PLOS NËMMEN: Milk fermentéiert vun Propionibacterium freudenreichii Induces Apoptosis vun HGT-1 Mënscherechter Gastric Cancer Cells

Wat VerfÜgung

Background VerfÜgung

Gastric Kriibs ass eent vun de meescht genannten Cancers vun der Welt. De "wirtschaftlech entwéckelt Länner" Liewen Stil, dorënner Ernährung, soumat e Risk Faktor dëser Kriibs favoriséieren. Diet modulation kann digestive Kriibs Heefegkeet niddreg. Dorënner villverspriechend Liewensmëttel Voleten, goufen Molkerei propionibacteria dës apoptosis vum Mënsch Colon Kriibs Zellen ze stellen, via d'Fräiloosse vu kuerzen-Ketten acetate fatty Saieren a propionate. VerfÜgung

Methodik /Principal effektiv VerfÜgung

A fermentéiert Mëllech , exklusiv vun P fermentéiert. freudenreichii VerfÜgung, war viru kuerzem entworf. An dëser Aarbecht, war de pro-apoptotic Potential vun dëser neier fermentéiert Mëllech op HGT-1 Mënsch gastric Kriibs Zellen bewisen. Fermentéiert Mëllech supernatant typesche Charakteristike vun apoptosis dorënner chromatin Kondensatioun, Équipe vun apoptotic Kierper, DNA laddering, Zell Zyklus verhaft an Entstoe vun enger subG1 Bevëlkerung, phosphatidylserine aussetzt um Plasma Membran baussenzege Iwerbléck reaktiv Sauerstoff Arten Heefung, Kënschtlech transmembrane Potential Stéierungen entschlof caspase Aktivéierung an cytochrome c release. Bemierkenswäert, mat dëser neier fermentéiert Mëllech P. freudenreichii VerfÜgung verstäerkte der cytotoxicity vun camptothecin, engem Alkohol- an gastric Kriibs Chimiotherapie benotzt. VerfÜgung

Konklusiounen /Grousses VerfÜgung

Entspriechend nei probiotic fermentéiert Mëllech also als Deel vun enger präventive Ernährung nëtzlech kann entworf ze verhënneren gastric Kriibs an /oder als Liewensmëttel Zousaz Kriibs therapeutesch Behandlungen potentiate VerfÜgung

Fro:. Cousin FJ, Jouan-Lanhouet S, Dimanche-Boitrel MT, Corcos L, Jan G (2012) Milk vun Propionibacterium freudenreichii VerfÜgung Induces Apoptosis vun HGT-1 Mënscherechter Gastric Cancer BTS. PLoS NËMMEN 7 (3): e31892. Doi: 10.1371 /journal.pone.0031892 VerfÜgung

Redakter: Abbes Belkhiri, Barnard University Medical Center, Vereenegt Staate vun Amerika VerfÜgung

Arnaque: 15. November 2011; Akzeptéiert: 19. Januar 2012; Publizéiert: 19. Mäerz 2012 VerfÜgung

Copyright: © 2012 Cousin et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung

Funding:. Dës Aarbecht vum Conseil Régional de Bretagne duerch d'CBB Développement Opruff war fir Projet'en fir Projeten an déi vum Centre National Interprofessionnel de l'Economie Laitière (CNIEL) duerch déi wëssenschaftlech Comité vun Syndifrais Opruff finanzéiert. Fuerschung an der IRSET Grupp war déi Subventioune vun der Ligue Nationale neier le Cancer (der Côte d'Armor, Departement Ille et Vilaine, Morbihan, Vendée an Sarthe Comittees), INSERM, Universitéit vu Rennes 1 an der Regioun Bretagne ënnerstëtzt. FJC scho Zouschoss aus CNIEL (Doktoranden hëllefen). SJL war vun der Association la Recherche sur le Cancer (Doktoranden Gemeinschaft) pour ënnerstëtzt. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung

Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung

Aféierung VerfÜgung

Diet modulates de Risiko gastric Kriibs VerfÜgung vun Entwécklungslänner

Cancer ass den Haaptgrond Doudesursaach vun wirtschaftlech entwéckelt Länner, déi aus Kriibs-verbonne Liewensstil entscheede dorënner fëmmen, kierperlech ordonnéiert, an "westernized" Ernährung [ ,,,0],1]. Tatsächlech ass d'Roll vun der Ernährung zu Kriibs Entwécklung staark vun epidemiological Studien ënnerstëtzt, besonnesch wat Cancers vun der digestive TRACT. Gastric Kriibs (GC) duerstellt drëtten Typ vu spektakulärer Cancers fir Männer vun der Welt. Am Joer 2008 huet 640,600 Fäll vun GC geschat, dauernd 464,400 Doudesfäll weltwäit [1]. Dës Krankheet ass besonnesch heefeg am Nordoste Asien, an Zentraleuropa an Osteuropa. Déi wichtegst etiological Facteuren zu gastric carcinogenesis implizéieren Ernährung an Helicobacter pylori VerfÜgung Wonn. Substantiell Beweiser, haaptsächlech aus Fall-Kontroll Studien, datt de Risiko vun Vertragspartner GC duerch héich ofgeroden salzeg, agemaachtent oder gefëmmt Traditionell Liewensmëttel fräi ass, wéi och gedréchent Fësch a Fleesch. Am Géigendeel, Faseren, frëscht Geméis an Uebst, wahrscheinlech wéinst hire Vitamin C Inhalt, huet fonnt inversely mam GC riskéieren [2] verbonne ginn, [3]. [6] - de Impakt vun natierleche /Liewensmëttel Komponente op carcinogenesis vun de Mo huet also während deene leschte Joerzéngten [4] propagéieren ginn. Dorënner, probiotics an hir Géigner d'Entwécklung vu Kriibs ze inhibit ugezunn wëssenschaftleche interesséieren [7], [8]. A probiotic ass allgemeng als "en liewen microorganism déi, wou an adequate Quantitéiten verwalt, e Gesondheet profitéiert fir de Provider jidferengem" definéiert [9]. Während e puer microorganisms wéi H. pylori VerfÜgung GC derfir kann, kann anerer hunn eng positiv Wierkung vun digestive Cancers bedengt. Besonnesch, ausgewielt analyséieren vun probiotic Bakterien kann Kriibs Entwécklung an Déier Modeller vun carcinogenesis [10] limitéiert. Dat war besonnesch fir Colon Kriibs Siicht ënnersicht manner op de méiglech Auswierkunge vun probiotics op GC bekannt ass. Eng méiglech mechanistic Erklärung vun esou engem Schutzpatrounin Effekt ass den zu situ VerfÜgung release vun Anti-carcinogenic metabolites wéi kuerz Kette fatty Saieren (SCFAs). VerfÜgung

Short Kette fatty Saieren apoptosis vun Kriibs Zellen induce VerfÜgung

SCFA, dorënner acetate, propionate an butyrate, si wichteg anions vun der intestinal Inhalt an hir Konzentratioun kënnt vun der Ernährung modulated ginn. Si waren eng Schlësselroll an wichteg Fro gestallt Funktiounen dorënner modulation vun der digestive epithelial Zellen Prolifératioun /apoptosis Gläichgewiicht ze Leeschtung gewisen. Heibäi handelt SCFA-mediated Zell-Zyklus verhaft, histone deacetylase inhibition an apoptosis Stimulatioun an transforméiert Zellen, mä och Stimulatioun dat an gesond Zellen [11], [12]. [15] - Et ass och, dass d'SCFAs butyrate an propionate souwuel induce apoptosis zu Mënsch gastric carcinoma Zell Linnen [13] gemellt ginn. Apoptosis ass eng natierlech physiologic Prozess Délaie Zell Zuel Regulatioun a soumat eng Zilscheif fir Anti-Kriibs Chimiotherapie [16]. Apoptosis erlaabt Ausschöpfung vun Kriibs Zellen zu engem "propper" duergestallt. Cancer Zellen Brochstéck vun engem koordinéiert Kette Reaktioun an d'Reschter sinn duerch bascht Stoffer an immun System opgehollen [17], [18]. Zwee Haaptgrënn apoptotic Weeër hunn beschriwwe ginn: d'extrinsic Passerelle, déi vun Aktivéierung vum Doud kenne an caspase 8, an d'Ausriichtung Passerelle mediated ass, an déi Mitochondrie an caspase 9 Équipe ginn [16]. Generell, an Kriibs Zellen, d'apoptotic Funktioun ass suivéiert, déi hir nohalteg Prolifératioun erklären kënnen an doduercher d'Équipe vun erhéijen. D'Kapazitéit apoptosis vun Kriibs Zellen ze induce ass domat fir hir therapeutesch Potential unerkannt [16]. Zanter Molkerei propionibacteria positiv pro-apoptotic SCFAs ze produzéiere kënnen, kënne si nëtzlech zu Kriibs Préventioun oder Behandlung beweisen. VerfÜgung

Propionibacterium freudenreichii VerfÜgung kann apoptotic Ausschöpfung vun digestive Kriibs Zellen dofir VerfÜgung

Dat probiotic Molkerei propionibacterium war duerch apoptosis kopéiert, an Co-Kulturen [19] Zell Doud vu verschiddene Mënsch Zell Colon Kriibs Linnen dës Distanz zu induce. Déi aktiv awer, an déi mëttel- secreted, ausgeléist Ausriichtung Kënschtlech apoptotic Passerelle an cultured Mënsch colorectal Kriibs Zellen. Besonnesch, acetate der SCFAs an propionate vun P lassgelooss. freudenreichii VerfÜgung induce apoptosis déi op der Kënschtlech adenine Nukleotid translocator Schauspill, dauernd Mitochondrie depolarization an permeabilisation, Auslafe vum cytochrome c an caspase Aktivéierung [19], [20]. Allerdéngs sinn propionibacterial supernatants nach méi pro-apoptotic wéi d'SCFAs acetate an propionate, um Konzentratioune vun supernatants gemooss ginn, proposéiert, datt aner awer zu dëser Effekt Équipe kann. Ausgewielt analyséieren vun P. freudenreichii VerfÜgung bleiwen liewen an metabolically aktiv am Daarm vun de Mënschen a vun de Mënscherechter microbiota-verbonne deër wou se SCFAs produzéiere [21], [22]. An anere Wierder, huet si dës Distanz zu apoptosis zu transforméiert Colon epithelial Zellen vun esou deër mat der carcinogen 1,2-dimethylhydrazine (DMH) z'iesse Erhéijung, mä net zu Kontroll gesond gelackelt [23]. Propionibacteria konnt probiotics favoriséieren Colon Kriibs prophylaxis wor, gëtt se hir Zil- lieweg a metabolically aktiv erreechen. An dësem Kontext, d'Vecteure, oder probiotic Liwwerung Gefier, huet dës Distanz zu propionibacteria Iwwerliewe an Aktivitéit [21], [24], [25] bestëmmen. Komplex Mëllechprodukter wéi évaluatiounssysteme a Kéis, an virun allem, schützen propionibacteria vum Stress, mä eng komplex Mëschung vun Bakterien enthalen. Et ass also net méiglech d'nëtzlechen Effekt zu engem bestëmmten Efforten ze Spezialfäegkeeten. VerfÜgung

