D'Roll vum Mir-26A zu Kriibs Zellen sech am fréiere Studien kontrovers. Bis elo, bleift der Roll vum Mir-26A zu gastric Kriibs ondefinéiert. An dëser Etude, hunn mer dat Mir-26A staark an gastric Kriibs (GC) Stoffer an Zell Linnen downregulated war, a sengem Ausdrock Niveauen sech mat lymph Node Metastasen a Krankheete Etapp assoziéiert, wéi och a Punkto Iwwerliewe an replase-gratis Iwwerliewe vun GC . Mir hunn och déi ectopic Ausdrock vu Mir-26A inhibited GC Zell Prolifératioun an GC Metastasen kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung. Mir weider engem Roman Mechanismus vum Mir-26A identifizéiert zu GC Wuesstem an Metastasen oofgesinn. FGF9 gouf bewisen engem direkten Zil vum Mir-26A gin, luciferase assay a westlech blot benotzt. FGF9 overexpression zu Mir-26A-ausdrécken Zellen konnt Invasioun an Wuestum Mängel vum Mir-26A retten. Zousätzlech, inversely Mir-26A Ausdrock mat FGF9 FAQ Niveauen am GC soll. Geholl zesummen, eis Daten drop hindeit, datt Mir-26A Funktiounen als entholl suppressor am GC Entwécklung an Werdegang, an hält verspriechen als prognostic uweist a Potential therapeutesch Zil fir GC VerfÜgung Fro:. Lu Deng M, Tang Hl, Xh, Liu My, Lu Xm, Gu Yx, et al. (2013) Mir-26A Hien entholl Wuesstem an Metastasen vun FGF9 gezielt an Gastric Cancer. PLoS NËMMEN 8 (8): e72662. Doi: 10.1371 /journal.pone.0072662 VerfÜgung Redakter: H. Sonn Sonn, Institut vu Krankheeten, Taiwan VerfÜgung Arnaque: 29. Mäerz 2013; Akzeptéiert: 12 Juli, 2013; Publizéiert: 28. August 2013 zu Copyright: © 2013 Deng et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Funding:. Dës Aarbecht war déi Subventioune vun der Nature wëssenschaftlech Foundation vu China (81101526, 31100936) an lousoihong Medical College Doctor Start Foundation (2012C11) ënnerstëtzt. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung miRNAs sinn endogenously ausgedréckt, kleng noncoding RNAs déi negatif vun der Gentherapie Ausdrock regléieren dauernd ofgeschnidden vun Zil- mRNAs, inhibition vun der Iwwersetzung vun dësen mRNAs oder béiden [1]. miRNAs huelen en Deel vun entscheedende bewosst Prozesser wéi de Stress Äntwert, Entwécklung, dat, apoptosis, an Prolifératioun [2]. Verännert miRNA Ausdrock huet zu villen malignancies gemellt ginn, dorënner Broscht [3], [4], haett [5], Liewer [6], Mo [7], Colon [8], Gehir [9], Leukämie [10], an lymphoma [11]. Ëmmer méi Etuden hu bewisen, dass miRNAs als oncogenes oder entholl suppressors Funktioun kënnen, a si sinn oft an erhéijen [12], [13] dysregulated. An dat wat, sinn oncogenic miRNAs dacks upregulated hierkommen entholl-suppressing miRNAs zu erhéijen downregulated sinn. Zum Beispill, loosse-7 ass gemellt ginn an haett Kriibs underexpressed gin an der oncogenic Ras [14] zu Zil, [15]. Mir ginn virdrun dass Mir-216b staark an nasopharyngeal carcinoma downregulated ass an attenuates Wuesstem entholl vun KRAS gezielt [16]. Am Géigesaz, sinn d'oncogenic Mir-17-92 Stärekoup vun miRNAs zu ville entholl upregulated [17], a kréie Ausdrock vun dësen miRNAs am Wuel-studéiert Eμ-myc transgenic Maus Modell vun B Zell lymphoma gut iwwerstan dramatesch Krankheet agesat a Werdegang [18]. Allerdéngs war d'Roll vum Mir-26A zu Kriibs Zellen kontrovers, wéi et engem entholl suppressor zu hepatocellular carcinoma ass [19], Broscht