PLoS ONE: reguliranje prema autophagy-Related Gene-5 (ATG-5) je povezana sa kemijska otpornost u ljudskim karcinoma želuca

Sažetak pregled

Autophagy povezanih gena 5 (ATG-5) je jedan od ključnih regulatora autophagic smrti stanice. Opće je smatran kao zaštitni molekularni mehanizam za tumorske stanice tijekom trajanja kemoterapije. U ovom istraživanju, istražili smo ekspresije uzorka ATG-5 i multidrug-povezan protein-1 (MRP-1) u 135 želučanih tumora (GC) pacijenata koji su bili tretirani s epirubicin, cisplatinom i 5-FU pomoćne kemoterapije (ECF ) nakon kirurške resekcije i istražiti njihovu potencijalnu kliničku važnost. Otkrili smo da su ATG-5 (77,78%) i MRP-1 (79,26%) su vrlo izražene u GC pacijenata. ATG-5 izražavanje bilo značajno povezano s dubine od zida invazije, TNM stadija i udaljenih metastaza GC (P < 0,05), dok MRP-1 ekspresija je značajno povezana s veličinom tumora, dubine zida invazije, limfnih čvorova metastaza, TNM stadija i stanje diferencijacije (P 0,05). ATG-5 ekspresije u pozitivnoj korelaciji s MRP-1 (RP = 0.616, P < 0.01). Povećana ekspresija ATG-5 i MPR-1 značajno je povezana sa siromašnima ukupno preživljenje (OS P 0,01) i bez znakova bolesti opstanak (DFS P 0,01) našeg GC skupini. Nadalje smo pokazali da ATG-5 bio je uključen u otpornom GC stanica, koja je najvećim dijelom kroz reguliranje autophagy lijeka. Naši podaci pokazuju da su doregulirane ekspresija ATG-5, što je važan molekulske značajkom zaštitne autophagy, povezana je s kemijska otpornost na GC. Izražavanje ATG-5 i MRP-1 mogu biti neovisni prognostički biljezi za GC tretman pregled

Izvor:. Ge J, Chen Z, Huang J, Chen J, Yuan W, Deng Z, et al. (2014) reguliranje prema Autophagy-Povezane Gene-5 (ATG-5) je povezana sa kemijska otpornost u ljudskoj raka želuca. PLoS ONE 9 (10): e110293. doi: 10,1371 /journal.pone.0110293 pregled

Urednik: Pankaj K. Singh, Sveučilište Nebraska Medical Center, Sjedinjenih Američkih Država Netlogu

Primljeno: 5. kolovoza 2014. godine; Prihvaćeno: 18. rujna 2014; Objavljeno: 17. listopad 2014 pregled

Copyright: © 2014 Ge et al. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan pregled

Data Dostupnost:. The autori potvrđuju da su svi podaci na kojima se temelji nalaze u potpunosti na raspolaganju bez ograničenja. Svi relevantni podaci u radu pregled

Financiranje:. Ovaj rad je podržan od strane Nacionalne zaklade prirodoslovni Hunan Province, China (br 2012FJ6088). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

Unatoč znatnom padu u svojoj pojavnosti stope u mnogim razvijenim zemljama, raka želuca (GC) i dalje je četvrti najčešće dijagnosticirana maligna bolest, a drugi vodeći uzrok smrti od raka povezanih svijetu [1]. Tijekom proteklih desetljeća, standardnih multimodalne strategije liječenja, zajedno sa drugim preporučenim opcija (npr D2 seciranje i adjuvantne kemoterapije) nisu uspjeli izliječiti veliki dio pacijenata pogođenih GC, posebno za one s naprednim i metastatskih bolesti, s lošijim postotkom preživljavanja koji se vide vjerojatno zbog prisutnosti kemijska otpornost za obradu [2]. Dakle, identifikacija novih molekularnih događanja na kojima se temelji razvoj ove maligne bolesti i njegove loše prognoze, kao i razumijevanje mehanizama GC kemijska otpornost hitno su potrebni za učinkovitiju kliničku intervenciju i bolje upravljanje pacijenata. Pregled

