De Prozess vun peritoneal Metastasen implizéiert de diapedesis vun Zollformalitéiten main exfoliated gastric Kriibs Zellen duerch d'mesothelial Zell monolayers; Ee, sinn déi wëssenschaftlech molekulare Mechanismen fir dëse Prozess nach onkloer. Heterocellular Schéier-junctional intercellular Kommunikatioun (GJIC) tëscht gastric Kriibs Zellen an mesothelial Zellen kann eng aktiv Roll am diapedesis Leeschtung. An dëser Etude nogewise mir den Ausdrock vun connexin 43 (Cx43) an der Primärschoul gastric Kriibs Stoffer, Zollformalitéiten-postwendend misse exfoliated Kriibs Zellen, an ë.a. metastatic peritoneal Stoffer. Mir hu fonnt, datt de Begrëff vun Cx43 am primäre gastric Kriibs Stoffer war vill rofgaang ass; der Zollformalitéiten-postwendend misse exfoliated Kriibs Zellen a reagéiert metastatic peritoneal Stoffer Schatzkummer Ausdrock waarden Verglach mat der Primärschoul gastric Kriibs Stoffer. BGC-823 an SGC-7901 mënschlech Zellen gastric Kriibs sech esou Cx43 oder Cx43T154A auszedrécken (eng Mann- FAQ datt nëmmen Koppelen Schéier junctions mee stellt kee intercellular Kommunikatioun) a sech Co-cultured mat mënschlechen peritoneal mesothelial Zellen (HPMCs). Heterocellular GJIC an diapedesis duerch HPMC monolayers op matrigel-Beschichtete coverslips sech ze propagéieren. Mir hu fonnt, datt BGC-823 an SGC-7901 Zellen gastric Kriibs Cx43 geformt funktionell heterocellular Schéier junctions mat HPMC monolayers bannent enger Stonn ausdrécken. Eng bedeitend méi diapedesis war an esou Cx43-ausdrécken Zellen am Verglach mat Cx43T154A a Kontroll Grupp Zellen observéiert, wat proposéiert, datt d'observéiert upregulation vun diapedesis zu Cx43-ausdrécken Zellen heterocellular GJIC néideg. Weider Etude bekannt, datt de gastric Kriibs Zellen duerch d'intercellular Raum tëscht der mesothelial Zellen via engem paracellular Wee transmigrated. Eis Resultater hindeit, datt de Manque Ausdrock vun Cx43 spillt eng wesentlech Roll an peritoneal Metastasen an datt Cx43-mediated heterocellular GJIC tëscht gastric Kriibs Zellen an mesothelial Zellen kann eng wichteg reglementaresche Schrëtt während Metastasen ginn. Endlech gesi mer, datt d'diapedesis vun exfoliated gastric Kriibs Zellen duerch mesothelial Barrièren engem liewensfäeg Wee vun paracellular Migratioun ass VerfÜgung
Fro:. Tang B, Peng ZH, Yu PW, Yu G, Ruilin F, Zeng DZ, et al. (2013) Aberrant Expression vun Cx43 Ass mat der Peritoneal Metastasen vun Gastric Cancer Associéierten an Cx43-Mediated Gap Kräizung verbessert Gastric Cancer Zell Diapedesis aus Peritoneal Mesothelium. PLoS NËMMEN 8 (9): e74527. Doi: 10.1371 /journal.pone.0074527 VerfÜgung
Redakter: Johanna M Brandner, Universitéit Hospital Hamburg-Eppendorf, Däitschland VerfÜgung
Arnaque: 19. Januar 2013; Akzeptéiert: 6 August, 2013; Publizéiert: 11. September 2013 VerfÜgung
Copyright: © 2013 Tang et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung
Funding:. Dës Aarbecht gouf vun der Bevëlkerung Nr 30801097 an Nr 81272366 vun der National Natural Science Foundation vu China ënnerstëtzt. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung
Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung
D'Heefegkeet vun gastric Kriibs zréckgeet mä bleift eng grouss Ursaach vum Kriibs-Zesummenhang Doud weltwäit. D'predominant Charakteristike vun gastric Kriibs Zellen och hir invasiv an metastatic Pouvoir. Peritoneal Metastasen ass eng kritesch Fonktioun fir entholl Werdegang vun fortgeschratt gastric Kriibs [1]. Während de Prozess vun peritoneal Metastasen, so gastric Kriibs Zellen intercellularly mat Multiple Zell Typen, an d'Zesummespill vun der Zollformalitéiten-postwendend misse exfoliated gastric Kriibs Zellen an der peritoneal mesothelial Zellen ass besonnesch Bedeitung. Als permanente Mënsch Akt peritoneal mesothelial Zell (HPMC) monolayers als eng Barrière géint