A fermentéiert Mëllech als propionibacteria Liwwerung Gefier bewäert huet an dësem Kontext VerfÜgung

An dëser Etude, déi mer eng nei Liewensmëttel-Schouljoer fermentéiert Mëllech nëmmen P mat. freudenreichii VerfÜgung als eenzege microflora. Wéi dëse Produit souwuel liewen propionibacteria an hir aktiv metabolites enthält, sollt et hinnen an Kontakt mat der gastric mucosa bréngen wann ingested. Dëst fermentéiert Mëllech war mat Respekt ze HGT-1 Mënsch gastric Kriibs Zellen apoptosis Aféierungs- propagéieren. Iwwerhaapt sinn bekannt propionibacteria Mënsch Colon Kriibs Zellen ze bréngen, mä hir Wierkung op gastric Kriibs Zellen ass onbekannt. D'fermentéiert Mëllech ëmbruecht HGT-1 Zellen zu engem time- a Kribbelen-ofhängeg täteg. Typesche Charakteristike vun der apoptosis Prozess huet observéiert, dorënner Nuetsvolen rof, chromatin Kondensatioun, apoptotic Kierper 'Opstellung, DNA laddering, Ros Produktioun, Kënschtlech Membran Potential perturbation, caspase Aktivéierung Zell Zyklus verhaft an Entstoe vun enger subG1 Populatioun. VerfÜgung

Resultater VerfÜgung

P. freudenreichii VerfÜgung fermentéiert Mëllech Uergt Mënsch gastric an Colon Kriibs Zellen VerfÜgung

P. freudenreichii VerfÜgung ITG P9 gewuess an 72 h op 30 ° C an ergänzt Mëllech a séchert Mëllech ultrafiltrate Finale Populatioun vun 9,43 Logbuch ze erreechen _{10 Kolonie-administrativ Ënnerdeelunge (cfu) /ML an 9,35 Logbuch 10 cfu /mL, bzw.. D'SCFA Konzentratioune waren 26,21 mm acetate an 54,47 mm propionate (2.08 propionate /acetate Verhältnis) am supernatant Mëllech fermentéiert hierkommen se 24,00 mm an 53,32 mm huet (2.22 Verhältnis) am fermentéiert Mëllech ultrafiltrate supernatant. Dës nennen sech fir propionibacteria erwaart, déi normalerweis duebel sou vill propionate als acetate produzéiere [26]. Zwielef aner Liewensmëttel-Schouljoer Molkerei propionibacteria analyséieren goufen och getest (kuckt Table S1 an Dorënner S1). Benotzt dëse analyséieren, goufen zwielef fermentéiert milks kritt. Propionate Konzentratioune gounge vun 36 bis 67 mm an propionibacteria Populatiounen vun 9.0 bis 9,7 Logbuch 10 cfu /ML, fir déi manner a fir d'effizientesten Klischee, bzw.. VerfÜgung}

D'cytotoxic Potential vun supernatants aus Mëllech virbereet oder Mëllech ultrafiltrate, souwuel vun P fermentéiert. freudenreichii VerfÜgung ITG P9, ze propagéieren war. HT-29 Mënsch Colon Kriibs Zellen an HGT-1 Mënsch gastric Kriibs Zellen sech mat dësen supernatants behandelt. Verschidde dilutions rangéiert vun ½ bis getest. Ausserdem war de cytotoxicity vun enger Mëschung vu 15 mm acetate an 30 mm propionate getest, um Konzentratioune genotzt, fir dësen ½ verdënntem supernatants. Als positiv Kontrollen vun apoptosis kopéiert, d'Chimiotherapie Drogen camptothecin (4 μM) an etoposide (100 μM) huet fir HGT-1 an HT-29 Zellen benotzt, bzw.. Dräi verschidde Methode vun Zell Doud iwwerwaacht goufen Verglach. Als zu Dorënner S2 gewisen, methylene blo, MTT an trypan blo Exklusioun assays huet ähnlech Kinetik vum Doud. Demno, war methylene blo assay an dëser Etude benotzt fir weider Zell Nuetsvolen bewäerten. D'Net-fermentéiert Mëllechprodukter (Mëllech oder Mëllech ultrafiltrate) hu keen Effekt, weder op HT-29, nach op HGT-1 Zell Nuetsvolen (Figebam. 1 A, B). D'supernatant vun Mëllech oder Mëllech ultrafiltrate vun P fermentéiert. freudenreichii zu engem ähnlechen cytotoxicity zu enger Zäit-ofhängeg Fassong HT-29 an HGT-1 Zellen entschlof, an no der cytotoxicity vun Drogen oder vun der acetate /propionate Mëschung entschlof. Halschent-Bäschten Dout vun HGT-1 Zellen Priedegt no 24 h an 26 h vu Behandlung mat der fermentéiert Mëllech a Mëllech ultrafiltrate supernatants fermentéiert respektiv, no 17 h vu Behandlung mat camptothecin an der 24 h vu Behandlung mat SCFA Mëschung (Figebam. S3) . Ausserdeem war de cytotoxicity vun fermentéiert Molkerei Produit supernatants zu HGT-1 Zellen Portioun-ofhängeg (Figebam. 1c). Fir all dilution getest entschlof d'Lëscht vun HGT-1 Zell Nuetsvolen vun der fermentéiert Mëllech oder der fermentéiert Mëllech ultrafiltrate war ganz ähnlech (Lalumi 1c &.. Lalumi S3). Dat ass firwat d'nächst Schrëtt vun der Etude mir nëmmen mat der fermentéiert Mëllech ultrafiltrate supernatant gesuergt. Geholl zesummen, weg dës Donnéeën, déi propionibacteria effizient Mënsch Colon an gastric Kriibs Zellen ëmbréngen, op d'mannst zu engem Deel via d'Produktioun vun propionate an acetate (Figebam. 1). Verschidden aner fermentéiert milks, duerch verschidden Molkerei propionibacteria analyséieren fermentéiert, awer ähnlech cytotoxic Auswierkungen op Kriibs Zellen (Table S2). P. freudenreichii VerfÜgung ITG P9 Wiesen fir seng metabolic Aktivitéit zu VIVO VerfÜgung [22], den entspriechende fermentéiert Mëllech bekannt war weider studéiert. VerfÜgung

