PLoS ONE: Beclin-1 išraiška yra reikšmingas prognostinis Survival Sergančiųjų limfmazgių teigiamas Skrandžio Cancer

Anotacija

Fonas

Beclin 1 yra pagrindinis aktorius autofagija. Iš Beclin 1 ir jo prognostinės vaidmenį skrandžio vėžiu išraiška yra labai neištirta. Šio tyrimo tikslas ištirti beclin 1 skrandžio vėžio ląstelių, audinių ir jos santykio su prognozėmis išraiška.

Metodai

iš Beclin 1 išraiška buvo aptiktas 271 egzempliorių limfos mazgas teigiami skrandžio vėžiu sergantiems pacientams imunohistocheminiu. Iš Beclin 1 išraiškos clinicopathologic funkcijų ir išlikimo skrandžio vėžio ryšys buvo tiriamas. Beclin-1 ekspresija skrandžio vėžio ląstelių linijų ir klinikinių mėginių, taip pat nustatytas taikant atvirkštinės transkripcijos-PGR ir Imunoblotingo.

Rezultatai

Beclin 1 yra iki reguliuojama tiek mRNR ir baltymų kiekiai šeši skrandžio vėžio ląstelių linijas, palyginti su įprastomis skrandžio gleivinės ląstelių linija (GES-1). Iš Beclin-1 ekspresija skrandžio klinikinių mėginių taip pat yra didesnis nei gretimose noncancerous audiniuose. Iš 271 pacientų, 229 (84,5%) buvo Beclin 1 aukšto raiškos navikų imunohistocheminiu. Beclin 1 išraiška yra glaudžiai susijęs su intravaskulinės embolija. Kaplan-Meier analizė parodė, aukštos beclin 1 išraiška buvo susijęs su ilgesniu bendro išgyvenamumo. Tiek vienmatės analizės ir daugiamatis analizė parodė, kad Beclin 1 išraiška buvo nepriklausomi prognostiniai veiksniai pacientams, sergantiems limfmazgius skrandžio vėžio.

Išvados

Mūsų išvados aiškiai rodo, kad Beclin 1 turi potencialų vaidmenį tumorigenesis skrandžio vėžio ir gali būti perspektyvus biologinis prognozuoti pacientų prognozę su limfmazgių teigiamas skrandžio vėžio. Jis taip pat gali tarnauti kaip naują terapinį tikslą skrandžio vėžio gydymo

nurodomoji dalis:. Geng Q R Xu D-Z, jis L-j, Lu J-B Zhou Z W Žano Y K et al. (2012) Beclin-1 išraiška yra reikšmingas prognostinis Survival Sergančiųjų limfmazgio teigiamas skrandžio vėžio. PLoS vieną iš 7 (9): e45968. Doi: 10,1371 /journal.pone.0045968

redaktorius: Alejandro H. Corvalán, Pontificia Universidad Catolica de Čilė, Čilė

Įstojo: Balandžio 4, 2012 m Priimtas rugpjūčio 23, 2012 m Paskelbta rugsėjo 27, 2012

Visos teisės saugomos: © Geng et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis darbas parėmė medicinos mokslo fondo Guangdong provincijoje (Nr 2010B031600071). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Skrandžio vėžys išlieka svarbia visuomenės sveikatos problema visame pasaulyje, specialiai Rytų Azijos šalyse amžių standartizuotas sergamumas yra > 20 100000 [1]. Dėl išplitusiu skrandžio vėžiu, jo prognozės vis dar prastas, su numatoma bendra 5 metų išgyvenamumas yra 25% ar mažiau [2], [3]. Limfmazgių metastazės yra galingiausias prognostinė rodiklis po gydomojo rezekcija [4] - [7]. Apie 75% pažangių pacientų turi limfmazgius skrandžio vėžys, kurio prognozės buvo gerokai blogiau, nei tiems, kurie su limfmazgius neigiamas ligos [4].

