PLoS ONE: fermentacijom pomoću Propionibacterium freudenreichii inducira apoptozu od HGT-1 Ljudski rak želuca Cells

Sažetak pregled

Pozadina pregled

karcinoma želuca je jedan od najčešćih oblika raka u svijetu. "Ekonomski razvijene zemlje" stil života, uključujući prehranu, predstavlja faktor rizika povoljnu ovaj rak. Dijeta modulacija može smanjiti probavne učestalost raka. Među perspektivnim sastojaka hrane, mliječnih propionibaktcrijc su pokazala da se aktiviraju apoptozu stanica raka debelog crijeva, putem objavljivanja kratkog lanca masnih kiselina acetata i propionata. Pregled

Metodologija /glavne nalaze

A kiselo mlijeko isključivo fermentira P. freudenreichii pregled, nedavno je dizajniran. U ovom radu, pro-apoptoze potencijal ovog novog fermentiranog mlijeka je pokazao na ljudskim stanicama raka želuca HGT-1. Fermentirani mliječni supernatant inducirani tipične značajke apoptoze, uključujući kondenzaciju kromatina, formiranje apoptotičnih tjelešaca, DNA laddering, staničnog ciklusa i pojavom subG1 populacije, izlaganje fosfatidilserina na plazma membrani vanjskoj lijeku, akumulacija slobodnih radikala, mitohondrijske poremećaja potencijalni transmembranski, kaspaze aktivacija i citokrom c izdanje. Zanimljivo je da je ovaj novi fermentirani mliječni sadrži str. freudenreichii pregled poboljšane citotoksičnost kamptotecina, lijek koji se koristi u želučanoj kemoterapiji raka. pregled

Zaključci /Značaj pregled

Takav novi probiotik fermentirano mlijeko može stoga biti korisno kao dio preventivnog prehrani dizajniran za spriječiti rak želuca i /ili kao dodatak prehrani da potenciraju raka terapeutske tretmane pregled

Izvor:. Cousin FJ, Jouan-Lanhouet s, dimanche-Boitrel MT, Corcos L, Jan G (2012) mlijeka fermentiranog pomoću Propionibacterium freudenreichii pregled inducira apoptozu od HGT-1 humanog karcinoma želuca stanica. PLoS ONE 7 (3): e31892. doi: 10,1371 /journal.pone.0031892 pregled

Urednik: Abbes Belkhiri, Vanderbilt University Medical Center, Sjedinjene Američke Države pregled

Primljeno: 15. studenoga 2011; Prihvaćeno: 19 siječnja 2012; Objavljeno: 19 ožujak 2012 pregled

Copyright: © 2012 Cousin et al. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo financiran je Conseil regionalnim de Bretagne kroz CBB développement poziva za projekte, a do centra Nacionalnog Interprofessionnel de l'Économie Laitière (CNIEL) kroz koju Znanstveni odbor za Syndifrais poziva za projekte. Istraživanja u IRSET skupini bio podržan od dotacija iz Ligue Nationale Contre le Cancer (Azurnoj oklop, Ille et Vilaine, Morbihan, Vendée i Sarthe Comittees), INSERM, Sveučilište u Rennesu 1 i regije Bretagne. FJC dobila je darovnicu CNIEL (doktorski zajedništvo). SJL je podržan od strane Udruge pour la Recherche sur rak Le (doktorska prijateljstva). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

Dijeta modulira rizik od razvoja želučanog karcinoma

Rak je glavni uzrok smrti u ekonomski razvijenim zemljama koji proizlaze iz povezane s rakom izbora načina života, uključujući pušenje, tjelesna neaktivnost i "zapadnjački" dijeta [ ,,,0],1]. Doista, uloga prehrane u razvoju raka snažno je podržan od strane epidemiološkim studijama, osobito glede raka probavnog trakta. Rak želuca (GC) predstavlja treću vrstu smrtonosnih oblika raka kod muškaraca u svijetu. U 2008. godini 640.600 slučajeva GC procijenjeno, što uzrokuje 464.400 smrtnih slučajeva u svijetu [1]. Ova bolest je osobito česta u istočnoj Aziji, te u središnjoj i istočnoj Europi. Najvažniji etiološki čimbenici koji su uključeni u želučanoj karcinogeneze su prehrana i Helicobacter pylori pregled infekcija. Dokaz, uglavnom iz case-control studija sugerira da je rizik od ugovornog GC povećava se visokim unosom slani, kiseli ili dimljeni tradicionalno hrane, kao i sušene ribe i mesa. Naprotiv, vlakana, svježeg povrća i voća, možda zbog njihove vitamina C sadržaja, pronađeno je da se obrnuto povezana s rizikom GC [2], [3]. Utjecaj sastojaka prirodnog /hrane na karcinogeneze u želucu čime je ispitivan tijekom posljednjih nekoliko desetljeća [4] - [6]. Među njima, probiotike i njihova sposobnost da inhibiraju razvoj raka privlači znanstveni interes [7], [8]. Probiotik se općenito definira kao "live mikroorganizama koji, kada se daje u odgovarajućim količinama, ne prenosi zdravstvenu korist domaćina" [9]. Dok su neki mikroorganizmi kao što su H. pylori pregled mogu favorizirati GC, drugi mogu imati blagotvoran učinak sprječavanja probavnih raka. Posebno odabranih sojeva probiotičkih bakterija može ograničiti razvitak karcinoma u životinjskim modelima karcinogeneze [10]. To se posebno svjedoče za rak debelog crijeva, dok manje je poznato o mogućim učincima probiotika na GC. Moguće mehaničko objašnjenje takvog zaštitni učinak je in situ pregled oslobađanje anti-kancerogenih metabolita, kao što su masne kiseline kratkog lanca (SCFAs). Pregled

