Reprimo (RPRM), engem afgerappt effector vun p53-entschlof Zell Zyklus verhaft um G2 /M, gouf als putative entholl suppressor Gentherapie (wënnt) a wéi eng potentiell uweist fir Net-invasiv erkennen gastric Kriibs (GC) proposéiert. D'Zil vun dëser Etude war d'epigenetic silencing vun RPRM Gentherapie vum Promoteur methylation a seng entholl suppressor Funktioun am GC Zell Zeilen ze diskutéieren. Doriwwer eraus, war Medeziner Bedeitung vun RPRM FAQ Produit a seng Associatioun mat p53 /p73 entholl suppressor FAQ Famill lant. Epigenetic silencing vun RPRM Gentherapie vum Promoteur methylation war zu véier GC Zell Linnen bewäert. Protein Ausdrock vun RPRM war zu 20 entholl évaluéiert an Net-entholl Fäll iwwereneestëmmen. D'Medeziner Bedeitung vun RPRM Associatioun mat p53 /p73 entholl suppressor FAQ Famill war zu 114 GC Fäll évaluéieren. Entholl suppressor Funktioun gouf duerch funktionell assays iwwerpréift. RPRM Gentherapie Ausdrock war erof mam Promoteur methylation (; p = 0,042 Spearman Geleeënheet r = -1) soll. RPRM overexpression inhibited Kolonie Équipe an Hafen-onofhängeg Wuesstem. An Medeziner Echantillonen, war RPRM Gentherapie FAQ Ausdrock zu 75% (15/20) vun Net-entholl bascht mucosa fonnt, mä nëmmen zu 25% (5/20) vun gastric entholl Stoffer (p = 0.001). Clinicopathological kennenzeléieren vum Verloscht vun RPRM Ausdrock sech vill mat invasiv Etapp vun GC (Etapp ech bis II-IV, p = 0.02) an engem positive association tëscht RPRM an p73 Gentherapie FAQ Produit Ausdrock verbonne fonnt gouf (p &Si besteet; 0,0001 an Kappa Wäert = 0,363 ). Zu der Konklusioun, ass epigenetic silencing vun RPRM Gentherapie vum Promoteur methylation mat Verloscht vun RPRM Ausdrock assoziéiert. Funktionell assays hindeit datt RPRM als wënnt doruechter. Verloscht vun Ausdrock vun RPRM Gentherapie FAQ Produit ass mat der invasiv Etapp vun GC assoziéiert. Positiv association tëscht RPRM an p73 Ausdrock hindeit datt aner Membere vun der p53 Gentherapie Famill an d'Regulatioun vun RPRM Ausdrock deelhuelen kann VerfÜgung
Fro:. Saavedra K, éischter Halschent J, Olivares W, Marchant MJ, Rodríguez A, Torres- Estay V, et al. (2015) De Verloscht vun Expression vun Reprimo, engem p53-entschlof Zell Cycle Arrest Gene, deemolegt Weltbild mat invasiv Etapp vun entholl zerstéiert an p73 Expression zu Gastric Cancer. PLoS NËMMEN 10 (5): e0125834. Doi: 10.1371 /journal.pone.0125834 VerfÜgung
Akademesch Redakter: Mohammed Soutto, Barnard University Medical Center, USA VerfÜgung
Arnaque: 16. Januar 2015; Akzeptéiert: 25. Mäerz 2015; Publizéiert: May 8, 2015 VerfÜgung
Copyright: © 2015 Saavedra et al. Dëst ass eng oppen Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz CC BY verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt si vum original Auteur an d'Quell Kaiser VerfÜgung
Data Disponibilitéit: All Daten de Pabeier sinn bannen a sengem Informatiounen Fichieren Ennerstëtzung VerfÜgung
Funding:.. dat Wierker vum Acceptéieren CONICYT-FONDECYTo1014 (AHC) an CONICYT-FONDAP—30011 (AHC an JCR) vun der Regierung vu Chile ënnerstëtzt gouf
