PLOS ONE: silenciamento de Claudina-11 está associado ao aumento Invasividade de câncer gástrico Cells

Abstract

Fundo

claudinas são proteínas da membrana que desempenham papéis críticos na junção formação apertada (TJ) e função. Os membros da família de genes claudina têm demonstrado ser regulada de forma aberrante, e a participar na patogénese de vários cancros humanos. No presente estudo, relatamos que claudin-11 ( CLDN11
) é silenciada no câncer gástrico via
hipermetilação da sua região promotora.

Metodologia /Apreciação principais

Os níveis de CLDN11
metilação e expressão de mRNA foram medidos em tecidos primários de câncer gástrico, mucosa gástrica não cancerosos, e linhas celulares de origem gástrica utilizando PCR quantitativo específico-metilação (qMSP) e quantitativa da transcriptase reversa-PCR (qRT-PCR), respectivamente. As análises dos cancros gástricos emparelhados e tecidos gástricos normais adjacentes hipermetilação revelada da região promotora CLDN11
em cancros gástricos, e este hipermetilação foi significativamente correlacionada com a regulação negativa do expressão CLDN11
vs
tecidos normais. O CLDN11 e região promotor foi também hipermetilado em todas as linhas celulares de cancro gástrico testados em relação às células epiteliais gástricas normais imortalizadas. Além disso, CLDN11
expressão de mRNA foi inversamente correlacionado com o seu nível de metilação. Tratamento de CLDN11
-nonexpressing células cancerosas gástricas com 5-aza-2'-desoxicitidina restaurado CLDN11
expressão. knockdown Além disso, siRNA mediada por expressão CLDN11
em células epiteliais gástricas normais aumentaram sua motilidade e invasão.

Conclusões /Significado

Estes dados sugerem que a hipermetilação de CLDN11
, levando a expressão reprimidos, contribui para carcinogênese gástrica através do aumento da motilidade celular e invasão. Uma melhor compreensão dos mecanismos subjacentes ao papel da Claudina proteínas na carcinogênese gástrica provavelmente ajudará na identificação de novas abordagens para diagnóstico e terapia do câncer gástrico

Citation:. Agarwal R, Mori Y, Cheng Y, Jin Z, Olaru AV, Hamilton JP, et ai. (2009) Silenciamento de Claudina-11 está associado ao aumento invasão das células neoplásicas gástrica. PLoS ONE 4 (11): e8002. doi: 10.1371 /journal.pone.0008002

editor: Fatah Kashanchi, George Escola de Medicina da Universidade de Washington, Estados Unidos da América

Recebido: 03 de agosto de 2009; Aceito: 23 de outubro de 2009; Publicação: 24 de novembro de 2009

Direitos de autor: © 2009 Agarwal et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado pelos Estados Unidos Institutos Nacionais de Saúde concede CA085069, CA138677 e CA146799 a Meltzer SJ. Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer gástrico (GC) continua a ser a segunda causa mais comum de morte por câncer no mundo todo. É uma das neoplasias mais letais e uma das principais causas de morte por câncer nos países em desenvolvimento, com taxas de sobrevida em 5 anos em geral abaixo de 20% [1], [2].

Estudos de GCs e seu precursor pr�neopl�ica lesões identificaram várias alterações genéticas e epigenéticas, incluindo instabilidade de microssatélites, mutações pontuais, e perda de heterozigosidade (LOH) que afeta os genes supressores de tumor (ETG) [3] - [6]. No entanto, a patogênese molecular de GC ainda não é completamente compreendida.

alterações epigenéticas são extremamente importantes no desenvolvimento e progressão do câncer [7]. inactivação transcricional de genes supressores de tumor via hipermetilação do promotor aberrante de ilhas CpG, fazendo com que o silenciamento do gene permanente, é um importante mecanismo epigenético de TSG inativação.

