PLOS NËMMEN: Silencing vun Claudin-11 Ass mat Geklomm Invasiveness vun Gastric Cancer Cells

Wat VerfÜgung

Background VerfÜgung

Claudins sinn Membran Proteinen déi kritesch Rollen an knapper Potaschbierg (TJ) Opstellung Leeschtung an Funktioun. Membere vun der claudin Gentherapie Famill hunn jo bewisen ginn aberrantly reglementéiert gin, an zu der pathogenesis vun verschiddenen Mënsch Cancers fir matzemaachen. Am Moment studéieren, Rapport mir dass claudin-11 ( CLDN11 VerfÜgung) ass an gastric Kriibs entsat via VerfÜgung hypermethylation vun hirem Promoteur Regioun. VerfÜgung

Methodik /Principal effektiv

Niveauen vun CLDN11 VerfÜgung methylation an mRNA Ausdrock am primäre gastric Kriibs Stoffer, noncancerous gastric mucosae, an Zell Linnen vun gastric Urspronk benotzt grouss methylation-spezifesch Hinnen alleguer (qMSP) a grouss ëmgedréint transcriptase-Hinnen alleguer gemooss goufen (qRT-Hinnen alleguer), bzw.. Analysen vun vläit gastric Cancers an bascht normal gastric Stoffer réischt hypermethylation vun der CLDN11 VerfÜgung Promoteur Regioun an gastric Cancers, an dëst hypermethylation war vill mat downregulation vun CLDN11 VerfÜgung Ausdrock vs. soll
normal Stoffer. D' CLDN11 VerfÜgung Promoteur Regioun gouf och an all gastric Kriibs Zell Linnen hypermethylated getest famill ze och normal gastric epithelial Zellen. Desweideren, CLDN11 VerfÜgung mRNA Ausdrock war inversely mat sengem methylation Niveau soll. Traitement vun CLDN11 VerfÜgung -nonexpressing gastric Kriibs Zellen mat 5-AZA-2'-deoxycytidine restauréiert CLDN11 VerfÜgung Ausdrock. Desweideren, siRNA-mediated knockdown vun CLDN11 VerfÜgung Ausdrock zu normal gastric epithelial Zellen fräi hir motility an invasiveness. VerfÜgung

Konklusiounen /Grousses VerfÜgung

Dës Donnéeë hindeit, datt hypermethylation vun CLDN11 VerfÜgung, fir downregulated Ausdrock Virwaat, dréit zu gastric carcinogenesis vun bewosst motility an invasiveness waarden. Eng weider Verständnis vun de Mechanismen d'Roll vun claudin Proteinen am gastric carcinogenesis Basisdaten wäert an d'Identifikatioun vun Roman wahrscheinlech Hëllef Approche fir Diagnos an Therapie vun gastric Kriibs VerfÜgung

Fro:. Agarwal R, Mori Y, Cheng Y, Jin Z, Olaru AV, Hamilton JP, et al. (2009) Silencing vun Claudin-11 Ass mat Geklomm Invasiveness vun Gastric Cancer BTS Associéierten. PLoS NËMMEN 4 (11): e8002. Doi: 10.1371 /journal.pone.0008002 VerfÜgung

Redakter: Fatah Kashanchi, George Washington University School vun der Medezin, Vereenegt Staate vun Amerika VerfÜgung

Arnaque: August 3, 2009; Akzeptéiert: 23 Oktober 2009; Publizéiert: 24. November 2009 VerfÜgung

Copyright: © 2009 Agarwal et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung

Funding:. Dës Aarbecht vun den USA National Instituter Gesondheetsminister Subventioune CA085069, CA138677 an CA146799 zu SJ Meltzer ënnerstëtzt gouf. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung

Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung

Aféierung VerfÜgung

Gastric Kriibs (GC) bleift d'zweet Équipe-gemeinsam Ursaach vum Kriibs Doudesfäll weltwäit. Et ass eent vun de meescht spektakulärer malignancies an eng Virreiderroll Ursaach vum Kriibs Doudesfäll an den Entwécklungslänner, mat insgesamt 5-Joer Iwwerliewe Taux ënnert 20% [1], [2]. VerfÜgung

Ënnersich vun GCs an hir preneoplastic Virleefer [6] - lesions hunn e puer genetesch a epigenetic hire Restaurant, dorënner microsatellite Instabilitéit, Punkt kennen, an Verloscht vun heterozygosity (Loh) Auswierkungen entholl suppressor Genen (TSGs) [3] identifizéiert. Trotzdem, ass de molekulare pathogenesis vun GC nach incompletely verstan. VerfÜgung