Wettsträit Interessen:. d'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung
Gastric Kriibs (GC) ass den drëtte Virwaat Ursaach vum Kriibs-Zesummenhang Doud an der fënnefter meeschte gemeinsam malignancy weltwäit [1]. Trotz der falender Heefegkeet vun GC, wéinst der Unerkennung vu gewësse Risiko Facteuren zu Deel (zB Helicobacter pylori VerfÜgung an Ëmwelt Faktoren), bleift et ee vun de stäerkste gemeinsam Cancers weltwäit an weider eng Medeziner Been ze ginn [2 , 3]. Gastric carcinogenesis doranner e moderate Heefung vun genetesch a epigenetic hire Restaurant, an den Ausdrock vun oncogenes zu dysregulation Haaptfiguren an entholl suppressor Genen (TSGs) [4]. Reprimo (RPRM) ass eng Verfilmung putative wënnt [5,6] a mat gastric carcinogenesis verbonne [7]. Desweideren hu mir proposéiert, dass methylated RPRM Zell-gratis DNA e Potential uweist fir d'Net-invasiv erkennen GC kann [8,9]. VerfÜgung RPRM ass eng absolut glycosylated FAQ en der Kannerbetreiung an der Zytoplasma a gouf identifizéiert als afgerappt effector vun der G2 /M [10] Zell Zyklus verhaft p53-entschlof. Rapporten hindeit, datt RPRM Ausdrock vun zwee Mechanismen reglementéiert ass, eng duerch DNA methylation op seng Promoteur Regioun [8] an den Trainer vun p53 Passerelle [10]. Allerdéngs, méi rezent Etuden hunn net gebass gouf dëse Conclusiounen ze confirméieren [6]. Op der aner Hand, huet de Medeziner Bedeitung vun RPRM schlecht studéiert ginn [11]. Am Moment studéieren bewäert mir d'Roll vun DNA methylation zu der Regelung vun RPRM Ausdrock, hire Krankheete Bedeitung a sengem Veräin mat Membere vun der p53 entholl suppressor FAQ Famill (i.e. p53 an p73). Mir fonnt dichten methylation an der RPRM Promoteur Regioun, déi mat Verloscht vun Ausdrock am GC Zell Linnen verbonne war. An Medeziner Fäll, war Verloscht vun Ausdrock mat der invasiveness Etapp vun GC assoziéiert. Ausserdeem, mir e positive association tëscht Ausdrock vun RPRM an p73 observéiert, suggeréiert datt aner Membere vun der p53 Gentherapie Famill kéint fir d'Regulatioun vun RPRM Ausdrock Roman Kandidate ginn. VerfÜgung Zell zesummeféieren a Ray Echantillon VerfÜgung Véier GC Zell Linnen (AGS, SNU-1, KATOIII an NCI-N87) huet aus American Type Kultur Collection (ATCC) am Dezember 2012 cultured zu RPMI-1640 mëttelfristeg (Hyclone) an ergänzt kaaft mat 10% an et Bovine serum (FBS) a bei 37 ° C, 5% CO haten 2. Zwanzeg reagéiert entholl an Net-entholl bascht mucosa (NTAM) Echantillon sech fir eng Evaluatioun vun RPRM Ausdrock ausgewielt. Sechs sech fir eng Evaluatioun vun RPRM methylation ausgewielt. A Kohort vun 114 GC Patienten war fir clinicopathological kennenzeléieren vun RPRM Gentherapie FAQ Produit ausgewielt. Ray Echantillon vun eenzelne Fäll goufen fir Gastric Cancer Recommandatiounen an Aklang ze Japanesch Research Society séiert [12]. All Fäll goufen aus der F Chileno Japonés de Enfermedades Digestivas-Klinik Clínico San Borja Arriarán (ICHJED-HCSBA), Santiago de Chile tëscht 1993-2000 [13] an clinicopathological Fonctiounen agestallt ginn an Table 1. Dës Etude gewisen vun de Finanzpolitiker ofgeseent gouf Bilan Vizepresident vun