PLoS One: Beclin-1 expressziója jelentős előrejelzője betegek túlélésének nyirokcsomó-pozitív Gyomor Cancer

absztrakt katalógusa

Háttér katalógusa

Beclin 1 egy főszereplőként autofágia. A kifejezés a Beclin 1 és prognosztikai szerepe a gyomorrák nagyrészt feltáratlan. A cél a jelen tanulmány célja, hogy megvizsgálja a kifejeződése Beclin 1 gyomorrákban sejteket, szöveteket és kapcsolata a prognózist. Katalógusa

Módszerek katalógusa

A kifejezés a Beclin 1 detektáltunk 271 példányai nyirokcsomó-pozitív gyomorrákos betegek immunohisztokémiával. A korreláció Beclin 1 kifejezés klinikopatológiai jellemzők és a túlélés a gyomorrák vizsgáltuk. Beclin-1 expresszió gyomorrák sejtvonalakon és klinikai mintákból is kimutattuk reverz transzkripciós PCR és Western blot. Katalógusa

Eredmények katalógusa

Beclin 1 up-szabályozott mRNS és fehérje szint hat gyomor rákos sejtvonalak képest normál gyomornyálkahártya sejtvonal (GES-1). A kifejezés a Beclin-1 gyomor klinikai mintákból is magasabb, mint azok a szomszédos nem-rákos szövetekben. A 271 beteg, 229 (84,5%) volt Beclin 1 nagy expressziós daganatok immunohisztokémiával. Beclin 1 expressziója szorosan kapcsolódik a intravaszkuláris embolus. Kaplan-Meier analízis magas Beclin 1 kifejeződése kapcsolódó hosszabb teljes túlélést. Mind egyváltozós analízis és többváltozós analízis kimutatta, hogy Beclin 1 expresszió független prognosztikai tényező a nyirokcsomó-pozitív gyomorrák. Katalógusa

Következtetések katalógusa

Eredményeink azt sugallják, hogy Beclin 1 egy potenciális szerepe tumorogenezisben gyomorrák, és lehet egy ígéretes biomarker előrejelzésére betegek prognózisát nyirokcsomó-pozitív gyomorrák. Azt is szolgálhat, mint új terápiás célpont gyomor rák kezelésére.

bevezető hivatkozás: Geng Q-R, Xu D-Z, Ő L-J, Lu J-B, Zhou Z-W, Zhan Y-Q, et al. (2012) Beclin-1 expressziója jelentős előrejelzője betegek túlélésének nyirokcsomó-pozitív gyomorrákban. PLoS ONE 7 (9): e45968. doi: 10,1371 /journal.pone.0045968 katalógusa

Szerkesztő: Alejandro H. Corvalan, Pontificia Katolikus Egyetem Chile, Chile katalógusa

Beérkezett: április 4, 2012; Elfogadva: augusztus 23, 2012; Megjelent: szeptember 27, 2012 katalógusa

Copyright: © Geng et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a munka támogatta a Medical Science Foundation Guangdong tartomány (No. 2010B031600071). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

a gyomorrák továbbra is komoly közegészségügyi problémát jelent világszerte, különösen a kelet-ázsiai országban, a korra standardizált incidencia ráta > 20 100.000 [1]. Az előrehaladott gyomorrák, a prognózis továbbra is gyenge, és ezáltal összességében körülbelül 5 éves túlélési arány 25% vagy annál kevesebb [2], [3]. Nyirokcsomómetastasis a legerősebb prognosztikai tényező alábbi kuratív rezekció [4] - [7]. Mintegy 75% -a fejlett betegek nyirokcsomó-pozitív gyomorrák, melynek prognózisa lényegesen rosszabbak voltak, mint azok, nyirokcsomó-negatív betegségben. [4] katalógusa

