PLOS NËMMEN: MicroRNA-149 bremst Zouhuelen an Zell Cycle zerstéiert duerch d'Reklamme vun ZBTB2 zu Mënscherechter Gastric Cancer

Wat VerfÜgung

Ëmmer Beweiser datt Mir-149 souwuel oofgesinn kann an entholl Wuesstem förderen op der entholl Typ jee. Allerdéngs bleift d'Roll vum Mir-149 zu der Werdegang vun gastric Kriibs (GC) onbekannt. Hei Rapport mir dat Mir-149 entholl suppressor zu Mënsch gastric Kriibs ass. Mir-149 Ausdrock ass zu GC Zell Linnen a Krankheete uplanzen am Verglach zu normalen gastric epithelial Zell an Stoffer ofgeholl, respektiv. Den Ausdrock Niveau vun Mir-149 vergläichen och mat der dat Ofschloss vun GC Zellen an Stoffer. Desweideren, bremst ectopic Ausdrock vu Mir-149 zu gastric Kriibs Zellen Prolifératioun an Zell Zyklus Werdegang vun verwandelt-Regulatioun ZBTB2 VerfÜgung, engem mächtegst repressor vun der Arf-HDM2-p53-p21 Passerelle, mat engem grousse Potential bindend Site fir Mir-149 an hir mRNA d'3'UTR. Et ass och, datt ZBTB2 Ausdrock Erhéijunge GC Zellen an Stoffer Verglach zu normal gastric epithelial Zell an Stoffer, bzw.. Silencing vun ZBTB2 VerfÜgung féiert zu Ennerdréckung vun Zell Wuesstem a Zell Zyklus verhaft an G0 /G1 Phas, wat beweist, datt ZBTB2 als oncogene am GC Akt kann. Ausserdeem, transfection vum Mir-149 mimics an Zellen gastric Kriibs induces verwandelt-Regulatioun vun ZBTB2 an HDM2, an weider-Regulatioun vun Arf, p53, an p21 fir d'Kontrollen Verglach. Am Resumé, proposéiere eis Daten dass Mir-149 Funktiounen als entholl suppressor mënschlechen gastric Kriibs duerch, op d'mannst deelweis duerch, gezielt ZBTB2

Fro:. Wang Y, Zheng X, Zhang Z, Zhou J, Zhao G, Yang J, et al. (2012) MicroRNA-149 bremst Zouhuelen an Zell Cycle zerstéiert duerch d'Reklamme vun ZBTB2 VerfÜgung zu Mënscherechter Gastric Cancer. PLoS NËMMEN 7 (10): e41693. Doi: 10.1371 /journal.pone.0041693 VerfÜgung

Redakter: Wael El-Rifai, Barnard University Medical Center, Vereenegt Staate vun Amerika VerfÜgung

Arnaque: 13. Mäerz 2012; Akzeptéiert: 25 Juni, 2012; Publizéiert: 29. Oktober 2012 VerfÜgung

Copyright: © 2012 Wang et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung

Funding:. Dës Aarbecht déi Subventioune vun der National Natural Science Foundation vu China ënnerstëtzt huet (keng. 30872966 a keen. 31071135), National Natural Science Foundation of China (keen. 81000864, ​​nee. 81172290, nee. 91129723, nee. 81090270, a keen. 81090273) , an déi chinesesch Postdoctoral Science Foundation (keen. 20100471776). D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung

Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung

Aféierung VerfÜgung

Gastric Kriibs (GC) ass eent vun de meescht genannten Cancers a groussen Ursaachen vun Kriibs Doud weltwäit, virun allem an Osteuropa an Asien, no der läscht global Estimatioun an 2011 publizéiert [1]. Trotz enger bemierkenswäert Ofsenkung GC Heefegkeet am meeschten Deeler vun der Welt, gëtt et nach ëmmer eng grouss Belaaschtung vun der grousser Zuel vu GC Fäll an Doudesfäll weltwäit. D'carcinogenesis vun GC ass eng ganz komplizéiert Prozess [2] - [5] d'dysregulation vu multiple Genen sensibiliséieren [6] - [8], dorënner oncogenes [9] - [14] an entholl suppressors [15] - [18]. Allerdéngs, muss de molekulare Mechanismen néideg fir GC Entwécklung an Werdegang weider lant gin. VerfÜgung

MicroRNAs (miRNAs) sinn e Grupp vun endogenously ausgedréckt, Net-coding kleng RNAs (20-25 nucleotides zu Längt) bekannt ze negativ regléieren Gentherapie Ausdrock Iwwersetzung oder falender d'Stabilitéit vun mRNAs duerch direkt bindend fir d'3'-untranslated Regioun (3'-UTR) vun Zil- mRNAs [19] andeem suppressing, [20]. Beweiser aktueller beweist dass miRNAs wichteg Roll an der Entwécklung, ukuerbelt, Prolifératioun, dat, an apoptosis Leeschtung. Ausserdeem, ass aberrant Post-transcriptional Regulatioun vun mRNAs vun miRNAs zu tumorigenesis Zesummenhang [21]. Anormal Ausdrock Profiler vun miRNAs hunn zu verschiddenen Zorte vu mënschlechen erhéijen fonnt goufen, dorënner haett [22], Broscht [23], Aarbecht [24], Liewer [25], Colon [26], an gastric Kriibs [27]. Desweideren, kann e puer miRNAs als oncogenes oder entholl suppressors Funktioun vun den Ausdrock vun Zil- Genen Regulatioun déi wichteg Roll vun Zell Zyklus Werdegang, apoptosis, oder Prolifératioun Leeschtung. Mir-22 [28], Mir-101 [29], a Mir-7 [30] hunn all gewise zu entholl uplanzen an Funktioun als entholl suppressors downregulated ze ginn; Mir-17 [31] an Mir-21 [32] goufen am entholl uplanzen an Funktioun als oncogenes gin upregulated gewisen. Des Studie weisen, dass dysregulation vun miRNAs dacks zu carcinogenesis a Kriibs Werdegang Équipe ass. VerfÜgung