Pontificia Universidad Católica de Chile (Comité de Ética Científico) an ICHJED-HCSBA (Comité de Ética Científico, Servicio de Salud Metropolitano Zentralbank, Santiago de Chile). Schrëftlech informéiert Averständnes war vun jidderee Équipe an der Emfro. VerfÜgung Ray microarray an Immunohistochemistry VerfÜgung Ray microarrays (TMA) huet andems e Manuell Ray Singular II Instrument (Beecher Instrumenter) wéi virdrun gemaach beschriwwen [14,15]. Kär Rubriken (4μm) sech un immunostaining vun Vectastain Elite Kit R.T.U (Vecteure Laboe) ënnerworf, laut Hiersteller d'Uweisungen. Antibodies an dëser Etude benotzt goufen RPRM (38-50, Fläch-Aldrich), p53 (Copie 318-6-11, Dako Dänemark) an p73 FAQ α (Copie 24, Novacastra). Resultater vun immunostaining am ganze entholl an NTAM souwéi TMA Rubriken sech positiv fir RPRM als wann > 30% vun epithelial Zellen cytoplasmic staining zougedréckt, > 10% nuklear staining fir p53 oder > 10% nuklear /cytoplasmic staining fir p73 . Evaluatioun vun immunohistochemical staining war vun zwee pathologists onofhängeg gesuergt (JV & GC). Déi zu Medeziner Donnéeën blinded sech VerfÜgung Bisulfite sequencing a grouss RT-Hinnen alleguer Expression Analys VerfÜgung DNA vum GC Zell Linnen war Hëllef TRIzol reagent (Life Technologies) laut Hiersteller d'Protokoll, gefollegt vun bisulfite Konversioun benotzt der EZ DNA methylation Gold Kit (Zymo Research) ofgebaut. RPRM Promoteur war vun bisulfite-behandelt DNA Implikatioune verstärkt, primers RPRM_B_FW benotzt 5'-TTGTAAAAGTAAGTAATAAAAAGTAAG-3 'an RPRM_B_RV 5'-CTACTATTAACCAAAAACAAAC-3 ", wouduerch d'Detektioun vun 52 CpG Siten an engem 509-BP Promoteur Regioun. Hinnen alleguer Produiten sech mat QIAXEN II gelies Extraktioun Kit (QIAGEN) sidd an Jonglenster an pGEM-T Vecteure. D'ligation Produit gouf benotzt fir zoustännegen E VerfÜgung renovéieren. belaascht VerfÜgung Top10 Zellen, no der Prozedur vum Mori et al beschriwwen. [16]. D'transformants sech op LB Agar Placke mat ampicillin (100 μg /ml), X-Gal (50 mg /l) an IPTG (100 mm) ergänzt ausgewielt. Déi doraus resultéierend wäiss Kolonie goufe vun Amphipolis-Hinnen alleguer évaluéieren. Positiv clones sech bis Enn exponential Phase op flësseg mëttelfristeg (LB /ampicillin) ugebaut (OD600 = 1) an DNA plasmids benotzt Pure nozeginn miniprep System Kit sidd (Promega). D'RPRM Promoteur Regioun war mat universell M13 Nepgen (W 5'-GTAAAACGACGGCCAG-3 "a RV 5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3") vun Macrogen (http://dna.macrogen.com). BiQ Organer Software war fir d'Analyse vun Nepgen clones benotzt. All positive pGEM-T clones sech bei -80 ° C op LB /ampicillin mëttel- a gespäichert ugebaut (zu 14% glycerol). Total RNS war mat TRIzol reagent (Invitrogen) ofgebaut a cDNA war mat laut iScript cDNA Synthes Kit Wierderbuch ze Fabrikant d'Instruktioune (Biorad). Duerno, war cDNA fir all Hinnen alleguer Reaktioun mat all primer Brëll gebraucht. D'RPRM spezifesch primers sinn: RPRM_FW 5'-GAGCGTAGCCTGTACATAATGC-3 'an RPRM_RV 5'-CCTTCACGAGGAAGTTGATCAT-3 ". Real Zäit RT-Hinnen alleguer Analyse gouf vun engem LightCycler 