Pod fiziološkim uvjetima, autophagy je lizosoma ovisna o samo-probavljanje sustav prvenstveno odgovoran za uklanjanje i recikliranje dugovječni proteina i oštećene /zastarjelih intracellularorganelles u cilju održavanja homeostaze stanica [3]. Proteini i organele namijenjeni uništenju su izdvojeni u "double-membranskih" vakuole (autophagosomes), nakon čega slijedi spajanje s lizosomi za izgradnju kompleksa poznate kao autophagosomes, gdje se sadržaj ponižava lizosomalni hidrolaze [4]. Zabilježeno je da je autophagy može biti inducirana u odgovoru na mnogim nepovoljnim uvjetima, uključujući gubitak u prehrani, oksidativnog stresa ili DNA oštećenja, a služi kao mehanizam adaptivni stanica, na kraju omogućuje stanicama da prežive i rastu, a opsežna ili trajne rezultate autophagy u stanične smrti [ ,,,0],5]. Oštećenja u fiziološkoj aktivacije, montaže i funkciju autophagic put su sve uočeno u raznim vrstama raka u čovjeka, iako je točno uloga koju autophagy u raka nastanka i progresije je još uvijek u kontroverzi. Neki podaci favoriziraju ideju da autophagy potiskuje tumorigenezi, dok drugi dokazi ukazuju na to da autophagy je u mogućnosti da se aktiviraju inicijacije tumora i štiti stanice tumora da prođu apoptozu [6]. Zanimljivo, inhibicija autophagy Nedavno je otkriveno da se poboljšala antitumorsko djelovanje od više citotoksičnih sredstava. Li i suradnici su izvijestili da se autophagy aktiviran kao zaštitnog mehanizma protiv staničnih učinaka 5-FU-tretman i inhibiciju autophagy po 3 methyladenine proširen 5-FU-induciranu apoptozu kod stanica raka debelog crijeva [7], [8]. S druge strane, neki lijekovi za (npr cetuksimab i dasatinib) su pokazali da induciraju autophagic stanična smrt putem različitih mehanizama u nekim stanicama karcinoma [9] - [13]. Molekularni strojevi kojim autophagy regulira preživljavanje ili smrt maligne stanice u velikoj mjeri ostaje nejasan do sada. Autophagy put je visoko modulirani dinamičan proces uglavnom izvršava autophagy vezane (ATG) obitelji gena koji upravljaju nekoliko ključnih kinaza, uključujući mTOR, PI3K /Akt, AMPK i MAPK [14], [15]. ATG-5 je središnji regulator potrebna za autophagy u smislu njegovog angažmana u autophagosome istezanja [16]. Prisilni izraz ATG-5 senzibiliziranih tumorskih stanica na antikancerogeno liječenje od droga i In vitro pregled i in vivo pregled; Nasuprot siRNA posredovanu inhibiciju ATG-5 dovela je do djelomične otpornosti na kemoterapiju [17] pregled

Postoperativni dodatna kemoterapija se trenutno glavni tretman za GC. Međutim, ukupna djelotvornost kemoterapije i dalje loš vjerojatno kao posljedica prisutnosti otpornosti na više lijekova (MDR) fenotipa. Za razliku od drugih tumora subjekata, izraz klasičnih MDR-posreduju molekula kao što su glutation-S-transferaze i gen za rezistenciju na lijekove 1 nije vrlo rasprostranjen u GC tkivima, što ukazuje da može postojati kompliciran mehanizam za razvoj MDR u ove zloćudne bolesti [ ,,,0],18]. Kao jedan od mehanizama klasičnih otporne na lijekove, multidrug-povezan protein 1 (MRP1 /ABCC1) nađeno je da jako izražene u GC i na taj način se može vršiti ključne uloge u posredovanju MDR u GC [19], [20]. Međutim, ostaje nepoznato da li MRP-1 ekspresija povezana s ATG-5 izražavanja. I da li autophagy je uključen u chemoresistence u GC pacijenata je nejasno. Pregled

U ovom istraživanju, prvo zaposleni imunohistokemije istražiti profile ekspresije ATG-5 i MRP1 u zbroju 135 bolesnika koji su primali GC ECF (epirubicin, cisplatin i 5-FU), dodatna kemoterapija nakon kirurške resekcije. Korelacije između ATG-5 i MRP-1 ekspresije, kao i njihovo izražavanje u različitim kliničkopatološkim značajkama GC i kliničkih ishoda također su ocijenjeni. Pregled