Kriibs [20] an nasopharyngeal carcinoma [21], [22] awer ass eng oncogene zu glioma [23 ] an cholangiocarcinoma [24]. Bis elo, war ondefinéiert der Roll vum Mir-26 zu gastric Kriibs. VerfÜgung Am Moment studéieren, mir Mir-26A Ausdrock vun 40 normal an GC uplanzen zur grouss RT-Hinnen alleguer (qRT-Hinnen alleguer) Analyse vläit iwwerpréift . Mir-26A war staark downregulated gin am GC Stoffer fonnt wéi mat deem vun bascht normal Mo. Stoffer Verglach. Dëst Resultat war weider vun op Otemschwieregkeeten microarrays zu situ hybridization bestätegt aus 126 Fäll vu GC Stoffer a 41 Fäll vun bascht normal Stoffer. Desweideren, ofgeholl Mir-26A war mat aarmséileg hätt verbonne a kënnen onofhängeg globale Iwwerliewe (OS) an replase-gratis Iwwerliewe (RFS) zu gastric Kriibs virauszesoen. Funktionell Studien Teamchef Mir-26A GC Zell Wuesstem opgeléist an Metastasen vun FGF9 gezielt. VerfÜgung Mir-26A ass Downregulated zu Mënscherechter Gastric Cancer VerfÜgung deems en qRT-Hinnen alleguer Method, Mir-26A Niveau sech zu 40 Puer gastric Kriibs Stoffer an hir gepasst bascht Stoffer, souwéi gastric Zell Linnen fonnt. Ënnert de 40 Patienten mat gastric Kriibs, ongeféier 70% (28 vun 40 Patiente) vun erhéijen réischt méi wéi zwee-Weeër Reduktioun Mir-26A Niveauen, mat engem 5.76-fantastesch Reduktioun famill ze bascht normal Stoffer, suggeréiert datt Reduktioun vum Mir -26a war e reegelméissegen Event am mënschleche GC (Dorënner 1A). Ausserdem, huet Mir-26A Ausdrock vun all gastric Kriibs Zell Linnen (MKN-28, SGC-7901, AGS, MGC-803, MKN-45, an BGC-823) reduzéiert Verglach mat der nonmalignant gastric Zell Linn GES-1 (Dorënner 1B). Fir weider d'Resultater z'iwwerpréiwen der biologescher Roll vum Mir-26A zu Mënsch gastric carcinogenesis, Employé mir zu situ hybridisation Mir-26A Ausdrock vun 126 GCs an 41 Net-entholl Stoffer op Otemschwieregkeeten microarrays (TMAs) diskutéieren. D'Resultater verroden, datt d'Ausdrock Fändelen vun Mir-26A sech zu GCs Verglach mat normal Stoffer (Dorënner 1c) däitlech erofgaangen. Nächst, sech mer d'Potential clinicopathological Implikatioune vun verännert Mir-26A Ausdrock. Séminairen Echantillon waren an niddreg Ausdrock ënnerdeelt an héich Ausdrock Gruppen baséiert op Mir-26A Ausdrock Fändelen méi oder manner wéi de Steiren. Konsequent mat der uewe Donnéeën, aus 41 total normal Mo. Echantillonen, 35 (85%) déi héich Ausdrock vu Mir-26A. Am Géigesaz, 60% (76 vun 126) vun gastric carcinoma uplanzen an niddreg ze negativ Ausdrock vu Mir-26A. Vun der 126 Persounen mat GC, goufen 38 fir lymph Node Metastasen negativ, an 45% vun deene Patienten ze negativ Ausdrock vun Mir-26A (Table 1) haten niddereg. Achtzegjärege-aacht Patienten sech fir lymph Node Metastasen positiv, an 67% vun hinne weisen downregulation oder Verloscht vun Mir-26A (Table 1). Desweideren, fonnt mir niddereg Ausdrock vu Mir-26A zu 37% an 77% vun gastric erhéijen als Etapp ech séiert /II an III Etapp /IV, bzw. (Table 1). Dofir, inversely Mir-26A Ausdrock deemolegt Weltbild mat lymph Node Metastasen a Krankheete Etapp ( P VerfÜgung = 0,019 an P VerfÜgung &Si besteet; 0,001 bzw.). Allerdéngs huet Mir-26A net mam Alter, Geschlecht, Zell dat, oder Invasioun Déift (T Etapp) vergläichen. Dës Resultater hindeit, datt de Bord-26A kéint eng kritesch Roll an der