peritoneal Metastasen, eemol de diapedesis vun exfoliated gastric Kriibs Zellen duerch mesothelial Zell monolayers existeiert, déi räich Blutt Energieversuergung an der Matrixentgasung ënnert der mesothelium wäert eng komfortabel Ëmwelt fir metastatic gastric Offer Kriibs Zellen an hir Kolonisatioun förderen. Dofir, diapedesis vun exfoliated gastric Kriibs Zellen duerch d'mesothelial Zell monolayer ass e wesentleche Schrëtt während peritoneal Metastasen. D'Zesummespill tëscht deenen Zellen ass vun intercellular Kommunikatioun (IC) begleet, déi virun allem duerch Zell-Zell Schéier junctions mediated ass [2]. Gap junctions sinn duerch Plasma Membran connexins geformt, all vun deem ass aus vun sechs connexins (Cxs) [3]. Fir Datum, 20 verschidden connexin isoforms goufen am Mënschen identifizéiert. Cx43 ass eng allgemeng isoform am meeschte epithelial Stoffer ausgedréckt. Virdrun Studien [4-6] uginn, datt Cx43 Ausdrock während tumorigenesis ofgeholl a gouf dofir als entholl suppressor klassifizéiert. Mä, et ass eng grouss Beweiser datt connexins an der intravasation an extravasation vun kriibserreegend Zellen Équipe kann an eng positiv Roll am Prozess vun Metastasen [7,8] spillen. Ob der Cx43 mediated Lück Potaschbierg eng wichteg Roll an diapedesis vun gastric Kriibs Zellen duerch d'peritoneal mesothelial Barrière spillt bleift onkloer. Fir d'Hypothes Adress iwwerpréift mir den Ausdrock vun Cx43 am primäre gastric Kriibs Stoffer, exfoliated gastric Kriibs Zellen, an peritoneal metastatic Stoffer. Mir gebaut engem Cx43-ausdrécken Vecteure an enger Cx43T154A Site stattfannen Vecteure. Dunn, déi mir zwee Mënsch gastric Kriibs Zell Linnen (BGC-823 an SGC-7901), datt GJIC erhéijen ass an net all bekannt connexins auszedrécken [9]. Well Iwwerfloss mesothelial Zellen Cx43 auszedrécken, esou mir Zellen gastric Kriibs entweder Wildwest-Typ Cx43 oder engem Site-spezifesch Mann- fir festzestellen, ob de Potential vun gastric Kriibs Zellen 'diapedesis duerch d'mesothelium ënner souwuel änneren oder entweder vun dëse Konditiounen géif auszedrécken. An dëser Etude weisen mir dat Cx43 Ausdrock entholl Zell diapedesis via engem GJIC-ofhängeg Mechanismus upregulates VerfÜgung
2.1:. Reagents an Antibodies VerfÜgung
Anti-connexin 43 polyclonal antibody (Zymed, San Diego, CA, USA), Matrigel (Becton-Dickenson, Bedford, MA, USA), 1, 1'-diocta-decyl-3, 3, 3 ', 3'-tetramethylindocarbocyanine percholate (Dil; cuisine Ämter, Eugene, OR, USA), Calcein-AM (Dojindo, Kumamoto, Japan), an FITC-conjugated phalloidin sech aus Fläch (Fläch-Aldrich, St. Louis, MO, USA) kaaft. VerfÜgung
2,2 : Ray Echantillonen an Cytological bei der VerfÜgung
All Participant gëtt Zoustëmmung schrëftlech informéiert (aus hirem Dépositaire wou néideg). Dës Etude gouf am Aklang mat der Stadpaschtouer vun der Deklaratioun vun Helsinki an hir Amendementer gehaal a gouf vun der Ethik Comité vun Südwesten Spidol, den drëtten Military Medical University guttgeheescht. D'Etude Bevëlkerung vun 42 Patiente wien als Etapp IV séiert sech no der siwenter Editioun vun UICC TNM Course vun Malignant erhéijen. Clinicopathologic Verännerlechen sinn an Table 1. All vun de Patienten an eiser Etude mécht Palliativmedezin oder Wa Agrëff Coursë opgezielt. Primärschoul entholl an metastatic peritoneal Stoffer sech virum Enn vun Agrëff gesammelt, an exfoliated gastric Kriibs Zellen vun der centrifugation vun ascites oder peritoneal lavage Flesseggassystem gesammelt goufen (wann ascites existéieren net). D'nucleated Zell futti war op engem Glas Rutsch an Kierchefënster mat hematoxylin an eosin (HIEN) verschmiert. Zwee erfuerene cytopathologists standing der cytological Evaluatioune. CEA war als uweist benotzt ze hëllefen adenocarcinoma Zellen vun immunofluorescence mat positive staining z'identifizéieren. Fäll goufen aus dem haitegen Etude ausgeschloss wann de Conclusiounen vum souwuel vun der cytopathologists sech net eens VerfÜgung Grupp VerfÜgung Number VerfÜgung Prozent (%) VerfÜgung Sex male2764.0 female1536.0Age (Joer) &Si besteet. 