masne kiseline kratkog lanca inducira apoptozu stanica raka pregled

SCFA uključujući acetat, propionat i butirat, važni anioni intestinalnog sadržaja i njihova koncentracija može se modulirati u prehrani. Oni su pokazali da igraju ključnu ulogu u važnim fiziološkim funkcijama, uključujući i modulaciju probavnom epitelnih stanica proliferacija /apoptoze ravnoteže. To uključuje SCFA-posredovane staničnog ciklusa uhićenje, histona inhibiciju deacetilazom i poticanje apoptoze u transformiranim stanicama, ali i stimulaciju diferencijacije u zdrave stanice [11], [12]. Također je objavljeno da je SCFAs butirata i propionat i inducira apoptozu u ljudskim stanične linije karcinoma želuca [13] - [15]. Apoptoza je prirodni fiziološki proces dopuštajući regulacija broj stanica i predstavlja cilj za borbu protiv raka kemoterapijom [16]. Apoptoza omogućuje trošenje stanica raka u "čiste" način. Stanice raka fragment u lančanoj reakciji koordiniran i ostaci su apsorbiraju susjednih tkiva i imunološkog sustava [17], [18]. Dva glavna apoptične putovi su opisani: je vanjska staza, koji je posredovan aktivacijom receptor smrti i caspase 8 i intrizični put u kojem mitohondrija i kaspaze 9 su uključeni [16]. Općenito, u stanicama raka, apoptotični funkcija nedostaje, što može objasniti njihovu proliferaciju produljeno i kasnijim stvaranjem tumora. Sposobnost da induciraju apoptozu stanica raka tako je poznat po svojoj terapeutskim potencijalom [16]. Od mliječnih propionibaktcrijc su u stanju proizvesti pozitivne pro-apoptoze SCFAs, oni mogu pokazati korisnim u prevenciji ili liječenju raka. Pregled

Propionibacterium freudenreichii pregled pogoduju apoptotski iscrpljivanje probavnih stanica raka pregled

To probiotičkih mliječnih Propionibacterium pokazalo se da induciraju staničnu smrt različitih raka debelog crijeva ljudskim staničnim linijama putem indukcije apoptoze, u ko-kulturi [19]. Aktivni spojevi, izlučen u medij, aktiviraju intrinzične mitohondrijalni apoptoze u kultiviranim ljudskim stanicama kolorektalnog raka. Posebno, SCFAs acetata i propionat oslobađa P. freudenreichii pregled inducira apoptozu djelovanjem na mitohondrijske adenin nukleotida translocator, uzrokujući mitohondrija depolarizacije i propusnosti, curenje citokroma c i aktivaciju kaspaze [19], [20]. Međutim, propionibacterial supernatanti su još pro-apoptoze od SCFAs acetata i propionata, koji se koristi kod koncentracije izmjerene u supernatantima, sugerirajući da drugi spojevi mogu biti uključeni u tu svrhu. Odabranih sojeva str. freudenreichii pregled ostanu živjeti i metabolički aktivna u crijevima ljudi i ljudskih štakora mikrobiota povezane gdje oni proizvode SCFAs [21], [22]. Prema tome, oni su pokazala da povećanje apoptoze u transformiranih stanica debelog epitelnih takvih štakora hranjenih s karcinogenom 1,2-dimethylhydrazine (DMH), ali ne u kontroli zdravih [23]. Propionibaktcrijc mogao predstavljati probiotici pogoduju raka debelog crijeva profilaksi, pod uvjetom da dostignu svoj cilj živ i metabolički aktivni. U tom kontekstu, vektora, ili probiotičke isporuke vozila, pokazalo se kako bi se utvrdilo propionibaktcrijc opstanak i djelovanje [21], [24], [25]. Složeni mliječni proizvodi kao što su jogurt i sir, a osobito štititi propionibakterije od stresa, ali sadrže složenu mješavinu bakterija. To je, dakle, nije moguće pripisati blagotvoran učinak na određeni soj. Pregled