GC Metastasen an Werdegang Leeschtung. VerfÜgung Ofgeholl Mir-26A deemolegt Weltbild mat Poor Séminairen hätt VerfÜgung weider Fir d'Bedeitung vum Mir-26A analyséieren am Beräich vun de Medeziner hätt, war Kaplan-Meier Iwwerliewe Analyse mat Patient global Iwwerliewe an Réckwee-gratis Iwwerliewe gesuergt. D'Resultater bewisen, dass Patienten mat niddereg Mir-26A Ausdrock hat kuerz Steiren OS a RFS wéi Patienten huet mat héije Bord-26A Ausdrock (21.6 Méint vs. 39,0 Méint, P VerfÜgung &Si besteet; 0,001 fir OS; 15,2 Méint vs . 31,6 Méint, P VerfÜgung = 0,002 fir RFS; Dorënner 1D). Mir benotzt Cox proportional-Risikoe Réckgang fir weider der Associatioun tëscht Mir-26A Ausdrock an hätt diskutéieren. An univariate Analyse, lymph Node Metastasen, TNM Etapp, an Mir-26A Niveauen sech vill mat der OS assoziéiert an RFS (Table 2, 3). D'Finale multivariate Model verroden datt allgemeng Iwwerliewe Zäit vill op lymph Node Metastasen Ofhängegkeet, TNM Etapp, an Mir-26A Niveauen (Table 2), an Réckwee-gratis Iwwerliewe Zäit huet op lymph Node Metastasen an Mir-26A Niveauen (Table 3). VerfÜgung mir-26A Hien GC Wuesstem an Metastasen VerfÜgung der ëmgedréit, et gesäit Korrelatioun tëscht mir-26A Niveauen a Metastasen opgeschriwwen, mir den Effet vum mir-26A du-Ausdrock vun der Migratioun an Invasioun Fähegkeeten propagéieren GC Zell Linnen. Zwee GC Zell Linnen (SGC-7901 an AGS) mat relativ niddreg basal Ausdrock vu Mir-26A (Dorënner 1B) sech mat entweder Mir-26A oder Kontroll lentivirus Krankheet a ausgewielt mat 5 mg /l puromycin fir zwou Wochen. Next Meter, verkënnegt assay an transwell assay gesuergt huet. Wéi erwaart, overexpression vum Mir-26A vill Zell Migratioun opgeléist an Invasioun Fähegkeeten (Dorënner 2A, B; Dorënner S1). VerfÜgung Fir d'Wierkung vum Mir-26A op GC Wuesstem hindeiten, standing mir GC Zell Prolifératioun assay. Der Prolifératioun assay zougedréckt datt ectopic Ausdrock vu Mir-26A zu SGC-7901 an AGS Zell Prolifératioun attenuated Verglach mat Kontroll Zellen (Dorënner 2C). Desweideren, ectopic Mir-26A Ausdrock Kolonie Opstellung Fähegkeet an mëll Agar (Dorënner 2D) inhibited. Mir standing dann Analyse Zell apoptosis an Teamchef Mir-26A overexpression zu SGC-7901 entschlof Zell apoptosis (Dorënner 2E). VerfÜgung Next mir getest, ob Mir-26A eng Roll an tumorigenesis andems Sauna Maus xenograft Leeschtung konnt Modeller. Mir hu fonnt, datt overexpression vum Mir-26A zu SGC-7901 Zellen vill Trupen entholl Wuesstem an Sauna Mais (Dorënner 3A; Dorënner S2). Dunn, SGC-7901 Zellen Krankheet mat entweder Mir-26A oder Kontroll lentivirsus sech an de Schwanz Sënn vun Sauna Mais heijen haett Metastasen ze iwwerpréifen. Well dës Dorënner 3B, konnt e wesentlech méi niddreg Zuel vun macroscopic haett Investitiounen an observéiert ginn Mir-26A Zellen wéi Kontroll Zellen overexpressing. Dës Resultater weisen, datt Mir-26A kann GC Wuesstem an Metastasen géint. VerfÜgung Mir-26A direkt Ziler an bremst FGF9 VerfÜgung Fir ze verstoen, wéi Mir-26A GC Wuesstem an Metastasen Hien, déi mir dräi algorithms (Targetscan, Pictar a Miranda) ze hëllefen Mir-26A Ziler am mënschleche gastric Cancers z'identifizéieren. Vun deenen Zil- Genen dass duerch all dräi algorithms (Table S1) virausgesot huet, ugezunn FGF9 eis Opmierksamkeet direkt wéi et zu