501740,4 ≥502559.6Tumor Standuert Antral2150.0 Body1228.6 Fundic911.4Pathological Typ Ma differentiated24.7 Mëttelméisseg differentiated49.5 LINN differentiated3685.8Bormann I00 II12.4 III1228.5 IV2969.1Ascites Yes1535.7 No2764.3Surgical Approche palliativer gastrectomy2457.1 Wa ennerluecht + biopsy1842.9Table 1. Séminairen a agebousst Charakteristiken vun 42 Fäll vu Patienten mat gastric Kriibs VerfÜgung CSV CSV Luet
2,3:. Immunohistochemistry VerfÜgung
Paraffin Otemschwieregkeeten Echantillon vun der Primärschoul erhéijen an metastatic sech peritoneal Stoffer serially sectioned , an HIEN staining der Existenz vun gastric Kriibs confirméiert. Nuechten Rubriken huet deparaffinized, léif, an zu antigen retrieval zu Haaptrei ënnerworf. De Rubriken huet mat enger Kanéngchen polyclonal fir 24 Stonnen bei 4 ° C anti-Cx43 antibody incubated. Verbindlech Siten sech visualized mat 3, 3'-diamino-benzidine (botzt) an engem 5-min Reaktioun. D'Sektiounen sech mat Mayer d'hematoxylin, léif, geraumt an Descher counterstained. Ënnerlooss vun der Primärschoul antibody war als negativ Kontroll benotzt. Immunohistochemical staining war vun dorop engem stoung op der Mooss an Intensitéit vun immunoreactivity baséiert bewäert. Staining Mooss war semiquantitatively zu Zytoplasma an Membran als negativ bewäert (0 &Si besteet; 5% Zellen Kierchefënster), positiv 1 + (6-25% Zellen Kierchefënster), positiv 2 + (26-50% Zellen Kierchefënster) oder positiv 3 + ( > 50% Zellen Kierchefënster). D'staining Intensitéit war den 0 (keng staining) Faarwen, 1 (schwaach staining, giel brong), 2 (moderéiert staining, giel brong), oder 3 (staark staining, brong). . Immunostaining Resultater goufen wéi d'Zomm vun der Mooss an Intensitéit vun immunoreactivity Faarwen, engem stoung que ≥3 positiv an engem stoung &Si besteet; 3 negativ VerfÜgung
2,4: Immunofluorescence VerfÜgung
Cx43 Ausdrock vun Zollformalitéiten-postwendend misse exfoliated gastric Kriibs Zellen war mat immunofluorescence évaluéieren. Véierzeg-zwee Fäll goufen an eiser Etude Coursë. D'Zellen op Glas coverslips verschmiert sech mat 4% paraformaldehyde fix a Katakombe mat PBS 0,5% BSA (falsch gefiermt) mat. D'Zellen sech dann mat enger Anti-Cx43 antibody (: 150 1) bei 4 ° C fir 24 Stonne incubated. D'coverslips sech mat FITC-conjugated anti-Kanéngchen Secondaire antibody Geess gewäsch a incubated. D'Käre sech Kierchefënster 10 μg /ml DAPI benotzt (Fläch-Aldrich, St. Louis, MO, USA). D'coverslips sech mat engem fluorescence microscope (Acda, Däitschland) Radioberäich. D'Kontrollen (Primärschoul antibodies vun PBS ageholl huet) sech negativ fir all Experimenter (Donnéeën net gewisen) VerfÜgung
2,5:. Zell Kultur a gëllt Ausdrock vun Cx43 an Cx43 mutants VerfÜgung
Nonmalignant Mënsch mesothelial Zellen och , kennegeléiert-5A, sech aus ATCC kritt. Dës Zellen sech haten a propagated zu mëttlerer 199 1,5 g /L Natrium bicarbonate, 10% An et Bovine serum, 3,3 nm epidermal Wuesstem Faktor (EGF) wouvun, 400 nm hydrocortisone, 870 nm Zénk-gratis Bovine Insulin, 20 mm HEPES, an 3,87 μg /L selenious Seier (H2SeO3). VerfÜgung
de Mënsch gastric adenocarcinoma Zell Linnen BGC-823 an SGC-7901 goufen aus de Shanghai Institut Zell Bank, Chinese Academy vun Science kritt. Cx43- an Cx43T154A-ausdrécken vectors benotzt lentiviral Wonn esou. PTA2-Cx43, déi engem Mënsch Cx43-Zeechesaatz Haaptrei abegraff, war an eiser Labo gebaut. D'Cx43T154A Site stattfannen Vecteure Bau war Overlap Extensioun Hinnen alleguer erfëllt benotzt, déi eng FAQ encoded dat als eng Lück Potaschbierg ouni IC funktionéiert wéi virdru beschriwwen [10]. D'cDNA vun Cx43 an Cx43T154A war an der lenti-GFP Vecteure gesaat an an der 293T Verpackungen Zell Linn transfected. D'lentiviral supernatant war no 48 h gesammelt, duerch eng 0.45-μm filter Filter a benotzt BGC-823 an SGC-7901 Zellen ze globalen. Déi mëttel- war mat RPMI1640 24 Stonnen an der Wonn ersat, an d'Zellen sech Zäitche cultured. Méi wéi 90% vun der entholl Zellen Cx43 oder Cx43T154A No dräi Ronnen vun Haren Wonn ausgedréckt; déi erfollegräich Krankheet Zellen sech cytometry duerch onkontrolléiert gesammelt VerfÜgung