A fermentirano mlijeko je ocijenjena kao propionibaktcrijc dostavno vozilo u ovom kontekstu pregled

U ovom istraživanju koristili smo novu prehrambena fermentirano mlijeko sadrži samo str. freudenreichii pregled kao jedini mikroflore. Kao što je ovaj proizvod sadrži i live propionibakterije i njihovih aktivnih metabolita, treba ih dovesti u kontakt s želučane sluznice kada se proguta. Ovaj fermentirani mliječni ispitana je s obzirom na HGT-1 stanica ljudskog karcinoma indukcije apoptoze želuca. Doista, propionibaktcrijc poznati ubiti stanica raka debelog crijeva, ali njihovo djelovanje na stanicama raka želuca je nepoznat. Fermentirani mliječni ubijeni HGT-1 stanice u vremenu i o dozi ovisan način. Tipične karakteristike postupka apoptoze se promatra, uključujući održivosti kap, kondenzacijom kromatina, formiranja apoptotična tijela ', DNA laddering, ROS proizvodnje mitohondrijskog membranskog potencijala, perturbacije aktivacije kaspaze, staničnog ciklusa i pojavom subG1 populacije. Pregled

Rezultati

P. freudenreichii
fermentirano mlijeko ubija ljudski želudac i stanice raka debelog crijeva pregled

P. freudenreichii pregled ITG P9 rastao u 72 h na 30 ° C u obogaćenom mlijeku i uz dodatak mlijeka ultrafiltrate do konačnog populaciju od 9,43 log _{10 jedinica koje tvore kolonije (CFU) /ml i 9,35 log 10 cfu /ml, respektivno. Koncentracije acid, SCFA su 26,21 mM acetata i 54,47 mM propionat (2,08 propionat /acetata omjera) u mlijeku fermentiranom supernatant dok su bili 24,00 mm i 53,32 mm (2,22 ratio) u fermentiranom mlijeku ultrafiltrate ostatku. Ovi omjeri su se očekuje za Propionibacteria koji obično stvaraju dvostruko više propionat kao acetata [26]. Dvanaest druge prehrambena sojevi mliječni propionibaktcrijc su također testirani (vidi Tablica S1 i Slika S1). Korištenjem ovih sojeva, dobiveni su dvanaest fermentiranog mlijeka. Koncentracije propionat u rasponu od 36 do 67 mm i propionibaktcrijc populacije od 9.0 do 9,7 log 10 cfu /mL, za manje i najučinkovitiji soja, respektivno. pregled}

citotoksični potencijal supernatanata pripremljen od mlijeka ili mlijeko ultrafiltrate, kako fermentira P. freudenreichii pregled ITG P9, je istraživana. HT-29 ljudske stanice raka debelog crijeva i HGT-1 stanice ljudskog raka želuca su tretirane s tim supernatantima. Različita razrjeđenja u rasponu od ½ do su ispitani. Osim toga, citotoksičnost smjese 15 mM acetata i 30 mM propionata je testiran pri koncentracijama u blizini tih ½ razrijeđenih supernatantima. Kao pozitivne kontrole indukcije apoptoze, kemoterapijski lijekovi kamptotecina (4 uM) i etopozid (100 uM) se koristi za HGT-1 i HT-29 stanica. uspoređene su tri različite metode praćenja smrti stanica. Kao što je prikazano na Slici S2, metilenskog modrila, MTT i Tryptan plavila pokusi dali sličnih kinetika smrti. Prema tome, metilen plavo test je korišten u ovoj studiji se dodatno ispitala sposobnost stanica. Ne-fermentirani mliječni proizvodi (mlijeko ili mlijeko ultrafiltrate) nije imao utjecaja ni na HT-29, niti na HGT-1 preživljavanje stanica (Sl. 1 A, B). Supernatant od mlijeka ili mlijeka ultrafiltrate fermentira P. freudenreichii pregled izazvana sličan citotoksičnost u vremenski ovisan način u HT-29 i HGT-1 stanice, te u neposrednoj blizini citotoksičnosti inducirane lijekovima ili po acetat /propionat smjesu. Polumaksimalna ubijanje HGT-1 stanica je došlo nakon 24 h i 26 h tretmana s fermentiranog mlijeka i fermentirani mliječni ultrafiltrate Supernatanti redom, nakon 17 h tretmana s kamptotecina i nakon 24 sata tretiranja s SCFA smjese (sl. S3) , Osim toga, citotoksičnost fermentiranih mliječnih proizvoda supernatanata u HGT-1 stanicama je ovisan o dozi (Sl. 1C). Za svako razrjeđenje testiranog, pad HGT-1 preživljavanje stanica inducirane fermentiranog mlijeka ili fermentiranog mlijeka ultrafiltrate je vrlo sličan (Slika 1C &, Sl. S3). Zato su sljedeći koraci istraživanja možemo provesti samo u fermentiranom mlijeku ultrafiltrate ostatku. Uzeti zajedno, ovi podaci pokazuju da propionibaktcrijc učinkovito ubijanje ljudskog debelog crijeva i želučani stanice raka, barem djelomično preko proizvodnji propionat i acetata (Sl. 1). Neki drugi fermentiranog mlijeka, fermentiranih različitih sojeva mliječnih propionibaktcrijc, pokazali su slične citotoksične učinke na stanice raka (Tablica S2). P. freudenreichii pregled ITG P9 je poznat po svojim metaboličkim djelovanjem In vivo pregled [22], odgovarajući fermentirani mliječni dalje proučavati. pregled