Materijali i metode pregled

Pacijenti i uzorci tkiva

ukupno 135 GC pacijenata koji se sastoji od 91 muškaraca i 44 žena koji su bili podvrgnuti operaciji na Odjelu gastrointestinalnih kirurgiju Xiangya bolnica, Central South University (CSU), Kina, od 1. siječnja 2007. do 31. prosinca 2008. godine bili su upisani u ova studija. Prosječna starost skupini bila je 53,62 ± 9,73 godina, s rasponom od 26 do 72. Theprimary GC tumora tissuesand podudaraju non-kancerogen (NC) tkiva koje se nalaze najmanje 5 cm udaljeni od jezgre tumora dobiveni su nakon kirurške resekcije i odmah obrađuje i pohranjene do sljedeće upotrebe. Nitko od regrutira bolesnika imalo kemoterapiju ili radioterapiju prije kirurškog zahvata. Histopatološko Dijagnoza je provedena preoperativno i potvrđuje operacije. Svi sudionici u stupnju IB IV tumora dobio ECF kemoterapije nakon operacije (doza epirubicina 50 mg /m ^{2 na dan 1, cisplatin 60 mg /m 2 na dan 1 i kontinuirane intravenske infuzije 5-FU 500 mg /m 2 /d 4 dana, ponavlja svaka 3 tjedna do 24 tjedana). Klinička obilježja tih bolesnika su navedene u tablici 1. pregled}

Svi slučajevi u ovoj studiji su pregledani i svi primjerci su patohistološki preispitana u listopadu 2012. godine na dubini od zida invazije, regionalne limfne čvorove, metastaza, te histološki stupanj potvrđeni su iste skupine od dvije iskusne starije patologa. Pacijenti su kategorizirani prema stanju i diferencijacije stanica raka u tri histoloških razreda: dobro, umjerenim i siromašnih. Na temelju kombinacije uključivanja loco-regionalna tumora i prisutnost metastaza, svi predmeti su stupili prema TNM klasifikaciji zloćudnih tumora (TNM) stage skupine [21]. Za analizu preživljavanja, datum operacije je korišten za zastupanje početnu točku praćenja posjeta. Pacijenti koji su umrli od drugih bolesti, a ne GC ili drugih neočekivanih događaja bili su isključeni iz zbirke slučaja. Uzrok smrti regrutiraju u ovom istraživanju bio je pogoršanje GC. Ukupna preživljavanje (OS) je izračunata kao razdoblje koje počinje teći od dana kada je inicijalni operacije do datuma smrti, odnosno od dana posljednjeg nastavka kao krajnje točke. Bolest preživljenja bez (DFS) je definirana kao vremenski interval od operacije do datuma lokalnog recidiva ili prvi udaljenih organa metastaza. Informirani pisani pristanak dobiven je od svakog pacijenta prije operacije, a ovo istraživanje je odobren od strane Etičkog povjerenstva za istraživanje Central South University, Kina. Svi uzorci su obrađeni i anonimni skladu s etičkim i zakonskim odredbama. Pregled

Imunohistokem pregled

Svježe su uzorci fiksirani u 10% neutralno puferiranom formalinu, a naknadno ugrađen sa parafinom. U parafin ugrađenih tkiva se izreže na 4 um i zatim deparafmizirani ksilenom i rehidrirane daljnjeg H &E ili peroksidaza imunohistokemijski obojenje pomoću DAKO isplanirati sustava. Ukratko, nakon proteolitičke razgradnje i blokiranje s endogenim peroksidaze stakalca tkiva inkubirani su s primarnim antitijelima (ATG5: ab54033, MRP1: ab32574, Abcam Inc., Cambridge, UK), protiv odgovarajućih ciljnih proteina u razrjeđenju 1:500 preko noći na 4 ° C. Nakon ispiranja s PBS, peroksidazno obilježen polimer i substrat kromogena zatim se upotrijebiti kako bi se vizualizirali immnohistochemical bojenje. Na kraju, sekcije su prebrojane s hematoksilinom, cover-skliznuo s montažnom srednje i pregleda pod svjetlosnim mikroskopom. Svi postupci provedeni su na Zavodu za patologiju Xiangya bolnice C.S.U. Slajdovi su interpretirani samostalno dva iskusna patologa, koji su bili slijepi za informacije pacijenata. kvantificirati smo bojenja intenzitet i postotak obojenih stanica pomoću prethodno opisanog pristupa [22], [23]: postotak pozitivno obojenih stanica (0% -100%) pomnožen je dominantan intenziteta uzorak bojenje, s obzirom na 1 kao negativna ili tragovima, 2 kao što je slaba, 3. kao umjerena i 4 jaka. Dakle, ukupni rezultat u rasponu od 0 do 400. Pacijenti su naknadno kategorizirane u četiri različite podskupine: rezultat 0-99, rezultat 100-199, rezultat 200-299 i rezultat 300-400 pregled