A korábbi tanulmányok azt találtuk pozitív nyirokcsomó arány független prognosztikus indikátor a nyirokcsomó-pozitív gyomorrák és intraperitoneális kemoterápia előnyös lehet [8], [9]. Azonban alapvető lépés javítja a betegek túlélési nyirokcsomó-pozitív gyomorrák rejlik mélyebb megértésével daganat biológiai viselkedése, és keresi a lehetséges célok egyéni terápia [10], [11]. Például a humán epidermális növekedési faktor receptor 2 (HER2) vált most egy új marker gyomorrák alábbi bizonyíték-alapú elvek [12] .Adding trastuzumab a szokásos kemoterápiás megváltoztathatja a szegény betegek túlélési HER2-pozitív metasztatikus gyomorrák [13] - [15]. katalógusa

az utóbbi időben, a szerepe az autofágia a daganatok kialakulásában és a rák kezelésére kapott nagy aggodalomra ad okot [16] - [18]. Beclin 1, kulcsfontosságú szabályozó autofágia képződés, találtak overexpresszió különféle emberi rákos megbetegedések [19] - [22].

Van azonban még mindig viszonylag kevés tanulmány, amely vizsgálta a szövetség között Beclin 1. és gyomorrák. Különösen nincs adat tekintetében hatásukat prognózis a gyomorrák, még nem számoltak be. Katalógusa

A jelen tanulmány vizsgálta Beclin 1 expresszió gyomorrák sejtek, szövetek és klinikopatológiai jelentősége betegeknél nyirokcsomó-pozitív gyomor- rák. Továbbá elemeztük a kapcsolatot a Beclin 1 expressziójának a prognózis, hogy meghatározza, hogy Beclin 1 lehet megjósolni a klinikai kimenetelt. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Sejtvonalak és tenyésztési körülmények katalógusa

az emberi gyomor rákos sejtvonalak HGC-27, MKN803, MGC-803, SGC-7901, MKN-28, BGC-823 volt ajándékokat Peking University School of Oncology (Peking, Kína). [23], [24]. A normál gyomornyálkahártya sejtvonal, GES-1, származó humán magzati gyomornyálkahártya hám, kapunk az első Affiliated Kórház Sun Jat-szen Egyetemen [25]. Ezeket a sejtvonalakat RPMI 1640 tápközegben (Invitrogen), kiegészítve 10% magzati marhaszérummal (Hyclone), penicillint (100 egység /ml) és sztreptomicin (100 egység /ml) 37 ° C-on és 5% CO 2-tartalmú nedvesített inkubátorban .

reverz transzkripciós PCR

Teljes RNS-t extraháltunk TRIzol módszerrel. Az RNS-t előkezeltük DNáz és használt cDNS-szintézishez véletlenszerű hexamerek. A keveréket (25 ul össz) PCR állt 0,5 ul cDNS, 0,5 U Taq DNS-polimeráz, 2,5 mikroliter 10 x koncentrált PCR-puffert, 2,5 mM dNTP keveréket, és 50 pM szensz és antiszensz primerek minden. Beclin 1 elemeztük következő primerek: Beclin 1 5'CGTGGAATGGAATGAGAT3 'katalógusa

reverse primer 5' GTAAGGAACAAGTCGGTAT3 '; katalógusa

Az aktin: 5'AGCCATGTACGTAGCCATCC3 "katalógusa

és 5' GTGGTGGTGAAGCTGTAGC 3 '.

Western-blot-analízis

a sejteket lizáltuk lízispufferben, és a fehérje koncentrációját határoztuk meg Bradford festék módszerrel (Bio-Rad Laboratories). Egyenlő mennyiségű sejtextraktumot vetettük alá SDS-PAGE és PVDF membránra (Bio-Rad). Expression of Beclin 1-ben határoztuk meg nyúl monoklonális antitesttel (1:1000, Novus Biologicals, NB500-249) alkalmazásával a gyártó által javasolt protokoll.