P. freudenreichii VerfÜgung fermentéiert Mëllech induces typesch Spuren vun apoptosis zu Mënsch gastric Kriibs Zellen VerfÜgung

Nucleus Wirklechkeet vun HGT-1 an der Präsenz incubated Zellen vun P. freudenreichii VerfÜgung fermentéiert Mëllech ultrafiltrate war vun fluorescence microscopy der Hoechst 33342 staining (Figebam. 2A) analyséieren. D'Nuklearenergie fluorescence vun onbehandelt Zellen (Kontroll) bleift während der Zäit natierlech vun der Experimenter mat bloe normal Kären (Zäit 0 h, Figebam. 2Aa) onverännert. Während Behandlung, ugewisen HGT-1 Zellen der condenséierter chromatin an fragmentaresch Käre Charakteristiken vun apoptotic Kären (Figebam. 2Ab, c), gefollegt vun der Opkommen vun apoptotic Kierper um 72 h (Figebam. 2Ad). Inter-nucleosomal DNA véiermol geplatzt DNA laddering, eng typesch Zeeche vun apoptosis [27], war och während fermentéiert Mëllech ultrafiltrate Behandlung iwwerwaacht. DNA véiermol sou gouf aus 24 h vu Behandlung mat fermentéiert Mëllech ultrafiltrate (Figebam. 2B), an zu enger klenger Mooss mat camptothecin (Figebam. S3) observéiert. DNA stong och duerch onkontrolléiert cytometry der propidium Kaliumiodid Etikette ze studéieren den Impakt vun fermentéiert Mëllech ultrafiltrate op HGT-1 Zell Zyklus Verdeelung (Figebam. 2C) laachen. Onbehandelt HGT-1 Zellen eng Zell Zyklus Verdeelung virgestallt (Figebam. 2Ca) ouni subG1 Phase, déi während der Zäit natierlech vun der Experimenter onverännert blouf (Donnéeën net gewisen). De Prozentsaz vun Zellen zu subG1 Phas, duerops eng apoptotic Prozess, vill mat Zäit während fermentéiert Mëllech ultrafiltrate Behandlung (. Lalumi 2Cb, gi, Albumen) fräi: um 24 h (39.24 ± 4,87%), um 48 h (91.63 ± 0,28 %) an um 72 h (94.79 ± 0,45%). Um 48 h an 72 h vu Behandlung, all waren d'Zellen am subG1 Zell Zyklus Phas, beweist de komplette Doud vun HGT-1 Zellen. Als Kontroll, vun der bannescht ze confirméieren apoptosis kopéiert, phosphatdylserine br camptothecin ähnlechen apoptotic hallmarks zu HGT-1 Zellen (Figebam. S4). VerfÜgung

entschlof zu de bausseschte Dépliant vum Plasma Membran vun staining HGT- évaluéieren war 1 Zellen mat enger Kombinatioun vun Annexin V-FITC (AV) a 7-vunda, gefollegt vun Flux cytometry fluorescence Analyse (Figebam. 3). Onbehandelt Zellen (0 h) virgestallt engem héijen Undeel vun liewen Zellen (AV - /7AAD -; 92%) an nëmme 5% vun Zellen sech mat Annexin V Kierchefënster (Lalumi 3B.). Dës Prozentzuelen an onbehandelt Zellen sech net während der Zäit natierlech vun der Experimenter änneren (Donnéeën net gewisen). Während der Behandlung vun HGT-1 Zellen mat ½ verdënntem fermentéiert Mëllech ultrafiltrate zu DMEMc, de Prozentsaz vun Zellen Kierchefënster nëmmen duerch 7-vunda (besot necrosis) war Héich (Figebam. 3B). Allerdéngs huet d'Prozentzuelen vun Zellen Kierchefënster mat Annexin V wiesentlech zu enger Zäit-ofhängeg Manéier an erreecht 80% op 72 h (Figebam. 3B). Dofir, mécht HGT-1 Zellen apoptosis der Behandlung mat P. freudenreichii VerfÜgung Mëllech ultrafiltrate fermentéiert, déi éischt AV positive staining charakteriséiert, phosphatidylserine aussetzt beweist, an dann souwuel AV a 7-vunda positive staining, e spéider Verloscht vun Membran Integritéit ugëtt. Als eng Kontroll entschlof camptothecin ähnlechen apoptotic hallmarks (Lalumi S5.) VerfÜgung