ankstesnių tyrimų, mes nustatėme teigiamą limfmazgis santykis yra nepriklausoma prognostinė rodiklis sergantiesiems limfmazgius skrandžio vėžio ir pilvaplėvės ertmę, chemoterapija gali būti naudinga [8], [9]. Tačiau esminis žingsnis gerinant pacientų išgyvenamumą su limfmazgių-teigiamas skrandžio vėžio slypi didinti supratimą apie naviko biologinio elgesio ir ieškoti galimų tikslų individualų gydymą [10], [11]. Pavyzdžiui, žmogaus epidermio augimo faktoriaus receptoriaus 2 (HER2) ekspresija tapo dabar nauja žymeklis skrandžio vėžio po įrodymais pagrįstos principais [12] .Adding trastuzumabu į standartinę chemoterapiją gali pakeisti prastą išgyvenamumo pacientams, kurių HER2 teigiamas skrandžio vėžiui [13] - [15]

Neseniai autofagija vėžio vystymąsi ir vėžio gydymo vaidmuo buvo skiriamas didelis rūpestis [16] - [18].. Beclin 1, pagrindinis reguliatorius autofagija formavimas, buvo nustatyta padidėjusi į žmogaus vėžio įvairovė [19] - [22].

Tačiau yra dar palyginti nedaug tyrimų, kurie tyrė asociaciją tarp Beclin 1 ir skrandžio vėžys. Visų pirma, dar nebuvo nustatyta jokių duomenų apie jų poveikį prognozės skrandžio vėžio.

Šis tyrimas nagrinėjo Beclin 1 išraišką skrandžio vėžio ląstelių, audinių ir jo clinicopathologic reikšmingas pacientams su limfmazgių-teigiamas skrandžio vėžys. Be to, mes analizavo tarp Beclin 1 išraiškos su prognozėmis santykius, siekiant nustatyti, ar Beclin 1 gali klinikinei baigčiai.

Medžiagos ir metodai

Mobilaus ryšio linijų ir auginimo sąlygos

žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijas HGC-27, MKN803, MSV-803, SGC-7901, MKN-28, BGC-823 buvo dovanos iš Pekino universiteto Onkologijos (Pekinas, Kinija). [23], [24]. Normalus skrandžio gleivinės ląstelių linija, GES-1, kilęs iš žmogaus vaisiaus skrandžio gleivinės epitelio, buvo gauta iš pirmasis filialas ligoninės Sun Yat-Sen universiteto [25]. Šie ląstelių linijos ir buvo išlaikytos RPMI 1640 terpė (Invitrogen), papildytoje su 10% vaisiaus galvijų serumo (Hyclone), penicilinui (100 vienetų /ml) ir streptomicino (100 vienetų /ml) 37 ° C temperatūroje ir 5% CO2 drėgmėje, inkubatoriuje .

atvirkštinės transkripcijos-PGR

viso RNR išskirta naudojant TRIzol metodą. RNR buvo iš anksto apdoroti DNaze ir naudojamas sintezei su heksamerų. Mišinys (25 pL, kad bendras) PGR sudarė 0,5 mikrol, kDNR, 0,5 U Taq DNR polimerazės, 2,5 pL 10 × PGR buferio, 2,5 mM trifosfato mišinio, ir 50 pM, jutimo ir priešprasmės pradmenų kiekvienas. Beclin 1 buvo analizuojami šie gruntai: Beclin 1 5'CGTGGAATGGAATGAGAT3 "

atvirkštinės gruntas 5 'GTAAGGAACAAGTCGGTAT3";

Actin: 5'AGCCATGTACGTAGCCATCC3 "

ir 5' GTGGTGGTGAAGCTGTAGC 3 ".

Western blot analizė

Ląstelės buvo lizuojamos lizuojančiame buferyje ir baltymo koncentracija, buvo nustatomas pagal Bradfordo dažų metodą (Bio-rad Laboratories). Lygios sumos ląstelių ekstrakto buvo atliktas ant SDS-PAGE ir perkelti į PVDF membrana (Bio-Rad). Išraiška Beclin 1 nulėmė su triušio monokloninis antikūnas (1:1000, Novus biologinių vaistų, NB500-249) pagal gamintojo siūlomų protokolus.