rezenten Etuden hu proposéiert, datt Mir-149 kënnen eng wichteg Roll an verschidde Krankheete spillen, dorënner de Werdegang vun malignant erhéijen. Mir-149 gouf den zwou entholl suppressor [33] an eng oncogene [34] zu der Entwécklung vun der Pluralitéit Zorte vu staark erhéijen dës Distanz ze fonktionnéieren. Zum Beispill, Verloscht vu Mir-149 féiert vun Funktioun vun e puer oncogenes ze gewannen a mat entholl Schouljoer an keen Auto Zell carcinoma [35], astrocytomas [36], an Aarbecht carcinoma [37] vergläichen. Ectopic Ausdrock vu Mir-149 induces apoptosis vun neuroblastoma an Hela Zellen [33]. Nik Ausdrock vu Mir-149 gouf an de Werdegang vun nasopharyngeal carcinoma [38] an melanoma Metastasen [34] wichteg gemellt ginn. Ausserdeem, dysregulation vum Mir-149 ass och vun e puer Net-neoplastic Krankheeten agebonne. Zum Beispill, ass downregulation vum Mir-149 Ausdrock vun der Entwécklung vun der Primärschoul myelofibrosis, polycythemia Vera, a wesentleche thrombocythemia [39] Équipe, an de Verloscht vun Mir-149 kann hepatitis C Virus (HCV) RNS Iwwerfloss [40] oofgesinn. Allerdéngs bleift d'Ausdrock Muster a Roll vum Mir-149 zu der Entwécklung vun GC onkloer. VerfÜgung

Am Moment studéieren, hunn mer dat Mir-149 bedeitend an GC Zell Linnen a Krankheete Echantillon am Verglach zu der downregulated ass normal gastric epithelial Zell an bascht Net-entholl Stoffer, bzw.. Ectopic Ausdrock vu Mir-149 bremst Prolifératioun an induces G0 /G1 verhaften AGS an SGC7901 Zellen kënschtlech VerfÜgung vun gezielt ZBTB2 VerfÜgung. Ausserdeem, Ausschöpfung vun ZBTB2 VerfÜgung vun siRNA Resultater am inhibition vun Prolifératioun an Zell Zyklus verhaft. Den Ausdrock Muster vum Mir-149 an ZBTB2 am GC Zell Linnen a Krankheete Echantillon waren inversely soll, weider suggeréiert datt ZBTB2 VerfÜgung ass eng Zilscheif Gentherapie vum Mir-149. Aféierung vum Mir-149 Resultater an hire Restaurant an der Expressioun vun p53, p21, Arf, an HDM2, Membere vun der Arf-HDM2-p53-p21 Passerelle déi vun ZBTB2 reglementéiert ass. Am Resumé, dës Resultater confirméieren datt Mir-149 am GC Zellen a Krankheete Echantillon downregulated ass a virschloen, datt Mir-149 Funktiounen als suppressor vun gastric Kriibs Zell Wuesstem vun Werdegang Prolifératioun an Zell Zyklus inhibiting. VerfÜgung

Resultater

Expression vum mir-149 ass am GC Zell Linnen a Krankheete Echantillon VerfÜgung downregulated

d'Roll vum mir-149 zu der carcinogenesis vun GC ze bewäerten, mir benotzt éischt grouss RT-Hinnen alleguer den Ausdrock vun ze moossen Mir-149 zu Mënsch GC Zell Linnen (MKN45, GC9811, AGS, SGC7901, an MKN28) an fonnt dass Mir-149 am GC Zell Linnen am Verglach zu engem normal gastric epithelial Zell Linn, GES-1 (Figebam. 1A) downregulated war. Besonnesch, war den Ausdrock Niveau vum Mir-149 positiv mat der dat Ofschloss vun GC Zellen soll. Nämlech, am Ausdrock Niveau vum Mir-149 Pro ënnerscheet Zell Linnen, wéi MKN45, GC9811, an AGS, ass wesentlech méi niddreg wéi an mëttelméisseg a gutt-ënnerscheet Zell Linnen. Den Ausdrock vun Mir-149 zu mëttelméisseg ënnerscheet Zellen, SGC7901, ass méi niddreg wéi déi vun de gutt-ënnerscheet Zell Linn, MKN28 (Figebam. 1A). VerfÜgung

Fir och wann Niveau vun Mir-149 ze bestëmmen vergläichen mat der dat Ofschloss vun erhéijen iwwerpréift mir den Ausdrock vun mir-149 zu 44 Mënsch GC Medeziner uplanzen, dorënner 13 schlecht, 16 mëttelméisseg, a 15 gutt ënnerscheet Echantillon. Mir hu fonnt, datt de Begrëff vun Mir-149 zu gastric erhéijen ass ganz niddreg wéi zu reagéiert normal bascht Stoffer (Figebam. 1B). Ausserdem, huet den Ausdrock vun Mir-149 zu méi ënnerscheet erhéijen héich wéi zu manner ënnerscheet erhéijen (Lalumi 1c, F = 65,391, p VerfÜgung &Si besteet;. 0.001). Zousätzlech, ofgeholl Ausdrock vu Mir-149 deemolegt Weltbild mat lymph Node Metastasen (* p VerfÜgung = 0.046) an TNM Etapp (** p VerfÜgung = 0.0011) (Table 1). VerfÜgung