tumorigenesis oder Metastasen agebonne ginn [26] - [28]. Mir gekloonten der voller-Längt FGF9 3'-UTR an enger luciferase reporter Vecteure. Luciferase assay Teamchef Mir-26A direkt gebonnen un FGF9 3'-UTR, a vun deenen et bemierkenswäert reduzéiert luciferase Aktivitéiten (Dorënner 4A). Allerdéngs, stattfannen vun der putative Mir-26A Siten an der 3'-UTR vun FGF9 abrogated luciferase Réceptivitéit fir Mir-26A (Dorënner 4A). Fir direkt den Effet vum Mir-26A op FGF9 Ausdrock bewäerten, mir standing westlech blot Analyse. Als zu Dorënner 4B gesinn, lentiviral entschlof ectopic Mir-26A Trupen Trainer d'FGF9 FAQ Niveauen am SCG-7901 an AGS Zellen. Ausserdeem, knockdown vum Mir-26A, duerch transfection vun Anti-Mir-26A, an GES-1 Zellen fräi FGF9 FAQ Niveauen (Dorënner 4B; Dorënner S1). Geholl zesummen, weg dës Resultater datt FGF9 engem direkt matgeholl Zil fir Mir-26A am GC Zellen ass. D'virun Resultater Suite eis ze iwwerpréifen, ob Mir-26A GC Wuesstem an Metastasen duerch repressing FGF9 Ausdrock Hien. Fir dësen Zweck, war FGF9 zu Mir-26A-transfected SGC-7901 Zellen-du ausgedréckt. Am Mir-26A-ausdrécken Zellen, bass-Ausdrock vun FGF9 gerett der Invasioun an Wuestum Mängel vum Mir-26A (Dorënner 4C, D, E). Endlech, getest mir wann Mir-26A Ausdrock mat FGF9 FAQ Niveauen am GC soll. Et gouf en ëmgedréit, et gesäit Korrelatioun tëscht der FGF9 FAQ Niveauen, déi immunohistochemistry staining uginn, an Mir-26A Ausdrock évaluéieren an situ hybridization zu 126 GC Stoffer op TMAs als benotzt uewen (Dorënner 4F; Figure1C). Eis Conclusiounen bewisen, datt Mir-26A huet Eegeschafte konsequent mat entholl suppressor Funktioun. D'Kapazitéit FGF9 Niveauen ze well kéint, op d'mannst zu engem Deel erklären, firwat Mir-26A GC Wuesstem an Metastasen inhibit kann. VerfÜgung Mir-26A gehéiert zu der Mir-26 Famill, déi Mir-26b enthält anere Member, souwuel vun deem mat der Ausnam vun 2 verschiddene nucleotides am alen miRNAs identesch Haaptrei Haus. Mir-26A ass eng funktionell miRNA dass virdrun Enquête merited huet [29]. Et ass bekannt, datt Mir-26A eng bedeitend Roll an der Wuesstem spillt, Entwécklung an Zell dat vu verschiddene Stoffer [29]. Puer Studie berichten iwwer propedeutësch Mir-26A Ausdrock vun enger Zuel vu mënschlechen erhéijen Venen ass [19], [22], [24], [30], [31]. Mä keng vun dëse Studien ass zu gastric Kriibs dinn. An der aktueller Etude, déi mir qRT-Hinnen alleguer an nemen ze weisen, datt Mir-26A Besatzungszäit Stoffer gastric Kriibs wéi déi wesentlech méi niddreg waren an Net-entholl Stoffer. Ausserdem, huet de Bord-26A Niveauen mat de Medeziner Etapp a Präsenz vun lymph Node Investitiounen assoziéiert. Kaplan-Meier Iwwerliewe Analyse verroden dass Patienten hir primär erhéijen ugewisen niddereg Ausdrock vu Mir-26A eng kuerz OS a RFS am GC haten. Zousätzlech, zougedréckt Cox proportional-Risikoe Réckgang Analyse datt reduzéiert Mir-26A zu erhéijen eng staark an onofhängeg Estimatioun vun kuerz OS a RFS war. Baséierend op vill Donnéeën, et war virdrun gemellt, dass eng Kombinatioun vu verschiddene miRNAs als prognostic lues zu gastric Kriibs nëtzlech kann [32], [33]. Ervirgestrach, e Single-miRNA, wéi Mir-218, kann e prognostic Luucht ginn [34]. Allerdéngs hunn dës miRNAs ginn an nëmmen e puer gastric Kriibs Patienten ze propagéieren. Hei, kann