Betegek vizsgált

A vizsgálat abból állt, 271 gyomor rákos betegek átesett reszekcióra a szövettanilag igazolt gyomorrák: Cancer Center Szun Jat-szen Egyetem között 1998 januárja és 2006. december kaptunk tájékozott beleegyezése minden résztvevő részt ebben a vizsgálatban. Etikai jóváhagyást nyert Szun Jat-szen Egyetemen Cancer Center kutatás etikai bizottság. A jogosultsági feltételeket tartalmazza szövettanilag igazolt R0 reszekció, amely definíció szerint nincs makroszkopikus és mikroszkopikus reziduális tumor és posztoperatív túlélési idő ≥6 hónap. Betegek távoli áttétek vagy preoperatív kezelés vagy nyirokcsomó-negatív kizártuk a vizsgálatból. A 7thTNM besorolás az American Joint Committee on Cancer és a Nemzetközi Rákellenes Unió kritériumokat alkalmaztuk patológiai staging [26]. Katalógusa

Minden beteg nyomon követése a műtét után a 6-12 hónapos időközönként; Medián követési idő 38 (tartomány 10-145) hónap minden beteg esetében. A teljes túlélés definíció szerint definiáltuk közötti időszakban a műtét idején és a halál, vagy azt cenzúrázzák az utolsó nyomonkövetési. Katalógusa

Az immunhisztokémiai katalógusa

Beclin 1 mutattuk nyúl monoklonális antitesttel ( 1:100, Novus Biologicals, NB500-249). Minden daganatminták nyerték műtétileg eltávolított gyomorrák előtt adjuváns terápia. A formalinnal fixált, paraffinba ágyazott szövet blokkok tároltuk szobahőmérsékleten azonosított egy azonosító számot. Az eljárásokat végeztünk, hasonlóan a korábban leírt módszer [23]. A immunfestett metszeteket értékeltük és a szöveteket a humán prosztata adenokarcinómák szolgált pozitív kontrollként. Minden tárgylemezt értékeltük két független megfigyelők alapuló aránya a pozitívan festődő tumorsejtek és intenzitása festéssel. Szerint a közelmúltban ismertetett kritériumok értékelése Beclin 1 expresszió intenzitása membránfestôdést mozgott gyenge erős: 0 (nincs festés), 1 (gyenge festés), 2 (közepes festés) és és a 3. (intenzív festés) [27]. A százalékos pozitív tumorsejtek pontoztuk, mint 0 (< 5%), 1 (6% és 25%), 2 (26% és 50%), 3 (51% -ról 70%) és 4 (> 70% ). A festést indexet összeadásával a festés intenzitása pontszám és a pozitív sejtek százalékos aránya pontszámot. Az immunoreaktív pontszám egyenlő vagy nagyobb, mint a 4-es besorolásához felhasznált tumorok magas Beclin 1 expressziót, és egy festési pontszám 4 alatt volt, amely jelzi az alacsony Beclin 1 expresszió.

Statisztikai elemzések

Minden statisztikai elemzések végeztük SPSS szoftver (verzió 18 for Windows; SPSS, Chicago, IL). Különbségek a P < 0,05 tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Az egyesület Beclin-1 expresszió különböző clinicalopathologic funkciók alkalmazásával analizáltuk chi-négyzet próba alapján. Túlélési görbéket a Kaplan-Meier-módszerrel, és összehasonlítottuk a log-rank teszt. A Cox (visszafelé, lépésenként) többváltozós analízist végeztünk a tényezőket, elért jelentősége univariable elemzés. Katalógusa

