa

Etikai Nyilatkozat katalógusa

Johns Hopkins University (JHU) Intézményi Review Board (IRB) jóváhagyást kapott valamennyi esetben vontak be a vizsgálatba. Esetekben nyerték JHU sebészeti patológiai alatt JHU IRB által jóváhagyott mentesítési 02-07-19-05e szabály alapján 45 CFR 46,101 (b), amely lemond a megszerzéséhez szükséges követelmények a páciens beleegyezése. Katalógusa

tisztítása és előkészítése A genomi DNS- és össz-RNS

a genomiális DNS-t extraháltunk gyorsfagyasztjuk szövetmintákból vagy sejtvonalak felhasználásával DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen, Valencia, CA) alkalmazásával a gyártó protokollja. Teljes RNS-t extraháljuk Trizol reagens (Invitrogen). Az extrahált DNS-t és RNS-t mennyiségileg egy NanoDrop ND-1000 spektrofotométer (NanoDrop, Wilmington, DE).

Kvantitatív metiiációspeeifikus PCR (qMSP) claudin-11

A genomiális DNS-eket nyert 36 betegminták tartalmazó 18 GC és 18 párosított jóindulatú gyomor nyálkahártya (NS) a szövetek, valamint a különböző gyomor-sejtvonalak, vetettük alá qMSP. qMSP végeztük a korábban leírtak szerint, kisebb módosításokkal [24]. Röviden, biszulfit-kezeiés genomiális DNS-ek segítségével végeztük egy EpiTect biszulfit-kezeiés Kit (Qiagen, Valencia, CA). Egy MSP amplikon és TaqMan próbát kimutatására teljesen metilezett DNS-t úgy terveztük, hogy tartalmaz többszörös CpG helyek az 5'-UTR-régiójában CLDN11
gént. CLDN11 katalógusa specifikus primereket és próba szekvenciák a következők voltak: forward primer 5 'CGCGATTGGTCGGCGCGTTTC 3'; reverz primer 5 'GACGAAAACAACAACGCTACT 3'; TaqMan próbát 5'TCGGAGTCGCGGGGTTTAAAGAG 3 '. CpGenome Universal Denaturált DNS-t (Chemicon International, Temecula, CA) szolgált pozitív kontrollként, és a soros hígításait úgy használtuk, hogy telek egy standard görbe. qMSP a TaqMan® próbát végeztünk egy iQ5 thermal cycler (BioRad, Hercules, CA) alkalmazásával iQ Supermix ( uo.
). Ötven ciklus PCR-amplifikáció-tól 50 ng-hidrogénszulfit-kezelt genomi DNS-t három párhuzamosban hajtjuk végre, a gyártó szerint protokollja. Duplex PCR β-aktin (ACTB) primer és próba szekvenciákat nem tartalmazó CpGs végeztünk normalizálás. A primer és próba szekvenciákat voltak korábban publikált [24]. Normalizált metiláció érték (NMV) a következők szerint határozzuk: NMV = ( CLDN11-S katalógusa / CLDN11-FM katalógusa) /( ACTB-S katalógusa / ACTB -FM katalógusa) * 100, ahol a CLDN11-S katalógusa és CLDN11-FM
képviseli CLDN11 katalógusa metilációs szintje a mintában, és teljesen denaturált DNS, illetve, míg ACTB-S katalógusa és ACTB-FM
megfelelnek az β-aktin katalógusa a mintában, és teljesen denaturált DNS, ill. Teljes genom amplifikált DNS-t (WGA) használtunk egy metilálatlan negatív kontrollként.