1,5 Real-Time Detektioun System (Roche) benotzt LightCycler Fast Start DNA MasterPlus SYBR Green ech (Roche) gesuergt. Relativ grouss Analyse normalized zu RPL-30 war via de Komparativ Zyklus loung Method gehaal [17]. D'RPL-30 spezifesch primers sinn:. RPL-30_Fw 5'-ACAGCATGCGGAAAATACTAC-3 'an RPL30_RV 5'-AAAGGAAAATTTTGCAGGTTT-3 "VerfÜgung Validatioun vun RPRM antibody vun Immunoblot an Immunofluorescence VerfÜgung 3x10 Zell Kultur an transfection VerfÜgung Fir stabil transfection Experimenter, AGS Zellen am 3x10 plated waren Kolonie Opstellung assay VerfÜgung Fir Kolonie Opstellung assay, goufen 200 Zellen stably mat pCMV6-RPRM oder pCMV6 eidel Vecteure transfected. Zellen sech cultured zu RPMI-1640 mëttelfristeg (Hyclone) a mat 10% FBS ergänzt. Kultur Medien war all 24 h geännert. Kolonie goufe Kierchefënster mat 0,4% glaskloer mauve (Fläch) zu 50% methanol, 21 Deeg no initial Morden, an gezielt um 20 Biller ënnert Inverted microscope geholl (Evos XL Haaptentwéckler Zell Imaging System, Life Technologies). All transfection war zu triplicate duerchgefouert. Ausserdeem goufen behaapten Experimenter duerchgefouert weider clones fir Ausdrock Analyse ze kréien. VerfÜgung Anchorage-onofhängeg Wuesstem assay VerfÜgung Anchorage-onofhängeg Zell Wuesstem vun di 1% agarose analyséiert war mat 2x10 statistique Analys VerfÜgung Spearman Korrelatioun souguer gemaach huet sech d'Korrelatioun tëscht RPRM methylation an der Gentherapie Ausdrock Niveauen berechent ze analyséieren. Diskussioun Verännerlechen vun Pearson Chi-Square Test (two-eesäitegen) analyséiert goufen, huet den p-Wäert korrigéiert engem Logistikzenter Réckgang Analyse benotzt. Lafend Verännerlechen benotzt Student d' t VerfÜgung Test an Daten analyséiert gouf wéi heeschen ± Fils ausgedréckt. Kappa Test war fréier d'Korrelatioun tëscht der RPRM Ausdrock an p73 Ausdrock ze analyséieren. Statistique analyséiert goufen benotzt SPSS Versioun 17.0 (SPSS Galaxy Chicago, IL) statistesch Pak an GraphPad Prism5 Software (La Jolla, CA, USA) gesuergt. All vun de Wäerter waren zwee-tailed, ausser Platz Korrelatioun Spearman. Statistique Bedeitung huet den p &Si besteet definéiert; 0,05. VerfÜgung RPRM methylation an Ausdrock vun gastric Kriibs Zell Linnen VerfÜgung Virdrun, hunn mir an anerer gemellt dass RPRM Ausdrock vun der demethylating Agent 5-AZA restauréiert ginn -2-deoxycytidine (Méi Informatiounen S3 an S4 Dozou Ennerstëtzung) [5,8,18]. Ee RPRM methylation ass mat sengem Ausdrock [18] schwaach soll. Fir weider d'Associatioun tëscht RPRM Promoteur methylation an der Gentherapie Ausdrock bewäerten, déi komplett Promoteur Regioun vun RPRM Gentherapie war vun DNA bisulfite sequencing zu véier GC Zell Linnen (AGS, SNU-1, Kato III an NCI-N87) analyséieren (Lalumi 1A). Soumat huet de methylation Status vun 52 CpG Siten, läit tëscht -207 a +302 nucleotides relativ zu der Transkriptiouns Start Site (TSS), analyséiert. Dës Analyse weist dichten methylation zu Zell Linnen AGS an SNU-1 (89.6% an 86%, respektiv), am Verglach zu Kato III an NCI-N87 (79.7% an 51,8%, respektiv) (p = 0.0002) (Lalumi 