Ectopic Ausdrock vu mir-149 bremst Prolifératioun an induces G0 /G1 verhaft an AGS an SGC7901 Zellen VerfÜgung

d'Roll vum mir-149 am GC Zellen ze ermëttelen, geheescht mer schlecht an mëttelméisseg ënnerscheet GC Zell Linnen, AGS an SGC7901, bzw.. AGS an SGC7901 Zellen sech transiently mat eithermature Mir-149 mimics transfected, inhibitor, mierkt transfected, oder Mir-NC. Als zu Figur 2A gewisen, 2D, show grouss RT-Hinnen alleguer Resultater datt Ausdrock vu Mir-149 mimics oder inhibitors vill upregulate oder den Ausdrock vun Mir-149, respektiv, vun AGS an SGC7901 Zellen aus dem éischte ze fënneften Dag posttransfection (Lalumi downregulate . 2A, F = 8,429, p VerfÜgung = 0,003;.. Figebam 2D, F = 8,595, p VerfÜgung = 0,003) am Verglach zu NC an mierkt Kontrollen VerfÜgung

AGS an SGC7901 Zellen transfected mat Mir-149 mimics an inhibitors zougedréckt a wesentlech méi a méi héich Niveauen vun Zell Prolifératioun, respektiv, wéi den NC oder mierkt Gruppen sech als déi MTT assay (Lalumi 2B, F = 27,47, p &Si besteet;. 0,001;. Lalumi 2E, F = 44,061, p &Si besteet; 0.001). Transfection vun AGS an SGC7901 Zellen mat Mir-149 mimics Resultater am wesentleche G1 Phase verhaft am Verglach zu NC an mierkt Kontrollen ( p VerfÜgung &Si besteet; 0,05). Desweideren, Behandlung mat Mir-149 inhibitors Spiller Nerve gewisen a manner AGS an SGC7901 Zellen an G1 verhaft Verglach zu NC an mierkt Kontrollen ( p VerfÜgung &Si besteet; 0,05). (Lalumi 2C, F = 134,177, p
&Si besteet; 0,001;.. Lalumi 2F, F = 58,792, p VerfÜgung = 0.003) VerfÜgung

ZBTB2 VerfÜgung ass eng Zilscheif vum Mir-149 VerfÜgung

virdrun Donnéeën hindeit, datt Mir-149 engem suppressor vun GC Zell Wuesstem kënnen Genen vun gezielt dass Prolifératioun an Zell Zyklus Werdegang (33-34) (38) Kontroll. Sou, mir fir zousätzlech potentiell Ziler vum Mir-149 aus TargetScanHuman Datebank gesichte. Mir bestëmmt vill Potential Mir-149 Zil- Genen, dorënner ZBTB2 VerfÜgung, engem POK Famill Transkriptiouns Faktor a mächtegst repressor vun der Arf-HDM2-p53-p21 Passerelle (41). ZBTB2 VerfÜgung gouf fonnt putative Mir-149 bindend Siten ze hunn an hiren 3'UTR (Figebam. 3A). Luciferase reporter assays huet gesuergt fir z'iwwerpréiwen ob ZBTB2 zu engem direkte Zil vum Mir-149 mat AGS ass an SGC7901 Zellen. Mir Co-transfected AGS an SGC7901 Zellen bzw. mat engem psiCHECK-2 Vecteure wouvun entweder 3'UTR fir ZBTB2 oder mutated 3'UTR fir ZBTB2, an mimics vum Mir-149 oder inhibitors vum Mir-149. Wild-Typ an Mann- ZBTB2-3'UTR wou sech den putative bindend Site vum Mir-149 gekloonten an psiCHECK-2 Vecteure matgeholl aus luciferase Gentherapie (Figebam. S1). Aféierung vum Mir-149 reduzéiert bedeitend der luciferase Aktivitéit aus der ZBTB2 3'UTR reporter Vecteure (Lalumi 3B-3C, p VerfÜgung &Si besteet;. 0.001), mä en Afloss huet net d'luciferase Aktivitéit aus der Mann- ZBTB2-3 "UTR reporter Vecteure. Dës Donnéeë hindeit, datt Mir-149 direkt reguléieren ZBTB2 VerfÜgung Ausdrock Niveauen. Doriwwer eraus, et ass kee groussen Verloscht am Verglach luciferase Aktivitéit vun Zellen Co-transfected mat Mir-149 inhibitor oder 3'UTR-ZBTB2 /psiCHECK-2 Vecteure (Figebam. 3B-3C). Et ass villäicht well vun der Heeméquipe sinn Interaktiounen tëschent 3'UTR vun ZBTB2 an endogenous Mir-149, dohier, ofgeholl Mir-149 Ausdrock net aus der ZBTB2-3'UTR reporter Vecteure luciferase Aktivitéit Erhéijung gemaach. Dës Resultater confirméieren weider dass Mir-149 ZBTB2 Ausdrock Hien duerch gezielt 3'-UTR vun ZBTB2 VerfÜgung mRNA. VerfÜgung

