PLoS ONE: Beclin-1 ekspresija značajan prediktor preživljenja u pacijenata s limfnog čvora pozitivnim rakom želuca

Sažetak pregled

Pozadina pregled

Beclin jedan je glavni glumac autophagy. Izraz Beclin 1 i njegova prognostička uloga kod raka želuca je u velikoj mjeri neistražen. Svrha ovog rada je istražiti ekspresiju beclin 1 u želučanim stanicama raka, tkiva i njegov odnos s prognozom. Pregled

Metode pregled

izraz Beclin 1 otkrivena je u 271 primjeraka limfnih čvorova pozitivnih pacijenata s rakom želuca imunohistokemijski. Korelacija Beclin 1 ekspresije u kliničko mogućnosti i preživljavanje karcinoma želuca je proučavao. Beclin-1 ekspresija u želučanim staničnim linijama karcinoma i kliničkih uzoraka također je otkriven pomoću reverzne transkripcije-PCR i Western blot. Pregled

Rezultati

Beclin 1 se regulira prema gore na obje mRNA i razina proteina u šest želučani stanične linije raka u usporedbi s onima u normalnim želučane sluznice stanične linije (GES-1). Izraz Beclin-1 u želučanim kliničkih uzoraka također je viša nego u susjednim noncancerous tkiva. Od 271 bolesnika, 229 (84,5%) su Beclin 1 visokih tumora ekspresije imunohistokemijski. Beclin 1 ekspresija je usko povezana s intravaskularne embolus. Kaplan-Meier analiza pokazala je visoku beclin 1 ekspresija povezana je sa dužim ukupnog preživljavanja. Oba Jednosmjerna analiza i multivarijatna analiza pokazala je da Beclin jedan izraz su neovisni prognostički čimbenici u bolesnika s čvora pozitivnim karcinomom želuca. Pregled

Zaključci pregled

Naša otkrića snažno sugeriraju da Beclin 1 ima potencijalnu ulogu u tumorigenezi od raka želuca i može biti obećavajuća biomarker za predviđanje prognozu bolesnika s limfnih čvorova-pozitivnih karcinoma želuca. To također može poslužiti kao novi terapijski cilj za želučane liječenje raka pregled

Izvor. Geng Q-R, Xu D-Z, je L-J, Lu J-B, Zhou Z-W, Zhan Y-Q, i sur. (2012) Beclin-1 ekspresija značajan prediktor preživljenja u pacijenata s limfnog čvora pozitivnim rakom želuca. PLoS ONE 7 (9): e45968. doi: 10,1371 /journal.pone.0045968 pregled

Urednik: Alejandro H. Corvalan, Pontificia Universidad Catolica de Chile, Čile pregled

Primljeno: 4. travnja 2012; Prihvaćeno: 23. kolovoz 2012; Objavljeno: 27. rujna 2012 pregled

Copyright: © Geng i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo je podržan od strane Medical Science Foundation provincije Guangdong (br 2010B031600071). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

karcinoma želuca ostaje glavni javni zdravstveni problem širom svijeta, posebno u istočno-azijskih zemalja, incidencija stopa dobno standardizirana je > 20 po 100.000 [1]. Za uznapredovalim rakom želuca, njegova prognoza je i dalje loša, a procjenjuje ukupnu stopu preživljavanja od 5 godina od 25% ili manje [2], [3]. Limfnih čvorova metastaze je najmoćniji prognostički pokazatelj slijedeće kurativne resekcije [4] - [7]. Oko 75% pacijenata s uznapredovalim imaju čvora pozitivnim rakom želuca, čija je prognoza bila je značajno lošija od one sa čvora negativnih bolesti [4]. Pregled

U prethodnim istraživanjima, pronašli smo pozitivan omjer limfnog čvora je nezavisna prognostički pokazatelj u bolesnika s čvora pozitivnim karcinomom želuca i intraperitonealne kemoterapije može biti koristan [8], [9]. Međutim, temeljni korak prema poboljšanju preživljenja bolesnika s limfni čvor-pozitivnim rakom želuca leži u povećanom razumijevanju biološkog ponašanja tumora i traženje mogućih ciljeva za individualne terapije [10], [11]. Na primjer, receptor humanog epidermalnog faktora rasta 2 (HER2) postao sada novi biljeg karcinoma želuca slijedi principe utemeljene na dokazima [12] .Adding trastuzumab standardnoj kemoterapiji moglo promijeniti lošu preživljavanje bolesnika s HER2-pozitivnim metastatskim rakom želuca [13] - [15] pregled

Nedavno je uloga autophagy u razvoju raka i liječenja raka je dao velik problem [16] -. [18]. Beclin 1, ključni regulator formiranja autophagy, pronađen je ekspresiju u različitim vrstama raka u čovjeka [19] -. [22] pregled

