Plos ONE: uravnavanjem avtofagija-Povezane Gene-5 (ATG-5) je povezana z Chemoresistance v humani Rak želodca

Povzetek

povezanih z avtofagija gen-5 (ATG-5) je eden od ključnih regulatorji autophagic celične smrti. Je bilo splošno velja kot zaščitna molekularni mehanizem tumorskih celic med potekom kemoterapijo. V tej študiji smo raziskovali izraz vzorec ATG-5 in povezan z rezistenco na protein-1 (MRP-1) v 135. želodčnega raka (PK) bolnikov, ki so bili zdravljeni z epirubicin, cisplatinom in 5-FU adjuvantno kemoterapijo (sklada kapitala ) po kirurško resekcijo in raziskati njihovo potencialno klinično pomembne. Ugotovili smo, da sta bila oba ATG-5 (77,78%) in MRP-1 (79,26%) močno izražen pri bolnikih GC. ATG-5 izraz je značilno povezana z globino stene invazije, TNM fazah in daljni metastaz GC (P < 0,05), medtem ko je bila MRP-1 izraz bistveno povezana z velikostjo tumorja, globino stene invazije, bezgavkah metastaze, TNM stopnjah in stanje diferenciacija (P < 0,05). ATG-5 izraz je v pozitivni korelaciji z MRP-1 (rp = 0.616, P < 0,01). Povečana ekspresija ATG-5 in MPR-1 je značilno povezana s splošno slabo preživetja (OS P < 0,01) in bolezni proste preživetje (DFS P < 0,01) našega GC kohorte. Poleg tega smo dokazali, da je bila ATG-5 vpleten v droge odporno GC celic, kar je predvsem skozi regulacijo avtofagija. Naši podatki kažejo, da molekul izraz ATG-5, ki je pomemben molekulsko značilnost zaščitne avtofagija je povezan z chemoresistance v GC. Izražanje ATG-5 in MRP-1 so lahko samostojni prognozi za zdravljenje GC

Navedba. Ge J, Chen Z, Huang J, Chen J, Yuan W, Deng Z, et al. (2014) uravnavanjem avtofagija-Povezani Gene-5 (ATG-5), ki je povezan z Chemoresistance v človeške želodčne raku. PLoS ONE 9 (10): e110293. doi: 10,1371 /journal.pone.0110293

Urednik: Pankaj K. Singh, University of Nebraska Medical Center, Združenih držav Amerike

Prejeto: 5. avgust 2014; Sprejeto: 18. september 2014; Objavljeno: 17. oktober 2014

Copyright: © 2014 Ge et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Data Zaloga:. avtorji potrjujejo, da so v celoti na voljo brez omejitev vse podatke, na katerih temeljijo ugotovitve. Vsi pomembni podatki so v dokumentu

Financiranje:. To delo je podprl National Natural Science Foundation provinci Hunan, Kitajska (št 2012FJ6088). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

Kljub znatnemu upadu v svoji stopnjo pojavnosti v mnogih razvitih državah, želodčni rak (GC) je še vedno četrta najpogosteje diagnosticiran malignost, in drugi najpogostejši vzrok smrti zaradi raka na svetu [1]. V zadnjih desetletjih, standardnih strategij multimodalnih zdravljenja, skupaj z drugimi priporočenih možnosti (npr D2 seciranju in adjuvans kemoterapija) ni uspelo ozdraviti velik delež bolnikov prizadetih z GC, še posebej za tiste, ki z naprednimi in metastatski bolezni, s slabšimi stopnje preživetja so opazili verjetno zaradi prisotnosti chemoresistance med zdravljenjem [2]. Zato so nujno potrebni identifikacija novih molekularnih dogodkov, na katerih temelji razvoj te maligne bolezni in njeno slabo prognozo, kot tudi razumevanje mehanizmov GC chemoresistance za bolj učinkovito klinično intervencijo in boljše vodenje bolnikov.