Mir-26A als prognostic Bewaacher nëtzlech sinn, fir virauszesoen Iwwerliewe an Réckwee vun gastric Kriibs. VerfÜgung Dës Etude gewisen, datt ectopic Ausdrock vu Mir-26A am GC Zellen leider Migratioun, Invasioun, Prolifératioun a Kolonie Wuesstem wéi souwéi entschlof apoptosis. Desweideren, an VIVO Donnéeën bewisen Mir-26A entholl Wuesstem an Metastasen inhibited. Dës kënschtlech an VIVO Donnéeën uginn weider dass Mir-26A Funktiounen als entholl suppressor zu gastric Kriibs. Puer Studien ënnerstëtzen eis Resultater. Zum Beispill, ass dat miRNA an dach Stoffer ofgeholl a kann duerch gezielt EZH2 [22] Zell Wuesstem an tumorigenesis attenuate. Hepatocellular carcinoma geet och reduzéiert Ausdrock vu Mir-26A [19]. D'Verwaltung vun dësem miRNA zu enger Maus Modell vun HCC eng adeno-verbonne Virus (AAV) Resultater am inhibition vun Kriibs Zell Prolifératioun, Aféierungs- vun entholl-spezifesch apoptosis benotzt, an dramatesch Schutz vu Krankheet Werdegang ouni toxicity [35]. verschidde rezent Studien réischt Allerdéngs, d'oncogenic Roll vum Mir-26A zu erhéijen wéi glioma an cholangiocarcinoma. Huse et al. confirméiert, datt Mir-26A an héich-Schouljoer glioma overexpressed war an direkt PTEN geziilte [23]. Den Zerfall, gouf Mir-26A fonnt an mënschlechen cholangiocarcinoma Stoffer overexpressed gin an cholangiocarcinoma Wuesstum ze förderen duerch B-catenin [24] activating. Dës kontrovers Resultater ugeholl, datt d'Roll vum Mir-26A war méiglecherweis entholl spezifesch a ganz ofhängeg op hiren Ziler a verschiddene Kriibs Zellen. Verschidde Studie berichten iwwer propedeutësch PTEN [23], EZH2 [21], [22], SMAD1 [36], CDK6 an cyclin E1 [37] ginn Potential afgerappt Zil- Genen vun Mir-26A. An dëser Etude, FGF9, enger direkter a funktionell Zil vum Mir-26A, war am GC identifizéiert. FGF9, och als glial activating Faktor bekannt, ass eng vun den 23 Memberen vun der héichgradeg conserved FGF Famill. Als secreted, glycosylated 26-kDa FAQ, huet et mitogenic Auswierkungen op enger Rei vu verschiddene Zell Zorte [26]. FGF9 gouf zu verschiddene Cancers wéi spillt endometrioid adenocarcinoma [26], hepatocellular carcinoma [27] an Aarbecht carcinoma [28] gin agebonne gewisen. An eise Studien, confirméiert mir dat FGF9 engem direkten Zil vum Mir-26A am GC Zellen war. Fir erauszefannen, ob Mir-26A GC Wuesstem an Metastasen duerch repressing FGF9 Ausdrock Hien, fonnt mir dass FGF9 overexpression konnt Invasioun an Wuestum Mängel vum Mir-26A retten. Dës Resultater ugeholl, datt Mir-26A GC Wuesstem an Metastasen bremst deelweis duerch FGF9 gezielt. VerfÜgung zesummen deelgeholl, mir downregulation vum Mir-26A zu gastric Kriibs Zellen observéiert a bewisen, dass Mir-26A als onofhängeg Estimatioun Akt kann vun OS a RFS. Mir fonnt weider dass Mir-26A déi as leie vun Regulatioun FGF9 GC Wuesstem an Metastasen ze oofgesinn. Eis Conclusiounen proposéiere Mir-26A Funktiounen als entholl suppressor am GC an hält verspriechen als prognostic uweist a Potential therapeutesch Zil fir GC. VerfÜgung Zell Kultur VerfÜgung d'gastric epithelial Zell Linn GES-1 war vun der Peking Institut fir Cancer Research (Peking, China) kaaft. De GC Zell Linnen MKN-28, SGC-7901, AGS, MGC-803, MKN-45, an BGC-823 goufen aus der chinesescher Academy vun Medical Science (Peking, China) kritt. Dës