Međutim, tu su još uvijek relativno malo studija koje su istraživali povezanost između Beclin 1 i rak želuca. Konkretno, nema podataka o njihovim učincima na prognozi kod raka želuca, još su izvijestili. Pregled

Ovaj Istraživani Beclin 1 ekspresija u želučanim stanicama raka, tkiva i njegovo kliničko značenje u bolesnika s limfni čvor-pozitivne želuca Rak. Nadalje, analizirali smo odnose između izraza Beclin 1 s prognozom kako bi se utvrdilo da li Beclin 1 može predvidjeti klinički ishod. Pregled

Materijali i metode

Stanične linije i uvjeti uzgoja pregled

ljudska stanične linije raka želučane HGC-27, MKN803, MGC-803, SGC-7901, MKN-28, BGC-823 bili su darovi od Peking University School of Oncology (Peking, NR Kina.) [23], [24]. Normalan želučane sluznice stanične linije, GES-1, dobiva se iz ljudske fetusa želučane sluznice epitela, dobiven iz Prvog SRODNE bolnice Sun Yat-Sen University [25]. Ove stanične linije su održavane u RPMI 1640 mediju (Invitrogen) uz dodatak 10% fetalnog goveđeg seruma (Hyclone), penicilinom (100 jedinica /mL) i streptomicina (100 jedinica /ml) na 37 ° C i 5% CO2 u vlažnom inkubatoru . pregled

Povratna transkripcija-PCR pregled

Ukupna RNA je ekstrahirana korištenjem TRIzol metode. RNA je tretirane s DNase i koristi se za sintezu cDNA sa slučajnim heksamera. Smjesa (25 ul ukupna) za PCR se sastojao od 0,5 ul cDNA, 0,5 U Taq DNA polimeraze, 2,5 ul 10 × PCR pufer, 2,5 mM dNTP smjese, i 50 pM smislenim i protivsmislenim zaglavljima svaki. Beclin 1 analizirane su sljedeće podloge: Beclin 1 5'CGTGGAATGGAATGAGAT3 '

zadnji primer 5' GTAAGGAACAAGTCGGTAT3 '; pregled

Actin: 5'AGCCATGTACGTAGCCATCC3' pregled

i 5 'GTGGTGGTGAAGCTGTAGC 3 '. pregled

Western blot analiza pregled

Stanice su lizirane u puferu za liziju i koncentracija proteina je određena prema metodi Bradford boje (bio-Rad Laboratories). Jednake količine ekstrakta stanica su bili podvrgnuti SDS-PAGE i prenesen na PVDF membranu (Bio-Rad). Ekspresija Beclin 1 je određen sa zec monoklonskim antitijelima (1:1000, Novus Biologicals, NB500-249) u skladu s predloženim protokolima proizvođača. Pregled

Pacijenti studirao pregled

U istraživanju je sudjelovalo 271 želuca pacijenata oboljelih od raka koji su podvrgnuti radikalnu resekcija za histološki potvrđenim karcinomom želuca od Cancer Center Sun Sveučilišta Yat-sen u razdoblju od siječnja 1998. do prosinca 2006. Mi smo dobili pristanak od svih sudionika u ovom istraživanju. Etički pristanak dobiven iz Sun Yat-sen University Cancer Center istraživanja Etičkog povjerenstva. Kriteriji prihvatljivosti uključeni histološki potvrđeno R0 resekcija, koji je definiran kao ne makroskopskim i mikroskopskim ostatnog tumora i postoperativnom vrijeme preživljavanja ≥6 mjeseci. Bolesnici s udaljenim metastazama ili preoperativne terapije ili limfni čvor-negativne su isključeni iz studije. Klasifikacija 7thTNM Zajednički odbor američkog protiv raka i Međunarodne unije protiv raka kriterija je bio korišten za patološku skele [26] pregled

Svi su bolesnici imali praćenja nakon završetka operacije na 6 do 12 mjeseci intervalima. Srednje razdoblje praćenja bilo je 38 (raspon 10-145) mjeseci za sve pacijente. Sveukupno preživljenje je definirana kao što je definiran kao razdoblje od vrijeme operacije i smrti, ili je cenzuriran na posljednjoj praćenja. Pregled