V skladu s fiziološkimi pogoji, avtofagija je lizosomska-odvisno samostojno digestijo sistem v prvi vrsti odgovorne za odstranjevanje in recikliranje dolgoživih proteinov in poškodovane /zastarelih intracellularorganelles, da se ohrani celic homeostaze [3]. Proteini in organele, namenjena za uničenje se vežejo v "double-membrane" votlinic (autophagosomes), sledijo pa fuzija z lizosomih za izgradnjo kompleksa znan kot autophagosomes, kjer se vsebina razgradi z lizosomskih hidrolaze [4]. Dokazano je, da bi se avtofagija povzročil odziv na mnogih neugodnih pogojih, vključno z odvzemom hranil, oksidativnim stresom ali DNA poškodbami in služi kot mehanizem prilagodljivo celic, sčasoma omogoča celice za preživetje in razmnožujejo, medtem ko je obsežna ali obstojne rezultate avtofagija v celične smrti [ ,,,0],5]. Oslabitev fiziološke aktivacije, montažo in funkcijo autophagic poti so vse bolj opaziti v različnih človeških raka, čeprav je točna vloga avtofagija igral v nastanku raka in napredovanje še vedno v polemiko. Nekateri podatki podpirajo idejo, da avtofagija zavira tumorigeneze, medtem ko so drugi dokazi kažejo, da je avtofagija lahko sproži pričetka tumorja in ščiti celice tumorja iz doživlja apoptozo [6]. Zanimivo je, da je inhibicija avtofagija nedavno odkrili povečati aktivnost protitumorsko več citotoksičnih agentov. Li in sodelavci so poročali, da je bil avtofagija aktivira zaščitni mehanizem proti celične učinke 5-FU zdravljenje in inhibicijo avtofagija s 3-metiladenin povečan 5-FU inducirano apoptozo v rakavih celic kolona [7], [8]. Po drugi strani pa so pokazali nekatera zdravila proti raku (npr cetuksimab in dasatinib) za sprožanje autophagic celično smrt prek različnih mehanizmov v nekaterih rakavih celic [9] - [13]. Molekularni stroji, s katerimi avtofagija ureja preživetje ali smrt tumornih celic v veliki meri ostaja nejasna doslej. Avtofagija pot je zelo modulacijo dinamičen proces pretežno izvaja tudi v zvezi z avtofagija (ATG) družine genov, ki ga ureja več ključnih kinaze vključno mTOR, PI3K /Akt, AMPK in MAPK [14], [15]. ATG-5 je osrednji regulator potreben za avtofagija v zvezi z njegovim sodelovanjem v autophagosome raztezek [16]. Prisilna izraz ATG-5 senzibiliziranih tumorskih celic za zdravljenje raka zdraviti oba in vitro
in in vivo
; v kontrastni siRNA-dosežene inhibicije z ATG-5 je privedlo do delne odpornost na kemoterapijo [17]

Pooperativna adjuvantno kemoterapijo je trenutno glavna obravnava za GC.; Vendar pa na splošno učinkovitost kemoterapije ostaja slaba verjetno zaradi prisotnosti odpornostjo na več zdravil (MDR) fenotip. Za razliko od drugih subjektov tumorjev, izraz klasičnih MDR-posredniških molekul, kot glutation S-transferaze in multiplo odpornostjo gena 1 ni zelo razširjena v GC tkivih, kar kaže, da lahko obstaja zapleten mehanizem za razvoj MDR tem maligne bolezni [ ,,,0],18]. Kot eden izmed klasičnih mehanizmov zdravila odpornih, je bilo ugotovljeno, multidrug odpornost povezan protein 1 (MRP1 /ABCC1), ki se močno izražen v GC in tako lahko izvaja osrednje vloge pri posredovanju MDR v GC [19], [20]. Vendar pa je še vedno ni znano, ali je MRP-1 izraz, povezan z ATG-5 izražanja. In tudi, ali je avtofagija vključen v chemoresistence pri bolnikih GC ni jasno.

V tej raziskavi smo najprej zaposlen imunohistokemično raziskati profila ekspresije ATG-5 in MRP1 v znesku 135 bolnikov, GC, ki so prejemali sklada kapitala (epirubicin, cisplatina in 5-FU) adjuvantno kemoterapijo po kirurški odstranitvi. so bili ocenjeni tudi korelacije med ATG-5 in MRP-1 izraz, kot tudi njihovo izražanje z različnimi clinicopathological značilnosti GC in klinične izide.