2,6:. Protein erauszéien a Western blot Analyse VerfÜgung
D'esou Cx43- an Cx43T154A-ausdrécken BGC-823 an SGC-7901 goufen gastric Kriibs Zellen lysed . Protein (50 μg) aus vunenee Typ gouf zu engem 12% SDS-polyacrylamide gelies an transferéiert ze nitrocellulose Schläimhait getrennt. Nitrocellulose Schläimhait sech mat 5% nonfat dréchen Mëllech blockéiert a sech da fir d'Cx43 FAQ Komedie engem polyclonal anti-Cx43 antibody benotzt (1: 500). 10.000 dilution: Immunoblots sech mat de passenden horseradish peroxidase-conjugated Secondaire antibodies (Fläch-Aldrich, St. Louis, MO, USA) op engem 1 Komedie. D'Proteinen sech mat engem Supersignal West Pico Chemiluminescent Realitéiten (Pierce chemesche Co.) visualized an immunoblots sech fir 30 ass zu Amersham Hyperfilm (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ, USA) ausgesat VerfÜgung
2,7:. Entholl Zell /Mesothelial Zell Haftung Assay VerfÜgung
Mesothelial Zellen sech am 24-gutt Placke bis monolayer Niewebaach op Glas coverslips ugebaut. D'esou Cx43- an Cx43T154A-ausdrécken gastric Kriibs Zellen mat engem 10 μg /ml Dil Léisung bei 37 ° C fir 15 min gekennzeechent waren. Dil ass eng allgemeng benotzt fluorescence Studiebäihëllefe datt en orange-rout fluorescence zu Schläimhait weist a war an eiser Etude benotzt gastric Kriibs Zellen ze Etikett. Dës Bezeechnung Zellen bäigebaut dann zu der mesothelial Zell monolayers a fir 1 h op 37 ° C incubated. Nonadherent Zellen sech duerch wäschen geläscht, an d'Zellen déi zu der mesothelial Zell monolayers sech fix mat 4% paraformaldehyde Directioun respektéiert hat. D'Kultur drënner waren am Mowiol (Calbiochem) Descher an iwwerpréift fluorescence microscopy benotzt (Leica Deputéierten 60) VerfÜgung
2,8:. Entholl Zell /Mesothelial Zell GJIC assay VerfÜgung
D'esou Cx43- an Cx43T154A-ausdrécken BGC-823 an SGC-7901 Zellen gastric Kriibs sech mat 2 ml vun Opti-Mem bei 37 ° C fir 15 Minutten Fortgeschratten mat 10 μg /ml calcein-aM an 10 μg /ml Dil. Calcein-AM ass eng unisse Realitéiten, déi am liewensfäeg Zellen zu enger Membran-impermeable Form eenalecn ass, datt duerch funktionell Schéier junctions awer net aner Plasma Membran Riewe laanscht kënnt. Mesothelial Zell monolayers sech fir 4 h pretreated mat 150μM carbenoxolone (CBX) homotypic GJIC ze blockéieren a sech dann mat 10 μg /ml calcein-AM (cuisine Ämter) an eng Opti-Mem Léisung fir 15 Minutten behandelt. D'virbereed Fortgeschratten gastric Kriibs Zellen sech un der kennegeléiert-5A monolayers op der Matrigel dobäi, an d'heterotypic GJIC tëscht gastric Kriibs Zellen an der mesothelial Zellen ass fonnt. Fluorescence Pateren an total topechkeeten Zellen gëtt nëmme geschéien, wann Hoerfaarw Eiffeltuerm Rapprochement junctions vun Bezierker unbleached gastric Kriibs Zellen. Individuell mesothelial Zellen bascht ze gastric Kriibs Zellen sech fir ronn 30 ass total topechkeeten engem König Laser Scannen confocal microscope an eng Argon Laser bei 33% Kraaft fir all experimentell Bedingung benotzt. Single mesothelial Zellen datt GJIC net wëlles hätt sech blenching den Kontrollen ze forméieren an dëse Match gaangen. Onbehandelt Zellen sech als Hannergrond verbidden Zellen benotzt. Déi heeschen fluorescence Intensitéit vun total topechkeeten /unbleached Zellen iwwer Zäit gemooss gouf Scion Imaging Software benotzen, an der fluorescence Erhuelung Taux war och (eegene Spillsteen = (Ib-Ib0) /IU × 100%, eegene Spillsteen berechent: fluorescence Erhuelung Taux bei Zäit t; Ib: d'fluorescence Intensitéit vun der total topechkeeten Zell am Moment net; Ib0: d'fluorescence Intensitéit vun der total topechkeeten Zell um Zäit t = 0; IU:. fluorescence Intensitéit an d'bascht unbleached Zell um Zäit t) [11] VerfÜgung