Epigenetic hire Restaurant sinn extrem wichteg an Kriibs Entwécklung an Werdegang [7]. Transcriptional inactivation vun entholl suppressor Genen via aberrant Promoteur hypermethylation vun CpG Inselen, dauernd permanent Gentherapie silencing, ass eng grouss epigenetic Mechanismus vun wënnt inactivation. VerfÜgung

Virdrun, hunn Studien gouf op Promoteur hypermethylation zu GCs an hir premalignant Etüd publizéiert [ ,,,0],8] - [10]. p16INK4A an p15INK4B sech ënnert den éischten Genen hypermethylation zu GCs ze weisen [11]. Eis Grupp an anerer duerno hypermethylation vun der Gentherapie hMLH1 DNA fonnt Reparatur entdeckt an GCs suer- heefeg microsatellite Instabilitéit (MSI-H) [12] - [14]. Mir weisen awer och, datt hypermethylation vun der E-cadherin (CDH1) Gentherapie dacks zu GCs existeiert [15]. VerfÜgung

A pilot microarray-baséiert Nepgen-grouss Sich vun eisem Grupp gehaal, standing Roman epigenetically entsat Genen an ze entdecken gastric carcinogenesis, identifizéiert claudin-11 ( CLDN11 VerfÜgung), enger knapper Potaschbierg (TJ) FAQ, wéi e Potential Zilscheif vun epigenetic inactivation zu gastric Cancers (Engels Daten). VerfÜgung

Claudin-11 gehéiert zu der Famill vun claudin Proteinen, déi méi wéi 23 Memberen enthält. Membere vun der claudin Famill sinn an engem héich Otemschwieregkeeten-spezifesch Manéier zu engem verschiddenste normal an neoplastic Stoffer ausgedréckt [16]. Claudins sinn transmembrane Proteinen déi wichteg Roll vun TJ Équipe a Funktioun Leeschtung. TJs sinn intercellular junctions kritesch an der paracellular Transport vun solutes, wéi och zu Zell Polaritéit ënnerhalen. Entholl Zellen Toast Collectioun strukturell a funktionell Mängel an hir TJs [17]. VerfÜgung

An de leschte Joren, eng ganz Rei vu Studien hunn aberrant Ausdrock bewisen vu Proteinen zu verschiddenen Kriibs Zorte claudin [18], [16]. E puer vun dësen Studien fonnt dysregulation vun claudin FAQ Ausdrock via VerfÜgung Promoteur hypermethylation. Hypermethylation-entschlof silencing vun claudin-7 Ausdrock war virdrun zu Broscht gemellt [19] an colorectal [20] carcinomas. Claudin-6 ass och zu Broscht Kriibs [21] epigenetically entsat, iwwerdeems claudins -3 an -4 zu spillt Kriibs Zellen epigenetically regulariséiert ginn [22], [23]. VerfÜgung

Déi aktuell Etude identifizéiren an Reportagen, fir eist Wëssen fir d'éischte Kéier, datt d' CLDN11 VerfÜgung Promoteur Regioun am GC Stoffer an Zell Linnen hypermethylated ass. Desweideren, iwwerdeems CLDN11 VerfÜgung mRNA war an all Primärschoul noncancerous gastric mucosal Stoffer, wéi och zu engem och normal gastric epithelial Zell Linn ausgedréckt, ass et zu all GC Stoffer an Zell Linnen iwwerpréift entsat war. Spannen, siRNA-mediated downregulation vun CLDN11 VerfÜgung zu CLDN11 VerfÜgung -expressing gastric Zellen och mat Kriibs-Zesummenhang phenotypic Ännerungen verbonne war, speziell fräi Zell motility an invasiveness. VerfÜgung

spontan a Methoden VerfÜgung

Zell zesummeféieren a Séminairen Ray uplanzen VerfÜgung

och mënschlech normal gastric epithelial Zellen (HFE145) sech vum Dr. Duane T. Smoot (Howard University) an GC Zell Linnen AGS kritt, SIIA, MKN28, KATOIII, an SNU-1 waren aus ATCC kritt. All Zell Strecken cultured an RPMI 1640 mëttelfristeg ergänzt mat 10% An et Bovine serum an 1% Antibiotike-antimycotic Léisung (Invitrogen). VerfÜgung

vläit Primärschoul gastric normal an entholl haten Stoffer an der Johns Hopkins Spidol gesammelt goufen ( JHH). Uplanzen ware virgezunnen-gefruer direkt no resection. VerfÜgung