Anteriormente, estudos têm sido publicados sobre a hipermetilação do promotor em GCs e seus precursores pré-malignas [ ,,,0],8] - [10]. p16INK4a e p15INK4B estavam entre os primeiros genes para mostrar hipermetilação em GCs [11]. O nosso grupo e outros posteriormente descobriu hipermetilação do gene de reparo incompatível DNA hMLH1 em GCs exibindo instabilidade freqüente de microssatélites (MSI-H) [12] - [14]. Nós também mostrou que a hipermetilação do gene da caderina-E (CDH1) ocorre freqüentemente em GCs [15].

Uma pesquisa do genoma baseado em microarray piloto realizado pelo nosso grupo, realizado para descobrir novos genes silenciados epigenetically em carcinogênese gástrica, identificado claudin-11 ( CLDN11
), uma proteína apertado junção (TJ), como um alvo potencial de inativação epigenética em cancros gástricos (dados não publicados).

claudina-11 pertence para a família de proteínas claudina, que contém mais de 23 membros. Os membros da família claudina são expressas de maneira altamente específica do tecido numa variedade de tecidos normais e neoplásicos [16]. Claudinas são proteínas transmembranares que desempenham papéis cruciais na formação e função TJ. TJs junções intercelulares são críticos para o transporte paracelular de solutos, bem como na manutenção da polaridade celular. As células tumorais comumente apresentam deficiências estruturais e funcionais em sua TJs [17].

Nos últimos anos, vários estudos têm demonstrado expressão aberrante de Claudina proteínas em vários tipos de câncer [18], [16]. Vários destes estudos encontraram desregulação da expressão da proteína claudina via
hipermetilação do promotor. silenciamento induzido por hipermetilação da claudina-7 expressão foi previamente relatada em cancros da mama [19] e [20] colorectal carcinomas. Claudina-6 também é epigenetically silenciada no cancro da mama [21], enquanto claudinas -3 e -4 são epigenetically regulada em células de cancro do ovário [22], [23].

A corrente identifica estudos e relatórios, a nosso conhecimento, pela primeira vez, que o CLDN11 e região promotor é hipermetilado em tecidos GC e linhas celulares. Além disso, enquanto CLDN11
ARNm foi expressa em todos os tecidos da mucosa gástrica não cancerosos primários, bem como de uma linha normal, gástrico imortalizada de células epiteliais, foi silenciada em todos os tecidos e linhas celulares de GC examinados. downregulation Curiosamente, siRNA mediada por CLDN11 Online em CLDN11
-expressing células gástricas também foi associada com alterações fenotípicas relacionadas ao câncer, especificamente aumento da motilidade celular e invasão.

Materiais e Métodos

Linhas de células e tecidos Clínica amostras

células normais humanas imortalizadas gástricas epiteliais (HFE145) foram obtidos a partir de Dr. Duane T. Smoot (Universidade Howard) e GC linhas celulares AGS, SIIA, MKN28, KATOIII, e SNU-1 foram obtidas da ATCC. Todas as linhas celulares foram cultivadas e mantidas em meio RPMI 1640 suplementado com 10% de soro fetal de bovino e solução de antibiótico-antimicótico a 1% (Invitrogen).

emparelhados tecidos normais e de tumor gástrico primários foram recolhidos no Johns Hopkins Hospital ( JHH). Os espécimes foram snap-congelados imediatamente após a ressecção.

Ética Declaração

Johns Hopkins University (JHU) Institutional Review Board (IRB) aprovação foi obtida para todos os casos incluídos no estudo. Os casos foram obtidos a partir de JHU patologia cirúrgica sob 02-07-19-05e isenção JHU IRB-aprovado ao abrigo da regra 45 CFR 46,101 (b), que renuncia os requisitos para a obtenção de consentimento do paciente.

Purificação e preparação de DNA genômico O ARN total e

O ADN genómico foi extraído de amostras de tecido ou de linhas de células utilizando um DNeasy Blood &snap-congelado; Kit de tecido (Qiagen, Valencia, CA) de acordo com o protocolo do fabricante. O ARN total foi extraído com o reagente de Trizol (Invitrogen). Extraiu-se ADN e ARN foram quantificados usando um NanoDrop ND-1000 Spectrophotometer (NanoDrop, Wilmington, DE).