Materiali in metode

Bolniki in vzorce tkiva

skupno 135 bolnikov GC sestavljeni iz 91 moških in 44 žensk, ki so bili operirani na Oddelku za operacijo na prebavilih, Bolnišnica XiangYa, Central South University (CSU), Kitajska, od 1. januarja 2007 do 31. decembra 2008 je bilo vpisanih v ta študija. Povprečna starost kohorte je bila 53,62 ± 9.73 let, z razponom od 26 do 72. Theprimary GC tumorja tissuesand ujema niso rakave (NC) tkiva, ki se nahajajo vsaj 5 cm stran od jedra tumorja so bili pridobljeni po kirurški odstranitvi in ​​takoj predelana in shranijo do nadaljnje uporabe. Nobena od vključenih bolnikov je imela kemoterapijo ali radioterapijo pred operacijo. Histopatološke diagnoza je bila izvedena predoperativno in potrjena z operacijo. Vsi udeleženci z odpovedjo IB IV tumorjev prejeli ECF kemoterapijo po operaciji (Doza: epirubicin 50 mg /m ^{2 na dan 1, cisplatin 60 mg /m 2 na 1. dan in nato stalno intravensko infuzijo 5-FU 500 mg /m 2 /d za 4 dni, ponovi vsake 3 tedne do 24 tednov). Klinični značilnosti teh bolnikov so navedeni v tabeli 1.}

Vsi primeri v tej študiji so bili pregledani in vsi so bili osebki histopathologically ponovno pregledajo oktobra 2012. globino stene invazije, regionalnih bezgavk metastaze, in histološki razred je potrdil isto skupino dveh izkušenih starejših patologi. Bolniki so bili razvrščeni glede na stanje diferenciacije rakavih celic v tri histoloških stopnje: dobro, zmerno in revnimi. Ki temelji na kombinaciji lokalnoregionalno vpletenosti tumorja in prisotnost metastaz, so bili vsi primeri postopne po TNM klasifikaciji malignega Tumorji (TNM) skupina fazi [21]. Za analizo preživetja, je datum operacije uporablja, da predstavlja začetno točko ponovnega obiska. Bolniki, ki so umrli zaradi drugih bolezni in ne GC ali drugih nepričakovanih dogodkov, so bili izključeni iz zbirke primera. Vzrok smrti se zaposli v tej študiji je bilo poslabšanje GC. Celotno preživetje (OS) je bila izračunana kot obdobje od datuma začetne operacijo do dneva smrti, ali datum zadnjega spremljanja kot končne točke. Bolezen brez preživetje (DFS) je bil opredeljen kot časovni interval od kirurgije do datuma lokalne ponovitve ali prvi daljni metastaz organov. Obveščeni pisno soglasje je bilo pridobljeno iz vsakega bolnika pred operacijo in ta študija je odobril Odbor za etiko raziskovalnega Central South University, Kitajska. Vsi osebki so ravna in je anonimen po etičnih in pravnih okvirov.

Imunohistokemija

Sveže osebki so bile določene v 10% nevtralnem zastalega formalinu in nato vgrajeni s parafinom. Tkiva-parafin vgrajeni smo razrezali na 4 um in nato deparaffinized s ksilenom in hidracijo nadaljnje H & E ali peroksidaze imunohistokemija obarvanje s pomočjo Dako predvidevamo sistema. Na kratko, po proteoliti prebavo in blokiranje z endogenim peroksidazo, so tkiva drsi inkubirali s primarnimi protitelesi (ATG5: ab54033; MRP1: ab32574, Abcam Inc., Cambridge, Velika Britanija), pred njihovimi ciljnimi proteinov pri razredčitvi 1:500 čez noč pri 4 ° C. Po spiranju s PBS smo peroksidazo označeni polimer in substrat-kromogena nato zaposleni Za prikaz immnohistochemical obarvanja. Na koncu so sekcije jih nasprotno s hematoksilinom, pokrov-zdrsnil z zaščitnim sredstvom, in s svetlobnim mikroskopom pregledajo. Vsi postopki so bili izvedeni na oddelku za patologijo, Bolnišnica XiangYa, C.S.U. Ploščice smo razlagati samostojno dve izkušeni patologi, ki so bili slepi za podatke pacientov. količinsko smo obarvanje intenzivnost in odstotek obarvanih celic z uporabo prej opisanega pristopa [22], [23]: odstotek pozitivno obarvanih celic (0% -100%), smo pomnožili s prevladujočim intenzitete vzorcu obarvanja, če upoštevamo 1 kot negativna ali sledovih, 2 kot šibko, 3 kot zmerno in 4 tako močan. Zato je splošni uspeh v razponu od 0 do 400 bolnikov je bilo nato razvrščeni v štiri različne podskupine: rezultat 0-99, rezultat 100-199, rezultat 200-299 in rezultat 300-400