P. freudenreichii
fermentirani mliječni inducira tipične znakove apoptoze kod stanica raka želuca pregled

jezgra morfologija HGT-1 stanica inkubiranih u prisutnosti P. freudenreichii pregled fermentirani mliječni ultrafiltrate analiziran fluorescentnom mikroskopijom nakon Hoechst 33342 bojenja (sl. 2a). Nuklearna fluorescencija netretiranih stanica (kontrola) ostala je nepromijenjena za vrijeme trajanja eksperimenta s plavom normalnim jezgre (vrijeme 0 h, sl. 2aa). Tijekom liječenja, HGT-1 stanice prikazuju kondenzirane kromatina i usitnjeni jezgara karakteristike apoptotičnih jezgre (sl. 2ab, c), nakon čega slijedi nastup apoptotičnih tijela na 72 sata (Sl. 2Ad). Inter-Nukleosomalna DNA fragmentacije rezultiralo DNA laddering, tipičan znak apoptoze [27], također je praćena tijekom fermentacije liječenja mlijeko ultrafiltrate. DNA fragmentacije opažena je 24 sata nakon tretmana s fermentirani mliječni ultrafiltrate (Sl. 2B), te u manjoj mjeri s kamptotecin (Sl. S3). Sadržaj DNA i kvantitativno je protočnom citometrijom nakon propidij jodida označavanja za proučavanje utjecaja fermentiranog mlijeka ultrafiltrate na HGT-1 raspodjelu staničnog ciklusa (Sl. 2C). Netretiranih HGT-1 stanice prikazana raspodjelu staničnog ciklusa (Sl. 2Ca) bez subG1 fazi, koji je ostao nepromijenjen za vrijeme trajanja eksperimenta (podaci nisu prikazani). Postotak stanica u subG1 fazi, koja je indikativna apoptičko proces značajno povećao tijekom vremena u fermentirane mliječne ultrafiltrate liječenja (Slika 2Cb, Cc, CD.), Na 24 h (39.24 ± 4.87%), 48 h (91,63 ± 0,28 %) i 72 sata (94.79 ± 0.45%). U 48 sati i 72 sata nakon tretmana, sve stanice su u fazi subG1 staničnog ciklusa, ukazujući na potpunu smrt HGT-1 stanicama. Kao kontrola, kamptotecin inducirane apoptoze slične obilježja u HGT-1 stanica (sl. S4), pregled

potvrdu indukcija apoptoze, phosphatdylserine translokacije od unutarnje prema vanjskoj letak plazma membrane je procijenjena obojenjem HGT- 1 stanice s kombinacijom Annexin V-FITC (AV) i 7-AAD, nakon čega je analiza protočnom citometrijom fluorescencije (Sl. 3). Netretirane stanice (0 h) predstavila je visok udio živih stanica (AV ^{- /7AAD - 92%), a samo 5% stanice su obojene Annexin V (slika 3B).. Ovi postoci utvrđeni kod netretiranih stanica nije mijenjati za vrijeme trajanja eksperimenta (podaci nisu prikazani). Pri liječenju HGT-1 stanica s ½ razrijeđena fermentiranog mlijeka ultrafiltrate u DMEMc postotak stanica koje su označene samo 7-AAD (označava nekroza) je vrlo niska (Sl. 3B). Međutim, postotak stanica koje su označene s Annexin V značajno povećana u vremenski ovisan način i dosegao 80% 72 sata (Sl. 3B). Dakle, HGT-1 stanice podvrgnut apoptoza nakon tretmana s str. freudenreichii
fermentirani mliječni ultrafiltrate, karakterizira prvi AV pozitivnim bojanjem, što ukazuje na izloženost fosfatidilserin, a zatim i AV i 7-AAD pozitivno bojanje, što ukazuje na kasniji gubitak integriteta membrane. Kao kontrola, kamptotecin izazvana slične apoptoze obilježja (Slika S5.) Pregled}