Western blot analiza <. br>

ekstrakti cijelih stanica su pripravljeni korištenjem 0,14 M NaCl, 0,2 M trietanolamin, 0,2% natrijeva deoksikolata, 0.5% Nonidet p-40 i uz dodatak inhibitora proteaze (svi proizvodi od Sigma, St. Louis, Missouri , USA). Zatim se uzorak protein se propusti kroz 12% natrij dodecil sulfatom-poliakrilamid gel elektroforeze (SDS-PAGE), gelu i prenese na membranu. Preneseni Membrane se nakon toga inkubirani preko noći na 4 ° C s primarnim antitijelom. Nakon ispiranja, membrana se inkubira s peroksidazom hrena (HRP), čija sekundarnog antitijela tijekom 1 sata na sobnoj temperaturi. Primarna antitijela su anti-ATG-5 (Santa Cruz, CA, USA), anti-LC3A /B (abcam, Cambridge, UK) i anti-β-aktin (Santa Cruz, CA, USA). Svi dobiveni rezultati su prosječni omjeri tri različita nezavisna eksperimenta. Pregled

Test stanične proliferacije pregled

Stanice su nasađene na ploče s 96 jažica (10000 stanica /jažica) tijekom 24 sati prije tretmana. MTT testovi su korišteni za procjenu proliferacije stanica u drugoj vremenskoj točki nakon tretmana. MTT Ispitivanje je izvedeno kako slijedi: MTT je dodan u svaku jažicu i ploče se inkubiraju na 37 ° C tijekom 4 sata. MTT medij Smjesa je zatim uklonjen i 150 uL dimetil sulfoksida (DMSO), je dodan u svaku jažicu. Apsorbancija je mjerena na 570 nm upotrebom spektrofotometra multiwall pregled

RNA interferencije

siRNA duplekse ciljanje ATG-5 su sintetizirani kao što slijedi: siRNA ATG5-486. GACGUUG GUAACUGACAAATT; siRNA-ATG5-695: GUCCAUCUAAGGAUGCAAUTT i siRNA-ATG5-938: GACCUUUCAUUCAGAAGCUTT. siRNA duplekse sadrže ne-specifične sekvence su korišteni kao negativna kontrola (NC): UUCUCCGAACGUGUCACGUTT. Različite siRNA se transficirati u stanice pomoću reagens lipofektamin 2000, a medij je zamijenjen 6 sati nakon transfekcije. Pregled

realnom vremenu RT-PCR pregled

Ukupna RNA iz stanične linije i tkiva su ekstrahirana korištenjem Trizol reagensa (Invitrogen, Carlsbad, SAD), u skladu s uputama proizvođača. Koncentracija RNA se mjeri pomoću spektrofotometra. CDNA bazen sintetizira 1 ug ukupne RNA i TaqMan reverzne transkripcije reagensa (Applied Biosystems, Foster City, USA) prema uputama proizvođača. Ekspresija ciljnog gena se procijeni korištenjem relativne kvantifikacije pristup (2 ^{-ΔΔCt metoda) s p-aktin kao unutarnju referencu. Pregled}