kvantitatív reverz transzkripciós-PCR analízis

CLDN11
RT-PCR-fragmentum volt a célja, hogy átfedik egymást egy intron-exon határ kizárása érdekében genomi DNS-t ( g katalógusa DNS) erősítés. Primer szekvenciákat, mint korábban publikált [18]. Egy lépésben QRT-PCR-t végeztünk a korábban leírtak szerint [24], egy QuantiTect SYBRA RT-PCR kit (Qiagen, Valencia, CA), a gyártó szerint protokollja. CLDN11 katalógusa kifejezés normalizáltuk β-aktin katalógusa kifejezést. A teljes RNS-re HFE145 sejtekből használtuk a standard görbe. ( CLDN11-S katalógusa / CLDN11-C katalógusa) /( ACTB-S katalógusa / ACTB-C katalógusa), ahol a CLDN11- S katalógusa és CLDN11-C katalógusa képviseli CLDN11 katalógusa mRNS expressziós szintje a vizsgálati minta és kontroll mRNS, illetve míg a ACTB-S katalógusa és ACTB -C
megfelelnek az β-aktin
expressziós szintek a vizsgálati minta és a kontroll mRNS, ill.

5-aza-2'-dezoxicitidin (5-aza-dC) kezelés

AGS egy GC sejtvonal megnyilvánuló hipermetiláció a CLDN11 katalógusa promoter együtt hiányzik CLDN11 katalógusa mRNS expresszióját. 5-aza-2'-dezoxicitidin (5-aza-dC) kezelésére sejtekkel végeztük a korábban leírtak szerint [24]. Röviden, a GC-sejtvonal AGS (ATCC katalógusszám CRL-1739) beoltjuk sűrűségben 2 × 10 ^{5 sejt /ml-t egy T-75 lombikba. Huszonnégy órával később a sejteket kezeltük 1 mM 5-aza-dC 72 órán át. Media, amely 5-aza-dC helyett frissen készített média minden 24 órában. Azután kinyertük a sejteket teljes RNS kivonása. Összesen RNS AGS sejtek előtt és után az 5-aza-dC kezelés vetettük alá kvantitatív valós idejű RT-PCR analízis.}

kis interferáló RNS Knockdown Kísérletek

CLDN11 katalógusa -specifikus siRNS oligonukleotidokat vásárolt Ambion, Inc. (Austin, Texas). A HFE145 sejtvonal, amely CLDN11 katalógusa pozitív lett kiválasztva, hogy tanulmányozza a hatását a claudin-11 knockdown a migrációs és behatolás tulajdonságait gyomor sejtek. A kísérleteket a korábban leírtak (Agarwal et al. Katalógusa, 2005). A sejteket tenyésztettük, 6 mérőhelyes lemezeken transzfektáltuk siRNS-duplexeket Lipofectamine 2000 (Invitrogen), a gyártó utasításai szerint. Mock-transzfekció és a nem specifikus siRNS-duplexeket alkalmaztunk negatív kontrollként. Sejteket kezeltünk 48 és 72 óra, hogy lehetővé tegye a maximális knockdown, ami után vagy betakarított Western-blot-analízis vagy használt migrációs és behatolás vizsgálatokban.

Western-blot analízis a claudin-11 a gyomor Sejtvonalak

az összefolyó sejttenyészeteket HBSS-sel mostuk (Invitrogen), és teljes sejt lizátumokat készült lízis puffer: 62,5 mmol /l Tris-HCl (pH = 6,8), 10% glicerin, és 2% SDS-t. A fehérje koncentrációját alkalmazásával határoztuk meg bicinchoninsav- (BCA) vizsgálattal kit (Pierce, Rockford, IL). Húsz ng teljes fehérjéket elválasztottuk 10% -ról 20% -os SDS-PAGE-on Tris-glicin géleken (Invitrogen) és polivinilidén-difluorid membránokra (Millipore Corp., Bedford, MA). A membránokat blokkoltuk 5% zsírmentes tejpor, mosott TBST-pufferben, és próbaként anti-claudin-11 antitesttel (Zymed, San Francisco, CA). A blotokat ezután mossuk és inkubáljuk torma-peroxidázzal konjugált szekunder antitesttel (anti-nyúl IgG-vel: 1:10,000; Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ). A kimutatáshoz, kemilumineszcencia végeztük egy fokozott kemilumineszcencia reagenskészlet (Amersham Pharmacia Biotech).