Zellen sech op 37 ° C an eng Atmosphär vu 5% CO 2 zu RPMI-1640 (MGC-803, BGC-823, MKN-28, SGC-7901) haten, DMEM (GES-1) oder F12 ( AGS) mëttelfristeg mat 10% an et Bovine serum, penicillin an streptomycin (Gibco BRL, NY, USA) ergänzt. All transfections benotzt Lipofectamine 2000 ((Invitrogen, Karlsbad, USA)). VerfÜgung Séminairen Echantillon VerfÜgung All Otemschwieregkeeten Echantillon vun den haitegen Etude benotzt goufen aus der Hunan Provincial entholl Hospital gesammelt (Changsha, Hunan, China). Schrëftlech informéiert Averständnes war vun all Etude Participanten kritt. Dës Etude gouf vun der Ethik Comité vun lousoihong Medical University Gesondheet Autoritéit guttgeheescht. D'Sammelen a Benotzung vu Stoffer duerno d'Prozeduren, déi am Aklang mat der ethesch Normen sinn wéi an der Helsinki-Deklaratioun formuléiert VerfÜgung Ray Echantillon vun 40 gastric Kriibs Patienten (23 männlech a 17 weiblech;. Steiren Alter 59 Joer; Rei 40-84 Joer) huet fir grouss real-Zäit Hinnen alleguer (qRT-Hinnen alleguer) Analyse benotzt. Resected kriibserreegend Stoffer (entholl) a vläit reagéiert normal gastric Stoffer (Normal) goufen direkt Géigewier, vun flëssegem Stéckstoff gefruer, an huet bei -80 ° C bis RNS erauszéien. VerfÜgung D'Otemschwieregkeeten microarrays (TMAs), aus 126 GCs an 41 bascht normal Mo. Stoffer, sech fir an situ hybridization Analyse benotzt. D'Steiren Alter vun gastric Kriibs Patienten op Diagnos ass 57 Joer (Rei 31-82). D'Steiren Suivi Zäit fir globale Iwwerliewe (OS) an Réckwee-gratis Iwwerliewe (RFS) huet 22 Méint an 15 Méint, respektiv. All Donnéeën vun 126 GC Echantillonen, dorënner Alter, Geschlecht, entholl Site, histological Schouljoer, Invasioun Déift (T Etapp), Medeziner Etapp, an lymph Node Metastasen vum Medeziner a pathologic records kritt an zousätzlech Dësch zesummegefaasst 2. VerfÜgung Chemeschen RT-Hinnen alleguer Analys VerfÜgung Total RNS vun Zellen ofgebaut gouf benotzt TRIzol reagent (Invitrogen, Karlsbad, USA). Ëmgekéierte Transkriptiouns an qRT-Hinnen alleguer Reaktioune waren mat engem qSYBR-grénge Hinnen alleguer Kit (QIAGEN, Germantown, USA) an U6 snRNA war als endogenous Kontroll benotzt gesuergt. Fantastesch Ännerung war den 2 An situ VerfÜgung Hybridization an Immunohistochemistry Detektioun vum Mir-26A déi zu situ hybridization d'Déiren-Label gespaart Nukleinsaier schreiwen (LNA) -based fir Mir-26A spezifesch Studiebäihëllefe (Exiqon, Vedbaek, Dänemark) laut Leeschtung war fir den Hiersteller d'Uweisungen an U6 snRNA war als eng positiv Kontroll benotzt. Maçovila fl y, Otemschwieregkeeten microarray drënner waren deparaffinized, behandelt mat proteinase K (5 min an 2 μg /ml protease K), an PBS gewäsch an duerno blockéiert endogenous peroxidase Aktivitéit mat 3% H 2O 2. Hybridization war Nuecht op 52 ° C standing no der Aféierung vun 50 nm vun Déiren-Label LNA Ämter, gefollegt vun engem stringency wäschen an SSC Baudeeler. No Spären (2% Schof serum an 2 mg /ml BSA vun PBS mat Tween-20) bei Raumtemperatur, war de Studiebäihëllefe-Zil- komplex visualized eng anti-Déiren-Staang antibody, an botzt komplex schreiwen. VerfÜgung Immunohistochemistry war op Otemschwieregkeeten microarray Rubriken standing mat anti-FGF9 antibody (Santa Cruz, CA, USA). Den Komplex ass mat streptavidin /peroxidase an botzt komplex visualized, a Käre mat hematoxylin counterstained. An situ hybridization an immunohistochemistry Resultater goufen duerch Intensitéit (0-4) an de Prozentsaz vun staining (0 zu 100%) Faarwen. Relativer Ausdrock war vun multiplizéieren Intensitéit vun Prozentsaz kritt. D'drënner waren déi zwee onofhängeg pathologists analyséiert. VerfÜgung Recombinant Vecteure VerfÜgung Recombinant lentiviruses wouvun Mir-26A Virleefer oder Alaister Message sech aus SunBio (Shanghai, China) kaaft. Fir luciferase Analyse, déi voll-Längt FGF9 3'-UTR gouf vum Mënsch Blutt Frankräich DNA Kick an duerno an der afgerappt Regioun vun engem Liichtkäfer luciferase Kassett gekloonten zu pMIR-Dobäi luciferase Vecteure (Ambion, Austin, Suerge, USA). Déi entspriechend Mann- gesond, an déi éischt sechs nucleotides ergänzen an der Mir-26A Som-Regioun vum Site-Direkter mutagenesis mutated waren (Stratagene, La Jolla, CA, USA). Fir FGF9-ausdrécken Vecteure, FGF9 ORF cDNA war vun GeneCopeia (Rockville, MD, USA) kaaft an subcloned an der eukaryotic Ausdrock Vecteure pcDNA3.1 (+) (Invitrogen). VerfÜgung Luciferase Reporter Assay VerfÜgung bauen Mir-26A oder Alaister lentiviruses an pMIR-3'UTR Vecteure waren an HEK-293T Zellen Co-transfected. Renilla an Liichtkäfer luciferase Aktivitéite sech mat der Dual-Luciferase Reporter System (Promega, Madison, allem) 24 h der transfection gemooss. Liichtkäfer war luciferase Aktivitéit normalized zu Renilla luciferase Ausdrock fir all Prouf. All Experimenter war zu triplicate gesuergt. VerfÜgung Western Blot VerfÜgung Western blotting war virdrun ëmschriwwen duerchgefouert [16]. Kuerz, FAQ lysates sech vun 10% SDS-PAGE getrennt, a Kanner ech-trophoretically zu PVDF (polyvinylidene difluoride) Membran transferéiert. Dunn, no der Membran mat Maus antibody géint Anti-FGF9 antibody (Santa Cruz, CA, USA), gefollegt vun HRP (horseradish peroxidase) -labeled Geess-antimouse IgG (Santa Cruz, CA, USA) a Réckstänn vun chemiluminescence incubated. β-actin war als FAQ-Luede Kontroll benotzt. VerfÜgung Zell prolifération Assay VerfÜgung BTS sech plated op 12-Meter Placken op der gewënschter Zell Konzentratioune. Zell zielt sech duerch trypsinizing d'Zellen geschat a leeschtungsfäeg Analyse engem Coulter blëtzaarteg (Beckman Coulter, Fullerton, USA) um uginn Zäit Punkten am triplicate benotzt. VerfÜgung Zell Migratioun a Missiounen Assays VerfÜgung Zell Migratioun Hëllef Meter-verkënnegt assays gouf iwwerpréift. Eng kënschtlech "Wonn" war op engem Spuenien wär Zell monolayer geschafen, an Fotoen mat engem Inverted microscope (Olympus, Tokyo, Japan) an 24 Stonnen geholl. VerfÜgung Fir Zell Invasioun assay, goufen Zellen aus dem Keller Membran rakommen presentéieren Matrixentgasung zu der Neiegkeet vun engem 24-gutt Kultur Plack (CE Matrixentgasung, Chemicon, Temecula, CA) an an et Bovine serum war als chemoattractant un der ënneschter Chambre notéiert. No engem weideren 48 Stonnen, waren d'Net-hypothetesch Zellen an CE Matrixentgasung verbannen mat engem Koteng Swab geläscht. Invasiv op der ënneschter Säit vun der Chamber läit Zellen sech mat Crystal Violet, gezielt an Radioberäich Kierchefënster. VerfÜgung Kolonie Formatioun Assay VerfÜgung Six-gutt Plaque mat enger Layer vun 0.6% Agar zu mëttelfristeg gedeckt goufen