IFLA- breakpoint VerfÜgung

Johns Hopkins Universitéit (JHU) Finanzpolitiker Kritik Board (IRB) penibel fir all déi Fäll kritt huet an der Etude abegraff. Fäll goufen aus JHU chirurgesch wirklech ënner JHU IRB-guttgeheescht Schachtelprivileg 02-07-19-05e ënner Regel kritt 45 CFR 46.101 (b), déi Viraussetzunge fir Erhaalen Patient Zoustëmmung waives. VerfÜgung

Offäll an Virbereedunge Frankräich DNA an Total RNS VerfÜgung

Frankräich DNA ofgebaut gouf aus virgezunnen-gefruer Otemschwieregkeeten Echantillon oder Zell Linnen mat engem DNeasy Blood & Ray Kit (QIAGEN, Valencia, CA) no de Protokoll d'Hiersteller. Total RNS war mat Trizol reagent (Invitrogen) ofgebaut. Quecksëlwer DNA an RNS sech mat engem NanoDrop ND-1000 laachen Spectrophotometer (NanoDrop, Mëtt, DE). VerfÜgung

Chemeschen Methylation-Spezifësch Hinnen alleguer (qMSP) fir Claudin-11 VerfÜgung

Frankräich DNAs aus 36 kritt Patient Echantillon vu 18 GC an 18 reagéiert noncancerous Mo. mucosal (NS) Stoffer, wéi och aus verschiddenen gastric Zell Linnen, sech ze qMSP ënnerworf. qMSP war ëmschriwwen standing virdrun, mat klengen Ännerungen [24]. An dowéinst, bisulfite Behandlung vu Frankräich DNAs war standing eng EpiTect Bisulfite Prefabrizéierten Kit (QIAGEN, Valencia, CA) benotzt. An MSP amplicon an TaqMan Studiebäihëllefe z'entdecken komplett methylated DNA Multiple CpG Siten ze gehéieren entworf goufen an der 5'-UTR Regioun vun CLDN11 VerfÜgung Gentherapie. CLDN11 VerfÜgung -specific primers an Studiebäihëllefe e Message ginn huet: no primer 5 'CGCGATTGGTCGGCGCGTTTC 3'; ëmgekéierte primer 5 'GACGAAAACAACAACGCTACT 3'; TaqMan Studiebäihëllefe 5'TCGGAGTCGCGGGGTTTAAAGAG 3 '. CpGenome Universal Methylated DNA (Chemicon International, Temecula, CA) fiert als eng positiv Kontroll a Serien dilutions vun et benotzt huet e Liewesniveau rop ze Komplott. qMSP mat TaqMan Studiebäihëllefe waren op en iQ5 thermesch LS (BioRad, Hercules, CA) benotzt IQ Supermix gesuergt ( ibid. VerfÜgung). Fofzeg Zykle vun Hinnen alleguer amplification mat 50 NG vun bisulfite-behandelt Frankräich DNA ugefaange sech an triplicate gesuergt, no de Protokoll d'Hiersteller. Duplex Hinnen alleguer mat β-actin (ACTB) primer an Studiebäihëllefe e Message mat kee CpGs sech fir normalization gesuergt. D'primer an Studiebäihëllefe benotzt Message sech virdrun als publizéiert [24]. Normalized methylation Wäert (NMV) ass definéiert als Konsequenz: NMV = ( CLDN11-S VerfÜgung / CLDN11-FM VerfÜgung) /( ACTB-S VerfÜgung / ACTB -FM VerfÜgung) * 100, wou CLDN11-S VerfÜgung a CLDN11-FM VerfÜgung bedeiten CLDN11 VerfÜgung methylation Niveauen an der Prouf a voll methylated DNAs, respektiv, iwwerdeems ACTB-S VerfÜgung a ACTB-FM zu β-actin VerfÜgung an der Prouf a voll methylated DNAs sëlwecht VerfÜgung, bzw.. Ganzt-Nepgen Implikatioune DNA (WGA) war als unmethylated negativ Kontroll benotzt. VerfÜgung