sejtek invázióját és migrációs tesztvizsgálat

invazivitását siRNS-transzfektált sejtek alkalmazásával határoztuk meg Matrigel bevont invázió kamra betétek (24 lyukú-formátumú, 8-um pórusokat, BD Biosciences) alkalmazásával egy módosított Boyden-kamra vizsgálat [25]. A sejteket körülbelül 80% -os összefolyásig és a szérum-éheztetett egy éjszakán át. A vizsgálat napján a sejteket tripszinizáltuk és sejtszámok venni. Mintegy 50.000 sejteket szélesztettünk rá a tetején minden egyes szűrő szérummentes közegben. Azonos térfogatú azonos közegben, amely 20% FCS-t helyeztünk az alsó kamrába ( azaz.
, A jól alatt a szűrő) eljárás egy kemoattraktáns. Vizsgálati lemezeket inkubáltuk 37 ° C-on legfeljebb 48 óra hosszat. Sejtek nem vándorolnak, vagy támadják pórusain keresztül a Transwell betéteket kézzel eltávolítani egy vattacsomót. A sejteket jelen alján a membrán fixáltuk hideg metanollal 10 percig, majd megfestettük 0,01% kristályibolya 20% -os etanolban. 10 perc elteltével inkubálás után a szűrőket alaposan mossuk vízzel és szuszpendáljuk 200 ul 5% -os ecetsav és 5% metanol. Kolorimetrikus leolvasást végzünk OD _{595. A kísérleteket megismételjük legalább háromszor, a három sorozatban minden kísérletben. Annak megállapítására, sejtmigráció, vizsgálatokat végeztünk lényegében a fenti, kivéve, hogy a sejteket szélesztünk tetején bevonat nélküli (Matrigel-mentes) betétekkel.}

Statisztikai elemzés

Statisztikai elemzéseket végeztünk a Student-féle t- -teszt (SPSS 16), a p katalógusa < 0,05 tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. katalógusa

Eredmények és megbeszélés katalógusa

először teszteltük a feltételezést CLDN11
promoter hipermetiláltnak, és ez hipermetiláció fordított arányban van a CLDN11 katalógusa mRNS expressziója primer GC szövetekben. Párosított primer gyomor normális és tumoros szövetekben gyűjtöttünk a Johns Hopkins Hospital (JHH). A mintákat kaptunk közvetlenül a műtét után, és beépülő modul a felhasználásig fagyasztva tároltuk. Csak esetekben kapott tájékoztatáson alapuló beleegyezés által jóváhagyott intézményi Review Board (IRB) vontak be a projektbe. Genomiális DNS kaptuk 36 klinikai mintákból, amely 18 GC és 18 illesztett rákos gyomor nyálkahártya (NS) szövetekben. CLDN11
promóter metilációs szintek ilyen mintákat kvantitatív valós idejű metiláció-specifikus PCR-rel (qMSP). Ábra az 1A megjeleníti a normalizált metiiációs érték (NMV), azaz.
, Az arány a metilezett értéke a CLDN11
promoter régió minden egyes próbadarabot egy teljesen metilezett kontroll DNS-t. CLDN11 katalógusa NM Vs katalógusa szignifikánsan magasabbak voltak a GC példányok, mint a saját illő NS szövetek ( P katalógusa < 0,001). Annak megállapítására, hogy CLDN11 katalógusa promoter hipermetiláció a GC-ben társult elhallgattatása CLDN11 katalógusa kifejezés, CLDN11 katalógusa mRNS szinteket mértünk kvantitatív valós idejű (qRT-PCR) RNS-ek kivont 36 példányok használt metilációs elemzéshez. Amint a 1B, normalizált értékek kifejezése (NEVs) A CLDN11 katalógusa GC példányok szignifikánsan alacsonyabb volt, mint a páros NS minta ( P katalógusa < 0,001). Ez az adat bizonyítja, hogy CLDN11 katalógusa promoter hipermetilációt korrelál a csökkent vagy elhallgattatott CLDN11 katalógusa mRNS expressziója primer GC. Katalógusa