mat 20% an et Bovine serum ergänzt. Zellen (1 × 10 Apoptosis Analys VerfÜgung D'apoptotic Zellen vun Annexin V-FITC an propidium Jod staining (BD, USA évaluéiert huet ) a mat engem FACS Calibur Instrument (BD, USA) analyséieren. Déi gesammelt Daten benotzt FlowJosoftware analyséiert. VerfÜgung Mouse Xenograft Model VerfÜgung D'gastric Kriibs Modell an Sauna Mais gebaut war wéi virdrun [25] beschriwwen. Ze diskutéieren an sech d'Roll vum Mir-26A zu entholl Opstellung, SGC-7901 Zellen Krankheet mat Mir-26A oder Alaister Viren propagated an subcutaneously an den däischtere Säite vun Sauna Mais (5 vun all Grupp) inoculated. Entholl Gréisst huet all 5 Deeg gemooss. No 30 Deeg, huet de Mais ëmbruecht, goufen Kuckt gesuergt a sech d'erhéijen gewien. Entholl Bänn sech no de folgenden Formule sech: A × B statistique Analys VerfÜgung Vergläicher tëschent Gruppe analyséiert goufen duerch den heeschen Chinchilla VerfÜgung Test an x Mir Merci J Ma an CK Wang fir hir technesch Assistenz. VerfÜgung
Aféierung VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
Informatiounen Ennerstëtzung VerfÜgung Dorënner S1. VerfÜgung qRT-Hinnen alleguer gemooss der Mir-26A Ausdrock Niveauen am SGC-7901 an AGS Zellen Krankheet mat Mir-26A lentivirus souwéi GES-1 Zellen transfected mat Mir-26A inhibitors VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone .0072662.s001 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung Dorënner S2. VerfÜgung qRT-Hinnen alleguer gemooss der Mir-26A Ausdrock Niveau vun entholl aus Sauna Mais ofgebaut Stoffer op den 30. Dag op Sprëtz Kriibs Zellen. All Donnéeën ginn als mengen ± s.e.m dës VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0072662.s002 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung Table S1. VerfÜgung Target Genen dass duerch all dräi algorithms virausgesot huet (Targetscan, Pictar a Miranda) VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0072662.s003 VerfÜgung (XLS) VerfÜgung Table S2. VerfÜgung Charakteristiken vun Patienten mat gastric Kriibs VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0072662.s004 VerfÜgung (Intrigue) VerfÜgung
Arbeschterlidder VerfÜgung
Darmmikrobiom an IBD - d'Verbindung vläicht an der Diät seet Studie
Darmmikroben a Wasps hëllefen Pestiziden ze iwwerwannen
Botzprodukter kënnen de Risiko fir Asthma vun der Kandheet fanne fënnt Studie
COVID-19 Restriktiounen hunn zu 86 Prozent erofgaang an Norovirus Infektiounen an den USA gefouert,
Haushënn onwahrscheinlech SARS-CoV-2 ze iwwerdroen,
Mënschlecht Mikrobiom schneit mucosal Glycanen,
Pankreatitis
DBauchspaicheldrüs ass laang, flaach Drüs, déi hannert dem Mo am ieweschte Bauch ass. Seng Haaptaufgab ass Enzyme ze produzéieren déi an der Verdauung vun enger Persoun hëllefen an Hormone déi reegelm
Cryptosporidiosis verschlechtert duerch allgemeng benotzt Probiotik
Fuerscher hunn dës Infektioun mam Darmparasit fonnt Cryptosporidium parvum gëtt verschlechtert bei Mais, déi e Probiotikum verwalt goufen. Bildkreditt:Alpha Tauri 3D Grafiken / Shutterst
Anti-Coronavirus Moleküle vu Mikroben kënne Schlëssel sinn fir nei Behandlungen
Mikroben am Darm, déi profitabel Verbindunge produzéieren, kënnen de Schlëssel fir dBehandlung vu Coronavirus Symptomer halen. Darmmikrobiom. Bildkreditt:Anatomy Image/Shutterstock.com