als SCFA Akt direkt op Mitochondrie, waren dräi wichteg Kënschtlech Parameter och alles:. De ΔΨm zentrale Membran Potential, an d'Generatioun vun Ros, mat zwou unisse Ämter, DiOC (6) 3 (deen ass ΔΨm-senisitive) an DHE (deen O _{bieden 2 - Niveau), an d'Lokalisatioun vun cytochrome c. Onbehandelt Zellen (0 h) Schatzkummer eng héich fluorescence (Héich ΔΨm) an engem niddregen DHE fluorescence (Niddereg Produktioun vun O 2 -) (. Lalumi 4A, B). No Behandlung mat fermentéiert Mëllech ultrafiltrate, eng Zäit-ofhängeg Ofsenkung vun Aktivitéiten vun DiOC6 (3) war unisse Studiebäihëllefe observéiert, e Verloscht vun ΔΨm an domat Kënschtlech Membran depolarization demaskéierte (Figebam. 4A). D'Prozentzuelen vun behandelt HGT-1 Zellen mat ofgeholl zentrale Membran Potential an enger Zäit-ofhängeg Manéier fräi 96% vun Zellen um 72 h ze erreechen. FCCP Traitement war als positive Kontroll vun Kënschtlech Membran depolarization benotzt. Dëse Verloscht vun ΔΨm war vun der charakteristesche Verloscht vun rout fluorescence folgenden JC-1 staining (Figebam. 4B) confirméiert. Wat Ros Produktioun vun HGT-1 Zellen, fermentéiert Mëllech ultrafiltrate Behandlung entschlof Heefung vun O 2 -, vill no 48 h an 72 h vu Behandlung (Lalumi 4C.). Dëst Ros Heefung kënnen deelweis wann Zellen verhënnert ginn si duerch den Ros Ralley TEMPOL Pre-behandelt (Figebam. S6). Cytochrome c Fräiloosse vu Mitochondrie zu der Zytoplasma ass e Schlëssel bewosst Evenement vun der apoptotic Programm. Immunoblotting Ënnersichung vum Zytoplasma-beräichert ufale fir d'Präsenz vun cytochrome c bestätegt enger Ännerung vun hire subcellular Lokaliséierung (Figebam. 4D). Cytochrome c war an der Zytoplasma-beräichert Ëmwandlung vun 24 h vu Behandlung, déi besot Transfer vun dëser FAQ (Figebam. 4D) fonnt. Dëst relocalization vun cytochrome c an der Zytoplasma war vun immunostaining confirméiert, diffusen immunostaining uechter d'Zell an der Behandlung ze weisen, während punctuated staining virun Behandlung (Figebam. 4E). VerfÜgung}

P. freudenreichii VerfÜgung fermentéiert Mëllech activéiert caspases VerfÜgung

der apoptotic Mechanisme vun fermentéiert Mëllech ultrafiltrate zu HGT-1 Zellen, Ofwécklung vun caspases 3, 8 an 9 war vum südwestlechen blotting an entspriechend enzymatic Aktivitéiten Iwwerwachung vun HGT analyséiert entschlof Fir confirméieren -1 Zell dovu (Figebam. 5). D'Net-fermentéiert Mëllech ultrafiltrate rauszesichen caspase Aktivatioun vun HGT-1 Zellen induce: nëmmen d'proforms vun caspase-3 an -9 sech op westlech blot fonnt (. Lalumi 5A) a kee caspase Aktivitéit war gemooss (Lalumi 5B.). D'fermentéiert Mëllech ultrafiltrate supernatant, souwéi d'camptothecin oder d'Mëschung vun propionate an acetate vun engem [2: 1] Dokter Verhältnis, déi Rëss vum pro-caspase 3 an d'Generatioun vun der aktiver Formen vun caspase-3, de subunits entschlof p17 an P12 (Figebam. 5A). Der Aktivatioun vun caspase-3, deen ass en effector caspase, confirméiert de apoptosis kopéiert. Zousätzlech, fermentéiert Mëllech ultrafiltrate Rëss vun procaspase-9 entschlof, Spëtzekandidat bei der 35 a 37 kDa Filteren Formen. Caspase-8 war zu Kontroll onbehandelt HGT-1 Zellen net fonnt. Allerdéngs, Behandlung mat propionibacterial supernatants oder C2 /C3 Mëschung zu engem kloer ze erkennen der 54. kDa proform gefouert, gefollegt duerch seng Rëss no 48 h vu Behandlung VerfÜgung