Ezután megvizsgáltuk CLDN11 katalógusa promoter metiláció és a kifejezés a gyomor sejtvonalakban. Halhatatlan humán normál gyomornyálkahártya-sejtek (HFE145) és GC sejtvonalak AGS, SIIA, MKN28, KATOIII és SNU-1 vizsgáltuk. Minden GC vizsgált sejtvonalban (AGS, a SIIA, MKN28, KATOIII, és SNU-1) kimutatták, promoter hipermetilációt mivel nincs metiláció volt megfigyelhető immortalizált normál HFE145 sejtek (2A ábra). CLDN11
mRNS-szinteket alkalmazásával értékeltük QRT-PCR on RNS tisztított sejt vonalak, míg a claudin-11 fehérje expresszióját analizáltuk Western-blottal. Amint azt a 2B ábra, mind az 5 rák vonal nem mutat detektálható expresszióját CLDN11
mRNS vagy fehérje, míg a HFE145 sejtek nyilvánul magas CLDN11
expressziós szintek. Ez a megállapítás megállapítja, hogy CLDN11 katalógusa van összehangoltan hipermetiláltnak és downregulált GC sejtvonalak viszonyítva a normál gyomornyálkahártya-sejtek (NGECs). Katalógusa

A további érvényesítéséhez elhallgattatása CLDN11 katalógusa expresszió hipermetilációt kezeltük a GC sejtvonal AGS a demetilező szer, 5-aza-2-dezoxicitidin (5-aza-DC, 1 uM), a különböző időintervallumokban. Összesen RNS kivont előtt vs.
Kezelés után vetettük alá qRT-PCR CLDN11 katalógusa. Amint az a 3. ábrán látható, minden egyes időpontban, CLDN11
mRNS lett újra expresszálódnak kezeléssel 5-aza-DC, amely megerősíti, hogy CLDN11
elnémítása promoter hipermetiláció AGS GC-sejtek. katalógusa

tagjai claudin fehérje család már szabályozásában részt sejtadhézió, invázió és a migráció a rákos sejtek [25] - [27]. Ezért a következő vizsgáltuk, hogy CLDN11 katalógusa hatások a sejtek mozgékonyságát vagy invazív. HFE145 sejteket, amelyek kifejezik a bőséges CLDN11 katalógusa választottak tanulmányozni hatásait CLDN11 katalógusa kiütése az invazív és migrációs tulajdonságait gyomornyálkahártya-sejtek. Tranziens siRNS transzfekciókat végeztünk CLDN11- katalógusa specifikus siRNS duplex. Transzfekció A CLDN11
-specifikus siRNS-duplexeket hatékonyan elnyomott claudin-11 fehérje szintje által > 90%, míg a kifejezés változatlan maradt mock- vagy kontroll siRNS-kezelt sejtekben (4a ábra). Sejtmozgás és inváziós vizsgálati eljárást végeztük siRNS-transzfektált sejtek egy módosított Boyden-kamra vizsgálati rendszer [25]. Érdekes módon, ahogy az a 4B és 4C, gátlása CLDN11
expresszió HFE145 sejtekben jelentősen növelte a migrációs és invazív potenciálok ezen sejtek, ill.

A jelenlegi tanulmány tehát megerősíti azt a hipotézist, hogy a CLDN11 katalógusa, a tight junction fehérje, elnémul a GC-n keresztül promoter hipermetilációt és ezek az adatok alátámasztják bevonásával CLDN11 katalógusa a kontroll a GC sejtek invázióját és a migráció. katalógusa