1B) . Next, war Niveau vun RPRM Ausdrock vun grouss RT-Hinnen alleguer alles. (Lalumi 1c); niddereg RPRM Gentherapie Ausdrock war zu AGS an SNU-1 Verglach zu Kato III an NCI-N87 Zell Linnen (0.0001 p &Si besteet) observéiert. Vun Spearman d'Korrelatioun Analyse bedeitendst negativ Korrelatioun opgedeckt gouf tëscht methylation Dicht an RPRM Gentherapie Ausdrock (r = -1; p = 0.042) fonnt (Lalumi 1D). Geholl zesummen, dëse Conclusiounen hindeit datt methylation vun RPRM Promoteur Regioun enger kritescher Roll an d'Regulatioun vun RPRM Ausdrock spillt. VerfÜgung RPRM methylation an Ausdrock vun gastric Kriibs Stoffer VerfÜgung Fir virdrun Donnéeën am GC Stoffer beléieren , RPRM methylation Niveau sech zu 6 vläit entholl an NTAM Echantillon alles. Resultater weg méi methylation Niveauen am entholl Stoffer Verglach zu NTAM Stoffer (Zréck Lalumi 1E). Fir den Ausdrock vun RPRM Gentherapie FAQ Produit am GC Stoffer IHC Analyse ermëttelen war gesuergt. Positiv RPRM Ausdrock war haaptsächlech am Zytoplasma vun gastric epithelial Zellen observéiert. RPRM Gentherapie FAQ Ausdrock war zu 75% (15/20) vun NTAM Stoffer Echantillon fonnt. Awer nëmmen 25% (5/20) vun entholl Echantillon zougedréckt a dem Ausdrock vun RPRM Gentherapie FAQ Produit (Lalumi 2). Dës Ënnerscheeder waren duerchaus relevant (p = 0.001) a virschloen, datt Ausdrock vun RPRM ass am GC Stoffer verluer. Ze diskutéieren war de Medeziner Bedeitung vun dësem Verloscht vun RPRM Ausdrock engem Kohort vun 114 GC Fäll bewäert. Verloscht vun RPRM Ausdrock war zu 62% (71/114) vun GC Fäll fonnt. Clinicopathological kennenzeléieren vun RPRM Ausdrock sinn vun Table 1. zerstéiert aus Etapp dës ech GC zu Etappen II-IV (p = 0.006) an lymph Node Metastasen (p = 0.037) sech mat Verloscht vun Ausdrock vun RPRM Gentherapie FAQ Produit vill verbonnen. Allerdéngs weist Logistikzenter Réckgang Analyse datt nëmmen Werdegang vun Bühn ech bis II-IV vill mat Verloscht vun RPRM Gentherapie FAQ Produit (p = 0.020) verbonnen ass. VerfÜgung Fonctionnement assay vun RPRM zu gastric Kriibs (Kolonie Équipe an Hafen -independent Wuesstem) VerfÜgung wéi de Verloscht vun RPRM Ausdrock war am GC assoziéiert an haaptsächlech mat de Werdegang vun Bühn ech bis II-IV, entholl suppressor Roll vun RPRM kéint plausibel ginn. Dofir, funktionell assays wéi kënschtlech VerfÜgung Kolonie Équipe an Hafen-onofhängeg Wuesstem assays sech zu AGS Zell mat pCMV6 /RPRM (Lalumi 3A) transfected gesuergt. Non-ausdrécken AGS Zell Linnen transfected mat RPRM Ausdrock plasmids weisen eng bedeitend reduzéiert Unzuel vu Kolonien am Verglach eidel Vecteure-transfected Zell Linnen mat pCMV6-eidel Vecteure transfected zu pCMV6- (p &Si besteet; 0,05) (Lalumi 3B). Den Effet vun RPRM overexpression op Hafen-onofhängeg Wuesstem an engem mëllen Agar Kolonie Opstellung assay war och am Stall transfected AGS Zell Linn clones évaluéieren. Kolonie goufe fir 4 Wochen no initial Morden a incubation zu mëll Agar gezielt. Zellen mat eidelen Vecteure transfected zougedréckt sécherlech Kolonie Wuesstem, vun Zuel a Gréisst vun Kolonien. Dëst war verréngert wann RPRM