Western blot analiza <. br>

ekstrakti Cela celic smo pripravili s pomočjo 0,14 M NaCl, 0.2 M trietanolamin, 0,2% natrijev deoksiholat, 0,5% Nonidet P-40 in dopolnjen z zaviralcem proteaze (vsi izdelki so iz Sigma, St. Louis, Missouri , ZDA). Nato smo proteinski vzorec teče skozi 12% natrijev dodecil sulfat, poliakrilamid gelska elektroforeza (SDS-PAGE) gel in prenesli na membrano. Prenesena Membrane smo nato inkubirali preko noči pri 4 ° C, s primarnim protitelesom. Po pranju smo membrano inkubirali s hrenovo peroksidazo (HRP) -vezan sekundarnega protitelesa za 1 uro pri sobni temperaturi. Primarna protitelesa so anti-ATG-5 (Santa Cruz, Kalifornija, ZDA), anti-LC3A /B (abcam, Cambridge, Velika Britanija) in anti-β-aktina (Santa Cruz, CA, ZDA). Vse poročali rezultati so povprečje razmerja treh neodvisnih eksperimentov.

Cell proliferacijo vsebnosti

Celice smo zasejali v 96 vdolbinami (10.000 celic /vdolbinico) za 24 ur pred obdelavo. MTT teste smo uporabili za oceno proliferacijo celic na želeni časovni točki po zdravljenju. MTT test smo izvedli, kot sledi: MTT dodamo v vsako vdolbinico in plošče inkubiramo pri 37 ° C 4 ure. Medij Zmes MTT smo nato odstranili in 150 u.l dimetilsulfoksida (DMSO) dodamo v vsako vdolbino. Absorbanco smo izmerili pri 570 nm z uporabo večslojni spektrofotometer

RNA interference

siRNA dvoetažna ciljanje ATG-5 smo pripravili takole: siRNA-ATG5-486. GACGUUG GUAACUGACAAATT; siRNA-ATG5-695: GUCCAUCUAAGGAUGCAAUTT in siRNA-ATG5-938: GACCUUUCAUUCAGAAGCUTT. siRNA Dvojniki, ki vsebujejo nespecifične sekvence smo uporabili kot negativno kontrolo (NC): UUCUCCGAACGUGUCACGUTT. Različni siRNAs smo transfektirali ločeno v celice uporabljajo Lipofectamine 2000 reagent in medij bil nadomeščen 6 ur po transfekciji.
Bili

realnem času RT-PCR

Celotna RNA iz celične linije in tkiva pridobljeni z uporabo TRIzola reagenta (Invitrogen, Carlsbad, ZDA), po navodilih proizvajalca. Koncentracijo RNA smo merili z uporabo spektrofotometra. CDNA bazen smo sintetizirali s pomočjo 1 ug celotne RNA in TaqMan reverzno transkripcijo reagentov (Applied Biosystems, Foster City, ZDA), ki jih je proizvajalec opisal. Izraz ciljnega gena je bil ovrednoten z relativno pristop količinsko (2 ^{-ΔΔCt metoda) z ß-aktina kot notranji referenco.}

imunofluoroscenca

Celice so permeabiliziramo z 0,3 % Triton X-100 za 10 minut, čemur sledi pritrditev z 2-4% metanala 15 minut, in blokirane s 3% seruma ovčjega pri sobni temperaturi 60 minut. Nato zaznati s primarnimi protitelesi anti-LC3B (Santa Cruz, CA, ZDA) preko noči pri sobni temperaturi, in celice izperemo trikrat s PBS. Obarvali z Alexa Fluor 488 konjugirano 488 kunčjega anti-kozjega IgG 1 uro pri sobni temperaturi, potem smo celice izprali trikrat s PBS. Jedra so vizualizirali z barvanjem z DAPI (Sigma, ZDA), za 2 min. Obarvane celice so opazili obrnjen fluorescenčnim mikroskopom.