2,9: Transmesothelial Migratioun assay VerfÜgung
D'transmesothelial Migratioun assay war gesuergt, wéi virdru beschriwwen [12]. Kuerz, 1 × 10 2.10:. Statistique Analyse VerfÜgung All statistesch Analyse gouf mat der SPSS Software gesuergt ( Versioun 13.0). Wahrscheinlechkeeten vu P &Si besteet; 0,05 waren statistesch relevant als VerfÜgung 3.1:. Cx43 Ausdrock am primäre erhéijen an stemmt metastatic peritoneal Stoffer VerfÜgung Forty--zwee normal epithelia (100%) ausgedréckt Cx43 mat typesch membranous an cytoplasmic staining (Dorënner 1A). Eelef vun 42 Primärschoul erhéijen (26.2%) waren fir Cx43 positiv, déi zu bascht normal epithelia (p &Si besteet; 0,05) bedeitend Verglach ofgeholl huet. Cx43 Ausdrock war heterogen a verschiddene Otemschwieregkeeten Echantillon: an och ënnerscheet gastric Kriibs Stoffer, Cx43 Ausdrock weisen eng grouss gemëscht (cytoplasmic an membranous) staining (Dorënner 1B); mëttelméisseg ënnerscheet no gastric Kriibs Stoffer nëmmen cytoplasmic Cx43 Ausdrock (Dorënner 1c); an Cx43 war seele zu kaum ënnerscheet gastric Kriibs Stoffer (Dorënner 1D) ausgedréckt. Am Géigesaz, war Cx43 Ausdrock an 29 vun den 42 metastatic peritoneal Stoffer (69.0%) an Schatzkummer typesch cytoplasmic an membranous staining (p &Si besteet; 0,05) däitlech geklommen. (D'Grondidee 1E) (Table 2) VerfÜgung 43 Connexin VerfÜgung primär gastric Kriibs (Fäll) (%) VerfÜgung bascht normal Otemschwieregkeeten (Fäll) (%) VerfÜgung Metastatic peritoneal Otemschwieregkeeten (Fäll) (%) VerfÜgung Negativ (stoung &Si besteet; 3) 31 (73,8%) 0 (0 ) 13 (31.0%) positiv (score≥3) 11 (26.2%) * 42 (100%) 29 (69.0%) † Table 2. Immunohistochemistry Resultater fir Connexin 43 Ausdrock am primäre gastric Kriibs Stoffer, bascht normal gastric Stoffer an peritoneal . metastatic Stoffer (N = 42) VerfÜgung * Verglach zu bascht normal Stoffer, den Ausdrock vun connexin 43 erofgaangen vill (p &si besteet; 0,05); † Verglach zu Primärschoul gastric Kriibs Stoffer, fräi Meenungsäusserung vun connexin 43 an metastatic peritoneal Otemschwieregkeeten vill (p &Si besteet; 0,05). Luet CSV CSV 3,2: Cx43 Ausdrock vun Zollformalitéiten-postwendend misse exfoliated gastric Kriibs Zellen VerfÜgung meescht Zollformalitéiten-postwendend misse exfoliated gastric Kriibs Zellen existéieren als multicellular spheroids (Dorënner 1F). Positiv Cx43 immunostaining war zu 35 vun den 42 Fäll vun Zollformalitéiten-postwendend misse exfoliated Kriibs Zellen mat gemëschte cytoplasmic an membranous staining, an de positiven Taux observéiert ass 83,3% (Dorënner 1 G, H, an ech). VerfÜgung 3,3 : Expression vun exogenous Cx43 zu BGC-823 an SGC-7901 Zellen gastric Kriibs VerfÜgung gastric Kriibs Zellen sech esou funktionell Cx43, Cx43T154A an eidelen lentiviral Vecteure als Kontroll auszedrécken d'Auswierkunge vun Cx43 Ausdrock op d'ze ermëttelen biologesch Behuele vun deenen Zellen. Cx43 Ausdrock war an der eidel Vecteure Grupp feelen, mä déi aner zwee esou Gruppe waren fonnt auszedrécken entweder Cx43 oder Cx43T154A (Dorënner 2A) VerfÜgung 3,4:. Haftung Properties vun Gastric Cancer BTS Zellen ze Mesothelial VerfÜgung den Effet vun Cx43 op der Haftung vun gastric Kriibs Zellen zu der mesothelial Zellen war och ze propagéieren. Esou gastric Kriibs Zellen Wildwest-Typ Cx43 oder Cx43T154A ausdrécken Schatzkummer engem groussen Zouhuele Haftung Zellen am Verglach mat eidelen Vecteure Grupp ze mesothelial (P &Si besteet; 0,05). Keng Differenze an Haftung Fähegkeet sech tëscht Cx43- an Cx43T154A-ausdrécken