quantitativa metilação-PCR específica (qMSP) para Claudina-11

DNAs genómicos obtidos a partir de 36 amostras de paciente, que compreende 18 GC e 18 não canceroso estômago mucosas tecidos emparelhados (NS), bem como a partir de várias linhas de células gástricas, foram submetidos a qMSP. qMSP foi realizada como descrito anteriormente, com modificações de menor importância [24]. Em resumo, o tratamento com bissulfito de DNAs genómicos foi realizada utilizando um Kit de bissulfito Tratamento EpiTect (Qiagen, Valencia, CA). Um amplicon MSP e sonda TaqMan para detectar DNA completamente metilado foram projetados para incluir vários locais CpG na região 5'-UTR do gene CLDN11
. CLDN11
iniciadores espec�icos e sequências de sondas utilizadas foram: iniciador directo 5 'CGCGATTGGTCGGCGCGTTTC 3'; iniciador de sentido reverso 5 'GACGAAAACAACAACGCTACT 3'; TaqMan sonda 5'TCGGAGTCGCGGGGTTTAAAGAG 3 '. CpGenome Universal Methylated DNA (Chemicon International, Temecula, CA) serviu como um controlo positivo, e as diluições em série de que foram utilizados para traçar uma curva padrão. qMSP com sonda TaqMan foram realizadas num termociclador IQ5 (BioRad, Hercules, CA), utilizando o IQ Supermix ( ibid.
). Cinquenta ciclos de amplificação por PCR a partir de 50 ng de ADN genómico tratado com bissulfito foram realizadas em triplicado, de acordo com o protocolo do fabricante. Duplex PCR com sequências β-actina (ACTB) Iniciador e Sonda contendo CpG não foram realizados para normalização. As sequências dos iniciadores e das sondas utilizadas foram como publicado anteriormente [24]. valor metilação normalizada (NMV) foi definida da seguinte forma: NMV = ( CLDN11-S
/ CLDN11-FM
) /( ACTB-S
/ ACTB -FM
) * 100, onde CLDN11-S Comprar e CLDN11-FM
representam CLDN11
níveis de metilação na amostra e totalmente DNAs metilados, respectivamente, enquanto ACTB-S Comprar e ACTB-FM
correspondem a β-actina
na amostra e DNAs totalmente metilados, respectivamente. Todo o genoma DNA amplificado (WGA) foi usado como um controle negativo não metilado.

quantitativa transcrição reversa-PCR Análise

O CLDN11
amplicon RT-PCR foi projetado para se sobrepor uma fronteira intrão-exão, de modo a excluir ADN genómico ( g de ADN
) amplificação. As sequências dos iniciadores foram como publicado anteriormente [18]. Um passo de qRT-PCR foi realizada como descrito anteriormente [24], utilizando um kit de Quantitect Sybra RT-PCR (Qiagen, Valencia, CA), de acordo com o protocolo do fabricante. CLDN11
expressão foi normalizado para β
actina expressão. O ARN total a partir de células HFE145 foi utilizada para a curva padrão. ( CLDN11-S
/ CLDN11-C
) /( ACTB-S
/ ACTB-C
), onde CLDN11- S Comprar e CLDN11-C
representam CLDN11
níveis de expressão de mRNA na amostra de teste e controle mRNAs, respectivamente, enquanto ACTB-S
e ACTB -C
correspondem a os níveis de expressão
beta-actina na amostra de teste e controle mRNAs, respectivamente.

5-aza-2'-desoxicitidina (5-Aza-dC) Tratamento

AGS é uma linha de células GC manifestando hipermetilação do CLDN11
promotor em conjunto com CLDN11
expressão ausente mRNA. 5-aza-2'-desoxicitidina (5-aza-dC) tratamento das células foi realizada como descrito anteriormente [24]. Em resumo, a linha de células de GC AGS (ATCC número de catálogo CRL-1739) foi semeada a uma densidade de 2 × 10 ^{5 culas /ml num frasco T-75. Vinte e quatro horas mais tarde, as células foram tratadas com 1? M de 5-aza-dC durante 72 horas. Meios contendo 5-aza-dC foi substituído com meio recém-preparado em cada 24 horas. As células foram então colhidas para extracção de RNA total. Total de RNAs das células AGS antes e após tratamento com 5-aza-dC foram submetidas a análise em tempo real RT-PCR quantitativo.}