eseja imunoflorescencije pregled

Stanice su natopljeni s 0,3 % Triton X-100 tijekom 10 minuta nakon čega slijedi fiksacija s 2-4% Methanal tijekom 15 minuta, te blokirani sa 3% ovčjeg seruma na sobnoj temperaturi tijekom 60 minuta. Zatim ispitane sa primarnim antitijelima protiv LC3B (Santa Cruz, CA, USA) preko noći na sobnoj temperaturi, a stanice su isprane tri puta s PBS. Obojeni Alexa Fluor 488 konjugiranim 488 zečjeg anti-kozjeg IgG za 1 sat na sobnoj temperaturi, a zatim su stanice su isprane tri puta s PBS. Jezgre su vizualizirana bojenjem sa DAPI (Sigma, SAD) tijekom 2 min. Obojeni Stanice su promatrane s obrnutim fluorescentnim mikroskopom. Pregled

Statistička analiza pregled

Sve statističke analize provedene su s paketom SPSS 15.0 for Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Kvantitativni podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± SD. Pearsonov χ ^{2 test je korišten za usporedbu razlika među rangiranim podacima, dok je jednosmjerna ANOVA-test proveden je za usporedbu razlika između kvantitativnih podataka. Survival analize provedene su pomoću Kaplan-Meier metodi i usporediti je log-rank testa. Cox-regresijski model izveden je procijeniti omjer nezavisnu opasnosti svake varijable u multivarijatne analize. Korelacija između ATG5 i MRP1 izražavanja ispitana je pomoću dvije vrijednosti korelacija (Pearson) test. Razlike su smatrane statistički značajna kada je P
vrijednosti bile manje od 0,05. Pregled}

Rezultati

Izražavanje ATG-5 i MRP-1 u GC pregled

Način ekspresije i mjesto ATG-5 i MRP-1 u našim GC bolesnika, koji su tretirani s epirubicina, cisplatinom i 5-FU pomoćne kemoterapije (ECF) nakon kirurške resekcije, ispitani su pomoću imunohistokemijske analize. Među 135 GC uzoraka, 105 (77,78%) bili su pozitivni za ATG-5 imunoreaktivnost, a 107 (79,26%) su MRP-1 pozitivan. Kao što je prikazano na slici 1, otkrili smo da ATG5 pretežno eksprimira u citoplazmi. Osim toga, prekomjerna ekspresija ATG-5 pozitivno korelira s onom MRP-1 u GC. (R = 0,616, P izvoznici < 0,001), što je otkriveno u bivarijantnih korelacija testa. Pozitivan izraz u susjednim non-kancerogen tkiva su 113 (83,70%) za ATG-5 i 89 (65,93%) za MRP-1. Podaci pokazuju da su obje ATG-5 i MRP-1 pozitivno izražene su u raka i ne-kanceroznim tkivima, koji ukazuju da ATG-5 i MRP-1 može se inducirati kemoterapije tumorskih i ne-tumorskih tkiva. Kao što svi naši pacijenata Uzorci su tretirani s ECF kemoterapije, a otkrili smo da su ATG-5 i MRP-1 su vrlo izražen i pozitivno povezana u tim uzorcima. U međuvremenu, prethodna studija pokazuje da MRP-1 možda povezana s otpornošću na više lijekova u GC. Zajedno s prethodnom nalazu, naši rezultati ukazuju na to da ATG-5 i MRP-1 može biti uključen u kemijska otpornost u GC pacijenata. Pregled

Udruge između ekspresije ATG-5 ili MRP-1 i kliničkopatološkim karakteristike GC Netlogu