Gruppen (P > 0,05) observéiert, suggeréiert datt Cx43 gastric Kriibs Zell Haftung ënnerstëtzt, déi vun GJIC (Dorënner 2B) onofhängeg ass VerfÜgung 3,5: esou. Cx43-ausdrécken BGC-823 an SGC-7901 Zellen Form funktionell Lück Potaschbierg Chaînen mat mesothelial Zell monolayers VerfÜgung Mir Co-cultured esou Cx43- an Cx43T154A-ausdrécken gastric Kriibs Zellen mat mesothelial Zell monolayers ënnersicht d'Fähegkeet vun Cx43 -expressing Zellen Schéier junctions zu Form an GJIC mat mesothelial Zellen etabléieren. D'Resultater weisen, datt gastric Kriibs Zellen an entweder d'Linn drécke Vecteure Grupp oder de Cx43T154A Grupp GJIC mat bascht peritoneal mesothelial Zellen der Laser Bleechmëttelen, Coursë vum Cx43-ausdrécken Grupp konnt gedoe GJIC mat peritoneal mesothelial Zellen erfollegräich ze etabléieren gescheitert. D'intracellular fluorescence Intensitéit war virun Bleechmëttelen fonnt, op der Instant vun Bleechmëttelen, an entweder 1 min, 2 min, 3 min oder 4 min der Bleechmëttelen. D'Resultater weisen, dass, am Grupp Cx43-ausdrécken, d'intracellular fluorescence Intensitéit vun total topechkeeten mesothelial Zell séier no Bleechmëttelen ofgeholl. Fluorescence Intensitéit dann nees lues a lues duerch Trip duerch Schéier junctions mat Bezierker unbleached gastric Kriibs Zellen ze hannendrun, an déi heeschen fluorescence Erhuelung Taux war 35,6 ± 0,9% an 39,4 ± 0,8% op 4 min der blenching zu BGC-823 an SGC-7901 Zellen, déi sinn, déi sech vill méi héich wéi zu Cx43T154A an eidel vetor Grupp (p &Si besteet; 0,05). (D'Grondidee 3, Table 3) VerfÜgung Group fluorescence Erhuelung Taux Mëttler VerfÜgung (%, x VerfÜgung ± den ) (t=4min) 3.6:. Morphological Evaluatioun vun entholl Zell diapedesis VerfÜgung Mir etabléiert eng kënschtlech VerfÜgung System d'transmesothelial Migratioun vun gastric Kriibs Zellen ze Image de rechtlechen a Wee vun diapedesis ze ermëttelen. Dëst assay mimics Aspekter vun der Zuchstreck Mauer an huet benotzt ginn virdrun leukocyte diapedesis [11] ze analyséieren. Dil-Label entholl Zellen sech no hirer Wirklechkeet an Standuert mat Respekt fir den mesothelium Faarwen. Mir definéiert dräi verschidde Stadien vun Migratioun mat confocal microscopy: ofgerënnt (Dorënner 4A); wanderen (Dorënner 4E); an naischt (Dorënner 4I). Entholl Zellen op widdert de mesothelium virun diapedesis Schatzkummer eng Ronn oder ovular Form, an dëser Form huet vun der enger steriler (Dorënner 4B) zu der basal Uewerfläch (Dorënner 4C, D) haten. Wanderen entholl Zellen tëscht bascht mesothelial Zellen Virowend geännert Form vun ovular zu engem laang spindle mat intracellular F-actin zesummebruecht an actin Filament Packages (Dorënner 4F, G, H). D'entholl Zellen datt diapedesis fäerdeg waren komplett ënnert der mesothelium wellkomm. D'Zell Form lues aus dem laang spindle dem Allrounder Form verännert, an der intracellular F-actin Filamenter a lues vergréissert a sech tëscht de Filamenter (Dorënner 4J, K, L) vun engem fonnt arrangéiert. Eis Etude Teamchef gastric Kriibs Zellen 'diapedesis via engem paracellular Wee Priedegt VerfÜgung 3,7:. Cx43-mediated GJIC gastric Kriibs Zellen verstäerkte diapedesis VerfÜgung Mir Co-cultured Cx43-, Cx43T154A-ausdrécken gasric Kriibs Zellen an CBX pretreated Zellen mat mesothelial Zellen fir 1, 4 a 7 h Cx43-ausdrécken hir diapedesis Effizienz [1,2] ze vergläichen. Dës Zellen sech domatter déi beschriwwen Critèrë fir Migratioun benotzt. De Prozentsaz vun wanderen Cx43T154A an CBX Zellen pretreated sech net vill anescht ze eidel Vecteure Grupp Zellen no 7 h vum Co-Kultur (p > 0,05), mä d'diapedesis Efficacitéit vum Grupp Zellen Cx43-ausdrécken war méi héich wéi déi aner dräi Gruppen (p &Si besteet 0,05) (Dorënner 5);. Dës Resultater hindeit, datt d'Präsenz vun de Cx43 FAQ am entholl Zell eleng ass net responsabel fir d'observéiert Erhéijung vun diapedesis, mä