Chemeschen Réckproduktioun Transkriptioun-Hinnen alleguer Analys VerfÜgung

Den CLDN11 VerfÜgung RT-Hinnen alleguer amplicon entworf gouf zu iwwerlageren eng intron-Exon Grenz fir Frankräich DNA vir ( g VerfÜgung DNA) amplification. Primer Message huet den publizéiert virdrun [18]. One-Schrëtt qRT-Hinnen alleguer Leeschtung war wéi virdru beschriwwen [24], mat Hëllef vun engem Quantitect SYBRA RT-Hinnen alleguer Kit (QIAGEN, Valencia, CA), laut dem Protokoll d'Hiersteller. CLDN11 VerfÜgung Ausdrock war normalized zu β VerfÜgung -actin Ausdrock. Total RNS aus HFE145 Zellen war fir de Standard Kéier benotzt. ( CLDN11-S VerfÜgung / CLDN11-C VerfÜgung) /( ACTB-S VerfÜgung / ACTB-C VerfÜgung), wou CLDN11- S VerfÜgung a CLDN11-C VerfÜgung vertrieden CLDN11 VerfÜgung mRNA Ausdrock Niveauen am Test Prouf a Kontroll mRNAs, respektiv, iwwerdeems ACTB-S VerfÜgung a ACTB -C VerfÜgung sëlwecht β-actin VerfÜgung Ausdrock Niveauen am Test Prouf a Kontroll mRNAs, bzw.. VerfÜgung

5-December-2'-Deoxycytidine (5-December-DC) Prefabrizéierten VerfÜgung

AGS ass eng Linn GC Zell manifesting hypermethylation vun der CLDN11 VerfÜgung Promoteur verzweifelt feelen CLDN11 VerfÜgung mRNA Ausdrock. 5-AZA-2'-deoxycitidine (5-AZA-DC) Behandlung vun Zellen war virdrun ëmschriwwen standing [24]. An dowéinst war de GC Zell Linn AGS (ATCC Katalog Nummer loosen-1739) op enger Dicht rakommen vun 2 × 10 5 Zellen /ml vun engem T-75 flask. Twenty-véier Stonne méi spéit, huet Zellen fir 72 Stonnen mat 1 μM 5-AZA-DC behandelt. Media 5-AZA-DC wouvun war all 24 Stonnen mam frësch preparéiert Medien ersat. Zellen sech dann fir total RNS Extraktioun recoltéiert. Total RNAs aus AGS Zellen virun an no 5-AZA-DC Behandlung ze grouss ass real-Zäit RT-Hinnen alleguer Analyse ënnerworf waren. VerfÜgung

klenger Interfering RNS Knockdown Experimenter VerfÜgung

CLDN11 VerfÜgung -specific siRNA oligos sech aus Ambion Galaxy (Austin, Suerge) kaaft. D'HFE145 Zell Linn, déi ass CLDN11 VerfÜgung positiv, war den Effet vun claudin-11 knockdown op Wanderung an Invasioun Eegeschafte vun gastric Zellen ze studéieren ausgewielt. Experiment ëmschriwwen gehaal virdrun (Agarwal et al. VerfÜgung, 2005). Zellen cultured zu 6-gutt Placke waren mat siRNA duplexes transfected benotzt LipofectAMINE 2000 (Invitrogen), d'Uweisungen d'Hiersteller folgenden. Mierkt-transfections an nonspecific siRNA duplexes sech als negativ Kontrollen benotzt. Zellen sech fir 48 bis 72 Stonnen behandelt maximal knockdown ze erlaben, no deem si entweder fir Western blot Analyse gesammelt goufen oder fir Migratioun a Invasioun assays benotzt. VerfÜgung

Western Blot Analys vun Claudin-11 zu Gastric Zell zesummeféieren

Spuenien wär Zell Kulturen sech mat HBSS (Invitrogen) a ganz Zell lysates zou sech mat lysis gefiermt feieren. Protein Konzentratioun war mat engem bicinchoninic Seier (BCA) assay Kit (Pierce, Rockford, IL) alles. Zwanzeg micrograms vun insgesamt Proteinen sech vun 10% bis 20% SDS-PAGE op Tris-Glycine gels (Invitrogen) an transferéiert ze polyvinylidene difluoride Schläimhait (Millipore Corp., Bedford, MA) getrennt. D'Schläimhait sech mat 5% nonfat dréchen Mëllech blockéiert, an TBST gefiermt gewäsch, a mat enger Anti-claudin-11 antibody (Zymed, San Francisco, CA) Komedie. (:; Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ 1:10,000 anti-Kanéngchen IgG) Blots sech dann zu horseradish peroxidase-conjugated Secondaire antibody gewäsch a incubated. Fir ze erkennen, gouf chemiluminescence duerchgefouert eng verstäerkte chemiluminescence Kit (Amersham Pharmacia Biotech) benotzt. VerfÜgung