Experimentos pequeno RNA de interferência Knockdown

CLDN11
Os oligos de ARNip espec�icos foram adquiridos da Ambion, Inc. (Austin, TX). A linha de células HFE145, que é CLDN11
positivo, foi selecionado para estudar o efeito da claudina-11 knockdown na migração e invasão propriedades das células gástricas. As experiências foram realizadas como descrito anteriormente (Agarwal et ai.
, 2005). As células cultivadas em placas de 6 poços foram transfectadas com o ARNic em cadeia dupla utilizando Lipofectamine 2000 (Invitrogen), seguindo as instruções do fabricante. Mock-transfecções e os ARNic em cadeia dupla não específicos foram utilizados como controlos negativos. As células foram tratadas durante 48 a 72 horas para permitir a máxima knockdown, após o que foram colhidas, quer por análise de Western blot, ou utilizadas para ensaios de migração e invasão.

Análise Western Blot de Claudina-11 em linhas de células gástricas

culturas de células confluentes foram lavadas com HBSS (Invitrogen) e os lisados ​​celulares totais foram feitas utilizando tampão de lise: 62,5 mmol /L de Tris-HCl (pH 6,8), glicerol a 10%, e 2% de SDS. A concentração de proteína foi determinada utilizando um kit de ensaio de ácido bicinconínico (BCA) (Pierce, Rockford, IL). Vinte microgramas de proteínas totais foram separadas por 10% a 20% de SDS-PAGE em géis de Tris-Glicina (Invitrogen) e transferidas para membranas de difluoreto de polivinilideno (Millipore Corp., Bedford, MA). As membranas foram bloqueadas com 5% de leite em pó magro, lavadas em tampão TBST, e sondadas com um anti-claudina-11 anticorpo (Zymed, San Francisco, CA). As manchas foram então lavadas e incubadas em anticorpo secundário conjugado com peroxidase de rábano (anti-IgG de coelho: 1:10,000; Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ). Para a detecção, por quimioluminescência foi realizada utilizando um kit de quimioluminescência aumentada (Amersham Pharmacia Biotech).

Migração e invasão celular Ensaio

invasividade das células de siRNA-transfectadas foi determinada utilizando inserções câmara de invasão de Matrigel-revestidas (24-well-formato com poros de 8 ^ m, BD Biosciences) utilizando um ensaio de câmara de Boyden modificado [25]. As células foram cultivadas a cerca de 80% de confluência e durante a noite privadas de soro. No dia do ensaio, as células foram tripsinizadas e as contagens de células viáveis ​​tomadas. Aproximadamente 50000 células foram plaqueadas sobre a parte superior de cada de cada filtro em meio isento de soro. Um volume igual do mesmo meio contendo 20% de FCS foi colocado na câmara inferior ( i.
, O bem abaixo do filtro) para agir como um quimioatractor. As placas de ensaio foram incubadas a 37 ° C durante até 48 horas. As células que não migraram ou invadem através dos poros das inserções Transwell foram removidos manualmente com um cotonete. As células presentes na parte inferior da membrana foram fixadas em metanol frio durante 10 min e em seguida coradas com 0,01% de violeta cristal em 20% de etanol. Após 10 min de incubação, os filtros foram lavados em água e suspenso em 200 ul de ácido acético a 5% e 5% de metanol. leituras colorimétricas foram tomadas no OD _{595. As experiências foram repetidas pelo menos três vezes, com triplicados em cada experiência. Para avaliar a migração de células, ensaios foram realizados essencialmente como acima, excepto que as células foram colocadas em cima de inserções não revestidos (Matrigel-free).}