war zu AGS Zellen (Lalumi 3C) s-ausgedréckt. VerfÜgung Association vun RPRM Ausdrock an p53 /p73 entholl suppressor FAQ Famill an gastric Kriibs VerfÜgung RPRM ass definéiert als engem p53-mediated Gentherapie zu embryonal fibroblast Zellen [18]. Mä, huet et schonn erwähnt, datt Regulatioun vun RPRM Ausdrock onofhängeg ginn kéint aus p53 Gentherapie Status vun neuronal Zellen mat Koffer behandelt [19]. Wéinst dem p73 kann der Reunioun vun p53-responsiven Genen [20] aktivéieren. Opgrond vun deem Kader, évaluéiert mir den Ausdrock vun p53 an anere Member vun der p53 FAQ Famill, p73 wënnt. Ausdrock vun p53 war an der Käre vun gastric mucosa Zellen wellkomm. Positiv p53 Ausdrock war zu 23,5% (20/114) vun GC Fäll festgestallt. Nëmmen entholl Gréisst mat dem Ausdrock vun p53 (p = 0,035, gesinn Table 2) assoziéiert gouf. Ausdrock vun p73 war an der Zell Kären an Zytoplasma vun epithelial Zellen wellkomm. Positiv p73 Ausdrock war zu 30,6% (34/114) vun GC Echantillon fonnt. Spannen, bedeitendst clinicopathological kennenzeléieren vun p73 Ausdrock sech mat invasiv Etapp (Etapp ech 55,6%; 10/18 zu Etappen II-IV 25,8%; 24/93, p = 0,012) assoziéiert an lymph Node Metastasen (p = 0.038) (Table 2 ). Zanter Perte vun Ausdrock vun RPRM an p73 Gentherapie FAQ Produiten ähnlechen clinicopathological kennenzeléieren hunn, évaluéiert mir association tëscht Ausstralung vun engem Niveau vun béiden Proteinen. Fir dat Enn Fäll goufen an véier Gruppen getrennt no dem Wëllen vun RPRM an p73 FAQ Produiten. D'Analyse gewisen, datt 22 aus 111 GC Fäll positiv fir béid RPRM an p73 Proteinen waren, wobäi 57 aus 111 negativ waren. Dësen Veräin huet statistesch relevant (p &Si besteet; 0.0001). Mat engem Kappa Wäert vun 0.363 (Table 3) VerfÜgung RPRM ass eng absolut glycosylated cytoplasmic FAQ, ufanks als afgerappt effector vun p53 identifizéiert -induced Zell Zyklus verhaft um G2 /M. Virdrun, gouf et proposéiert, datt RPRM vum Promoteur methylation entsat ass, obwuel se mat hiren Ausdrock schwaach soll gouf [5,8]. Zousätzlech, RPRM gouf als putative entholl suppressor Gentherapie an keen Auto Zell carcinoma an pituitary erhéijen [5,6] proposéiert. An dëser Etude, hien huet mir dat RPRM Gentherapie Ausdrock staark mat sengem Promoteur Regioun methylation Status verbonnen ass, epigenetic silencing vun RPRM Gentherapie Ausdrock suggeréiert. Zousätzlech, weisen mir dat RPRM Gentherapie FAQ Produit am GC Otemschwieregkeeten Verglach mat noncancerous gastric mucosa ofgeholl huet. Des Resultater sinn gläicht dofir deem vun Luo et al VerfÜgung. [11], deen Verloscht vun RPRM am GC gemellt wann gastric oppent Otemschwieregkeeten Echantillon Verglach. Ausserdeem, eis Opklärung iwwert Verloscht vun Ausdrock vun RPRM am Iwwergank vum Etapp ech bis Etappen II-IV ass klinesch relevant. Luo et al VerfÜgung. [11] gemellt engem ähnleche fannen, mee an enger klenger Zuel vu Etapp ech GC Fäll (n = 15). Dës bruet hun kann Medeziner Bedeitung als predictive Faktor fir de Werdegang vun GC. Et geet mat dëser Verloscht vun RPRM Ausdrock vun de Werdegang vun GC, eis funktionell assays (Kolonie