Promoter hipermetiláció ismert, hogy a kapcsolódó transzkripciós silencing bizonyos gének. DNS metiláció zavarhatja kötő transzkripciós faktorok, amelynek kötőhelyek tartalmaznak CpG. A TFSEARCH szoftver program, mi beolvasott a CLDN11 katalógusa szekvencia találták hipermetiláltnak gyomorrák szövetek és sejtvonalak, pl katalógusa., A qMSP fragmentum (-104-től + 4 bázisok képest a transzkripciós starthely használatával CLDN11 katalógusa). Ez a vizsgálat azonosított feltételezett kötőhelyek Sp1 és GATA-1 és GATA-2. Korábbi tanulmányok kimutatták, hogy hipermetiláció promoter DNS hozzájárul elhallgattatása CLDN3 katalógusa és CLDN4 katalógusa petefészek sejtvonalak, részben via katalógusa metiláció által indukált zavarok kötődésének Sp1 annak rokon kötőhely (22, 23). Ezen kívül, a tagok a GATA család már kimutatták, hogy a pozitív szabályozói CLDN11
transzkripciós [28]. További vizsgálatok jelenleg indokolt annak értékelésére, hogy hipermetiláció ilyen oldalak zavarja a kötelező transzkripciós faktorok, és hogy az ilyen zavar befolyásolhatja CLDN11 katalógusa géntranszkripcióban. Katalógusa

A tumorsejteket általában mutatnak strukturális és funkcionális hiányosságokat azok TJs [17]. Ezeket a hiányosságokat társított veszteséggel polaritás és differenciálódását. További fontos kapocs a TJs és a rák veszteség TJ integritás, aminek következtében szivárgást vagy szállítása pro tumorképző anyagok (például növekedési faktorok vagy tápanyagok) a fejlődő tumorsejt primordia, elősegítve a tumor növekedését [29]. Ezen túlmenően, a veszteség a polaritás, a differenciálódást és tapadó tulajdonságok társulnak károsodott TJ funkció rákos kritikus lehet megszerzése egy áttétes fenotípust [30]. Tanulmányok javasolták, hogy anomáliák TJ kapcsolódó fehérjék képviselhet epithelialis-mesenchymalis átmenet (EMT), és ezzel megváltoztatja a invazivitását és motilitását rákos sejteket.

modulációk expresszióját TJ-asszociált fehérjék, különösen a claudin fehérjék, van kimutatták számos rák. A legújabb tanulmányok az általunk és mások kimutatták változások claudin fehérje szabályozása különböző epiteliális rákok [18]. Tagjai claudin géncsalád vannak kifejezve erősen szövet-specifikus, valamint egy nagyon fejlődési szakaszban-specifikus, módon. Ezen felül, attól függően, hogy a rák típusától, a kifejezés a claudin fehérjék lehetnek serkentett vagy downregulált a rákos sejtekben. Például számos claudin fehérjék felülszabályozott vastagbél-, petefészek-, hasnyálmirigy- és prosztatarák, míg néhány downregulált emlőrák és a fej és a nyak rákos [16], [18]

Tanulmányok azt korábban jeleztük expressziójának megváltozása profilok tagjainak claudin család társítható GC. Soros elemzése génexpresszió (SAGE) azonosította a CLDN18 katalógusa gén downregulált a GC rendelkező bél fenotípus [31]. A CLDN23 katalógusa gént is downregulált a bél típusú GC [32]. Ezzel szemben, Cunningham et al.
Jelentett CLDN4 katalógusa kifejezést kell növelni intestinalis metaplasia és gyomornyálkahártya dysplasia, azonosító ez a gén mint marker GC prekurzor elváltozásokban [33]. A jelenlegi vizsgálat során azt találtuk, CLDN11 katalógusa kifejezést kell downregulált vagy hallgatásra GC via katalógusa hipermetiláció a promoter régióban. Sőt, azt találtuk, hogy ellentétben CLDN18 katalógusa és CLDN23 katalógusa, CLDN11 katalógusa kifejezést downregulált GC beteg példányok, valamint a sejtvonalak, függetlenül attól, hogy a diffúz vs .
bél altípus.

claudin-11, más néven oligodendrocita-specifikus fehérje, először azonosították, hogy specifikusan expresszálódik a tight junction szálak oligodendrociták az agyban és a Sertoli-sejtek a patkányok és egerek [ ,,,0],34], [35]. Veszteség a claudin-11 expresszió, ami zavar a TJ gát társul neurológiai és reprodukciós hiány [36]. Egy friss tanulmány szerint túltermelése és mislocalization a CLDN11 katalógusa véréből-here gát Sertoli sejtek társítható hererák intraepithelialis neoplasia férfiaknál [37]. Adatok a jelenlegi tanulmány megállapítja, hogy CLDN11
expresszálódik normális gyomor- szövetek és halhatatlanná NGECs. Azonban a teljes funkció normál gyomor, valamint a gyomor karcinogenezis homályos marad. Katalógusa