Análise Estatística

As análises estatísticas foram realizadas utilizando t de Student -test (SPSS, versão 16), com o p
. < 0,05 considerado estatisticamente significativo

resultados e Discussão

em primeiro lugar, testou a nossa hipótese de que o CLDN11
promotor é hipermetilado e que esta hipermetilação correlaciona inversamente com a CLDN11
expressão de mRNA em tecidos GC primários. Emparelhados tecidos normais e tumorais gástricas primários foram coletados no Hospital Johns Hopkins (JHH). As amostras foram obtidas imediatamente após a ressecção e snap-congelados até à sua utilização. Apenas os casos obtidos com o consentimento informado aprovado pelo Institutional Review Board (IRB) foram incluídos neste projecto. Os ADN genómicos foram obtidos a partir de 36 amostras clínicas, compreendendo 18 GC e 18 tecidos da mucosa gástrica emparelhados não cancerosos (NS). CLDN11
níveis de metilação do promotor nestas amostras foram analisadas utilizando PCR em tempo real quantitativo específico-metilação (qMSP). A Figura 1A mostra o valor metilação normalizada (NMV), i.
, A razão entre o valor metilado do CLDN11 e região promotora em cada amostra a um DNA de controle totalmente metilado. CLDN11
NM Vs
foram significativamente maiores nas amostras de GC do que nos seus correspondentes tecidos NS ( P Art < 0,001). Para avaliar se CLDN11
hipermetilação do promotor em GCs foi associada com silenciamento de CLDN11
expressão, CLDN11
níveis de mRNA foram medidos usando quantitativo em tempo real (qRT-PCR) em RNAs extraídos a partir das 36 amostras utilizadas para a análise de metilação. Como demonstrado na Figura 1B, valores de expressão normalizados (NEVs) de CLDN11
em amostras de GC foram significativamente menores do que em amostras NS emparelhados ( P Art < 0,001). Estes dados estabelece que CLDN11
hipermetilação do promotor correlaciona-se com CLDN11
expressão do mRNA diminuída ou silenciados em GCs primário.

Em seguida, avaliamos CLDN11
metilação do promotor e expressão em linhas de células gástricas. células imortalizadas humanas normais gástricas epiteliais (HFE145) e linhas celulares GC AGS, SIIA, MKN28, KATOIII e SNU-1 foram estudadas. Todas as linhas celulares testadas (GC AGS, SIIA, MKN28, KATOIII, e SNU-1) demonstraram a hipermetilação do promotor, enquanto que a metilação não foi observada em células imortalizadas HFE145 normais (Figura 2A). CLDN11
níveis de ARNm foram avaliados por meio de qRT-PCR em ARN purificado a partir de linhas de células, enquanto claudina-11 expressão da proteína foi analisada por Western blotting. Tal como mostrado na Figura 2B, todas as linhas de cancro 5 exibiu nenhuma expressão detectável de CLDN11
ARNm ou proteína, enquanto que as células que se manifesta HFE145 elevados CLDN11
níveis de expressão. Essa descoberta estabelece que CLDN11
é coordenadamente hipermetilado e reprimidos em GC linhas celulares em relação às células epiteliais gástricas normais (NGECs).

Para validar ainda mais silenciamento de CLDN11
expressão por hipermetilação, tratámos a linha celular GC AGS com o agente de desmetilação, 5-aza-2-desoxicitidina (5-aza-dC, 1 uM), para diferentes intervalos de tempo. Total de RNAs extraídos antes vs.
Após o tratamento foram submetidos a qRT-PCR para CLDN11
. Como pode ser visto na Figura 3, em cada ponto de tempo, CLDN11
mRNA ficou re-expressos aquando do tratamento com 5-aza-dC, confirmando que CLDN11
é silenciado por hipermetilação do promotor em AGS células. GC

os membros da família de proteínas claudina têm sido implicados na regulação da adesão celular, invasão e migração de células cancerosas [25] - [27]. Portanto, o próximo investigou se CLDN11
motilidade celular influências ou invasão. HFE145 células, que expressam abundante CLDN11
, foram escolhidos para estudar os efeitos de CLDN11
knockdown sobre as propriedades invasivas e migratórias de células epiteliais gástricas. transfecções siRNA transitórios foram realizados utilizando CLDN11-
ARNic em cadeia dupla específicas. A transfecção com CLDN11
espec�ico ARNic em cadeia dupla de forma eficiente reprimidos claudina-11 os níveis de proteína em > 90%, enquanto que a expressão permaneceu inalterada em mock- ou células de controlo tratadas com siRNA (Figura 4A). Os ensaios de motilidade celular e invasão foram conduzidos em células transfectadas com ARNsi utilizando um sistema de ensaio Boyden modificada câmara-[25]. Curiosamente, tal como mostrado nas Figuras 4B e 4C, a inibição de expressão CLDN11
em HFE145 células aumentou significativamente os potenciais migratórios e invasivos destas células, respectivamente.