Kao SCFA djeluju izravno na mitohondrije, također su određena tri važna mitohondrijske parametri:. The ΔΨm unutarnja membrana potencijal, a generacija ROS, pomoću dva fluorescentne probe, DiOC (6) 3 (koja je ΔΨm i mala slova) i DHE (koji detektira o _{2 ^{- razina), te lokalizaciju citokroma c. Netretirane stanice (0 h) pokazala je visoku fluorescenciju (visoka ΔΨm) i nisku DHE fluorescencije (niska proizvodnja O 2 -) (Sl. 4A, B). Nakon tretmana s fermentirani mliječni ultrafiltrate, vremenski ovisan pad ugrađivanja DiOC6 (3) fluorescentna sonda je opaženo, otkrivajući gubitak ΔΨm a time mitohondrijsku membranske depolarizacije (Sl. 4A). Postoci tretiranih HGT-1 stanica s smanjen unutrašnji membranski potencijal povećan na vremenski ovisan način do 96% stanica u 72 sata. FCCP tretman je korišten kao pozitivna kontrola mitohondrijske membranske depolarizacije. Ovaj gubitak ΔΨm potvrđena je karakterističnim gubitka u crvenom fluorescencije sljedećem JC-1 bojenja (Sl. 4B). Glede proizvodnje ROS u HGT-1 stanice, fermentirani mliječni ultrafiltrate liječenje induciranog nakupljanja O 2 -, značajno nakon 48 h i 72 h tretmana (slika 4c).. To ROS akumulacija djelomično može spriječiti ako stanice su prethodno liječene ROS sakupljača TEMPOL (Sl. S6). Citokrom c izdanje iz mitohondrija u citoplazmi je ključni stanični događaj apoptoze programa. Imunoblatin ispitivanje frakcija citoplazme obogaćen za prisustvo citokroma c potvrdio promjene u svom podstanično lokaliziranje (Sl. 4D). Citokroma c je detektirati u citoplazmi obogaćena frakcija od 24 sata nakon tretmana, što ukazuje premještanje tog proteina (Sl. 4D). Ovaj relokalizaciju citokroma C u citoplazmi je potvrdio imunološkim, pokazujući difuzna imunološkeg cijeloj stanici nakon tretmana, dok se isprekidanih bojenje prije liječenja (sl. 4E). Pregled}}

P. freudenreichii pregled fermentirano mlijeko aktivira kaspaza

Kako bi potvrdili apoptoza izazvane fermentiranog mlijeka ultrafiltrate u HGT-1 stanice, obrada kaspaze 3, 8 i 9 su analizirani Western hibridizacija i odgovarajući enzimatskih aktivnosti monitoringa u HGT stanični ekstrakti -1 (Sl. 5). Ne-fermentirani mliječni ultrafiltrate ne induciraju aktivaciju kaspaze u HGT-1 stanica: samo proforms kaspase-3 i -9 detektirana na western blot (Sl. 5A), i nema kaspaze aktivnosti je izmjerena (Slika 5B).. Fermentirani mliječni ultrafiltrate supernatant, te kamptotecin i smjesa propionata i acetatom u molarnom omjeru [2: 1] inducira cijepanjem pro-kaspaze 3 i stvaranje aktivnog oblika caspase-3, podjedinica P17 i P12 (Sl. 5A). Aktivacija kaspaze-3, koji je efektor kaspaze potvrdila indukciju apoptoze. Osim toga, fermentirani mliječni ultrafiltrate izazvana cijepanja procaspase-9, što je dovelo do 35 i 37 kDa obrađenih oblika u. Kaspaze-8 nije detektiran u kontrolne netretirane HGT-1 stanicama. Međutim, tretman s propionibacterial supernatantima ili C2 /C3 smjese dobio se jasan detekcije 54 kDa Proform, nakon čega slijedi njeno cijepanje nakon 48 sata tretmana pregled

kvantifikacija kaspaze-3, -8 i. - 9 enzimatske aktivnosti potvrdio aktivaciju kaspaze obje propionibacterial metabolita i kamptotecin. Doista, kaspaza-9 i -3 su aktivirane u najranijim stadijima liječenja, dok kaspaza-8 činilo aktivira kasnije (sl. 5b). Kamptotecin i the SCFA smjesu aktivira sve tri proučavane kaspaze. Ovi podaci potvrdili aktivaciju unutrašnjeg toka apoptoze fermentiranog mlijeka obradom ultrafiltrate, s početkom aktivacije kaspaze-9 i kaspaze-3 i -8, pregled