Mir-149 an ZBTB2 Ausdrock negatif zu GC Zellen a Krankheete Echantillon soll ass

weider fir der Relatioun tëscht mir-149 an ZBTB2 ermëttelen, iwwerpréift mir den Ausdrock vun ZBTB2 am GC Zellen mat westlecher blotting an am GC Stoffer immunohistochemistry benotzt. Et gouf festgestallt, dass GC Zellen hunn vill méi Ausdrock Niveau vun ZBTB2 wéi déi normal gastric epithelial Zell, GES-1 (Lalumi 4A e-b F = 167,843, p VerfÜgung &Si besteet;. 0.001). ZBTB2 Ausdrock negatif mat der dat Ofschloss vun de GC Zellen soll; schlecht ënnerscheet GC Stoffer awer e wesentleche héich ZBTB2 Ausdrock Niveau wéi gutt ënnerscheet GC Stoffer a reagéiert normal gastric Stoffer (Lalumi S2A-B, F = 117,280, p VerfÜgung &Si besteet;. 0.001). ZBTB2 VerfÜgung mRNA Ausdrock Niveau sinn Hoplit mat d'FAQ Niveauen (Lalumi 4B engem, F = 283,355, p VerfÜgung &Si besteet;. 0.001). Ausserdeem, ass den Ausdrock vun Mir-149 an ZBTB2 inversely soll (Figebam. 4B b, p VerfÜgung = 0,033, R = -0.908). Mir gemooss dann den Ausdrock Niveau vun Mir-149 an ZBTB2 VerfÜgung benotzt grouss RT-Hinnen alleguer zu 5 GC Zell Linnen (MKN45, GC9811, AGS, SGC7901, an MKN28) (Figebam. 4C engem) an 18 GC Krankheete Echantillon (6 schlecht, 6 mëttelméisseg, a 6 gutt ënnerscheet Echantillon) (Figebam. 4C b). Resultater confirméieren datt d'mRNA Niveau vun ZBTB2 VerfÜgung mat Mir-149 Ausdrock (Lalumi negatif deemolegt Weltbild 4C engem, p VerfÜgung = 0,033, R = -0,847;.. Lalumi 4C b, p VerfÜgung &Si besteet; 0,001, R = -0.908). Desweideren, AGS (Figebam. 4D) an SGC7901 Zellen (Figebam. 4E) transfected mat Mir-149 mimics hunn vill rofgaang Ausdrock vun ZBTB2 op d'FAQ Niveauen (Brieder e-b) an mRNA Niveauen (erschéngt c) am Verglach zu mierkt oder NC Zellen ( p VerfÜgung &Si besteet; 0.001). Eis Conclusiounen unzeginn dat Mir-149 direkt den Ausdrock vun regléieren kann ZBTB2 VerfÜgung. VerfÜgung

Mir-149 Hien GC Zell Prolifératioun an Zell Zyklus Werdegang vun gezielt ZBTB2

Next confirméiert mir dat Prolifératioun inhibition an Aféierungs- vun Zell Zyklus verhaft am GC Zellen mir-149-mediated verlaangt Reklamme vun ZBTB2 VerfÜgung. ZBTB2 VerfÜgung war Ausdrock Uewerschenkel-verwandelt siRNAs zu AGS an SGC7901 Zellen benotzt. Western blotting (Figebam. 5A, e-c) a grouss Hinnen alleguer Analyse gewisen, datt Ausschöpfung vun ZBTB2 VerfÜgung vun siRNA transfection bedeitend zur Mir-149 inhibitor kéint kompenséiert an enger markéiert Erhéijung vun ZBTB2 war vun Zellen transfected gesinn mat Mir-149 inhibitors (Lalumi 5B, p VerfÜgung &Si besteet;. 0.001). MTT assay weist dass Prolifératioun vun Zellen mat siRNA-ZBTB2 transfected gouf opgeléist an d'Prolifératioun vu Zellen mat Mir-149 inhibitors transfected geklomme Verglach zu Zellen transfected mat siRNA-NC (Kontroll) an siRNA-ZBTB2 + Mir-149 (Figebam. 5C ). Ausserdeem, inhibition vun ZBTB2 VerfÜgung Ausdrock ënnerstëtzt G0 /G1 verhaft a Hien der G0 /G1 Zell Zyklus verhaft entschlof vum Mir-149 inhibitor Behandlung an AGS an SGC7901 Zellen am Verglach zu NC Kontroll Zellen (Figebam. 5D-5E, p VerfÜgung &Si besteet; 0.001). Eis Conclusiounen hindeit datt Mir-149 bremst GC Zell Prolifératioun an Zell Zyklus Werdegang vun inhibiting ZBTB2 VerfÜgung Ausdrock. VerfÜgung

Aféierung vum Mir-149 der Ausdrock vun ZBTB2 an Zell-Zyklus-Zesummenhang Proteinen verännert

ZBTB2 gouf confirméiert enger mächtegst repressor vun der Arf-HDM2-p53-p21 Passerelle ze ginn, déi zu Zell Zyklus Regulatioun wichteg ass (41). Zu der Regelung vun dësen Proteinen vum Mir-149 am GC Zellen ermëttelen, transfected mir AGS an SGC7901 Zellen mat Mir-149 mimics oder Mir-NC an standing RT-Hinnen alleguer a westlech blotting Analyse fir ZBTB2 Zil- Genen. Als zu Dorënner 6A-6B gewisen, ectopic Ausdrock vu Mir-149 downregulates den Ausdrock vun ZBTB an HDM2, an upregulates den Ausdrock vun Arf, p53, an p21 ( p VerfÜgung &Si besteet; 0.001). Dës Donnéeë sinn konsequent mat der Funktioun vun ZBTB2 zu repressing der Reunioun vun Arf, p53, an p21 an activating den Ausdrock vun HDM2 (41). Desweideren, réckgängeg ectopic Ausdrock vun ZBTB2 vun transfection der Mir-149-mediated Reduktioun vun HDM2 Ausdrock an Zouhuele Arf, p53, an p21 Ausdrock vun AGS an SGC7901 Zellen (Figebam. 6A-B). . Ectopic ZBTB2 Ausdrock war zu transfected AGS an SGC7901 Zellen bestätegt (Lalumi S3, SGC7901 Zellen, F = 806,365, p VerfÜgung &Si besteet; 0,001; AGS Zellen, F = 1436,300, p VerfÜgung &Si besteet; 0.001). Arf, p53 an p21 Promotioun Zell Zyklus Werdegang dofir, hir downregulation vun Ausdrock vu Mir-149 mimics erkläert de G0 /G1 Phase verhaft an AGS an SGC7901 Zellen. VerfÜgung