datt heterocellular GJIC tëscht entholl Zellen an mesothelial Zellen ass néideg der Effizienz vun diapedesis fir gastric Kriibs Zellen ze augment. Dës Resultater ugeholl datt Cx43 GJIC-ofhängeg entholl Zell diapedesis maaachen. VerfÜgung Gap junctions an connexin subunits sinn an verschidden Cancers downregulated [4,13,1,4]. rezent Rapporten awer, dass connexins "ass Ausdrock net ëmmer um ofgeholl Niveau während entholl Werdegang haten; Ëmgekéiert kënne si während der spéider Stadien vun carcinogenesis, waarden d'Migratioun Kapazitéit vun invasiv Zellen [2,15-11,7] präsent sinn. Dëst du-Entstoe vun connexins ass däitlech während de Werdegang vun mënschlech Broscht Kriibs observéiert, wou Cx26- an Cx43-negativ Primärschoul erhéijen Cx26- an Cx43-positiv Investitiounen an lymph Wirbelen [18,1,9] entwéckelt. Ähnlech Resultater hunn och zu Maus Haut carcinogenesis kritt goufen; Cx26 Ausdrock ass während de Grondsteen vun carcinogenesis reduzéiert mee ass am metastatic lymph Wirbelen [20] restauréiert. Dës Studien préziséiert dass connexins verschiddene Chargen während dem Prozess vun carcinogenesis Leeschtung. Eis Etude war déi éischt Kéier den Ausdrock vun Cx43 während verschidden Etappe vun gastric Kriibs Werdegang (Primärschoul gastric Kriibs Stoffer, Zollformalitéiten-postwendend misse exfoliated gastric Kriibs Zellen a reagéiert metastatic peritoneal Stoffer) ënnersicht. D'Resultater weisen eng drastesch ofgeholl an Cx43 Ausdrock am primäre gastric Kriibs Stoffer am Verglach mat der bascht normal gastric Stoffer (p &Si besteet; 0,05). Am Géigesaz, Ausdrock Cx43 zu Zollformalitéiten-postwendend misse exfoliated gastric Kriibs Zellen an metastatic war peritoneal Stoffer vill fräi. Dës Resultater hindeit, datt Cx43 Wahrscheinlechkeet eng wichteg Roll an peritoneal Metastasen spillt. VerfÜgung Fir ze wëssen ob Cx43 Ausdrock en Effekt op peritoneal Metastasen huet, war Cx43 transfected an BGC-823 an SGC-7901 gastric Kriibs Zellen, an engem Cx43T154A Site stattfannen gouf d'Roll vun Schéier junctional Kommunikatioun an de Prozess vun peritoneal Metastasen ze bestëmmen. Haftung an diapedesis vun entholl Zellen zu der mesothelial Zell monolayers sinn zwee kritesch Schrëtt fir d'Équipe vun peritoneal Metastasen. An kënschtlech VerfÜgung Zell Haftung assay Teamchef Cx43- an Cx43T154A-ausdrécken BGC-823 an SGC-7901 Zellen méi efficace Haftung fir d'mesothelial Zell monolayers wéi eidel Vecteure Zellen an datt d'Haftung Effizienz vun Schatzkummer Cx43T154A-ausdrécken entholl Zellen war ähnlech ze Cx43-ausdrécken Zellen. Dës Resultater hindeit, datt Cx43 der Haftung vun gastric Kriibs Zellen ënnerstëtzt Zellen ze mesothelial, déi vun de Gruef menaarbecht Kommunikatioun onofhängeg ass. Mat wat fir seng wëssenschaftlech Mechanismus, haten eis virdrun Étude uginn, datt Cx43 mat Zell Haftung-verbonne Proteinen so kann, wéi E-cadherin, an de Prozess vun Haftung zousätzlechen [21], déi eng positiv Roll vu Cx43 Ausdrock proposéieren kann an waarden Zell Haftung. VerfÜgung D'diapedesis vun gastric Kriibs Zellen duerch mesothelial Zell monolayers kënschtlech VerfÜgung weider an eiser Experimenter ze propagéieren war. Eis Etude bekannt, datt de diapedesis vun Cx43-ausdrécken gastric Zellen vill mat Cx43T154A-ausdrécken Zellen Verglach verstäerkte war, suggeréiert datt Cx43 Ausdrock bewosst motility betraff, déi mat e puer virdrun Rapporten konsequent war [2, 14, 22, an 23]. Allerdéngs bleift et opgekläert ze ginn ob Cx43 Ausdrock mat intercellular Kommunikatioun verbonne war. Mir lant dann ob GJIC enger Jarnéier Roll an diapedesis spillt. Éischt, iwwerpréift mir de GJIC tëscht gastric Kriibs Zellen an peritoneal mesothelial Zellen. gastric Kriibs Zellen etabléiert eng effikass heterotypic GJIC mat peritoneal mesothelial Zellen d'Resultater bewisen, dass Cx43-auszedrécken; Ee, ausfale