P. freudenreichii
fermentirani mliječni povećava kamptotecinski citotoksičnost pregled

Campthotecin je citotoksični kinolin alkaloid koji inhibira enzim DNA topoizomeraze I (topo I), a široko se koristi u kemoterapijskim tretmanom GC. Pokazali smo iznad da propionibacterial metaboliti inducira apoptozu u HGT-1 stanice preko mitohondrijske smrti puta. Sljedeće smo proučavali apoptozu induciranu kombinacijom oba kamptotecina i fermentirani mliječni ultrafiltrate u HGT-1 stanicama. Povećane koncentracije kamptotecina (0, 0,25, 0,5, 1, 2 uM) u kombinaciji s povećanim koncentracijama fermentiranog mlijeka ultrafiltrate (0,, ⅛, ¼) ispitani su na HGT-1 preživljavanje stanica i oba izazvanog gubitka HGT-1 vijabilnosti , na način ovisan o dozi (Sl. 6). Osim toga, dodatak fermentiranog mlijeka ultrafiltrate značajno poboljšana citotoksičnost kamptotecina u HGT-1 stanica (sl. 6). Na primjer, 0,25 uM kamptotecin i fermentirani mliječni ultrafiltrate razrijedi do ⅛ dovodi do gubitka sposobnosti za život od 8,6% i 18,6%, po istom redoslijedu. Kombinacija ovih dvaju spojeva dovodi do gubitka stanične vijabilnosti od 29,8% (Sl. 6), što ukazuje na dodanu citotoksičnosti učinak kada kamptotecin se pomiješa s fermentirani mliječni ultrafiltrate u HGT-1 stanicama. Prema tome, je indeks kombinacije (CI), koji se izračunava kao ranije [28], ima vrijednost 1, što indicira aditivni učinak kamptotecina i fermentirani mliječni ultrafiltrate tretmane. Pregled

Rasprava pregled

Novi fermentirani mlijeko, sadrži P. freudenreichii pregled kao jedini bakterija, razvijen je kako bi se dodatno istraži probiotika potencijal ovog pripremu mliječnog Propionibacteria (prikaz u [29]). U ovom istraživanju, javljaju se da vodena faza ovog fermentiranog mlijeka ubija ljudski debelog crijeva i želučani stanica karcinoma preko metabolita, uključujući i propionat acetata, izdana od strane tih bakterija. Taj pojam se temelji na promatranim citotoksičnih učinaka str. freudenreichii
fermentirani mliječni bistri slojevi na kulturan HT-29 i HGT-1 stanica raka. Ovaj učinak postiže se ultracentrifugiranjem supernatanta, tj fermentiranog mlijeka vodene faze, lišenih kazeina i bakterija, pokazujući da su aktivni spojevi izlučuje, kao što je prethodno opisano za Propionibacteria [19]. Zbog toga, većina eksperimenata u ovom radu su izvedeni sa fermentirani mliječni ultrafiltrate (Sl. 1). Pokazali smo po prvi put da je P. freudenreichii
fermentirani mliječni supernatant apoptozi HGT-1 stanice u vremenu i o dozi ovisan način sa pojavom klasičnih morfoloških i biokemijskih svojstava apoptoze (kondenzira i fragmentirane chromation, DNA laddering i akumulaciju stanica u staničnom ciklusu subG1 faza). pregled