A kísérlet, hogy vizsgálja meg a lehetséges részvételét CLDN11 katalógusa GC megvizsgáltuk fenotípusos változások kapcsolódó elhallgattatása CLDN11 katalógusa kifejezést CLDN11- katalógusa kifejező gyomornyálkahártya-sejtek (HFE145). Nagyon érdekes, hogy az siRNS-közvetített kiütése CLDN11 katalógusa megnövelte a sejtek mozgékonyságát és inváziós. Katalógusa

A korábbi vizsgálatok azt jelentette, a rák-specifikus fenotípusos változásokat társítható modulációt a claudin expresszió különböző ráktípusok . Túlexpressziója claudin-3 és claudin-4 fehérjék a petefészek rákos sejtvonalakban megnövekszik invázió ezen sejtek által [25]. A vastagbélrák, fokozott expressziója claudin-1 leírták, és a változások a claudin-1 expresszió fejtenek jelentős hatást a növekedés-xenograftot hordozó, tumorok és áttétek csecsemőmirigy nélküli csupasz egerekben [27]. Másrészt, a claudin-7 downregulation emlőrákban már összefüggésbe hozható a megnövekedett celluláris discohesion és képes a mellrák sejtek terjesztésére [19]. Emellett kísérletek hasnyálmirigy sejtvonalak azt mutatta, hogy kifejeződése claudin-4 vezet csökkent invazív, tumorgenézisre és metasztatikus, hogy e sejtek [38]. Ennek okait eltérések hatását jelenleg nem tisztázott, de kapcsolatban lehet a szövet-specifikus különbségeket claudin funkció vagy akár variációk válaszul különböző sejtvonalak. Nyilvánvaló, hogy tagjai a claudin család Ismert, hogy egy szövet-specifikus módon, és gyakorolhassák eltérő hatását. Katalógusa

Bár az utóbbi években világossá vált, hogy a TJs és TJ-asszociált fehérjék kiterjedt és változatos funkcionális és fiziológiai tevékenységek normál és rákos állapotok molekuláris mechanizmusa e tevékenységek továbbra sem tisztázott. TJs kifinomult intercelluláris készülékek képesek a toborzás jelátviteli fehérjék, ezáltal szabályozza a különböző sejtes folyamatokat, beleértve a sejtek növekedésének, differenciálódásának és a tumorgenezis [39], [40]. Claudin fehérjék közvetlenül társítani diszkrét jelátviteli utak kölcsönhatásban jelző molekulák, mint az atipikus protein kináz C és a Rho fehérjék, valamint más PDZ domént tartalmazó fehérjéket. A petefészekrák, claudinok módosíthatja tumor invázió szabályozása által MMP aktivitás [25].

Összefoglalva, az adatokat a jelenlegi tanulmány azonosítani CLDN11 katalógusa, mint a cél epigenetikus módosítás, valamint egy ígéretes biomarker gyomorrák korai felismerés, diagnózis és terápia. Ezek az eredmények azt sugallják, bevonása CLDN11 katalógusa downregulációját a carcinogenesisben via katalógusa előmozdításához sejtek invázióját és mozgékonyságát. A mechanizmus ennek a jelenségnek is képezi további vizsgálat. Katalógusa

Köszönetnyilvánítás katalógusa

Köszönöm Dr. Duane T Smootnak az ő nagylelkű ajándéka HFE145 sejteket. Katalógusa

• PLOS Genetics: Mir-218 Gátolja invázió és metasztázis gyomorrák megcélozva Robo1 receptor
• PLOS Genetics: onkogén útvonal kombinációk Tippelje klinikai prognózisa gyomorrákban