Équipe an Hafen-onofhängeg Wuesstem) proposéiert och e putative entholl suppressor Roll fir RPRM am GC. VerfÜgung Obwuel p53 Ufank als beschriwwen huet RPRM inductor [10], Medeziner Studien standing zu Datum an net kënnen esu Opklärung ze confirméieren [6,18]. Hei, identifizéiert mir dass Verloscht vun RPRM Ausdrock deemolegt Weltbild mat Verloscht vun Ausdrock vun engem anere Member vun p53 Famill, p73. Obwuel p73 wënnt op engem Héich Niveau am normale Mënsch Stoffer ausgedréckt ass [21], ass op ville verschiddene Mënsch Cancers wéi Broscht, neuroblastoma, haett, esophagus, Mo, Colon, BBC a ovary [14,22] overexpressed. Ausserdeem, ass et gouf confirméiert, datt p73 der Reunioun vun p53-responsiven Genen aktivéieren kann, dorënner p21Waf1 /Cip1, Bax, mdm2, cyclin-G, GADD45 an IGFBP3 [20]. Sou, baséiert op eise Conclusiounen, mir proposéieren, datt RPRM Ausdrock vun p73 zu engem p53-onofhängeg Manéier regulariséiert ginn hätt. VerfÜgung Am Resumé, eisen Daten drop hindeit datt epigenetic silencing vun RPRM Gentherapie vum Promoteur methylation mat Verloscht vun assoziéiert ass RPRM Ausdrock an anere Wierder, funktionell assays proposéiert e putative entholl suppressor Roll vun RPRM am GC. An Medeziner Echantillonen, RPRM ass um invasiv Etappe vun GC a sengem Ausdrock deemolegt Weltbild suggeréiert mat deem vun p73 verluer datt aner Membere vun der p53 Gentherapie Famill an d'Regulatioun vun RPRM Ausdrock matschaffe kann. Weider Fuerschung ass hëllt d'Roll vun RPRM an de Werdegang vun GC a validéiert de biologeschen Regulatioun vun RPRM vun p73 zu Markenzeeche. VerfÜgung Mir wëllen gären Sabina Magedson fir hire Bäitrag zu Gebai Merci Ray Microarrays. Mir wëllen gären och Hiroshi Kawachi fir histological review vun Fäll, Ignacio Wichmann fir hir wäertvoll Commentairen op eiser war an Oslando Aylesbury fir seng wichteg Ënnerstëtzung vun der statistescher Analys Merci. VerfÜgung
Method VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
Ennerstëtzung Informatiounen VerfÜgung S1 Data. . Data Basisdaten der Etude VerfÜgung Doi: 10,1371 /journal.pone.0125834.s001 VerfÜgung (ernannte) VerfÜgung S1 Figebam. Effekter vun Tunicamicyn op RPRM FAQ. VerfÜgung RPRM ass eng absolut glycosylated zu 25 Beien zB stéiert vun Western blot visualized cytoplasmic FAQ, déi glycosylation inhibitor tunicamycin (TkLanguage) displaces der 25. Beien zB stéiert RPRM Band zu 15 Beien zB stéiert zu AGS Zellen mat RPRM overexpression (pCMV6 /RPRM) (RPRM virausgesot Gréisst 12 Beien zB stéiert). Zellen sech fir 24 h am RPMI1640 mat 10% FBS an der Presenz oder Feele vun der inhibitor vun N-glycosylation tunicamicyn (10 Dummeldéng /ml) incubated. RPRM Ausdrock war vun Western blotting mat engem RPRM polyclonal antibody (: 1000, Fläch-Aldrich ieweschte Rot, dilution 1) alles. Den Ausdrock vun β-actin (ënneschten erschéngt, dilution 1: 2000, Santa Cruz) duerstellt FAQ Luede VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0125834.s002 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung S2 Figebam. Lokalisatioun vun RPRM Ausdrock vun overexpressing AGS Zell