Eredmények katalógusa

Beclin 1 expressziója gyomorrákban sejtvonalak katalógusa

overexpressziója Beclin 1 leírták számos rák. A kifejezés állapotát gyomor rákos sejtvonalakban azonban továbbra is tisztázatlan. Annak meghatározására, az expressziós szintek Beclin-1-transzkriptumok és a fehérje, fél-kvantitatív reverz transzkripciós PCR-analízis és a Western-blot-analízis végeztünk külön-külön a normál humán gasztrikus epiteliális sejtek (GES-1) és hat gyomor rákos sejtvonalat (HGC-27, MKN803, MGC-803, SGC-7901, MKN-28, BGC-823). Azt találtuk, hogy Beclin 1 mRNS és fehérje expressziós szintje fel-szabályozott mind a hat gyomor rákos sejtvonalak összehasonlítva normál gasztrikus epiteliális sejtek GES-1. (1. A és B) hotelben

Beclin 1 expressziója gyomorrákban szövetek katalógusa

Annak meghatározására Beclin-1 mRNS és fehérje expresszió gyomorrák szövetekben, 4 páros gyomorrák szövetek és rákos szövetekben szomszédos a rákos elváltozást mutattuk reverz transzkripció-PCR-analízissel és Western-blot elemzés, külön-külön. Azt találtuk, hogy Beclin-1 mind a négy tumorszövet minták lényegesen magasabb volt az expresszió mindkét mRNS és fehérje szinten, mint azok a normális szövetben szomszédos daganatok az azonos beteg (ábra. 1 C és D).

Beclin 1 expressziót gyomorrák

Annak vizsgálatára, hogy Beclin-1 lehetett klinikailag korrelálnak gyomorrák progresszió, expresszióját és szubcelluláris lokalizációját Beclin 1 protein volt kimutatható immunhisztokémiai 271 paraffinba ágyazott gyomorrák szövetekben. Specifikus Beclin 1 festődést többnyire megtalálható a membrán-plazma és a citoplazmában, a rákos sejtek, esetenként a sejtmagba. A 2. ábra reprezentatív példái Beclin 1 immunfestés. A 271 beteg, 229 (84,5%) volt Beclin 1 magas expressziós daganatok. Katalógusa

Túlélési analízis katalógusa

betegek Beclin 1 alacsony expressziója gyomorrákban szignifikánsan rövidebb 5 éves teljes túlélési arány (OS , p = 0,011; ábra. 3) és betegségmentes túlélés (DFS, p = 0,010; ábra. 4.), mint azok a Beclin 1 magas expressziós is. A kifejezés a Beclin 1 szorosan kapcsolódik a intravaszkuláris embolus (p = 0,017). Azonban nem volt szignifikáns összefüggés a expressziós szintjének Beclin 1 és az életkor, a nem, az oldalon, a daganat mérete, T osztályozás, N osztályozás, vagy kóros szakaszában gyomorrák beteg (1. táblázat). Beclin 1 kifejezés, telek, intravascularis embólia, kóros T besorolás, patológiai N besorolás és patológiai stádiuma független prognosztikai faktorok egyváltozós elemzésben (nem közölt adatok) .A többváltozós elemzés Beclin 1 kifejezés, intravascularis embólia, helyszín és patológiai stádium szignifikáns független prognosztikai tényező túlélési idő (2. táblázat). katalógusa

Vita katalógusa

az autofágia egy önálló degradáció mechanizmusát és összefügg a tumor progresszióját. Beclin 1, egy emlős ortológját élesztő Atg6, döntő szerepet játszik a vezikulum nukleációs folyamat autofágia [28]. Ez egy gén nélkülözhetetlen az első fázisait autofágia [29] - [30].

A jelenlegi tanulmány, az első alkalommal, azt mutatta, Beclin 1 felülszabályozott mind mRNS és fehérje szinten hat gyomor rákos sejtvonalak képest normál gyomornyálkahártya sejtek GES-1. Azt is kimutatta, Beclin 1 expresszálódása fokozódott primer gyomor tumorok képest négy párosított gyomorrákos mintákban szomszédos tumorok ugyanabból a betegek reverz transzkripció-PCR és Western-blottal. Az eredmények eltérnek jelentettek máj rákos sejtek és a méhnyakrák-sejtek, amely azt mutatta, Beclin 1 expressziója szignifikánsan alacsonyabb, mint a megfelelő normál szövetekhez [31], [32]. A lehetséges explaination az, hogy Beclin-1 expresszióját a gyomor rákos hozzájárulnak a indukciója autofág sejthalál, ezáltal szelektív nyomás, hogy felülbírálja a sejthalált a fejlesztés során a daganat [27], [33].