pogledao onda ako su stanični mehanizmi uključeni u HGT-1 stanična smrt puta bili slični mitohondrijske smrti puta aktivira u stanicama Caco-2 i HT-29 humanog karcinoma kolona p. freudenreichii pregled DMEMc supernatanti kultura [19], [20]. U sub-staničnim i biokemijskim događaji zapaženi u liječenih HGT-1 stanica s fermentiranog mlijeka ultrafiltrate bili su slični i uključuje, najmanje, mitohondrijska gubitak ΔΨm, ROS (O _{2 ^{-) generacije, kaspaza obradu i aktivaciju, citokrom c preseljenje u citoplazmu (Sl. 3, 4, 5). Fermentirani mliječni supernatant inducirane Obradu i aktivaciju kaspaze-8, osim kaspaze-3 i -9. Štoviše, Slika 4A pokazuje da kaspaza-8 nije otkriven u kontrolnim netretiranim stanicama i stanicama tretiranim kamptotecina ili ne-fermentiranog mlijeka ultrafiltrate, u skladu s nedostatkom njegove mRNA (C. Le Jossic-Corcos Medicinskog fakulteta, Brest Francuska, osobna komunikacija). Treba primijetiti da postoji očiti raskorak između enzimskih rezultata, što upućuje na kaspaze-8 aktivnost u stanicama kamptotecina obrađen, a ne kaspaze-8 je slučaj u ovim stanicama pomoću Western blot. To se može objasniti nedostatkom specifičnosti Ac-IETD-AMC podloge koja može obraditi drugih enzima kao što je kaspaze-3 i -10 ili granzim B, osobito ako je povišen koncentracija tih enzima [30], [31]. Za razliku od toga, P. freudenreichii
fermentiranog mlijeka ultrafiltrate i smjesu SCFA i uzrokovala ekspresiju i aktivaciju kaspaze-8. Mehanizmi koji su uključeni ovdje nisu razjašnjeni; Međutim, caspase-8 Poznato je da je nedovoljno izražen u nekim stanicama karcinoma, kao rezultat DNA metilacije [32], [33]. Njegova ekspresija se može vratiti na razini RNK i proteina uzročnicima demethylating kao decitabin [34] i HDAC inhibitora [35], čime se demetilacijom regulacijske sekvencije kaspaze-8, povećanje kaspaze-8 promotora i u re -expression kaspaze-8 [32]. SCFA, kao što je propionat, su inhibitori HDAC, što dovodi do hiperacetiliranje histona [36]. To pogoduje transkripcije putem promjene u DNA konformacije [37], a mogao vratiti ekspresiju kaspaze-8. Ostali spojevi hrane rođeni su već pokazala da vraćanje kaspaza-8 izraz. Injekcijska ekstrakt Sjeme coicis pregled (rođak kukuruza) ekstrakt prikazivanje anti-tumorsku aktivnost pojačava ekspresiju kaspaze 8 i inducira apoptozu u stanicama HepG2 [38]. Dialil disulfid, pronađeno češnjak, pojačava ekspresiju kaspaze-8, Fas i FasL u leukemije K562 stanica. Takva regulacija može na taj način biti uključeni u pro-efekte apoptoze od mliječnih Propionibacteria i fermentiranih proizvoda koji ih sadrže. Western blot vođene obnovljena ekspresiju i zatim kasni aktivaciju kaspaze-8 u propionibacterial metabolita-tretiranih HGT-1 stanice, a koji mogu nastati kao posljedica kaspaze-8 aktiviranje pomoću drugog kaspaze poput kaspaze-9. Doista, izlaz citokroma c, dio mitohondrijske puta, pokazalo se aktivirati nekoliko kaspaze, uključujući 2, 3, 6, 7, 8 i 10 [39]. Nadalje, kaspaza-9 aktivacija je prikazan rezultat u nizvodnim kaspaza-8 aktivacije [40]. U skladu s tim, kaspaza-9 je prikazan In vitro pregled za aktiviranje kaspaze-3, koji se pretvara aktivira kaspaze-6, koji je odgovoran za kaspaza-8 aktivacije [41]. Sve u svemu, naši rezultati potvrđuju da propionibacterial metabolita prisutnih u P. freudenreichii pregled fermentirani mliječni induciranje nekoliko pod-stanične mehanizme pogoduju apoptozu. Takav reaktivacija kaspaze-8 izražavanja moglo dovesti do velikog apoptoze odgovora u HGT-1 stanice tretirane s mrtve agonista receptora domena (npr Trail ili FAS). Pregled}}