Linn Immunofluorescence vun RPRM zu gastric Kriibs AGS Zell Linn transfected mat pCMV6 Vecteure Zeechesaatz RPRM. VerfÜgung 24 h Post-transfection Zellen sech am paraformaldehyde 4% fest an incubated mat anti-RPRM-Kanéngchen (1 : 1000, 38-50, Fläch-Aldrich) a Secondaire antibody Alexa Fluor-488 (1: 200, cuisine Ämter, Invitrogene). E positiven Ausdrock vun RPRM (GREEN) ass haaptsächlech an der Zytoplasma gesinn. Biller waren am Asaz Axio Vision4 multichannel Software an fluorescence microscope Axio Scope.A1- König ageholl VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0125834.s003 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung S3 Figebam. RPRM Ausdrock ass vum Promoteur methylation entsat. VerfÜgung A) RT-Hinnen alleguer Analyse vun RPRM mRNA Ausdrock vun AGS gastric Kriibs Zell Linn mat an ouni d'DNA methylation inhibitor 5-Azacytidine (1 UM fir 72 Stonnen). GAPDH war wéi enger Kontroll benotzt. B) Amplification vun RPRM vun Methylation Spezifësch Hinnen alleguer zu AGS gastric Kriibs Zell Linn. Amplification vun methylated MYOD1 war als Kontroll benotzt. AGS Zell Linn war an de Promoteur Regioun methylated. NC: negativ Kontroll VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0125834.s004 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung S4 Figebam. RPRM Ausdrock ass vum Promoteur methylation (Original gelies) entsat. VerfÜgung A) RT-Hinnen alleguer Analyse vun RPRM mRNA Ausdrock vun AGS gastric Kriibs Zell Linn mat an ouni d'DNA methylation inhibitor 5-Azacytidine (1 UM fir 72 Stonnen). GAPDH war wéi enger Kontroll benotzt. B) Amplification vun RPRM vun Methylation Spezifësch Hinnen alleguer zu AGS gastric Kriibs Zell Linn. Amplification vun methylated MYOD1 war als Kontroll benotzt. AGS Zell Linn war an de Promoteur Regioun methylated. NC:. Negativen Kontroll VerfÜgung Doi: 10,1371 /journal.pone.0125834.s005 VerfÜgung (Name) VerfÜgung
Arbeschterlidder VerfÜgung
Leaky Darm a mikrobiell Dysbiose kéinte bäidroe fir den Zytokin Stuerm a schwéier kranke COVID-19 Fäll
Verdauungsmanifestatiounen heefeg awer mëll ënner hospitaliséierten COVID-19 Patienten
Geess Mëllech-baséiert Formel gutt fir Puppelcher Darmgesondheet
Antike Primatmikrobiome kënne méi Informatioun iwwer d'mënschlech Entwécklung ginn
Wëssenschaftler léisen mysteriéise Fall vum Auto Brauerei Syndrom
Firwat sollt Dir natierlech Quelle vu Faser an Ärer Diät enthalen
Iessen Äntwerte gi regéiert vum Darmmikrobiom,
fënnt nei Studie Eng Studie déi dës Woch verëffentlecht gouf weist datt dInteraktioune vu Bakterien an eisem Darm (dem Darmmikrobiom) mat dem Iessen dat mir iessen däitlech tëscht Individuen ënnersche
Ëmgank mam Reizbaren Darm Syndrom
Irritabel Darm Syndrom (IBS) gëtt ugeholl datt se iwwerall vu 25 op 45 Milliounen Amerikaner beaflossen, meeschtens Fraen aus hire spéiden Teenager bis an de fréien 40er. DKonditioun ass eng Mëschung
Maach weider,
Eat the Camera - Kapsel Endoskopie Wann och ëmmer e grousse Great White Shark gefaang gëtt an hie gëtt geduecht hannert enger Attack ze sinn, gëtt de Fësch de Mo opgeschnidden. All Zort vu Saachen kë