D'quantification vun der caspase-3, -8 an. - 9 enzymatic Aktivitéiten bestätegt caspase Aktivatioun vun béiden propionibacterial metabolites a vun camptothecin. Tatsächlech caspases-9 an -3 sech um éischt Etappe vun der Behandlung ausgeléist, iwwerdeems caspase-8 spéit ageschalt war (Figebam. 5B). Camptothecin an der SCFA Mëschung ageschalt der all dräi studéiert caspases. Dës Donnéeë confirméiert der Aktivatioun vun der Ausriichtung Passerelle vun apoptosis vun fermentéiert Mëllech ultrafiltrate Behandlung mat engem fréie Aktivatioun vun caspase-9 an da vun caspase-3 an -8. VerfÜgung

P. freudenreichii VerfÜgung fermentéiert Mëllech geet camptothecin cytotoxicity VerfÜgung

Campthotecin engem quinoline alkaloid cytotoxic ass wat d'DNA Aktivitéit bremst topoisomerase ech (anerer Sprooch sin) an ass iwwerall an der chemotherapeutic Behandlung vun GC benotzt. Mir gewisen hu virun datt propionibacterial metabolites apoptosis zu HGT-1 Zellen via de Kënschtlech Doud Passerelle induce. Mir studéiert nächst apoptosis entschlof vun der Kombinatioun vun deenen zwee camptothecin an fermentéiert Mëllech ultrafiltrate zu HGT-1 Zellen. Geklomm Konzentratioune vun camptothecin (0, 0,25, 0,5, 1, 2 μM) a Kombinatioun mat fräi Konzentratioune vun fermentéiert Mëllech ultrafiltrate (0, ⅛, ¼) sech op HGT-1 Zell Nuetsvolen getest a béid entschlof Verloscht vun HGT-1 Nuetsvolen , an enger Portioun-ofhängeg Manéier (Figebam. 6). Desweideren, verstäerkte Zousatz vun fermentéiert Mëllech ultrafiltrate bedeitend der cytotoxicity vun camptothecin zu HGT-1 Zellen (Figebam. 6). Zum Beispill, 0,25 μM camptothecin an fermentéiert Mëllech ultrafiltrate verdënntem zu engem Nuetsvolen Perte vun 8,6%, an 18,6%, respektiv Nerve ⅛. D'Kombinatioun vun dësen zwee awer Nerve eng Zell Nuetsvolen Verloscht vun 29,8% (Figebam. 6), proposéiert Iech eng Valeur cytotoxicity Effekt wann camptothecin mat fermentéiert Mëllech ultrafiltrate zu HGT-1 Zellen kombinéiert huet. An anere Wierder, de geschéckt index (CI), berechent wéi virdrun [28], huet e Wäert vun 1, eng additive Effet vun camptothecin an fermentéiert Mëllech ultrafiltrate Behandlungen besot. VerfÜgung

Diskussioun VerfÜgung

Eng nei fermentéiert Mëllech, wouvun P. freudenreichii VerfÜgung als eenzege Bakterie, war fir entwéckelt fir weider der probiotic Potential vun dëser Molkerei Virbereedung vun propionibacteria (iwwer- [29]) z'ënnersichen. An dëser Etude, Rapport mer datt der meng Phase vun dëser fermentéiert Mëllech Uergt Mënsch Colon an gastric Kriibs Zellen via metabolites, dorënner propionate an acetate, vun dëser Bakterie lassgelooss. Dës Notioun ass baséiert op der observéiert cytotoxic Auswierkunge vun P. freudenreichii VerfÜgung op cultured HT-29 Mëllech supernatants fermentéiert an HGT-1 Kriibs Zellen. Dësen Effekt gouf mat ultracentrifugation supernatants kritt, i.e. der fermentéiert Mëllech meng Phas, ouni caseins a vun Bakterien, weist datt déi aktiv awer sinn secreted, wéi virdrun fir propionibacteria beschriwwen [19]. Aus deem Grond, waren déi vun der Experimenter zu dëser Aarbecht mat fermentéiert Mëllech ultrafiltrate (Figebam. 1) gesuergt. Mir bewisen, fir d'éischte Kéier, datt P. freudenreichii VerfÜgung zu engem time- a Kribbelen-ofhängeg Manéier mat den Optrëtt vun der klassescher morphological an biochemical Charakteristike vun apoptosis (ënnersichen an fragmentaresch chromation, DNA laddering an Heefung vun Zellen zu subG1 Zell Zyklus Mëllech supernatant entschlof apoptosis vun HGT-1 Zellen fermentéiert Phase). VerfÜgung