Imunohistokem pregled

Beclin 1 otkriven je sa zec monoklonskim protutijelom ( 1:100, Novus Biologicals, NB500-249). Svi uzorci tumora su dobiveni iz kirurški reseciranih želučanog raka prije adjuvantne terapije. Formalinom fixed, paraffin-embedded blokovi tkiva bile su pohranjene na sobnoj temperaturi, koja je identificirana sa identifikacijskim brojem. Postupci su učinili na sličan način kao prethodno opisanim postupkom [23]. U imunološki sekcije su ocijenjeni i tkiva iz humanih adenokarcinoma prostate služili su kao pozitivna kontrola. Svi slajdovi su ocijenjeni od strane dva neovisna promatrača na temelju udjela pozitivno obojenih stanica tumora i intenzitet bojenja. Prema nedavno opisanim kriterijima Ocjena Beclin 1 ekspresije, intenzitet membranskog bojanja varirao od slabe do jake: 0 (bez bojanja), 1 (slaba obojenost), 2 (umjerena bojenje) i i 3 (intenzivno obojenje) [27]. Postotak pozitivnih stanica tumora ocijenjena je kao 0 (< 5%), 1 (6% do 25%), 2 (26% do 50%), 3 (51% do 70%) i 4 (> 70% ). Indeks Bojenje je izračunata iznosu rezultat bojenja intenzitet i postotak postići pozitivne stanice. Imunoreaktivni postići jednak ili veći od 4 se koristi za klasifikaciju tumora s visokim Beclin 1 ekspresije, i rezultat bojenja ispod 4 je bio korišten za označavanje niske Beclin 1 izraza. Pregled

Statistički analizira

Sve statističke analize provedena su pomoću SPSS softvera (verzija 18 za Windows, SPSS, Chicago, IL). Razlike u P < .05 se smatralo da su statistički značajne. Udruga Beclin-1 ekspresije s raznim clinicalopathologic značajkama analiziran pomoću hi-kvadrat test. Krivulje preživljavanja su nacrtane po Kaplan-Meier metodi i usporediti je log-rank testa. COX Model proporcionalna opasnosti (unatrag, korak po korak) za multivarijatnog primijenjen je na čimbenike koji postignute značaj u Univarijatnom analizu. Pregled

Rezultati

Beclin 1 ekspresija u želučanim staničnim linijama karcinoma pregled

Prekomjerna ekspresija Beclin 1 je prijavljen u mnogi karcinomi. Njegov izraz status u želučanim staničnim linijama karcinoma, međutim, ostaje nejasno. Za određivanje razine ekspresije beclin-1 transkripata i proteina, polu-kvantitativno reverznom transkripcijom-PCR analize i western blot analize provedene su odvojeno u normalnim ljudskim epitelnim stanicama želuca (GES-1) i šest želučane tumorskih staničnih linija (HGC-27 MKN803, MGC-803, SGC-7901, MKN-28, BGC-823). otkrili smo da Beclin 1 mRNA i protein razina ekspresije doregulirani u svih šest želučanim staničnih linija raka želuca u usporedbi s normalnim stanicama epitela GES-1. (Sl. 1 A i B) pregled

Beclin jedan izraz u želučanom tkivu raka pregled

Da bi se odredilo beclin-1 mRNA i proteina u želučanog tkiva raka, 4 paru želučanog tkiva raka i noncancerous tkiva susjedna karcinoma lezije su detektirani reverznom transkripcijom-PCR analize i Western blotting analizama, odvojeno. Nađeno je da Beclin-1 u sva četiri uzorka tkiva tumora imala značajno višu ekspresiju obje mRNA i proteina razinama od onih u normalnom tkivu uz tumora iz istih pacijenata (sl. 1 C i D). Pregled

Beclin jedan izraz u rak želuca Netlogu

Da bi istražili da li beclin-1 mogla klinički korelaciji s želučanog raka progresije, izražavanja i substaničnog lokalizaciju Beclin 1 proteina otkrivena je imunohistokemijski u 271 parafin uklopljenih želučanog tkiva raka. Specifična Beclin 1 bojenje uglavnom nalaze na membrani-plazme i citoplazmi u stanicama raka, povremeno jezgre. Slika 2 prikazuje reprezentativne primjere Beclin 1 imunološkim. Od 271 bolesnika, 229 (84,5%) su Beclin jedan visoki tumori izraz. Pregled

Survival analize pregled

Pacijenti s Beclin 1 niske ekspresije karcinoma želuca bila je znatno kraće od 5 godina ukupne stope preživljavanja (OS , p = 0,011; Sl. 3) i bez znakova bolesti opstanak (DFS, p = 0,010; Slika 4) od onih s Beclin 1 visoke ekspresije one.. Izraz Beclin 1 usko je povezana s intravaskularne embolus (P = 0,017). Međutim, nije bilo značajnih korelacija između razine ekspresije od Beclin 1 i dobi, spolu, mjestu, veličini tumora, T klasifikaciji, N klasifikaciji, ili patološki stadij bolesnika s karcinomom želuca (Tablica 1). Beclin jedan izraz, stranica, intravaskularne embolus, patološka T klasifikacija, patološka N klasifikacija i patološki stadij bili neovisni prognostički faktori u univarijantne analize (podaci nisu prikazani) .U multivarijatnog, Beclin jedan izraz, intravaskularne embolus, mjesto i patološki stadij bili značajan neovisan prognostički čimbenik za vrijeme preživljavanja (tablica 2). pregled