Zell Missiounen a Migratioun Assay VerfÜgung

Invasiveness vun siRNA-transfected Zellen sech war Matrigel-Beschichtete Invasioun Chambre Text benotzt (24-Meter-Format mat 8-μm Pore, BD Biosciences) eng geännert Boyden Chambre assay benotzt [25]. Zellen sech zu ronn 80% confluency cultured an serum-gehongert Iwwernuechtung. Op den Dag vun der assay, goufen Zellen trypsinized a liewensfäeg Zell zielt geholl. Ronn 50.000 Zellen sech plated op der uewen op all vun all filter am serum-gratis mëttelfristeg. Eng gläichberechtegt Volume vun der selwechter mëttelfristeg 20% ​​FCS wouvun am ënneschten Chamber gesat huet ( i.e. VerfÜgung, déi och ënnert den filter) als chemoattractant ze handelen. Assay Placke waren op 37 ° C incubated fir bis zu 48 Stonnen. Zellen, datt duerch d'Pore vun der Text goufen Transwell opgeholl oder violéieren manuell mat engem Koteng Swab geläscht rauszesichen. Zellen präsent bei der leschter vun der Membran sech zu kal methanol fir 10 min fix an duerno mat 0,01% glaskloer mauve zu 20% Ethanol Kierchefënster. No 10 min incubation, huet de Filter Hënn am Waasser an Sursis an 200 μL vun 5% acetic Seier an 5% methanol gewäsch. Colorimetric Moossungen sech um sel _{595 geholl. Experiment op d'mannst dräi Mol widderholl, mat triplicates zu all Experimenter. Ze bewäerten Zell Migratioun, assays sech am Fong wéi uewe gemaach, ausser datt Zellen op widdert uncoated (Matrigel-gratis) Text plated goufen. VerfÜgung}

statistique Analys VerfÜgung

statistique analyséiert goufen benotzt Student d't gesuergt Azeton (SPSS, Versioun 16), mat p VerfÜgung &Si besteet;. 0,05 statistesch relevant als VerfÜgung

Resultater an Diskussioun VerfÜgung

Mir getest éischt eis Hypothes, datt déi CLDN11 VerfÜgung Promoteur ass hypermethylated an datt dës hypermethylation deemolegt Weltbild inversely mat CLDN11 VerfÜgung mRNA Ausdrock am primäre GC Stoffer. Vläit Primärschoul gastric normal an entholl Stoffer sech an der Johns Hopkins Spidol (JHH) gesammelt. Uplanzen sech direkt no resection kritt an virgezunnen-gefruer bis benotzen. Nëmmen Fäll mat Awëllegung kritt wéi déi vun de Finanzpolitiker Kritik Board (IRB) abruecht huet zu dësem Projet mat abegraff. Frankräich DNAs sech aus 36 Medeziner ugedait kritt, mat 18 GC an 18 reagéiert noncancerous gastric mucosal (NS) Stoffer. CLDN11 VerfÜgung Promoteur methylation Niveauen an dës Echantillon waren benotzt grouss real-Zäit methylation-spezifesch Hinnen alleguer (qMSP) analyséieren. Figur 1A weist de normalized methylation Wäert (NMV), i.e. VerfÜgung, d'Verhältnis vun methylated Wäert vun der CLDN11 VerfÜgung Promoteur Regioun an all specimen fir eng voll methylated Kontroll DNA. CLDN11 VerfÜgung NM géint VerfÜgung am GC uplanzen bedeitend méi héich waren, wéi am passend NS Stoffer ( P VerfÜgung &Si besteet; 0.001). Ze evaluéieren, ob CLDN11 VerfÜgung Promoteur hypermethylation zu GCs verbonne war mat silencing vun CLDN11 VerfÜgung Ausdrock, CLDN11 VerfÜgung mRNA Niveauen benotzt grouss real-Zäit gemooss (qRT-Hinnen alleguer) an RNAs aus dem 36. uplanzen benotzt fir methylation Analyse ofgebaut. Wéi hien zu kengem 1B, normalized Ausdrock Wäerter (NEVs) vun CLDN11 VerfÜgung am GC uplanzen sech wesentlech méi niddreg wéi an vläit NS Echantillon ( P VerfÜgung &Si besteet; 0.001). Dës Donnéeë féiert dass CLDN11 VerfÜgung Promoteur hypermethylation deemolegt Weltbild mat manner oder entsat CLDN11 VerfÜgung mRNA Ausdrock am primäre GCs. VerfÜgung