Statistična analiza

Vse statistične analize smo opravili s programskim paketom SPSS 15.0 for Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, ZDA). Kvantitativni podatki so bili predstavljeni kot povprečje ± SD. Pearsonov χ ^{2 testu smo uporabili za primerjavo razlike med uvrščenih podatkov, one-Way-ANOVA testu, medtem ko je bila izvedena primerjava razlike med kvantitativnimi podatki. Analize za preživetje so bile izvedene po metodi Kaplan-Meier, in v primerjavi s testom log-ranga. Model Cox-regresija je bila opravljena za oceno neodvisno razmerje ogroženosti za vsako spremenljivko v multivariatne analize. Korelacija med ATG5 in MRP1 izražanja je preučila uporabo Dvomjerni korelacija test (Pearson). Razlike so bile upoštevane kot statistično značilna, če je bilo P
vrednosti manj kot 0,05.}

Rezultati

Izražanje ATG-5 in MRP-1 v GC

izraz vzorec in lokacija ATG-5 in MRP-1 v naših GC bolnikih, ki so se zdravili z epirubicinom, cisplatinom in 5-FU adjuvantno kemoterapijo (ECF) po kirurški odstranitvi, so bile pregledane s pomočjo imunohistokemičnim analize. Med GC osebkov 135 je bilo 105 (77,78%) pozitiven ATG-5 radioinkorporacijo in 107 (79,26%) je bilo MRP-1 pozitivna. Kot je prikazano na sliki 1, smo ugotovili, da je ATG5 pretežno izražena v citoplazmi. Poleg tega prekomerno ekspresijo ATG-5 je v pozitivni korelaciji z učinkovitostjo MRP-1 v GC. (R = 0,616, P
< 0,001), kot jih je preizkus Dvomjerni Korelacijska razkrila. Pozitiven izraz v sosednjih non-rakavih tkiv bilo 113 (83,70%) pri ATG-5 in 89 (65.93%) za MRP-1. Podatki so pokazali, da sta ATG-5 in MRP-1 so pozitivno izražena v raka in ne-rakavih tkiv, ki kažejo, da se ATG-5 in MRP-1 lahko povzročene s kemoterapijo v obeh tumorskih in ne-tumorskih tkivih. Ker so bili vsi naši vzorci bolnikov, zdravljenih z ECF kemoterapijo, in smo ugotovili, da sta ATG-5 in MRP-1 so bili zelo izražena in v pozitivni korelaciji v teh vzorcih. Medtem, prejšnji študija kaže, da MRP-1 je morda povezana z rezistenco na več zdravil v PK. Skupaj s prejšnjo ugotovitvijo, naši rezultati kažejo, da se ATG-5 in MRP-1 lahko sodeluje pri chemoresistance pri bolnikih GC.

