Абстрактный
Фон
<р> Beclin 1 является главным действующим лицом аутофагии. Выражение Beclin 1 и его прогностической роли в развитии рака желудка в значительной степени неизученными. Целью настоящего исследования является изучение экспрессии Beclin 1 в раковых клетках желудка, тканях и ее взаимосвязи с прогнозом.
Финансирование:. Эта работа Работа выполнена при поддержке медицинского научного фонда провинции Гуандун (№ 2010B031600071). Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов
Введение
<р> рак желудка остается серьезной проблемой общественного здравоохранения во всем мире, особенно в странах Восточной Азии, возрастная стандартизованный показатель заболеваемости > 20 на 100000 [1]. Для поздних стадий рака желудка, его прогноз остается низким, по оценкам, общий показатель 5-летняя выживаемость составляет 25% или менее [2], [3]. Лимфоузлов метастаз является самым мощным прогностическим индикатором следующие лечебной резекции [4] - [7]. Около 75% пациентов имеют продвинутых лимфоузлов рак желудка, чей прогноз был значительно хуже, чем у тех, кто с лимфоузлов болезни [4].
<Р> В предыдущих исследованиях, мы обнаружили положительное отношение лимфатических узлов является независимым прогностическим индикатором для пациентов с поражением лимфатических узлов положительным раком желудка и внутрибрюшинного химиотерапии может быть полезным [8], [9]. Тем не менее, фундаментальный шаг на пути к повышению выживаемости пациентов с лимфоузел-положительным раком желудка лежит в более глубокому пониманию биологического поведения опухоли и поиска возможных целей для индивидуальной терапии [10], [11]. Например, человеческий рецептор эпидермального фактора роста 2 (HER2) стал теперь новый маркер рака желудка следующие доказательства на основе принципов [12] .Adding трастузумаба к стандартной химиотерапии может изменить плохую выживаемость пациентов с HER2-положительным метастатическим раком желудка [13] - [15]
<р> в последнее время роль аутофагии в развитии рака и лечения рака было уделено большое беспокойство [16] - [18].. Beclin 1, ключевым регулятором формирования аутофагии, была обнаружена избыточная экспрессия в различных злокачественных опухолях человека [19] - [22].
<Р> Тем не менее, есть все еще относительно небольшое число исследований, изучавших связь между Beclin 1 и рак желудка. В частности, отсутствуют данные относительно их влияния на прогноз при раке желудка, до сих пор не сообщалось.
<Р> Настоящее исследование изучало Beclin 1 выражение в желудочном раковых клеток, тканей и его клиникопатологическими значение у пациентов с лимфоузел-положительным желудка рак. Кроме того, мы проанализировали взаимосвязь между выражением Beclin 1 с прогнозом, чтобы определить, может ли Beclin 1 предсказать клинический исход.
Клеточные линии и условия культивирования
<р> желудка человека раковых клеток линии ТЖК-27, MKN803, MGC-803, SGC-7901, MKN-28, КУП-823 были подарки из Пекинского университета школы онкологии (Пекин, Китай PR.) [23], [24]. Нормальной слизистой оболочки желудка клеточная линия, GES-1, полученный из человеческой эмбриональной эпителия слизистой оболочки желудка, была получена из первой филиал больницы Сунь Ятсена университета [25]. Эти клеточные линии поддерживали в среде RPMI 1640 (Invitrogen), дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки (Hyclone), пенициллином (100 ед /мл) и стрептомицином (100 ед /мл) при 37 ° С и 5% CO2 в увлажненном инкубаторе .
с обратной транскрипцией PCR
<р> Общую РНК экстрагировали с использованием метода TRIzol. РНК подвергали предварительной обработке с ДНКазой и использовали для синтеза кДНК со случайными гексамерах. Смесь (25 мкл всего) для ПЦР состояла из 0,5 мкл кДНК, 0,5 U Taq ДНК-полимеразы, 2,5 мкл 10 × ПЦР буфера, 2,5 мМ дНТФ смеси и 50 чувств пМ и антисмыслового праймеров каждый. Beclin 1 были проанализированы с помощью следующих праймеров: Beclin 1 5'CGTGGAATGGAATGAGAT3 '
<р> обратный праймер 5' GTAAGGAACAAGTCGGTAT3 ';
<р> актина: 5'AGCCATGTACGTAGCCATCC3'
<р> и 5 'GTGGTGGTGAAGCTGTAGC 3 '.