Cx43T154A-ausdrécken Zellen GJIC gedoe, wéi virun considéréiert gouf [10]. VerfÜgung Cx43- an Cx43T154A-ausdrécken gastric Zellen bäigebaut Zell monolayers a Co-cultured Iwwernuechtung (net méi laang wéi 12 Stonnen ze mesothelial ) fir weider d'Roll vun GJIC an der transmigration vun gastric Kriibs Zellen duerch d'peritoneal mesothelial Zell monolayers confirméieren. Gastric Kriibs Zell diapedesis war mat Laser Scannen confocal microscopy iwwerpréift. Eis Resultater Teamchef Cx43-ausdrécken gastric Kriibs Zellen méi efficace Wanderung duerch d'mesothelial Zell monolayers wéi Cx43T154A an eidel Vecteure Grupp Zellen Schatzkummer hierkommen d'diapedesis Effizienz vun entholl Zellen an dësen zwou Gruppe net vill anescht war, suggeréiert, dass d'heterocellular GJIC tëscht entholl an mesothelial Zellen ass néideg diapedesis ze verbesseren. Fir d'Jarnéier Roll vun GJIC verstoen an der diapedesis vun gastric Kriibs Zellen duerch d'mesothelial Zell Schichten, notze mer virdru Studien dass d'Mechanisme vun der diapedesis vun entholl Zellen duerch endothelial Zell Schichten Équipe opgekläert hunn. Dës Studien hunn uginn, datt entholl Zellen Signaler un d'endothelium, wéi inositol Adenosintriphosphat (IP3), duerch Schéier junctions schécken kann intracellular Kalzium Niveauen ze regléieren. Nik Niveau vun intracellular Kalzium transiently der myosin Liicht Kette phosphorylate endothelial permeability ze erhéijen. Endothelial Zellen kann och Signaler ze entholl Zellen duerch Schéier junctions schécken un bewosst motility Proteinen upregulate, wéi Rho GTPases, FAQ kinase C, an phosphoinositide-3 kinase [24-22,7]. Dës Resultater kënnen hëllefen de Mechanismus wéi GJIC spillt eng dréien Roll während diapedesis vun gastric Kriibs Zellen ze entschlësselen. VerfÜgung Berécksichtegung vun de Resultater vun dëser Etude an de leschte Conclusiounen, proposéiere mer, datt Cx43-mediated Schéier junctions eng Leeschtung aktiv Roll vun der peritoneal Metastasen vun gastric Kriibs Zellen. Eis Resultater Ënnerstëtzung der Hypothes, datt Schéier-junctional Gefierer tëscht gastric Kriibs Zellen an der mesothelium reguléieren der transmigration vun gastric Kriibs Zellen zu der peritoneal mesothelial Zell monolayers heterocellular. Gastric transmigration 'Kriibs Zellen duerch d'mesothelial Barrière Priedegt via paracellular Migratioun.
Resultater VerfÜgung
BGC-823Cx4335.6±0.9*BGC-823Cx43T154A12.1±0.6BGC-823v13.4±0.7SGC-7901Cx4339.4±0.8†SGC-7901Cx43T154A15.3±0.4SGC-7901v14.7±0.6Table 3. Verglach vun den menge fluorescence Erhuelung Tariffer no an BGC-823 an SGC-7901 gastric Kriibs Zellen (fluorescence Intensitéit, x VerfÜgung ± s) Bleechmëttelen VerfÜgung CSV CSV Luet Diskussioun VerfÜgung
Mikroplastik identifizéiert am mënschlechen Offall fir d'éischte Kéier
Nei Strategie kann d'Gutt-Gehir Kommunikatioun stäerken
Eng Zort vun Darmbakterien kann de Risiko vum Darmkriibs erhéijen
Fäert net d'Kolonoskopie
Ulzerativ Kolitis
Neie Prozess weist verbessert Iwwerliewe fir Patienten mat fortgeschrattem kolorektalen BRAF-mutanten Kriibs
Neit Tool registréiert a verfollegt de Mikrobiomwuesstum
An de leschte Joeren, de mënschleche Mikrobiom huet immens Popularitéit gewonnen wéinst senger Roll bei der Gestaltung vun hirer Gesondheet. Et ass wesentlech fir dmënschlech Entwécklung, Ernährung, a
Fuerschung weist datt Probiotika hëllefe kënnen Angscht an Depressioun ze bekämpfen
Virdrun Fuerschung huet mental Gesondheetsprobleemer an Entwécklungsstéierunge mat der Darmgesondheet gebonnen. Elo, eng Equipe vu britesche Wëssenschaftler huet gewisen datt Liewensmëttel déi de Prof
Mikroben verbonne mat Häerzinfarkt fanne Studie
Eng Studie, déi um ESC Kongress 2019 zu Paräis de leschte Weekend ofgehale gouf, weist datt anormal Mikropopulatioun am Kierper zu enger Behënnerung vun de stabile Koronarplacken féiere kann a féiere