Diskussioun VerfÜgung

Méi Beweiser hindeit datt miRNAs Leeschtung enger kritescher Roll an carcinogenesis a Kriibs Werdegang [21]. Verännert miRNA Ausdrock Niveaue gi vun der Initiatioun an Entwécklung vun erhéijen agebonne; modulation vun miRNAs datt den negativen Reglementatioun vun oncogenes oder entholl suppressors Resultater am Promotioun vu Kriibs Zell Prolifératioun a Wuesstem [28] Funktioun - [32]. Virdrun Etuden hu gewisen, datt d'Roll vum Mir-149 zu der Werdegang vun verschiddenen Zorte vun erhéijen kontrovers ass [33] - [36], [38]. Den Ausdrock Muster an Ziler vum Mir-149 variéieren an verschidden Zorte vun erhéijen. Mir-149 Ausdrock ass zu puer erhéijen downregulated, wéi eng entholl suppressor Fonctionnement vun oncogenes zu puer Cancers gezielt. Zum Beispill, ass am kloer Zell keen Auto Zell carcinoma Mir-149 downregulated a seng wahrscheinlech Ziler waren, wéi KCNMA1 an LOX (35) identifizéiert. Ausserdeem, ass Mir-149 och zu Gehirtumoren Zellen downregulated a gouf als entholl suppressor vun gezielt RAP1B, CD47, CCN1, an NXF1 [36] zu Akt proposéiert. Am Géigesaz, kann Mir-149 och als entholl suppressor Funktioun vun verschidden oncogenes gezielt. Detektioun vun miRNA Ausdrock Profiler vun verschidden Medeziner Etappe vun nasopharyngeal carcinoma (dach) an lymph dach Node Metastasen weist datt den Ausdrock vun Mir-149 an dach upregulated ass an Ausdrock vun hirem Ziel Gentherapie, Smad2 VerfÜgung, ass erofgaangen mat de Werdegang vun dach [38]. Eng ähnlech oncogenic Roll fir Mir-149 war och zu deem upregulation vum Mir-149 bewierkt downregulation vun GSK3-α an upregulation vun Mcl-1, geplatzt apoptotic Resistenz [34] zu melanoma gesinn. Sou wäit, wéineg ass iwwer d'Roll vum Mir-149 zu gastric Kriibs bekannt. Hei, mir mellen, datt Mir-149 Ausdrock bemierkenswäert zu Multiple gastric Kriibs Zell Linnen a Krankheete uplanzen Verglach mat der normal gastric epithelial Zell iwwereneestëmmen bascht normal Stoffer, respektiv reduzéiert gëtt. Wichtegst, ass den Niveau vum Mir-149 Ausdrock mat der dat Ofschloss vun GC Zellen an uplanzen verbonnen; schlecht ënnerscheet GC Zellen oder uplanzen hunn ënneschten Mir-149 Ausdrock Verglach zu gutt ënnerscheet Echantillon. Ectopic Ausdrock vu Mir-149 bremst Zellen Prolifératioun an Zell Zyklus Werdegang vun gezielt ZBTB2 VerfÜgung zu AGS an SGC7901 Zellen. Mir-149 an ZBTB2 Ausdrock sinn vun GC Zellen a Krankheete uplanzen negatif soll, an overexpression vum Mir-149 bewierkt downregulation vun ZBTB2 VerfÜgung. Ausschöpfung vun ZBTB2 Resultater am inhibition vun AGS an SGC7901 Zellen Prolifératioun an Zell Zyklus Werdegang. Erginn des Resultater weisen, fir d'éischte Kéier, datt ZBTB2 kann als oncogene an der tumorigenesis vun gastric Kriibs Funktioun. VerfÜgung