O presente estudo confirma por conseguinte a hipótese de que CLDN11
, uma proteína de junção apertado, é silenciada no GC via hipermetilação do promotor, e esses dados suportam o envolvimento de CLDN11
no controle da invasão de células GC e migração.

hipermetilação promotor é conhecida por estar associada com o silenciamento transcricional de determinados genes. metilação de ADN pode interferir com a ligação de factores de transcrição cuja locais de ligação contêm dinucleótidos CpG. Usando o programa de software TFSEARCH, que examinou o CLDN11
sequência encontrada a ser hipermetilado em tecidos com câncer gástrico e linhas celulares, ou seja
., O amplicon qMSP (-104 a quatro bases em relação ao o local de início da transcrição para o CLDN11
). Essa verificação identificados sítios de ligação putativos para o SP1 e GATA-1 e GATA-2. Estudos anteriores demonstraram que a hipermetilação do DNA promotor contribui para silenciamento de CLDN3
e CLDN4
em linhas celulares de ovário, em parte via
perturbação induzida por metilação de ligação de Sp1 ao seu local de ligação cognato (22, 23). Além disso, os membros da família GATA foram mostrados para ser reguladores positivos da CLDN11
transcrição [28]. Mais estudos são agora necessários para avaliar se hipermetilação desses sites interfere com a ligação de fatores de transcrição, e como tal perturbação pode influenciar CLDN11
transcrição do gene.

As células tumorais normalmente exibem deficiências estruturais e funcionais na sua TJs [17]. Estas deficiências são associados com uma perda de polaridade e diferenciação. Outra ligação importante entre TJs e cancro é uma perda de integridade de TJ, com consequente fuga ou o transporte de substâncias pró-tumorigénicas (tais como factores de crescimento ou nutrientes) no desenvolvimento de primórdios de células tumorais, promovendo o crescimento de tumores [29]. Além disso, a perda de polaridade, diferenciação, e propriedades adesivas associadas com a função prejudicada em TJ câncer pode ser crítica na aquisição de um fenótipo metastático [30]. Os estudos sugerem que as alterações nas proteínas TJ-associados podem representar a transição epitelial-mesenquimal (EMT), mudando assim a invasividade e motilidade das células cancerosas.

modulações na expressão de proteínas TJ-associados, particularmente proteínas, têm claudina foi demonstrado em vários cancros. Estudos recentes realizados por nós e outros demonstraram alterações na regulação da proteína claudina em vários cancros epiteliais [18]. Os membros da família de genes claudina são expressas de maneira altamente específica do tecido, bem como uma fase muito específicas do desenvolvimento,. Além disso, dependendo do tipo de cancro, a expressão de proteínas claudina pode ser regulada positivamente ou regulados negativamente em células cancerosas. Por exemplo, várias proteínas claudina são regulados positivamente em cancros do cólon, ovário, pâncreas e próstata, enquanto alguns são reprimidos no câncer de mama e câncer de cabeça e pescoço [16], [18]

Estudos têm relatado anteriormente mudanças na expressão perfis de membros da família claudina para ser associado com GC. Análise serial da expressão gênica (SAGE) identificou o CLDN18
gene como reprimidos em GCs que possuem um fenótipo intestinal [31]. O gene CLDN23
também é regulada negativamente em GCs do tipo intestinal [32]. Por outro lado, Cunningham et ai. Relataram
CLDN4
expressão seja aumentada em metaplasia intestinal e displasia epitelial gástrica, identificar este gene como marcador de lesões precursoras GC [33]. No presente estudo, encontramos CLDN11
expressão a ser reprimidos ou silenciados em GC via
hipermetilação da sua região promotora. Além disso, verificou-se que, ao contrário CLDN18
e CLDN23
, CLDN11
expressão foi regulada negativamente em amostras GC paciente, bem como em linhas de células, independentemente da difusa vs .
subtipo intestinal.