Društva med izražanjem ATG-5 ali MRP-1 in clinicopathological značilnosti GC

združenja ATG-5 in MRP1 izražanja z različnimi clinicopathological parametri GC so prikazani v tabeli 1 in tabeli 2, v tem zaporedju. Izražanje ATG-5 je bila značilno povezana z globino stene invazije, oddaljenih metastaz in TNM stopnjah GC ( P
< 0,001, P
= 0.018, P
< 0,001 zaporedju). MRP-1 izraz je značilno povezana s povečano velikostjo tumorja, globina stene invazije, regionalne bezgavke metastaze, TNM stopnje ( P
= 0.032, P
< 0,001, P = 0,016, P < 0,001 zaporedju) in status diferenciacija ( P
= 0,005). Za nadaljnje določanje vključenosti Ö f ATG-5 in MRP-1 v razvoj GC, smo izvedli analizo preživetja v naših vzorcev bolnikov. Naše preživetje analize so pokazale, da je bila celotna celotno preživetje (OS) stopnja naše GC kohorte 43.70% s pomeni preživetje 39.849 mesecev (95% interval zaupanja, 35.636-44.061 mesecev); ker je brez bolezni (DFS) je bila stopnja 34.07% s povprečno preživetje 35.802 mesecev (95% interval zaupanja, 31.618-39.986 mesecev). Mi poleg razvrščeni bolnikov v štiri različne podskupine glede na mnogo imunohistokemični barvanjem. Analiza preživetja po metodi Kaplan-Meier je pokazala višje ATG-5 izraz je precej povezana s slabšim OS ( P
< 0,001) in DFS ( P
= 0,003). Parne primerjave so pokazali, da bolniki, ki nosi največjo ATG-5 izraz (rezultati 300-400) so imeli najslabše stopnje preživetja v primerjavi s položajem drugih podskupin (Slika 2A in 2B). Dosledno je bilo ugotovljeno, molekul MRP-1 izraz, ki se bistveno povezana s slabim OS ( P
= 0,001) in DFS ( P
= 0,018) naših bolnikov GC. Podskupina z najvišjimi MRP1 izražanja točk (0-99) je zdelo, da imajo najslabše prognozo (slika 2C in 2D) v primerjavi z drugimi podskupin. Naši podatki tudi pokazala, da obstaja visoka korelacija med TNM fazah in preživetje bolnikov GC. Bolniki s stopnjo III in IV tumorjev prikaže slabšo prognozo v primerjavi s tistimi, zadrževanje fazi IB in tumorji II ( P < 0,01
) (slika 2E in 2F). Bolj zanimivo, v Cox je multivariatna regresija nevarnost model, je pokazala, da so bile ATG-5 in MRP-1 stopnje izraženosti in TNM faze vse neodvisne in pomembne prognostičnih kazalcev za napovedovanje OS ( P
= 0,037, P
= 0.005, P
< 0,001), in po DFS ( P
= 0,004, P
= 0.008, P
< 0,001 zaporedju) GC (tabela 3). Naši podatki kažejo, da ATG-5 in MRP-1 so bili tesno povezani z razvojem GC in lahko služi kot slabo prognozo označevalcev pri zdravljenju GC.

ATG-5 je bila bistveno povečana pri kemoterapijo celicah

da bi še dodatno raziskati vlogo ATG-5 v tumorigeneze in odporna na zdravila. Zaznali smo izraz beljakovin v več želodčnih raka celičnih linijah (AGS, BGC-832, SGC7901, SGC7901 /DPP in MKN45) in v nesmrtno človeške želodčne epitela sluznice celične linije (ges). Zanimivo je, da smo ugotovili, da je ATG-5 dramatično prekomerno v DPP celične linije, odporne, SGC7901 /DPP celice, v primerjavi z vsemi drugimi celičnih linij, ki vključujejo DPP občutljiva SGC7901 celice (slika 3A). nadalje smo potrdili, da so SGC7901 /DPP celice odporne na zdravljenje DPP. IC 25, IC50 in IC75 15,4 LM, 38,7 iM in 93,53 LM v SGC7901 celicah. V nasprotju s tem, IC 25, IC50 in IC75 bili 120.03 um, 271.9 mikrometrov in 423.7 mikronov SGC7901 /DPP (slika 3B). Gre za 5 do 9-krat višja od tiste pri odpornih celic brez drog. Naše ugotovitve močno nakazujejo, da ATG-5 prispeva k zdravila odporno od GC celic.