Eis Donnéeë weisen datt Aféierung vum Mir-149 an GC Zellen induces verhaft Zell Zyklus, suggeréiert datt Mir-149 Ziler vläicht zu Zell Zyklus Regulatioun agebonne ginn. ZBTB2 ass eng POK Famill Transkriptiouns Faktor, deen de Arf-HDM2-p53-p21 Passerelle oofgesinn kann [41]. Arf, entholl suppressor [42], kann déi nohalteg mitogenic Stimulatioun a spillt eng wichteg Roll an activating p53 onofhängeg an kontroléieren d'Stabilitéit vun p53 duerch dÉxistenz HDM2 [43], eng wichteg regulator vun p53 entschlof ginn. D'entholl suppressor p53 spillt enger kritescher Roll an den Entretien vun Zell homeostasis duerch Pinguin Zell Zyklus verhaft an apoptosis wann Zellen ze stressors ënnerworf sinn, wéi hypoxia, DNA Schued, an telomere Viagra [44]. p21, engem p53 Zil- Gentherapie, mediates Zell Zyklus G1 Phase verhaft duerch bindend an d'Aktivitéit vun cyclin-CDK2 oder CDK1 investéiert inhibiting [45]. ZBTB2 kann der Reunioun vun Arf, p53, an p21, géint a HDM2 Ausdrock [41] induce. Ze validéieren, ob d'Auswierkungen Zell Zyklus entschlof vum Mir-149 Ausdrock vun ZBTB2 Verloscht mediated ass, mir iwwerpréift Ausdrock vun HDM2, Arf, p53 an p21 vun AGS an SGC7901 Zellen transfected mat Mir-149 mimics. Mir hu fonnt, datt ectopic Ausdrock vu Mir-149 Resultater am fräi Meenungsäusserung vun Arf, p53, an p21 a rofgaang Ausdrock vun HDM2 an ZBTB2. Dës Resultater ënnerstëtzen d'Iddi dass Mir-149 enormen seng Roll GC Zellen Prolifératioun an Zell Zyklus Werdegang vun inhibiting vun gezielt ZBTB2 VerfÜgung domat modulating den Ausdrock vun afgerappt Reglementatioun vun Zell Zyklus Werdegang. VerfÜgung

Am Resumé , eisen Daten unzeginn dat mir-149 als entholl suppressor zu gastric Kriibs Zellen Funktioun kënnen a spillt eng wichteg Roll ZBTB2 VerfÜgung zu inhibiting. Dofir, downregulation vum Mir-149 ënnerstëtzt GC Zell Prolifératioun an Zell Zyklus Werdegang. Desweideren, eis Resultater weisen, datt ZBTB2 als oncogene zu der Entwécklung vun gastric Kriibs Funktioun kënnen. Allerdéngs, virausgesat d'Tatsaach dass all miRNA Genen vill Zil- regléieren kënnen déi carcinogenesis zu verschidden Weeër Afloss kann, sinn méi Studien waren aner Mir-149 Ziler ze ermëttelen déi kritesch Biergleit am GC tumorigenesis hun kann. Déi heiteg Etude stellt och Roman Abléck an der Roll vum Mir-149 zu Mënsch gastric Kriibs Werdegang a beweist, datt Mir-149 als eng therapeutesch Zil fir gastric Kriibs Behandlung déngen kann. VerfÜgung

spontan a Methode VerfÜgung

breakpoint VerfÜgung IFLA-

Fir Otemschwieregkeeten Echantillonen, war schrëftlech informéiert Zoustëmmung vu Patiente kritt. D'Prozedure vun dëser Etude benotzt goufen duerch den institutionnelle Kritik Verwaltungsrot vun der véierter Military Medical University guttgeheescht a gouf zu der Helsinki Deklaratioun, a bis lokal Gesetzgebung conformed. VerfÜgung

Zell Linnen a Kultur Konditiounen VerfÜgung

Gastric Kriibs Linnen AGS, MKN28, MKN45 sech aus AGCC an, GC9811 an SGC7901 kaaft Zell Strecken aus Peking Institut Zukunft kritt. All d'Zell Strecken an eisem Institut haten no recommandéiert Ëmwelt-. Zellen sech cultured zu RPMI-1640 mëttelfristeg (Invitrogen, Karlsbad CA, USA) mat 10% An et Bovine serum nà (FBS) (Invitrogen, Karlsbad CA, USA) op 37 ° C an engem 5% CO _{2 incubator . VerfÜgung}

Mënscherechter uplanzen VerfÜgung

All experimentell Prozedure vun de Finanzpolitiker Kritik Verwaltungsrot vun der véierter Military Medical University guttgeheescht huet. Schrëftlech informéiert Zoustëmmung war fir all Patient samples.Human gastric Kriibs ugedait kritt (n = 44) an stemmt bascht Net-entholl uplanzen sech vu Patienten op Xijing Hospital vun Digestive Krankheeten kritt, dee véierten Military Medical Universitéit, mat Awëllegung vun all Patient. VerfÜgung

RNS Offäll, cDNA Synthes, a grouss real-Zäit Hinnen alleguer (qRT-Hinnen alleguer) VerfÜgung

Total RNS vun cultured Zellen war Quecksëlwer mat TRIzol reagent (Invitrogen, Karlsbad CA, USA) no Fabrikant d'Protokoll an RNAs sech bei -80 ° C virum qRT-Hinnen alleguer Analyse gespäichert. Mature Mir-149 Ausdrock war mat engem mirVana TM qRT-Hinnen alleguer miRNA Detektioun Kit (Ambion Galaxy Austin, Texas), mat U6 wéi eng intern Kontroll fonnt. ZBTB2 Ausdrock war mat primers F fonnt: 5'ACTCGGGCGAGATCCACGGC 3 ', R: 5' ACGCAGGCTGCTCATCGGAG 3 ', an GAPDH war wéi eng intern Kontroll benotzt. Hinnen alleguer Produiten sech op eng ethidium bromide-Kierchefënster 1,5% agarose gelies an visualized mat UV getrennt. VerfÜgung