Claudina-11, também conhecido como proteína específica-oligodendrócitos, foi identificado pela primeira vez para ser expresso especificamente na junção dos fios apertados de oligodendrócitos no cérebro e nas células de Sertoli de ratos e ratinhos [ ,,,0],34], [35]. A perda da expressão claudina-11, levando a quebra da barreira TJ, está associada a défices neurológicos e reprodutivos [36]. Um estudo recente relatou sobre-expressão e mislocalization de CLDN11
da barreira hemato-testicular em células de Sertoli para ser associado a neoplasia intra-epitelial testiculares em homens [37]. Os dados do estudo estabelece que CLDN11
é expresso em tecidos gástricos normais e imortalizadas NGECs. No entanto, as suas funções completas no estômago normal, assim como na carcinogénese gástrica permanecem obscuros.

Em uma tentativa de explorar o possível envolvimento de CLDN11
no GC, estudamos alterações fenotípicas associados com silenciamento de expressão CLDN11
em CLDN11-
expressando células epiteliais gástricas (HFE145). knockdown muito interessante, siRNA mediada por CLDN11
resultou em aumento da motilidade celular e invasão.

Estudos anteriores relataram alterações fenotípicas específicas do cancro a ser associados com modulações na expressão claudin em vários tipos de câncer . Superexpressão de claudina-3 e claudina-4 proteínas em linhas celulares de cancro do ovário resultados no aumento da invasão por essas células [25]. No cancro do cólon, a expressão aumentada de claudina-1 tem sido relatada, e as alterações na expressão de claudina-1 exerce efeitos significativos sobre o crescimento de tumores e metástases xenoenxertados em ratinhos nus atímicos [27]. Por outro lado, claudina-7 regulação negativa no cancro da mama tem sido associado com o aumento da discohesion celular e a capacidade de células de cancro da mama para disseminar [19]. Além disso, as experiências em linhas de células pancreáticas mostraram que a expressão da claudina-4 conduz a invasividade reduzida, a tumorigenicidade e o potencial metastático destas células [38]. As razões para estas discrepâncias no efeito são presentemente desconhecida, mas pode estar relacionada com as diferenças específicas de tecido em função claudina ou até mesmo a variações na resposta de diferentes linhas celulares. Claramente, os membros da família claudina são conhecidos a ser expresso de uma forma específica do tecido e pode exercer efeitos divergentes.

Apesar de nos últimos anos tornou-se claro que TJs e proteínas TJ-associados possuem uma vasta e diversificada funcional e atividades fisiológicas em condições normais e cancerosas, os mecanismos moleculares subjacentes a essas atividades permanecem obscuros. TJs são aparelhos sofisticados intercelulares capazes de recrutar proteínas de sinalização, regulando assim vários processos celulares, incluindo crescimento celular, diferenciação, e tumorigénese [39], [40]. proteínas claudina associar directamente com vias de transdução de sinal discretos através da interacção com moléculas de sinalização, tais como atípica proteína quinase C e proteínas Rho, bem como com outras proteínas contendo o domínio PDZ. No cancro do ovário, claudinas modificar invasão tumoral por regulação da actividade de MMP [25].

Em resumo, os dados do estudo actual identificar CLDN11
como um alvo de modificação epigenética, bem como um promissor biomarcador para câncer gástrico detecção precoce, diagnóstico e terapia. Estas descobertas também sugerem o envolvimento de CLDN11
downregulation na carcinogênese via
promoção da invasão celular e motilidade. Os mecanismos para este fenómeno estão sujeitos a uma investigação mais aprofundada.

Reconhecimentos

Agradecemos ao Dr. Duane T Smoot por sua generosa dádiva de HFE145 células.

• PLoS Genetics: miR-218 inibe a invasão e metástase de câncer gástrico, visando os Robo1 Receptor
• PLoS Genetics: oncogênicos Caminho Combinações predizer o prognóstico clínico em Câncer Gástrico