Вестерн-блот-анализ
<р> Клетки лизируют в буфере для лизиса и концентрацию белка определяли методом красителя Брэдфорда (Bio-Rad Laboratories). Равные количества клеточного экстракта, подвергали SDS-PAGE и переносили на PVDF мембрану (Bio-Rad). Выражение Beclin 1 определяли с помощью моноклональных антител кролика (1:1000, Novus биологические препараты, NB500-249) в соответствии с предлагаемыми протоколами изготовителя.
Все статистические анализы были проведены с использованием программного обеспечения SPSS (версия 18 для Windows; SPSS, Чикаго, Иллинойс). Различия в P &Лт; .05 считались статистически значимыми. Ассоциация Beclin-1 экспрессии с различными clinicalopathologic функциями анализировали с использованием критерия хи-квадрат. Кривые выживаемости были построены по методу Каплана-Мейера и сравнивались с помощью теста лог-ранга. Модель Кокса пропорционального риска (назад, ступенчато) для многовариантного анализа был применен для факторов, которые достигли значения в univariable анализа.
Beclin 1 выражение в желудочном линиях раковых клеток
<р> Гиперэкспрессия Beclin 1 сообщалось во многих видов рака. Его статус выражение в желудочном линиях раковых клеток, однако, остается неясным. Для того, чтобы определить уровни экспрессии Beclin-1 транскриптов и белка, полуколичественного обратного анализа транскрипции-ПЦР и вестерн-блоттинга были проведены отдельно в нормальных эпителиальных клеток желудка человека (GES-1) и шести желудочных линий раковых клеток (ТЖК-27, MKN803, MGC-803, SGC-7901, MKN-28, КУП-823). Мы обнаружили, что Beclin 1 мРНК и белка уровень экспрессии повышающей регуляции во всех шести желудочных линии раковых клеток по сравнению с нормальными эпителиальных клеток желудка ГЭС-1. (Рис. 1 А и В)
Beclin 1 выражение в желудочном раковых тканей
<р> Для определения Beclin-1 мРНК и экспрессию белка в желудочном раковых тканей, 4 парные желудочные раковые ткани и незлокачественных ткани, прилежащие к раку повреждения были обнаружены с помощью обратного анализа транскрипции-ПЦР и вестерн-блоттинга, отдельно. Было установлено, что Beclin-1 во всех четырех образцах опухолевой ткани, имели значительно более высокую экспрессию обоих уровней мРНК и белка, чем в нормальной ткани, прилежащей к опухоли из одних и тех же пациентов (рис. 1 C и D).
Beclin 1 выражение в желудочном
рака
Для того, чтобы исследовать вопрос о том клинически может коррелировать Beclin-1 с прогрессированием рака желудка, экспрессии и внутриклеточной локализации Beclin 1 белка был обнаружен иммуногистохимии в 271 залитых парафином желудка раковых тканей. Удельное Beclin 1 окрашивание в основном найдены на мембранно-плазмы и цитоплазмы в раковых клетках, время от времени ядра. На рисунке 2 показаны характерные примеры Beclin 1 иммунным окрашиванием. Из 271 пациентов, 229 (84,5%) были Beclin 1 высокие опухоли экспрессии.
У пациентов с Beclin 1 низкая экспрессия рака желудка показали значительно более короткие 5-летняя общая выживаемость (OS , р = 0,011;. рис 3) и безрецидивная выживаемость (БРВ, р = 0,010; рис 4), чем те, с 1 Beclin высокой экспрессии из них.. Выражение Beclin 1 тесно связана с внутрисосудистым эмбола (P = 0,017). Тем не менее, не было никакой существенной корреляции между уровнем экспрессии Beclin 1 и возраста, пола, сайт, размер опухоли, T, N классификации классификации, или патологической стадии рака желудка у пациентов (таблица 1). Beclin 1 выражение, сайт, внутрисосудистого эмболии, патологическая T классификация, патологическая N классификации и патологической стадии были независимыми прогностическими факторами однофакторного анализа (данные не показаны) .в многовариантного анализа, Beclin 1 выражение, внутрисосудистого эмболии, сайт и патологической стадии были значимыми независимыми прогностическим фактором выживаемости (таблица 2).
Обсуждение
<р> Аутофагия представляет собой механизм, с собственной деградации и связан с опухолевой прогрессии. Beclin 1, а ортолог млекопитающих дрожжей Atg6, играет решающую роль в процессе пузырек нуклеации аутофагии [28]. Это ген незаменим для первых фаз аутофагией [29] - [30].