tirtų pacientų

Tyrimas susidėjo iš 271 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, kuriems buvo atlikta radikali rezekcija dėl histologiškai patvirtinta skrandžio karcinoma nuo vėžio centro Sun Yat-sen universiteto nuo 1998 sausio ir 2006 m Gavome informuotą sutikimą iš visų dalyvaujančių šiame tyrime dalyviai. Etikos patvirtinimas buvo gautas iš Sun Yat-sen Universiteto Cancer Center tyrimų etikos komitetas. Tinkamumo kriterijai apėmė histologiškai patvirtinta R0 rezekcijos, kuris buvo apibrėžiamas kaip be makroskopinių ir mikroskopinių likutinės naviko ir pooperacinio išgyvenamumo laiko rodmuo yra ≥ 6. mėnesius. Pacientai, kurių tolimų metastazių ar Priešoperacinės terapijos ar limfmazgiuose neigiami buvo pašalinti iš tyrimo. 7thTNM klasifikacija pagal Amerikos jungtinio komiteto vėžio ir Tarptautinės Sąjungos kovos su vėžiu kriterijus buvo naudojamas patologinis sustojimo [26]

Visi pacientai turėjo tolesnių po operacijos praėjus 6 iki 12 mėnesių intervalais.; Mediana iki laikotarpis buvo 38 (nuo 10 iki 145) mėnesiai visiems pacientams. Bendras išgyvenamumas buvo apibrėžtas kaip buvo apibrėžiama kaip skirtumas tarp operacijos ir mirties laiką ar buvo cenzūruojamas paskutinę tolesnių.

imunohistocheminis

Beclin 1 buvo aptiktas su triušio monokloninis antikūnas ( 1:100, Novus biologinių vaistų, NB500-249). Visi naviko egzemplioriai buvo gauti iš chirurginiu rezekcijos skrandžio vėžio prieš pagalbinį gydymą. Formalinu fiksuoto, parafino-patalpinto audinio blokai buvo laikomi žymimas identifikacijos numeriu, kambario temperatūroje. Procedūros buvo padaryta panašiai kaip ir metodo anksčiau aprašytą [23]. Į immunostained dalys buvo įvertintos ir audiniai iš žmogaus prostatos adenokarcinomos tarnavo kaip teigiamą kontrolę. Visos skaidrės buvo įvertinti dviejų nepriklausomų stebėtojų grindžiamų teigiamai tamsintas vėžinių ląstelių ir intensyvumo dažymo proporcingai. Pagal neseniai aprašytų kriterijų įvertinimas Beclin 1 išraiškos, iš membranos nusidažo intensyvumas svyravo nuo silpnos iki stiprios: 0 (ne dažymo), 1 (silpnas dėmių atsiradimas), 2 (vidutinio dėmių atsiradimas) ir ir 3 (intensyvi dėmių atsiradimas) [27]. Teigiamų vėžinių ląstelių procentas pelnytas kaip 0 (< 5%), 1 (6% iki 25%), 2 (nuo 26% iki 50%), 3 (51% iki 70%) ir 4 (> 70% ). Dažymo puslapis buvo apskaičiuojamas sudedant Dažymo intensyvumo rezultatą ir teigiamos ląstelės rezultatas procentais. Imunoreaktyvi rezultatas lygus ar didesnis kaip 4 buvo naudojamas klasifikuoti navikai su dideliu Beclin 1 išraiškos ir dažymo rezultatas žemiau 4 buvo naudojamas nurodyti žemą Beclin 1 išraišką.

statistines analizes

Visi statistines analizes buvo atlikta naudojant SPSS programinę įrangą (versija 18 for Windows; SPSS, Čikaga, IL). buvo laikomi .05 būti statistiškai reikšmingas; Skirtumai p <. Iš Beclin-1 išraiškos su įvairiomis clinicalopathologic funkcijų asociacija buvo analizuojami naudojant chi kvadrato testas. Išgyvenimo kreivės buvo brėžiamas pagal Kaplan-Meier metodu ir lyginti žurnalas rango testą. Cox proporcinės rizikos modeliu (atgal, palaipsniui) už kintamųjų analizei buvo taikomas veiksnių, pasiektus reikšmę univariacinį analizė.