Zaviranje ATG-5 občutljivi kemoterapijo celic zdravljenja odvisnosti od drog

Da bi še dodatno dokazuje, da ATG-5 prispeva k zdravila odporen od GC celic smo uporabili manjših motečih RNA (siRNAs) za rasklapanje izražanja ATG-5. Tri siRNAs so bile oblikovane. Naša realnem času PCR in zahodni rezultati blot so pokazali, da vsi trije siRNAs inhibira ekspresijo ATG-5 na ravni mRNA in na ravni proteina (slika 4A in 4B). Odločili smo eno, siRNA ATG5-695, z najvišjo učinkovitostjo rasklapanje izvesti naslednje eksperiment. rasklapanje smo ATG-5 izraz in nato obdelamo celic z DPP. sposobnost celic širjenje bila preučena pri 0, 48 in 72 ur po zdravljenju. Naš rezultat je pokazal, da knockdowning ATG-5 ni vplivalo na proliferacijo celic v SGC7901 /DPP celic v primerjavi s kontrolno siRNA (siRNA NC). Zdravljenje DPP zgolj nekoliko inhibira proliferacijo celic. Zanimivo je, ko smo rasklapanje ekspresijo ATG-5 in obdelamo celice z DPP hkrati povečajo zmožnost proliferacije celic so nadalje preprečena v primerjavi s celicami, ki so se zdravili z DPP sam 48 in 72 ur po obdelavi (slika 4 C). Naši podatki nadaljnjo podporo, ki ATG-5 prispeva k zdravila odporno GC celic.

avtofagija je bil vpleten v droge odporno DC celice

Ker je ATG-5 osrednji regulator avtofagija, smo predvidevali, da se avtofagija lahko sodelujejo v zdravila odporno GC celic. Tako smo uporabili 3Ma, ki je inhibitor avtofagija, za zdravljenje odporne celice drog. Kot je bilo pričakovati, smo ugotovili, da 3Ma skupaj z zdravljenjem DPP imeli podoben učinek z ATG-5 kncokdown skupaj z zdravljenjem DPP (slika 4C in 4D). Podatki kažejo, da avtofagija prispeva k zdravila odporno. Nato smo pregledali, ali je bila avtofagija spremenil med zdravljenjem. Uporabili smo imunofluoroscenca odkriti LC3B izraz raven, ki je avtofagija dvojno podajo v celicah. Naši podatki so pokazali, da je bila avtofagija zatreti po utišanje ATG-5 ali zdravljenje celic z 3Ma (slika 5A). In western blot rezultat potrjuje, da je izraz LC3A /B beljakovine je bila prizadeta samo v celicah, ki so se zdravili s siRNA-ATG5 ali 3Ma. Skladno s tem, je bila celična proliferacija nadalje zaviral šele, ko je avtofagija inhibiran (slika 4 in slika 5). Zato so naši podatki so pokazali, da je bila ATG-5 vpleten v droge odporno DC celic, ki je bila v glavnem preko vpliva na avtofagija rakavih celic.

Pogovor

GC še vedno ena od najbolj pogoste maligni tumorji na globalni ravni, kljub vedno manjši pojavnosti in skupno število pa naj bi se nenehno plezati kot posledica rasti prebivalstva. Pri moških, GC uvršča na drugo mesto v umrljivosti; pri ženskah pa je na četrtem mestu umrljivosti [24], [25]. Koeficient smrtnost GC na Kitajskem je bila 25,2 na 100 000 [26]. V naši raziskavi smo preverjali izražanje ATG-5 in MRP-1 v kohorti GC bolnika po kemoterapiji. Nato smo dokazali, da je bila ATG-5 povečana pri cisplatin (DPI) odporne celične linije. Poleg tega, ko je bilo zavrto ATG-5 izraz ali aotophogy so rakave celice občutljivi na zdravljenje DPP. Naši rezultati zagotovil nov vpogled v mehanizem kemoterapijo v napredovanje GC.

smo ovrednotili profil exression za ATG-5 in MRP-1 pri 135 bolnikih kitajskih GC. V dogovoru s prejšnjim poročilom [22], naši rezultati pokazali, da je visok odstotek GC tkiv izražena ATG-5, in ATG-5 izraz je statistično povezana z globino stene invazije, oddaljenih metastaz in TNM fazah GC. Te ugotovitve podpirajo idejo, da lahko visoka izraz raven ATG5 prispevalo k, neke mere, bolj agresiven in maligni fenotip v PK. To stališče je naš ugotovitev povezave med višjo ATG5 izražanja v PK in slabšo prognozo bolnikov nadalje podpirajo (glej več razpravo v nadaljevanju). Še pomembneje je, smo ugotovili pozitivno korelacijo med ATG-5 in MRP1 izražanja v naši GC kohorti. Glede na dejstvo, da je MRP1 ABC transmembranski transport protein dobro znano, za spodbujanje MDR fenotip v GC, je smiselno predlagati, da se ATG-5 vpleten tudi s prenosom GC chemoresistance prek nekaterih neznanih molekularnih mehanizmov.