Mir ausgesinn dann wann der bewosst Mechanismen HGT-1 Zell Doud Passerelle Équipe op den Kënschtlech Doud Passerelle ähnlechen sech ausgeléist zu Caco-2 an HT-29 Mënsch Colon Kriibs Zellen vun P. freudenreichii VerfÜgung DMEMc Kultur supernatants [19], [20]. Sous-bewosst an biochemical Evenementer zu behandelt HGT-1 Zellen mat fermentéiert Mëllech ultrafiltrate observéiert waren ähnlech an och, op d'mannst, Kënschtlech ΔΨm Verloscht, Ros (O _{2 -) Generatioun, caspases Veraarbechtung an Aktivéierung cytochrome c Transfer an der Zytoplasma (Figebam. 3, 4, 5). Fermentéiert Mëllech supernatant entschlof Veraarbechtung an Aktivéierung vun caspase-8, zousätzlech zu caspases -3 an -9. Desweideren, beweist Dorënner 4A datt caspase-8 net zu Kontroll onbehandelt Zellen an Zellen mat camptothecin oder Net-fermentéiert Mëllech ultrafiltrate, am Aklang mat de Mangel vun hirer mRNA (C. Le Jossic-Corcos, Fakultéit fir Medezin, Brest behandelt festgestallt gëtt , Frankräich, perséinlech Kommunikatioun). Et soll festgestallt ginn, datt eng visuell Ënnerscheeder tëscht enzymatic Resultater existéiert, caspase-8 Aktivitéiten am camptothecin-behandelt Zellen suggeréiert, iwwerdeems keng caspase-8 vun deenen Zellen duerch westlech blotting fonnt gëtt. Dëst kann duerch d'Feele vun Spezifizitéit vun der AC-IETD-AMC Realitéiten erkläert ginn, wat déi aner Enzymen wéi caspases verschafft ka -3 an -10 oder granzyme B, virun allem wann d'Konzentratioun vun esou Enzymen nik ass [30], [31]. Par contre, P. freudenreichii VerfÜgung Mëllech ultrafiltrate fermentéiert an d'Mëschung vun SCFA souwuel Ausdrock an Aktivéierung vun caspase-8 verursaacht. D'Prozeduren hei involvéiert sinn net opgekläert; Ee, caspase-8 ass bekannt ënnert-ausgedréckt an e puer Kriibs Zellen als Resultat vun DNA methylation ginn [32], [33]. Seng Ausdrock kënnt vun demethylating Agenten wéi decitabine [34] an HDAC inhibitors [35], geplatzt demethylation vun der reglementaresche Haaptrei vun caspase-8, eng Hausse vun caspase-8 Promoteur Aktivitéit an du bei der RNS an FAQ restauréiert ginn -expression vun caspase-8 [32]. SCFA, wéi propionate, sinn HDAC inhibitors, flénke hyperacetylation vun histones [36]. Dëst favoriséiert Transkriptiouns via eng Ännerung vun DNA conformation [37] a konnt de caspase-8 Ausdrock restauréieren. Aner Liewensmëttel-gebuer awer goufen et scho gewisen ze caspase-8 Ausdrock restauréieren. An injectable Extrait vun Semen coicis VerfÜgung (eng famill vu Mais) Extrait ginn Anti-entholl Aktivitéit Ausdrock vun caspase verbessert 8 an induces apoptosis zu HepG2 Zellen [38]. Diallyl disulfide, an Knuewelek fonnt, verbessert Ausdrock vun caspase-8, Sekondär FasL zu Leukämie K562 Zellen. Esou eng Regelung also kann an de pro-apoptotic Auswierkunge vun Molkerei propionibacteria a vun fermentéiert Produite mat hinnen Équipe ginn. Western blotting Siicht Ausdrock restauréiert an dann spéiden Aktivatioun vun caspase-8 zu propionibacterial metabolites-behandelt HGT-1 Zellen, déi als Resultat vun caspase-8 Aktivatioun vun engem anere caspase wéi caspase-9 geschéie kann. Tatsächlech Sortie vun cytochrome c, Deel vun der Kënschtlech Passerelle, war 3 verschidden caspases dorënner 2, ze aktivéieren gewisen, 6, 7, 8 an 10 [39]. Doriwwer eraus, war caspase-9 Aktivéierung Resultat an Ugrëff-bäiginn caspase-8 Aktivéierung dës [40]. An anere Wierder, caspase-9 huet dës kënschtlech VerfÜgung ze aktivéieren caspase-3 déi am ëmdréit caspase-6, responsabel fir caspase-8 Aktivéierung activéiert [41]. Ofzeschafen, eis Resultater confirméieren datt propionibacterial metabolites präsent an P. freudenreichii VerfÜgung fermentéiert Mëllech puer Ënner-bewosst Mechanismen apoptosis favoriséieren induce. Esou engem reactivation vun caspase-8 Ausdrock hätt zu engem groussen apoptotic Äntwert Féierung vun HGT-1 behandelt Zellen mat dout Domain kenne agonists (zB Trail oder Sekondär). VerfÜgung}

Fir eist Wëssen, dat ass déi éischt Aarbechten spezifesch Informatiounsblat Aféierungs- vun gastric Kriibs Zell apoptosis vun engem fermentéiert Molkerei Produit. Fermentéiert milks, dorënner évaluatiounssysteme, si proposéiert an der Préventioun vun Colon Kriibs nëtzlech ze sinn. Epidemiological Donnéeën iwwert d'Schutzpatrounin Auswierkunge vun Mëllech a Mëllechprodukter op Colon Kriibs Taux vum contraire Resultater [42]. Mëllech an total Mëllechprodukter Konsum ass mat enger Reduktioun vun colorectal Kriibs Risiko verbonnen. Mä dat ass net richteg, fir all Zorte vu Mëllechproduiten a Effekter daitlech variéieren. Fermentéiert Mëllechprodukter kann efficace Liwwerung Gefierer sécherlech zu Schutzpatrounin Molekülle oder microorganisms zu Anlagen wéi d'digestive epithelium Zil- [43]. Bovine lactoferrin, eng Assemblée vun Mëllech, induces apoptosis vun Colon [44] an gastric [45] Kriibs Zellen. Ausgewielt analyséieren vun microorganisms präsent an fermentéiert milks kann och Colon carcinogenesis Krise. An anere Wierder, évaluatiounssysteme an lactic Seier Bakterien Anti-Kriibs Eegeschafte vun Déier Modeller vun Colon carcinogenesis Schatzkummer [46]. Allerdéngs, kleng Aarbechten do op fermentéiert Mëllechproduiten a gastric Kriibs. Eis Aarbecht hindeit datt P. freudenreichii VerfÜgung hätt eng wichteg Roll an dësem Kontext spillen, wéi et souwuel liewen propionibacteria liwwere géif an pro-apoptotic metabolites zu der gastric mucosa. An dësem Kontext, soll et bemierkt ginn, dass P. freudenreichii VerfÜgung Decisioune epithelial Zellen ze digestive an zu mucus [47], [48]. Et war och epithelial Zellen ze digestive, souwéi H zu inhibit Haftung vun der causative Agent vum gastric Kriibs Helicobacter pylori VerfÜgung gewisen. pylori VerfÜgung -induced Schuedenersaz [49]. Dës Eegeschafte proposéiere eng Roll vun P. freudenreichii VerfÜgung Mëllech am prophylaxis vun gastric Kriibs fermentéiert. VerfÜgung