Zell transfection VerfÜgung

De Mënsch Mir-149 duplex rescht an inhibitor (Mir-149) an negativ Kontroll oligonucleotide duplex rescht (Mir-NC) sech entwéckelt a gëtt vun Ribobio (lousoihong Guangdong, China). Déi kleng interfering RNS (siRNA) fir ZBTB2 an den negativen Kontroll RNS (siRNA-NC) waren Wierderbuch a stilvoller vun Genepharma (Shanghai, China). miRNAs, siRNAs an ZBTB2 cDNA plasmid (FulenGen Co. China) waren déi LipofectamineTM 2000 reagent transfected (Invitrogen, Karlsbad CA, USA) no de Protokoll d'Hiersteller. D'ZBTB2 siRNA Haaptrei: F: 5 'GCUGGCUUCUUUCCAAGUU dTdT 3', R: 5 'AACUUGGAAAGAAGCCAGC 3'; D'NC siRNA Haaptrei: F: 5'-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT -3 ", R: 5'-ACGUGACACGUUCGGAGAATT -3 'VerfÜgung

miRNA Zil- Cepheid VerfÜgung

Fir Potential miRNA Zil- Genen, TargetScanHuman Websäit fannen (. http://www.targetscan.org/) benotzt gouf, war d'obligatoresch fräi Energie berechent an biding Siten benotzt http://bibiserv.techfak.uni-bielefeld.de/rnahybrid Websäit analyséiert. VerfÜgung

Vecteure gesond a luciferase reporter assay VerfÜgung

ZBTB2-3'UTR plasmid ze bauen, eng Wild-Typ 3'-UTR Brochstéck vun mënschlech ZBTB2 mRNA (1238-1244 NG, Genbank Bäitrëtt keen. NM_020861.1) d'putative wouvun mir-7 bindend Haaptrei war vun RT-Hinnen alleguer Kick an de Site tëscht Xho ech gekloonten an ech gouf net vun der luciferase reporter Gentherapie vun der psiCHECK ™ Vecteure (Promega, USA). A Mann- vun der eenzeger Mir-7 bindend Site vun der 3'-UTR vun ZBTB2 (5'- GAGCCAG-3 "ACCGCGC-3 zu 5'-") duerch Site-Direkter Mutagenesis Kit (SBS Genetech, Peking, China abegraff ass ). Wild an Mann- Zorte vun pmirGLO-ZBTB2-UTR vectors sech duerch DNA sequencing validéiert VerfÜgung

D'Nukleotid Message vun primers fir ZBTB2-3'UTR (MT) Klon:. MutZBTB2F: 5'GGCCTCACAAGACAAAACAGACCGCGCAAGTAAGGACTGAAGGAGAA 3 'mutZBTB2R: 5' TTCTCCTTCAGTCCTTACTTGCGCGGTCTGTTTTGTCTTGTGAGGCC 3 'VerfÜgung

D'Nukleotid Message vun primers fir ZBTB2-3'UTR (virstellen) Klon: ZBTB2XhoIF: 5'CCGCTCGAG ATGTCACTTATCTTTTTAAAAAACTCTCA 3' ZBTB2NotIR: 5'ATAAGAATGCGGCCGC TACTCATTTAATTAAACGTTTATTC 3 'ZBTB2XhoIF2: 5'CCGCTCGAGATGTCACTTATCTTTTTAAAAAACTCTCATTTTTACAAAGACTATC 3' ZBTB2F3: 5'CCGCTCGAG CTGTAGTTCTCCATGGCATGATAC 3 '. VerfÜgung

BTS sech mat der Raumstatioun-149 mimics transfected, NC an pmirGLO plasmid zu 24-gutt Placke mat lipofectamine ™ 2000 (Invitrogen) no der Taktik. 48 h drop, waren Zellen recoltéiert a fir luciferase Aktivitéit analyséiert mat de Dual-Luciferase Reporter Assay System (Promega, USA) a Réckstänn vun der GloMaxTM 20/20 erkennen System (E5331, Promega). VerfÜgung

Western blotting

Total FAQ aus cultured Zellen sech lysed vun Lysis Respektiv PMSF op Äis mat. Dunn FAQ sech duerch 12% SDS polyacrylamide gels electrophoresed a sech dann zu engem PVDF Membran (Millipore) transferéiert. Schläimhait sech fir 1 h mat 5% Nët-Fett Mëllech Pudder bei Raumtemperatur blockéiert an Nuecht mat der Primärschoul antibodies incubated. Schläimhait sech no dräi 10 min Mëtten an TBS-T (triethanolaminebuffered Salins Léisung mat Tween) mat Première antibodies Fortgeschratten mat HRP fir 1 h bei Raumtemperatur incubated. Endlech, goufen d'Signaler ECL Kit fonnt benotzt (Pierce Biotech., Rockford, IL, USA) an de Schläimhait si gescannt an analyséiert e Bio-Rad ChemiDoc XRS + Imaging System mat Imaging Software (Versioun Quantitéit 1) benotzt. D'FAQ Ausdrock war fir eng endogenous Referenz (Actin) normalized a relativ zu der Kontroll. D'Spektren multicolor breet-Gamme FAQ Leeder (Fermentas) war wéi molekulare Bewaacher benotzt. All déi benotzt antibodies am Südweste blot assay sinn an Dësch S1 opgezielt. VerfÜgung

Immunohistochemistry an Immunohistochemical ukomm VerfÜgung

Paraffin Rubriken, 4-μm an deck, sech op 65 ° C fir 2 h gebakene an deparaffinized . Antigen retrieval war fir 15 Minutten am Asaz citrate Natrium Prellbock (PH 7,2) 95 ° C standing an dann drënner waren fir 30 Minutte bei Raumtemperatur gi si. No 15 Minutte mat 3% Waasserstoff Hem behandelt ginn d'endogenous peroxidase ze blockéieren, huet de Rubriken fir 30 Minutten mat normal Geess serum confining flësseg behandelt Net-spezifesch bindend ze reduzéieren an dann Kanéngchen polyclonal anti-ZBTB2 (1:500, Bioss Co . China) de Rubriken fir 12 h bei 4 ° C.After rewarming fir 1 h an wäschen fir 5 Mol incubated war, Rubriken sech mat Première antibody fir 30 Minutte bei Raumtemperatur incubated. Diaminobenzidine (botzt) war fir Faarf Reaktioune gebraucht. Kierzunge immunohistochemical staining Faarwen war wéi virdru beschriwwen [46]. VerfÜgung