Prema našim saznanjima, ovo je prvi posao izvještavanja specifične indukcija želučane stanice raka apoptoze od fermentiranih mliječnih proizvoda. Fermentiranog mlijeka, uključujući jogurt, predloženi da budu korisni u prevenciji raka debelog crijeva. Epidemiološki podaci o zaštitnim učincima mlijeka i mliječnih proizvoda na stopu raka debelog crijeva je dao proturječne rezultate [42]. Mlijeko i mliječni proizvodi ukupna potrošnja je povezana sa smanjenjem rizika od raka debelog. No, to ne vrijedi za sve vrste mliječnih proizvoda i efektima uvelike se razlikuju. Fermentirani mliječni proizvodi mogu predstavljati učinkovite dostavna vozila koji ciljaju na zaštitne molekula ili mikroorganizama na određene web stranice kao što su probavni epitela [43]. Goveđi laktoferin, sastojak mlijeka, inducira apoptozu debelog crijeva [44] i stanica želuca [45] raka. Odabranih sojeva mikroorganizama prisutnih u fermentiranog mlijeka također može suprotstaviti debelog karcinogeneze. Prema tome, jogurt i mliječne kiseline bakterija izlaže antikancerogena svojstva u životinjskim modelima kolona karcinogeneze [46]. Međutim, malo rad usmjeren na fermentiranih mliječnih proizvoda i raka želuca. Naš rad sugerira da str. freudenreichii pregled može igrati ulogu u tom kontekstu, jer će isporučiti obje žive propionibakterije i pro-apoptoze metabolita na želučanu sluznicu. U tom kontekstu, treba primijetiti da P. freudenreichii pregled pridržava probavnih epitelnih stanica i sluzi [47], [48]. Također je pokazano da inhibira adheziju uzročnika raka želuca Helicobacter pylori pregled probavnog epitelne stanice, kao i H. pylori pregled izazvanu štetu [49]. Ta svojstva ukazuju na ulogu str. freudenreichii
fermentiranog mlijeka u profilaksi raka želuca. pregled

Konačno, fermentirani mliječni potencira pro-apoptotične djelovanje lijeka na kamptotecin želuca stanica raka. U skladu s tim, žive kulture probiotika laktobacila su prethodno prikazani senzibilizirati stanice raka debelog crijeva i rektuma LS513 u 5-fluorouracila [50]. Međutim, u ovom slučaju, probiotici sama nije proapoptotski učinak. U ovom radu, niske doze kamptotecina lijeka koji se koristi u kemoterapiji raka želuca su neučinkoviti u ubijanje želučanih stanica raka. Međutim, u prisustvu niskim dozama str. freudenreichii
fermentirano mlijeko, ubili su iste stanice učinkovito (Sl. 6). Propionibacterial metaboliti inducira apoptozu intrinzičnu put djelovanjem izravno na mitohondrijima, a kamptotecin djeluje na razini DNA. To je u skladu sa svojim kumulativnim potencijala u indukciji apoptoze kada su ti proapoptotska induktori kombinaciji. Štoviše, kiselo mlijeko sadrži SFCAs, poznat i kao inhibitori HDAC mogu modulirati apoptoze i staničnog ciklusa u želučanim stanica raka [13], [51], kao i ekspresija staničnog ciklusa povezanih i apoptotičkim proteinima u drugim stanicama raka [52] [53]. Probiotike je već koriste u kliničkim studijama za smanjenje nuspojava kemoterapije kod raka [54]. P. freudenreichii pregled može, u skladu s našim rezultatima, može koristiti u takvim kliničkim studijama. Njegov sinergijski efekt može pomoći smanjiti dozu lijeka i poboljšati udobnost pacijenata. Pregled

U zaključku, novi mlijeko, isključivo fermentirani u P. freudenreichii pregled, inducira apoptozu u HGT-1 ljudskih stanica raka želuca. Osim toga, ovaj fermentirani mliječni pojačava aktivnost citotoksičnosti kamptotecina, lijek koristi u kemoterapiji raka želuca. Takav novi probiotički fermentirani mliječni moglo biti od interesa kao funkcionalna hrana u sprečavanju raka želuca i /ili potentialize terapijske tretmane. Pregled

Materijali i metode pregled

Kemikalije pregled

Kamptotekin, etopozida , TEMPOL, acetat i propionat natrijeve soli i caspase supstrata Ac-DEVD-AMC (N-acetil-Asp-Glu-Val-Asp-7-amido-4-metilkumarin), Ac-IETD-AMC (N-acetil-Ile -Glu-Thr-Asp-7-amido-4-metilkumarin) i Ac-LEHD-AFC (N-acetil-Leu-Glu-His-Asp-7-amido-4-trifluoromethylcoumarin) kupljeni su od Sigma-Aldrich (Saint -Quentin Fallavier, Francuska). Kamptotecin je otopljen u DMSO. Konačna koncentracija DMSO ne prelazi 0,01%, koncentracija koja nije induciralo ikakve toksičnost. RNAze A, PI (propidij jodid), Hoechst H33342, MitoTracker® Red CMXRos, U-PRO-3, JC-1, 3,3'-dihexyloxacarbocyanine jodid (DiOC6 (3)) i difidroetidij (DHE) dobiveni su od Invitrogen ( Cergy-Pontoise, Francuska). Aneksin V-FITC (AV) kit i 7-aminoactinomycin-D (7-AAD) otopine dali su BD Biosciences (Pont-de-Claix, Francuska).