Next, mir bewäert CLDN11 VerfÜgung Promoteur methylation an Ausdrock vun gastric Zell Linnen. Och mënschlech normal gastric epithelial Zellen (HFE145) an GC Zell Linnen AGS, SIIA, MKN28, KATOIII, an SNU-1 studéiert. All GC Zell Linnen getest (AGS, SIIA, MKN28, KATOIII, an SNU-1) Gewise Promoteur hypermethylation hierkommen kee methylation an och normal HFE145 Zellen (Dorënner 2A) observéiert gouf. CLDN11 VerfÜgung mRNA Niveauen benotzt qRT-Hinnen alleguer op RNAs zurzäit vun der Zell Linnen sidd, iwwerdeems claudin-11 FAQ Ausdrock vun Western blotting analyséiert huet. Als zu Dorënner 2B gewisen, all 5 Kriibs Linnen Schatzkummer kee Magnéitfeld Ausdrock vun CLDN11 VerfÜgung mRNA oder FAQ, iwwerdeems HFE145 Zellen héich CLDN11 VerfÜgung Ausdrock Niveauen offenbart. Dëst brengt féiert dass CLDN11 VerfÜgung ass am GC Zell Linnen relativ zu normal gastric epithelial Zellen (NGECs). VerfÜgung

Fir weider validéieren silencing vun CLDN11 VerfÜgung Ausdrock coordinately hypermethylated an downregulated vun hypermethylation, mir behandelt de GC Zell Linn AGS mat der demethylating Agent, 5-AZA-2-deoxycytidine (5-AZA-DC, 1 μM), fir Zäit Intervalle verännerlech. Total RNAs ofgebaut virum vs. VerfÜgung der Behandlung ze qRT-Hinnen alleguer deen sech fir CLDN11 VerfÜgung. Wéi kann an Dorënner 3, an all Kéier Punkt ze gesi sinn, CLDN11 VerfÜgung mRNA gouf mat 5-AZA-DC op Behandlung du-ausgedréckt, confirméiert, datt CLDN11 VerfÜgung vum Promoteur hypermethylation zu AGS entsat ass . [27] - GC Zellen VerfÜgung

Memberen vun der claudin FAQ Famill goufen an der Regulatioun vun Zell Haftung, Iwwerfall a Migratioun vun Kriibs Zellen [25] agebonne. Dofir, mir nächst propagéieren ob CLDN11 VerfÜgung Afloss Zell motility oder invasiveness. HFE145 Zellen, déi räich auszedrécken CLDN11 VerfÜgung, sech an dëse Match gaangen fir ze studéieren Auswierkunge vun CLDN11 VerfÜgung knockdown op der invasiv an Opbau Eegeschafte vun gastric epithelial Zellen. Flüchteg siRNA transfections benotzt duerchgefouert CLDN11- VerfÜgung spezifesch siRNA duplexes. Transfection mat CLDN11 VerfÜgung -specific siRNA duplexes effizient claudin-11 FAQ Niveauen repressed vun > 90% hierkommen Ausdrock onverännert bliwwen an mock- oder siRNA-behandelt Zellen (Dorënner 4A) Kontroll. Zell motility an Invasioun assays sech op siRNA-transfected Zellen gehaal engem geännert Boyden-Chambre assay System benotzt [25]. Spannen, den am Sauerdall 4B an 4C gewisen, inhibition vun CLDN11 VerfÜgung Ausdrock vun HFE145 Zellen geklomme den Opbau an invasiv Potenzialer vun deenen Zellen, bzw.. VerfÜgung

Déi aktuell Etude also d'Hypothes dé CLDN11 VerfÜgung, enger knapper menaarbecht FAQ, ass am GC via Promoteur hypermethylation entsat, an dës Donnéeën Ënnerstëtzung der Bedeelegung vun CLDN11 VerfÜgung an der Kontroll vun GC Zell Invasioun an Migratioun. VerfÜgung