A jelen tanulmányban megfigyeltük, hogy a 229 (84,5%) betegnél magas expressziós Beclin 1 271 gyomorrákos betegek, összhangban azzal a megállapítással, az előző tanulmány Ahn et al.Their adatok azt mutatták, nem vagy csak nagyon gyenge kifejezés Beclin1 normál nyálkahártya sejtjeiben gyomor immunhisztokémiai [27]. Ezek azonban nem tárta fel a Beclin-1 expresszióját mRNS-szinten sejtvonalakon, sem vizsgálja szerepét a prognózist. Katalógusa

Ezután viszonyát elemezte kifejezése Beclin-1 és klinikai betegek tulajdonságait . Nem volt szignifikáns összefüggés a kifejezése Beclin-1 és az életkor, a nem, a T besorolás, N besorolás, illetve szakaszában gyomorrákos betegeknél. Érdekes, hogy a jelenlegi vizsgálatban nem volt szignifikáns összefüggés a kifejezése Beclin-1 és intravascularis embólia. Ez arra utal, hogy Beclin-1 lehetne használni, mint egy marker intravaszkuláris embolus a nyirokcsomó-pozitív gyomorrák. Ezek a megfigyelések kiemelik a fontos szerepét Beclin-1 a gyomorrák kialakulásával. Katalógusa

Továbbá azt találtuk, alacsony Beclin-1 expresszió szoros összefüggést mutatott csökkent túlélést gyomorrákos betegek ( P katalógusa = 0,011), és az intravascularis embólia részhalmaza ( P katalógusa = 0,017). A többváltozós elemzés, Beclin-1 expresszió megőrizte függetlenségét prognosztikai faktor ( P katalógusa = 0,044). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a potenciálisan ígéretes hasznosságát Beclin-1 prognosztikai és túlélési mutatója. A mechanizmusa még nem tisztázott. A másik magyarázat az lehet, hogy Beclin-1 expresszió gyomorrák határok kromoszómális instabilitás, és csökkenti a gyakoriságát újabb mutációt [34]. Katalógusa

Tudomásunk szerint a tanulmány az első olyan jelentés, amely Beclin 1 volt szignifikánsan magasabb expressziót gyomor rákos sejtek és a szövetek mind mRNS és fehérje szinten, mint a normális társaik. Sőt, azt találtuk, nagy Beclin 1 kifejeződése kapcsolódó hosszabb teljes túlélést. Mind egyváltozós analízis és többváltozós elemzés Beclin 1 kifejezés, telek, intravascularis embólia és patológiai stádiuma független prognosztikai tényezők. Az eredmények azt sugallják, hogy Beclin 1 egy lehetséges szerepét a tumorigenezisben gyomorrák. Ez lehet egy ígéretes biomarker és egy új terápiás stratégiák betegek nyirokcsomó-pozitív gyomorrák. További vizsgálatok is szükségesek, hogy tisztázza a mechanizmust, amellyel az autofágia színész Beclin 1 részt vesz a kialakulásában és progressziójában gyomorrák. Katalógusa

• PLoS One: kölcsönhatása GSTP1 Val allél és a H. pylori fertőzés, dohányzás, alkoholfogyasztás és a kockázat a gyomorrák között a kínai lakosság
• PLoS One: veleszületett immunitás és Non-Hodgkin limfóma (NHL) rokon gének egy eset-kontroll tanulmány gyomorrák kockázata