udruge ATG-5 i MRP1 ekspresije sa klinikopatološkim različitim parametrima GC prikazani su u tablici 1 i tablici 2, respektivno. Izražavanje ATG-5 bio je statistički značajno povezana s dubine od zida invazije, udaljenim metastazama i TNM stadija GC ( P izvoznici < 0,001, P pregled = 0,018, P
< 0,001 respektivno). MRP-1 ekspresija značajno je povezana s povećanim veličine tumora, dubina zida invazije, regionalni limfni čvorovi su metastaze, TNM stadija ( P pregled = 0,032, P izvoznici < 0,001, P = 0,016, P < 0.001) te su status diferencijaciju ( P pregled = 0,005). Kako bi se dodatno utvrditi uključenost Ø f ATG-5 i MRP-1 u razvoju GC, proveli smo analizu preživljenja u našim uzorcima bolesnika. Naš opstanak analiza pokazuje da je ukupni ukupno preživljenje (OS) Brzina našeg GC skupine bio je 43,70% sa srednjom opstanak 39.849 mjeseci (95% CI, 35.636-44.061 mjeseci); dok preživljenja bez bolesti (DFS) iznosila je 34.07% sa srednjom opstanak 35.802 mjeseci (95% CI, 31.618-39.986 mjeseci). Mi smo sljedeći klasificirani pacijente u četiri različite podskupine prema ocjenama od imunohistokemijske bojenja. Analiza preživljenja Kaplan-Meier otkrila veći izraz ATG-5 bio je statistički značajno povezana s lošijom OS ( P izvoznici < 0,001) i DFS ( P pregled = 0,003). Parnu usporedbu pokazala da pacijenti koji nosi najveću ATG-5 izraza (rezultati 300-400) imali najsiromašnijim stope preživljavanja u usporedbi s onim drugih podskupina (slika 2a i 2b). Dosljedno, regulira prema gore MRP-1 ekspresija je utvrđeno da je značajno povezana s lošim OS ( P pregled = 0,001) i DFS ( P pregled = 0,018) naših GC pacijenata. Podgrupa s najvišim MRP1 izraz rezultate (0-99) pojavili su najgoru prognozu (slika 2C i 2D), u usporedbi s ostalim podgrupama. Naši podaci također pokazuju da postoji značajna korelacija između TNM stadija i opstanak GC pacijenata. Bolesnici s stadiju III i IV tumora prikazana lošiju prognozu u odnosu na one koji nose stupnja IB i II tumora ( P < 0,01 pregled) (Slika 2E i 2F). Što je još zanimljivije, COX-a multivarijatne regresije opasnosti Model je pokazao da ATG-5 i MRP-1 Razina ekspresije i TNM stadija su sve neovisne i značajni prognostički pokazatelji za predviđanje OS ( P pregled = 0,037, P
= 0.005, P izvoznici < 0,001) te su DFS ( P pregled = 0,004, P pregled = 0,008, P izvoznici < 0.001 pojedinačno) GC (tablica 3). Naši podaci ukazuju na ATG-5 i MRP-1 su usko povezani s razvojem GC i mogu poslužiti kao lošom prognozom markere u GC liječenja. Pregled

ATG-5 značajno je reguliran u chemoresistant stanica pregled

Kako bi se dodatno istražiti ulogu ATG-5 u nastanku tumora i otporan na lijek. Otkrili smo ekspresiju proteina u nekoliko rak želuca staničnih linija (AGS, BGC-832, SGC7901, SGC7901 /DPP i MKN45) te u besmrtnom ljudskog želuca epitelnih sluznica stanične linije (GES). Zanimljivo, otkrili smo da ATG-5 dramatično izraženo u DPP otporne na staničnoj liniji, SGC7901 /DPP stanica, u usporedbi sa svim drugim staničnim linijama koje uključuju DPP osjetljivi SGC7901 stanice (slika 3A). Nadalje je potvrdio da SGC7901 /DPP stanice su otporne na DPP liječenje. IC 25, IC50 i IC75 su 15,4 uM, 38,7 uM i 93,53 M u SGC7901 stanica. Nasuprot tome, IC 25 IC50 i IC75 su 120.03 uM, 271,9 uM i 423.7 M u SGC7901 /DPP (slika 3B). To je oko 5 do 9 puta veća od one u stanicama rezistentnim bez lijeka. Naš pokazuje da se ATG-5 doprinosi otpornog od GC stanicama lijeka. Pregled

Inhibicija ATG-5 senzibiliziranih chemoresistant stanica na terapiju lijekovima pregled