Rezultatai

Beclin 1 ekspresija skrandžio vėžio ląstelių linijų

Padidėjusi Beclin 1 buvo pranešta daugelio vėžio. Jo išraiška statusas skrandžio vėžio ląstelių linijas, tačiau lieka neaišku. Norėdami nustatyti raiškos lygius beclin-1 nuorašai ir baltymų, pusiau kiekybiniu atvirkštinės transkripcijos-PGR analizės ir Imunoblotingo analizė buvo atlikta atskirai normalios žmogaus skrandžio epitelinių ląstelių (GES-1) ir šešių skrandžio vėžio ląstelių linijų (HGC-27, MKN803, MSV-803, SGC-7901, MKN-28, BGC-823). Mes nustatėme, kad Beclin 1 mRNR ir baltymų ekspresijos lygis iki reguliuojama visuose šešiuose skrandžio vėžio ląstelių linijų, palyginti su normaliomis skrandžio epitelinių ląstelių GES-1. (1 pav. A ir B)

Beclin 1 ekspresija skrandžio vėžio audiniuose

Norėdami nustatyti beclin-1 mRNR ir baltymų raiškos skrandžio vėžio audiniuose, 4 suporuotas skrandžio vėžys audinius ir noncancerous audinius gretimų į vėžio pakitimai buvo aptikta atvirkštinės transkripcijos-PGR metodu ir Vakarų blotingo analizės, atskirai. Buvo nustatyta, kad Beclin-1 visose keturiose naviko audinių pavyzdžių turėjo žymiai didesnę ekspresiją tiek mRNR ir baltymų koncentracijos nei nustatytos normalaus audinio greta navikų iš tų pačių pacientų (1 pav. C ir D).

Beclin 1 ekspresija skrandžio vėžio

ištirti, ar beclin-1 gali kliniškai koreliuoja su skrandžio vėžio progresavimą, saviraiškos ir pavienių ląstelių tyri- mas lokalizacijos Beclin 1 baltymo buvo aptiktas imunohistocheminiu 271 parafino įterptųjų skrandžio vėžio audiniuose. Konkretus Beclin 1 dažymo daugiausia buvo rasti ant membranos plazmoje ir citoplazmos į vėžines ląsteles, kartais branduolį. 2 paveikslas rodo atstovybes pavyzdžių Beclin 1 imunodažymu. Iš 271 pacientų, 229 (84,5%) buvo Beclin 1 aukštas išraiška navikai.

išgyvenimo analizė

Pacientams, sergantiems Beclin 1 mažas išraiška skrandžio vėžio parodė žymiai trumpesnius 5 metų bendras išgyvenamumas kainos (OS p = 0,011; 3 pav.) ir liga išgyvenamumas (DFS, p = 0,010; 4 pav), nei su Beclin 1 aukšto raiškos tie.. Iš Beclin 1 išraiška yra glaudžiai susijęs su intravaskulinės embolija (p = 0,017). Tačiau nebuvo reikšminga koreliacija tarp ekspresijos lygį Beclin 1 ir amžių, lytį, svetainės, naviko dydį, T klasifikavimo, N klasifikavimo, ar patologinis etape skrandžio vėžiu sergančių pacientų (1 lentelė). Beclin 1 išraiška, svetainė, intravaskulinė embolija, patologinis, T klasifikacija, patologinis N. klasifikacija ir patologinis etapas buvo nepriklausomi prognostiniai veiksniai pagal vieną požymį analizės (duomenys nerodomas) .Be kintamųjų analizė, Beclin 1 išraiška, intravaskulinė embolija, svetainė ir patologinis etapas buvo reikšmingas nepriklausomos prognostinis faktorius išlikimo laiką (2 lentelė).

Diskusijos

autofagija yra savarankiškai degradacija mechanizmas ir susijęs su naviko progresavimo. Beclin 1, žinduolių orthologue mielių Atg6, vaidina lemiamą vaidmenį pūslelės užuomazgų proceso autofagija [28]. Ji yra genas, būtina per pirmuosius etapus autofagija [29] - [30].