MTT assay VerfÜgung

BTS sech transfected mat 100 nm Mir-149 inhibitor (Genepharma, Shanghai, China), mimics (Ribobio, lousoihong Guangdong, China) oder 100 nm siRNA-ZBTB2 (Genepharma) .Twenty-véier spéit, Zellen sech am 96-gutt Placke (2 × 103 /gutt) rakommen. D'Wirtschaftlechkeet vun Zellen war vun MTT iwwerpréift (3-2, 5-diphenyl tetrazolium bromide) assay (Fläch, USA) deeglech fir 6 Deeg. VerfÜgung

Zell Zyklus assay duerch onkontrolléiert cytometry VerfÜgung

Gastric Kriibs Zell Linnen, AGS an SGC7901 sech zu RPMI-1640 mëttelfristeg (Invitrogen, Karlsbad CA, USA) ergänzt mat 10% FBS zu 6-gutt Placke ugebaut. Transfection sech standing wann Zellen erreecht 80 %% - 90% confluency. Duerno, huet Zellen, recoltéiert zweemol mat PBS gewäsch, an Iwwernuechtung zu 70% Ethanol bei 4 ° C fest. Dunn Zellen sech fir 1 h mat propidium Kaliumiodid bei Raumtemperatur incubated a goufen duerch onkontrolléiert analyséiert cytometry engem FACScan Flux cytometer (BD Biosciences, Mountain View, CA) benotzt. Dës Date goufen duerch benotzt Flowjo (Flowjo) analyséiert. VerfÜgung

statistique Analyse VerfÜgung

Data sech als Mëttler ± Sem vun dräi onofhängeg Experimenter ausgedréckt. Fir statistesch Tester, SPSS statistesch Software Package, version17.0 (SPSS, Chicago, IL, USA) benotzt gouf. D'Schüler an d'T-Test, déi ee-Manéier ANOVA an zwee-Manéier ANOVA Test huet fir MTT assays, grouss Hinnen alleguer an entholl Wuesstem rop gesuergt. D'Korrelatioun tëscht Mir-149 an ZBTB2 war mat Spearman Geleeënheet Korrelatioun analyséiert. P Wäerter &Si besteet; 0,05 waren statistesch relevant als VerfÜgung

Ennerstëtzung Informatiounen VerfÜgung Dorënner S1.. VerfÜgung Wild-Typ an Mann- ZBTB2 VerfÜgung -3'UTR der putative bindend Site vum Mir-149 mat sech gekloonten an psiCHECK-2 Vecteure. A. ZBTB2 VerfÜgung -3'UTR war aus Frankräich DNA vun AGS Kick. B. Lane 1,3, 5: Recombinant plasmids vun ZBTB2-1, ZBTB2-2, ZBTB2-3 VerfÜgung bzw.; Geschäftswelt 2,4,6: Bilan vun Aktivitéit Verdauung vun recombinant plasmids vun ZBTB2-1, ZBTB2-2, bzw. ZBTB2-3 VerfÜgung. Resultater weisen, datt ZBTB2 VerfÜgung -1/2/3 hunn erfollegräich an der vectors gesaat ginn (M1:. DL2000 DNA context; M2: DL1 KB DNA context; ZTBT2-1 /2/3 Gruppen: 1406 BP; Vectors Bands: 6.1 kB). C. M1: 1 KB DNA Leeder context. Lane 1: amplification vun Mut ZBTB2 VerfÜgung F1 /R1 (negativ Kontroll ouni Taq Aktivitéit); Lane 2: amplification vun Mut ZBTB2 VerfÜgung F1 /R1. Eng Band vu Mut ZBTB2 VerfÜgung (7.6 KB) Gewise erfollegräich Hinnen alleguer vun Mann- amplification. D. Sequencing Resultater vun WT- ZBTB2 VerfÜgung an MT - ZBTB2
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0041693.s001 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung Dorënner S2 . VerfÜgung ZBTB2 Ausdrock vun mënschlecher gastric Kriibs uplanzen an stemmt bascht normal Stoffer. A. Vertriederin Biller gewise ginn positive immunohistochemical staining vun ZBTB2 zu Mënsch gastric Kriibs uplanzen (b-c) iwwereneestëmmen bascht normal Stoffer (en) (Vergréisserung 200 ×). B. Immunohistochemical staining Faarwen war wéi virdru beschriwwen [46]; statistesch Analyse vun Daten iwwert den ZBTB2 Ausdrock Ënnerscheed tëschent Mënsch gastric Kriibs uplanzen an stemmt bascht Net-kriibserreegend Stoffer (One-Way ANOVA Analyse, F = 117,280, *** p VerfÜgung &Si besteet; 0.001). VerfÜgung

• PLOS NËMMEN: CYP2E1 RsaI /PstI Polymorphism an Gastric Cancer waat: Meta-Analysen Baséierend op 24 Case-Control Studies
• PLOS NËMMEN: genetesch waat fir op op Genen verwéckelt der Arméi Hormon Biosynthesis Passerelle an Progesterone Receptor fir Gastric Cancer Risk