Kako bi se dodatno dokazuju da ATG-5 pridonosi otporan od GC stanicama drogama, koristili smo male smetaju RNA (siRNA) na obaranje ekspresiju ATG-5. Tri siRNA su dizajnirani. U stvarnom vremenu PCR i Western blot rezultati su pokazali da su sve tri siRNA inhibira ekspresiju ATG-5 na razini mRNA i proteina (Slika 4A i 4B). Mi smo izabrali jedan, siRNA ATG5-695, uz najveću učinkovitost obaranje obavljati sljedeće eksperiment. obaranje smo ATG-5 izraza, a zatim obrađuje stanice s DPP. Proliferaciju stanica sposobnost ispitan je na 0, 48 i 72 sata nakon tretmana. Naš rezultat je pokazao da knockdowning ATG-5 nije utjecao na proliferaciju stanica u SGC7901 /DPP stanicama u usporedbi s kontrolnom siRNA (siRNA NC). DPP tretman sam malo inhibira proliferaciju stanica. Zanimljivo, kada obaranje ekspresiju ATG-5 i tretirana stanica s DPP istovremeno, stanična proliferacija sposobnost dalje suprimiranim usporedbi sa stanicama koje su tretirane s DPP sama 48 i 72 sati nakon tretmana (slika 4 ° C). Naši podaci daljnju potporu da ATG-5 doprinosi lijek otporne na GC stanica. Pregled

Autophagy je uključen u rezistentnih na lijekove od DC stanica pregled

Kao ATG-5 je središnji regulator autophagy, se nagađa da autophagy mogu biti uključeni u lijek otpornog GC stanica. Tako smo se 3MA, koji je inhibitor autophagy, liječiti stanice su rezistentne. Kao što se očekivalo, otkrili smo da 3MA zajedno s DPP tretman imao sličan učinak s ATG-5 kncokdown zajedno s DPP liječenja (Slika 4c i 4d). Podaci pokazuju kako autophagy doprinosi lijek otpornog. Zatim, ispitali smo je li autophagy je promijenjen tijekom liječenja. Koristili smo imunofluorescencija test za otkrivanje razine LC3B izraz, koji je autophagy marker u stanicama. Naši podaci su pokazali da je potisnuto autophagy nakon utišavanje ATG-5 ili tretiranje stanica sa 3MA (Slika 5A). I Western blot rezultat dodatno potvrdio da LC3A /B ekspresija proteina bio je pod utjecajem samo u stanicama tretiranim siRNA-ATG5 ili 3MA. Prema tome, stanična proliferacija je dalje inhibirani samo kada autophagy inhibirana (Slika 4 i Slika 5). Dakle, naši podaci pokazuju da ATG-5 je bio uključen u rezistentnih na lijekove DC stanica, koja je uglavnom kroz utječu na autophagy stanica raka. Pregled

Rasprava pregled

GC ostaje jedan od najvažnijih česti zloćudni tumori na globalnoj razini unatoč svojoj pada incidencije i ukupnog broja predviđa se da će stalno penjati kao rezultat rasta stanovništva. Kod muškaraca, GC redovima drugi u stopu smrtnosti; u žena, to je četvrti smrtnosti [24], [25]. Sirova stopa smrtnosti od GC u Kini bio je 25,2 na 100 000 [26]. U našoj studiji, ispitali smo ekspresiju ATG-5 i MRP-1 u skupini GC bolesnika nakon kemoterapije. Zatim, pokazali smo da ATG-5 je reguliran u cisplatina (DDP) otporna stanične linije. Također, nakon ATG-5 ekspresije ili aotophogy inhibirana, stanice raka su senzibilizirani na DPP liječenje. Naši rezultati pružaju novi uvid u mehanizam chemoresistant u GC napredovanje. Pregled

Istraživali smo exression profil ATG-5 i MRP-1 u 135 kineskih GC pacijenata. U dogovoru s prethodnom izvješću [22], naši rezultati pokazuju da visok postotak GC tkiva izražena ATG-5 i ATG-5 ekspresija je statistički povezana s dubine od zida invazije, udaljenim metastazama i TNM stadija GC. Ovi rezultati podupiru ideju da visoka ekspresija razina ATG5 može pridonijeti, donekle, agresivnijim i maligni fenotip u GC. To gledište je dodatno podržava naš nalaz povezanosti između visokog izražavanja ATG5 u GC i lošijom prognozom bolesnika (vidi više rasprava u nastavku). Što je još važnije, identificirali smo pozitivnu korelaciju između ATG-5 i MRP1 izraza u našem GC skupini. S obzirom na činjenicu da je MRP1 je ABC transmembranski protein za transport poznato promovirati MDR fenotip u GC, razumno je predložio da ATG-5 mogu također biti uključene u dodjelu GC kemijska otpornost kroz određene nepoznatih molekularnim mehanizmima. Pregled