Rasprava pregled

Autophagy je mehanizam samo-degradacija i povezane s progresijom tumora. Beclin 1, A orthologue sisavaca kvasac Atg6, igra ključnu ulogu u procesu kesicu nukleacije autophagy [28]. To je gen neophodna za prve faze autophagy [29] -. [30] pregled

Trenutni Studija je, po prvi put, pokazao Beclin 1 doregulirana na oba mRNA i proteina razine u šest želuca stanične linije raka u usporedbi s onima u normalnim želučanih epitelnim stanicama GES-1. Također smo otkrili Beclin 1 ekspresija je povišena u primarnim gastričnih tumora u usporedbi s četiri Spareni uzorci rak želuca susjedna tumora iz istih bolesnika reverznom transkripcijom-PCR i Western blot-a. Rezultati se razlikuju od onih prijavio u stanicama raka jetre i cervikalnih stanica raka, što su pokazali ekspresiju Beclin 1 značajno niži u usporedbi s odgovarajućim normalnim tkivima [31], [32]. Moguće je da explaination beclin-1 ekspresija u želučanim raka pridonosi indukciji autophagic stanična smrt, čime se dobiva selektivnu pritisak nadjača smrt stanica tijekom razvoja raka [27], [33]. Pregled

ovoj studiji , primijetili smo da 229 (84,5%) bolesnika imalo veliku ekspresiju Beclin 1 na 271 bolesnika s rakom želuca, u skladu s nalazom prethodne studije Ahn et al.Their podataka pokazala nikakav ili vrlo slab izraz Beclin1 u normalnim mukoznih stanica želudac imunohistokemijski [27]. Međutim, oni nisu istražiti izražaj beclin-1 na razini mRNA u staničnim linijama, niti istražiti svoju ulogu u prognozi. Pregled

Nakon toga je analizirao odnos između ekspresije beclin-1 i kliničke karakteristike pacijenata , Nije bilo značajne korelacije između ekspresije beclin-1 i dob, spol, T klasifikaciji, N klasifikacije, odnosno fazi bolesnika s rakom želuca. Zanimljivo, u našoj studiji, postojala je značajna povezanost između ekspresije beclin-1 i intravaskularnog embolus. To ukazuje da beclin-1 može se upotrijebiti kao markerski intravaskularne embolus u bolesnika s čvora-pozitivnih karcinoma želuca. Ova opažanja ukazuju na važnu ulogu beclin-1 u razvoju raka želuca. Pregled

Osim toga, pronašli smo nisko beclin-1 ekspresija je snažno povezana sa smanjenjem preživljavanje u bolesnika s karcinomom želuca ( P
= 0,011), a intravaskularne embolije podskup ( P pregled = 0,017). U multivarijatnog, Beclin-1 ekspresija zadržao svoju nezavisnost kao prognostički faktor ( P pregled = 0,044). Ovi rezultati ukazuju na potencijalno obećavajući korisnost beclin-1 kao prognostičkog i preživljavanje pokazatelja. Mehanizam još uvijek nije jasno. Alternativa objašnjenje za to može biti da beclin-1 ekspresija u želučani rak granica kromosomske nestabilnosti i smanjuje učestalost dodatne mutacije [34]. Pregled

Prema našim saznanjima, studija je prvo izvješće koje Beclin jedan je imao značajno veći izražaj u želučanim stanicama raka i tkiva u oba mRNA i razina proteina u odnosu na normalne kolegama. Štoviše, našli smo visoke beclin 1 ekspresija povezana je sa dužim ukupno preživljenje. Oba Jednosmjerna analiza i multivarijatna analiza pokazala Beclin 1 izričaj, site, intravaskularne embolije i patološki stadij bili neovisni prognostički čimbenici. Rezultati jasno ukazuju da Beclin 1 ima potencijalnu ulogu u nastanku tumora raka želuca. To bi mogla biti obećavajuća biomarkera i roman terapijske strategije u bolesnika s limfnih čvorova-pozitivnih karcinoma želuca. Također su potrebna daljnja istraživanja kako bi se objasnio mehanizam kojim autophagy glumac Beclin 1 je uključen u razvoj i progresiju raka želuca. pregled

• PLoS ONE: Interakcija između GSTP1 Val alela i H. pylori infekcije, pušenje i konzumiranja alkohola i rizik od raka želuca među kineski Population
• PLoS ONE: urođene imunosti i ne-Hodgkinov limfom (NHL) srodnih gena u ugniježdenom Case Study-kontrole za rak želuca Risk