Promoter hypermethylation ass bekannt mat transcriptional silencing vu bestëmmte Genen verbonne ginn. DNA methylation kann mat verbindlechen vun Transkriptiouns Faktoren hir obligatoresch Siten enthale CpG dinucleotides Amëschung. D 'TFSEARCH Software Programm, mir gescannt der CLDN11 VerfÜgung Haaptrei fonnt an gastric Kriibs Stoffer an Zell Linnen hypermethylated gin, dh VerfÜgung., De qMSP amplicon (-104 bis +4 Base famill ze der transcriptional Start Site fir CLDN11 VerfÜgung). Dëst Scanner putative bindend Siten fir Sp1 an Gata-1 an Gata-2 identifizéiert. Virdrun Etuden hunn dat hypermethylation vum Promoteur DNA dréit zu silencing vun dës CLDN3 VerfÜgung a CLDN4 VerfÜgung zu spillt Zell Linnen, am Kader via VerfÜgung methylation-entschlof Stéierungen bindend vun Sp1 fir seng cognate bindend Site (22, 23). Ausserdeem goufen Membere vun der Gata Famill dës positiv Reglementatioun vun CLDN11 VerfÜgung Transkriptiouns [28] gin. Weider Studien sinn hëllt elo ze diskutéieren, ob hypermethylation vun deenen Siten mat der bindend vun Transkriptiouns Faktoren interferes, a wéi esou Stéierungen Afloss kann CLDN11 VerfÜgung Gentherapie Transkriptiouns. VerfÜgung

entholl Zellen typesch Collectioun strukturell a funktionell Mängel an hir TJs [17]. Dës Mängel si mat engem Verloscht vun Polaritéit, an dat assoziéiert. Anere wichtege Lien tëscht TJs a Kriibs ass eng Perte vun TJ Integritéit, mat konsequent Auswee oder Transport vun de pro-tumorigenic Matièren (wéi Wuesstem Faktoren oder nährstoffaarme) an entholl Zell primordia Entwécklungslänner, entholl Wuesstem förderen [29]. Zousätzlech, de Verloscht vun Polaritéit, dat, an Kondom Eegeschafte mat leider TJ Funktioun vun Kriibs verbonne kann an duerno eng metastatic phenotype [30] kritesch ginn. Etuden hu proposéiert dass UCI TJ-verbonne Proteinen epithelial-mesenchymal Transitioun (EMT) vertriede kënnen, an esou d'invasiveness an motility vun Kriibs Zellen änneren. VerfÜgung

Modulations an Ausdrock vun TJ-verbonne Proteinen, besonnesch claudin Proteinen, hunn schonn zu enger Rei vun Cancers gewisen. Rezent Studie vun eis an anerer hunn hire Restaurant zu claudin FAQ Regulatioun vun verschiddenen epithelial Cancers dës [18]. Membere vun der claudin Gentherapie Famill sinn an engem héich Otemschwieregkeeten-spezifesch, souwéi eng ganz Entwécklungsphase Etapp-spezifesch, Manéier ausgedréckt. Zousätzlech, je Kriibs Typ, kann de Begrëff vun claudin Proteinen entweder upregulated oder zu Kriibs Zellen downregulated ginn. Zum Beispill, sinn e puer claudin Proteinen vun Colon, spillt, pancreatic an Aarbecht Cancers upregulated, während e puer vun Broscht Kriibs a Chef an den Hals Cancers downregulated sinn [16], [18] VerfÜgung

Ënnersich virdrun gemellt Ännerungen am Ausdrock Profiler vu Membere vun der claudin Famill mam GC gin assoziéiert. Serial Analyse vun der Gentherapie Ausdrock (Salbei) identifizéiert der CLDN18 VerfÜgung Gentherapie wéi zu GCs downregulated eng intestinal phenotype ass: [31]. D' CLDN23 VerfÜgung Gentherapie ass och zu intestinal-Typ GCs downregulated [32]. Ëmgedréit, Cunningham et al. Gemellt VerfÜgung CLDN4 VerfÜgung Ausdrock vun intestinal metaplasia an gastric epithelial dysplasia fräi ze ginn, dat Gentherapie als Bissau vum GC Virleefer lesions Erkenntnesser [33]. An der aktueller Etude, fonnt mir CLDN11 VerfÜgung Ausdrock via VerfÜgung hypermethylation vun hirem Promoteur Regioun am GC downregulated oder entsat gin. Desweideren, fonnt mir dass Géigesaatz CLDN18 VerfÜgung a CLDN23 VerfÜgung, CLDN11 VerfÜgung Ausdrock war am GC Patient uplanzen souwéi zu Zell Linnen downregulated, onofhängeg vun diffusen vs VerfÜgung. intestinal subtype. VerfÜgung

Claudin-11, och als oligodendrocyte-spezifesch FAQ bekannt, war éischt identifizéiert speziell an der knapper menaarbecht strands vun oligodendrocytes am Gehir, an zu Sertoli Zellen vun deër an Mais ausgedréckt gin [ ,,,0],34], [35]. Verloscht vun claudin-11 Ausdrock, fir Stéierungen vun der Barrière TJ Virwaat, ass mat neurologësch an reproduktive Defiziter verbonne [36]. Eng rezent Etude confirméiert overexpression an mislocalization vun CLDN11 VerfÜgung aus dem Blutt-testis Barrière zu Sertoli Zellen mat testicular intraepithelial neoplasia zu Männer [37] verbonne ginn. Daten an der aktueller Etude féiert dass CLDN11 VerfÜgung ass zu normal gastric Stoffer ausgedréckt an och NGECs. Allerdéngs, hir komplett Funktiounen am normal Mo wéi och zu gastric carcinogenesis bleiwen onkloer. VerfÜgung