na splošno velja, da so ponovitve in metastaze dve veliki ovire v naših prizadevanjih za izboljšanje nizko OS in hitrosti DFS preživetja GC. Chemoresistance ostaja eden od najpomembnejših razlogov, ki vodijo do tumor doselitvijo /ponovitve po zdravljenju. Ustrezno možnost individualne obravnave bo nedvomno koristna za izboljšanje kliničnega izida; Kljub temu, trenutna odločitev zdravljenje je večinoma odvisna od stopnje TNM [27], [28]. Naše preživetje analize pri bolnikih z GC 135 z odpovedjo IB IV tumorji je pokazala, da sta bila oba ATG-5 in MRP-1 izraz sposoben samostojno napovedati OS in DFS po zdravljenju z adjuvans ECF kemoterapijo, kar kaže, da je spremljanje svoje ravni izražanja v kombinaciji konvencionalne prognozi nam lahko zagotovijo dodatne dragocene informacije za boljše vrednotenje kemoterapije učinka pri bolnikih GC. Zanimivo je, da smo našli ATG-5 smo močno izraženi pri drog odporen GC celičnih linij. In utišati ATG-5 lahko ponovno občutljivi odpornih celice drog na kemoterapijo. Naši podatki kažejo, da so lahko ATG-5 tarča kemoterapijo paitents.
Je

Kopičijo dokazi kažejo, da je avtofagija sposoben sprožiti tako celično preživetje in smrt celice v različnih kontekstih. Liu et al so poročali, da z zaviranjem PI3K /Akt /mTOR poti, v lahko β-elemene povzroči zaščitno avtofagija za pomoč GC celice bolje prilagodijo na stresne razmere in zaščito pred postopku apoptoza smrt [29]. Poleg tega so nedavne študije pokazale, da je PI3K /Akt /mTOR signalne poti pogosto aktivira malignih obolenj človeških prebavilih [30]. signalizacijo PI3K /Akt modulira tudi MDR v GC celici z regulacijo p-glikoprotein, BCL 2 in Bax [31]. Prav tako so poročali nekateri agenti proti raku, da zavira mTOR signalizacije in povzroči avtofagija na rakave celice, ki jih ponižujoče številne glavne sestavine v mTOR osi [14], [32]. Na splošno, ti podatki kažejo, da bi lahko avtofagija povzročene med kemoterapijo in zatiranje autophagic poti z uporabo zaviralca avtofagija imajo potencial za izboljšanje kemoterapevtsko učinkovitost pri bolnikih GC z ATG-5 visoko ekspresijo. V podporo, smo ugotovili, da, ko je bilo zavrto avtofagija, so odporni proti celice drog občutljivi tudi za zdravljenje odvisnosti od drog spet kot utišanje ATG-5 izraz. Torej, naš rezultat podpore, ki avtofagija prispeva k kemoterapijo pri bolniku.

Če povzamemo, prekomerno izražanje ATG-5, ki je ključni molekularno predvajalnika autophagic poti, ki je povezana z chemoresistance v PK. Izražanje ATG-5 in MRP-1, se lahko šteje kot neodvisne prognostičnih označevalcev za napovedovanje OS in DFS bolnikov GC, ki temelji na trenutno pridobljenih podatkov. Na osnovi TNM stopnjah, lahko odkrivanje ravnmi izražanja klinično pomembne za boljše napovedovanje izidov kemoterapevtskih zdravljenja pri bolnikih, ki trpijo zaradi tega maligne bolezni. Nadaljnje študije, ki vključujejo oceno večjega števila primerov, v najboljšem primeru z drugačnim etničnim ozadjem, so vsekakor upravičena za potrditev naše ugotovitve v tej študiji.

• Plos ONE: Primerjava operativnih izidov in učenja krivulj med laparoskopsko in robotske želodca za Rak želodca
• Plos ONE: Napoved Rak želodca razvoj, ki ga Serum Pepsinogen Test in Helicobacter pylori seropozitivnosti v vzhodnih Azijcev: sistematični pregled in Meta-Analysis