Endlech, eis fermentéiert Mëllech potentialized de pro-apoptotic Aktioun vun der Drogenofhängeger camptothecin op gastric Kriibs Zellen. An anere Wierder, waren liewen Kulturen vun probiotic lactobacilli virdrun gewisen ze LS513 colorectal Kriibs Zellen zu 5-fluorouracyl [50] sensitize. Mä an dësem Fall no der probiotics eleng keen proapoptotic Effekt. An dësem Wierk, camptothecin héich Dosis vun den Drogen an gastric Kriibs Chimiotherapie benotzt goufen gestéiert an gastric Kriibs Zellen Märder. Allerdéngs, an der Präsenz vun héich Dosis vun P. freudenreichii VerfÜgung Mëllech fermentéiert, se déi selwecht Zellen effizient (Figebam. 6) ëmbruecht. Propionibacterial metabolites d'Ausriichtung apoptosis Passerelle induce déi direkt op Mitochondrie Schauspill, iwwerdeems camptothecin um DNA Niveau Akten. Dat ass konsequent mat hire entwéckele Potential vun apoptosis Aféierungs- wann dës pro-apoptotic inducers kombinéiert ginn. Ausserdeem, d'fermentéiert Mëllech enthält SFCAs, bekannt als HDAC inhibitors gebass apoptosis an Zell Zyklus vun gastric Kriibs Zellen zu well [13], [51] wéi och de Beweis vun Zell Zyklus dinn an apoptotic Proteinen an aner Kriibs Zellen [52], [53]. Probiotics sech schonn am Medeziner Studien gebraucht der Säit Auswierkunge vun Kriibs Chimiotherapie [54] ze reduzéieren. P. freudenreichii VerfÜgung kann, laut eisem Resultater, zu esou Krankheete Studien gebraucht ginn. Seng synergistic Effekt kann hëllefen d'Drogenofhängeger Dosis an verbesseren de Confort vun Patienten bis ënnen. VerfÜgung

An Conclusioun, eng nei Mëllech, exklusiv fermentéiert vun P. freudenreichii VerfÜgung entschlof apoptosis zu HGT-1 Mënsch gastric Kriibs Zellen. Zousätzlech, verstäerkt dës fermentéiert Mëllech der camptothecin cytotoxicity Aktivitéit, Alkohol- an gastric Kriibs Chimiotherapie benotzt. Esou nei probiotic fermentéiert Mëllech kéint interessant gin als Nahrung gastric Kriibs an /oder zu potentialize therapeutesch Behandlungen ze verhënneren. VerfÜgung

spontan a Methode VerfÜgung

Chemesch VerfÜgung

Camptothecin, etoposide propionate, TEMPOL, acetate an Natrium Salzer, an caspase heescht de Législateur, AC-DEVD-AMC (N-Acetyl-ASPLanguage-Glu-Val-ASPLanguage-7-amido-4-methylcoumarin), AC-IETD-AMC (N-Acetyl-Île -Glu-dëss-ASPLanguage-7-amido-4-methylcoumarin) an AC-LEHD-AFC (N-Acetyl-Leu-Glu-seng-ASPLanguage-7-amido-4-trifluoromethylcoumarin) sech aus Fläch-Aldrich (Saint kaaft -Quentin Fallavier, Frankräich). Camptothecin war zu DMSO opgeléist. D'Finale Konzentratioun vun DMSO hutt däerfte net 0,01%, eng Usammlung datt all toxicity net induce gemaach. RNAse A, PI (propidium Kaliumiodid), Hoechst H33342, MitoTracker® Red CMXRos, A-PRO-3, JC-1, 3,3'-dihexyloxacarbocyanine Kaliumiodid (DiOC6 (3)) an dihydroethidium (DHE) sech aus Invitrogen kritt ( Cergy-Pontoise, Frankräich). Annexin V-FITC (AV) Kit a 7-aminoactinomycin-D (7-vunda) Léisung sech duerch BD Biosciences (Pont-de-Claix, Frankräich) gëtt.

• PLOS NËMMEN: E-Cadherin Déstabiliséierung Konten fir d'Pathogenicity vun Missense kennen Ierfgroussherzog Firwat Gastric Cancer
• PLOS NËMMEN: Umeldung vun Serum MicroRNAs als Roman Non-invasiv Biomarkers fir fréi ze erkennen Gastric Cancer