An engem Versuch de méiglech Abannung vun beschen CLDN11 VerfÜgung am GC, studéiert mir phenotypic Verännerungen, verbonne mat silencing vun CLDN11 VerfÜgung Ausdrock vun CLDN11- VerfÜgung ausdrécken gastric epithelial Zellen (HFE145). Ganz gespaant, siRNA-mediated knockdown vun CLDN11 VerfÜgung schéinen fräi Zell motility an Invasioun. VerfÜgung

virdrun Studien hunn Kriibs-spezifesch phenotypic Ännerungen am Rapport mat modulations zu claudin Ausdrock vun verschiddenen Kriibs Zorte verbonne ginn . Overexpression vun claudin-3 an claudin-4 Proteinen am spillt Kriibs Zell Linnen Resultater am fräi Invasioun vun deenen Zellen [25]. An Colon Kriibs, fräi Meenungsäusserung vun claudin-1 gemellt gouf, an Ännerungen am Ausdrock claudin-1 bedeitendst Auswierkungen op de Wuesstem vun xenografted erhéijen an Investitiounen an athymic Sauna Mais [27] noutwänneg. Op der aner Hand, huet claudin-7 downregulation zu Broscht Kriibs gouf mat méi bewosst discohesion an der Fähegkeet vun Broscht Kriibs Zellen verbonne zu Weidervermëttlung [19]. Zousätzlech, zougedréckt Experimenter zu pancreatic Zell Linnen déi Ausdrock vun claudin-4 bis reduzéiert invasiveness féiert, tumorigenicity, an metastatic Potential vun deenen Zellen [38]. D'Grënn fir dës Vigel zu Effekt sinn op weideres keng kloer, mä vläicht ze Otemschwieregkeeten-spezifesch Differenzen an claudin Funktioun oder souguer zu de Variatiounen vun Äntwert vu verschiddene Zell Linnen Zesummenhang ginn. Kloer, si Memberen vun der claudin Famill bekannt an enger Otemschwieregkeeten-spezifesch Manéier ausgedréckt gin an Duden Effekter Übung kann. VerfÜgung

Obwuel an de leschte Joeren huet et kloer ginn, dass TJs an TJ-verbonne Proteinen hunn extensiv an diversen funktionell a Fro gestallt Aktivitéiten zu normal an kriibserreegend Konditiounen, molekulare Mechanismen dës Aktivitéiten Basisdaten bleiwen onkloer. TJs sinn mechanesch intercellular apparatuses kapabel zousätzlech sécher Proteinen, doduerch verschidde bewosst Prozesser dorënner Zell Wuesstem, dat Regulatioun, an tumorigenesis [39], [40]. Claudin Proteinen Associé direkt mat diskret Signal transduction Weeër duerch mat sécher Molekülle, wéi atypical FAQ kinase C an Rho Proteinen, wéi och mat anere PDZ Domain-haltege Proteinen proposéiert. Am spillt Kriibs, MMP Aktivitéit claudins entholl Invasioun Reform vun Regulatioun [25]. VerfÜgung

Am Resumé, Daten aus der aktueller Etude z'identifizéieren CLDN11 VerfÜgung als Zil vun epigenetic Modifikatioun, souwéi eng villverspriechend uweist fir gastric Kriibs fréi ze erkennen, Diagnos an Therapie. Dës Conclusiounen proposéiere och Abannung vun CLDN11 VerfÜgung downregulation zu carcinogenesis via VerfÜgung Promotioun vun Zell Invasioun an motility. D'Mechanisme fir dëst Phänomen ënnerleien weider Enquête. VerfÜgung

Arbeschterlidder VerfÜgung

Mir Merci Dr. Duane T Smoot fir seng generéis Cadeau vun HFE145 Zellen. VerfÜgung

• PLOS Genetik: Mir-218 bremst Missiounen an Metastasen vun Gastric Cancer vun gezielt Robo1 Receptor
• PLOS Genetik: Oncogenic Passerelle Kombinatioune virauszesoen Séminairen hätt an Gastric Cancer