<Р> Данное исследование, в первый раз, показал Beclin 1 повышающей регуляции на обоих уровней мРНК и белка в шести желудка линии раковых клеток по сравнению с теми, в нормальных эпителиальных клеток желудка ГЭС-1. Мы также показали выражение Beclin 1 повышается в первичных опухолях желудка по сравнению с четырьмя парными образцов желудочного рака, прилегающих к опухоли из одних и тех же пациентов путем обратной транскрипции-ПЦР и Вестерн-блоттинга. Результаты отличаются от описанных в раковых клетках печени и рака шейки матки клеток, которые показали Beclin 1 выражение значительно ниже, по сравнению с соответствующими нормальными тканями [31], [32]. Возможно, что объяснений Beclin-1 выражение в рака желудка способствуют индукции аутофагической гибели клеток, тем самым производя селективное давление, чтобы переопределить гибель клеток во время развития рака [27], [33].
<Р> В настоящем исследовании , мы обнаружили, что 229 (84,5%) пациентов имели высокую экспрессию Beclin 1 в 271 больных раком желудка, в соответствии с выводами предыдущего исследования по данным Ahn и др al.Their показали отсутствие или очень слабая экспрессия Beclin1 в нормальных клетках слизистой желудка с помощью иммуногистохимии [27]. Тем не менее, они не исследовали экспрессию Beclin-1 на уровне мРНК в клеточных линиях, и не исследовать его роль в прогнозе.
<Р> Затем мы проанализировали взаимосвязь между выражением Beclin-1 и клинических характеристик пациентов , Там не было никакой значимой корреляции между экспрессией Beclin-1 и возраста, пола, T, N классификации классификации, или стадии больных раком желудка. Интересно, в нашем текущем исследовании, существует значительная связь между выражением Beclin-1 и внутрисосудистого эмболии. Это предполагает, что Beclin-1 может быть использован в качестве маркера внутрисосудистого эмболии у пациентов с поражением лимфатических узлов положительным раком желудка. Эти наблюдения подчеркивают важную роль Beclin-1 в развитии рака желудка.
<Р> Кроме того, мы обнаружили, низкий Beclin-1 выражение было в значительной степени связано со снижением выживаемости больных раком желудка ( P
= 0,011) и внутрисосудистого эмбола подмножество ( P
= 0,017). В многофакторном анализе, Beclin-1 выражение сохранила свою независимость как прогностический фактор ( P
= 0,044). Эти результаты свидетельствуют о потенциально многообещающий полезность Beclin-1 в качестве прогностического и выживания индикатора. Этот механизм до сих пор не ясна. Альтернативное объяснение этому может быть то, что Beclin-1 выражение в рак желудка пределы хромосомной нестабильности и уменьшает частоту дополнительных мутаций [34].
<Р> Насколько нам известно, исследование является первым сообщением, что Beclin 1 имел наиболее высокий уровень экспрессии в клетках рака желудка и тканей на обоих мРНК и уровня белка по сравнению с их нормальным аналогами. Кроме того, мы обнаружили высокий Beclin 1 выражение было связано с более общей выживаемости. Оба однофакторный анализ и многомерный анализ показал Beclin 1 выражение, сайт, внутрисосудистого эмболии и патологической стадии являются независимыми прогностическими факторами. Результаты убедительно показывают, что Beclin 1 имеет потенциальную роль в онкогенеза рака желудка. Это может быть перспективным биомаркером и новой терапевтической стратегии для пациентов с лимфоузлов-положительным раком желудка. Кроме того, необходимы дальнейшие исследования для выяснения механизма, с помощью которого аутофагия актер Beclin 1 участвует в развитии и прогрессии рака желудка.
Мужчины, которые едят йогурт два раза в неделю, реже заболевают раком кишечника.
Генетически измененные кишечные бактерии снижают риск развития колоректального рака у мышей - результаты исследования
Исследование предполагает связь между употреблением пробиотиков и «затуманенностью мозга».
Хронический кашель можно облегчить с помощью нового препарата
DeNovix объявляет победителя конкурса на спектрофотометр / флуорометр Platinum DS11 FX +
Иммунные клетки кишечника могут быть ответственны за изменения метаболизма, находит исследование
Оральный секс может вызвать бактериальный вагиноз
Новое исследование, опубликованное в журнале PLOS Биология выявил, что различные микробные популяции могут способствовать колонизации влагалища патогенными микроорганизмами, что, в свою очередь, мож
Обычный грибок, обнаруженный на коже, может вызвать воспалительное заболевание кишечника.
Терапия, направленная на определенные комменсальные грибы, может предоставить новый способ лечения воспалительного заболевания кишечника (ВЗК), по мнению исследователей Лос-Анджелеса. Фон |
Белок SARS-CoV N вызывает выработку IFN-β, провоцируя убиквитинирование RIG-I,
находит исследование Многие представители семейства Coronaviridae, такие как ближневосточный респираторный синдром (MERS), тяжелый острый респираторный синдром (ОРВИ), и тяжелый острый респираторный с