dabartinis tyrimas yra, pirmą kartą, parodė, Beclin 1 yra iki-reguliuojama abiejų mRNR ir baltymų kiekiai šešių skrandžio vėžio ląstelių linijos, lyginant su tais, normaliomis skrandžio epitelinių ląstelių GES-1. Mes taip pat atskleidė, Beclin 1 išraiška, iš pradžių padidėja pirminių skrandžio navikų, palyginti su keturiais suporuotas skrandžio vėžio mėginių gretimų navikai iš tos pačios pacientų, skyriuje, atvirkštinės transkripcijos-PGR ir Imunoblotingo. Rezultatai skiriasi nuo tų, kurie pranešė, kepenų vėžio ląstelių ir gimdos kaklelio vėžio ląstelių, kuri parodė, Beclin 1 išraiška žymiai mažesnis palygintos su atitinkamomis normaliuose audiniuose [31], [32]. Galimas explaination yra tai, kad beclin-1 ekspresija skrandžio vėžio prisidėti prie autophagic ląstelių mirties sukėlimo, taip gaminant selektyvus spaudimą nepaisyti ląstelių žūtį vystymosi metu vėžį [27] [33].

Šios studijos , mes nustatėme, kad 229 (84,5%) pacientai turėjo aukštą raišką Beclin 1 iš 271 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, atsižvelgiant į ankstesnio tyrimo duomenimis Ahn ET al.Their duomenų išvadai parodė ne arba labai silpnas išraiška Beclin1 normaliomis gleivinės ląstelių skrandžio imunohistocheminiu [27]. Tačiau jie nebuvo ištirti beclin-1 išraiška iRNR lygio ląstelių linijų, nei ištirti jos vaidmenį prognozė.

tada analizavo tarp saviraiškos santykius beclin-1 ir klinikinių charakteristikų pacientų , Nebuvo reikšminga koreliacija tarp beclin-1 ir amžių, lytį, T klasifikavimo, N klasifikavimo, ar etapą pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu išraiška. Įdomu, mūsų dabartinės tyrime buvo reikšmingas ryšys tarp beclin-1 ir intravaskulinės embolija išraiška. Ji tai rodo, kad beclin-1 gali būti naudojamas kaip žymėtaisiais intravaskulinės embolija pacientams, sergantiems mazgas-teigiamas skrandžio vėžio. Šie pastebėjimai svarbų beclin-1 skrandžio vėžio vystymąsi.

Be to, mes nustatėme, mažai beclin-1 išraiška buvo stipriai susijęs su sumažėjusiu išlikimo skrandžio vėžiu sergančių pacientų ( P pervežimas = 0,011) ir intravaskulinė embolija poaibį ( P
= 0,017). Be kintamųjų analizė, Beclin-1 išraiška išlaikė savo nepriklausomybę, kaip prognostinis faktorius ( P
= 0,044). Šie rezultatai rodo, potencialiai perspektyvi naudingumą beclin-1 kaip prognostinis ir išgyvenimo rodiklis. Mechanizmas yra vis dar nėra aišku. Alternatyva paaiškinimas, tai gali būti, kad beclin-1 ekspresija skrandžio vėžio ribos chromosomų nestabilumo ir sumažina papildomų mutacijos [34] dažnį.

Mūsų žiniomis, tyrimas yra pirmoji ataskaita, kad Beclin 1 buvo žymiai didesnis išraiška skrandžio vėžio ląstelių ir audinių tiek mRNR ir baltymų koncentracijos, lyginant su jų įprastomis kolegomis. Be to, mes nustatėme, aukštos beclin 1 išraiška buvo susijęs su ilgesniu bendro išgyvenamumo. Tiek vienmatės analizės ir daugiamatis analizė parodė Beclin 1 išraišką, svetainės, intravaskulinė embolija ir patologinis etapas buvo nepriklausomi prognostiniai veiksniai. Rezultatai aiškiai rodo, kad Beclin 1 turi potencialų vaidmenį Tumorigenesis skrandžio vėžio. Tai galėtų būti perspektyvi biologinis ir romano gydymo strategijas, pacientams, sergantiems limfos limfmazgius skrandžio vėžio. Tolesni tyrimai taip pat reikia paaiškinti mechanizmą, pagal kurį autofagija aktorius Beclin 1 yra dalyvauja rengiant ir progresavimo skrandžio vėžio.

• PLoS ONE: Sąveika tarp GSTP1 Val alelį ir H. pylori infekcija, rūkymas ir alkoholio vartojimo bei rizikos skrandžio vėžio tarp Kinijos gyventojų
• PLoS ONE: Įgimtas imunitetas ir Ne Hodžkino limfoma (NHL) Susiję genų įdėtos atvejo ir kontrolės tyrimas skrandžio vėžio riziką