Opće je prihvaćeno da bi ponavljanje i metastaze su dvije glavne prepreke u našim nastojanjima da se poboljša niske OS i DFS stopu preživljavanja GC. Kemijska otpornost i dalje jedan od najvažnijih razloga koji dovode do tumora naseljavanje /recidiva nakon tretmana. Odgovarajuće mogućnost individualnog tretmana biti će nesumnjivo koristan za poboljšanje kliničkog ishoda; Ipak, sadašnja odluka liječenje je uglavnom ovisi o TNM stadija [27], [28]. Naš opstanak analize u 135 GC bolesnika s stadiju IB je na IV tumori pokazuju da su i ATG-5 i MRP-1 ekspresija bili u mogućnosti samostalno predvidjeti OS i DFS nakon tretmana s pomoćnim sredstvom ECF kemoterapije, sugerirajući da praćenje njihove razine ekspresije u kombinaciji konvencionalni prognostički biljezi mogu nam pružiti dodatne vrijedne informacije za bolje vrednovanje kemoterapije učinak u GC pacijenata. Zanimljivo, našli smo ATG-5 je izraženo u otporne na lijekove GC staničnim linijama. I utišavanje ATG-5 može ponovno senzibiliziraju stanice su rezistentne na kemoterapiju. Naši podaci ukazuju na to da ATG-5 može biti meta chemoresistant paitents. Pregled

Prikupljeni dokazi ukazuju da su autophagy je sposoban da se aktiviraju oba preživljenje stanice i stanične smrti u različitim kontekstima. Liu i sur izvijestili da je preko inhibicije PI3K /Akt /mTOR put, β-elemene mogao izazvati zaštitnu autophagy za pomoć GC stanice se bolje prilagode stresnim uvjetima i zaštititi ih da prođu apoptozu smrt [29]. Nadalje, novija istraživanja su pokazala da su PI3K /Akt /mTOR signalizacije često aktivira kod humanih maligniteta gastrointestinalnih [30]. PI3K /Akt signalizacije također modulira MDR u GC stanice kroz regulaciju p-glikoproteina, BCL2 i Bax [31]. Isto tako, neki citostatici su izvijestili da inhibiraju mTOR signalizaciju i izazivaju autophagy u stanicama raka razlažući mnoge glavne komponente u mTOR osi [14], [32]. Sve u svemu, ti podaci ukazuju na to da autophagy može biti induciran tijekom kemoterapije i potiskivanje autophagic putova pomoću inhibitora autophagy imaju potencijal za poboljšanje kemoterapijski učinkovitost u GC bolesnika s ATG-5 visoku ekspresiju. U prilog, otkrili smo da kada je inhibirana autophagy, stanice otporne na lijek također su senzibilizirani na terapiju lijekovima opet kao utišavanje ATG-5 izraz. Dakle, naša podrška rezultat koji autophagy doprinosi chemoresistant u pacijenta. Pregled

Ukratko, prekomjerna ekspresija ATG-5, ključni molekularni igrač od autophagic puta, povezana je s kemijska otpornost u GC. Izražavanje ATG-5 i MRP-1 može se smatrati neovisnim prognostičkim biljezima za predviđanje OS i DFS GC bolesnika na temelju trenutno dobivenih podataka. Na temelju TNM stadija, otkrivanje njihove razine ekspresije mogu biti klinički značajni za bolje predviđanje kemoterapijskih ishoda liječenja u bolesnika koji boluju od ove zloćudne bolesti. Buduće studije koje uključuju procjenu većeg broja predmeta, idealno iz nekog drugog etničkog podrijetla, definitivno imaju jamstvo kako bi potvrdili naše rezultate u ovoj studiji. Pregled

• PLoS ONE: Usporedba operativnih ishoda i učenje krivulja između laparoskopske i robotsko gastrektomije za želučani Cancer
• PLoS ONE: Predviđanje rak želuca razvoj serumom Pepsinogen Test i Helicobacter pylori seropozitivnosti u istočnim Azijatima: sustavni pregled i meta-Analysis