PLoS ONE: kalpaina /SHP-1 Interakcija by Honokiol vlaženje peritonejsku distribuciji rak želuca u nu /nu miševa

Sažetak pregled

Pozadina pregled

Honokiol, mali molekularni prirodni proizvod, već je prijavljen za aktiviranje apoptoze i spriječiti želučane nastanku tumora. Bilo honokiol inhibira angiogenezu i metastaze želučanih stanica raka ostaje nepoznat. Pregled

Metodologija /glavne nalaze

Mi smo testirali učinke honokiol na angiogeneze aktivnosti i peritonejsku širenje pomoću in vivo, ex vivo pregled i In vitro
analitički sustavi. Signalnih reakcije kod ljudskih stanica raka želuca, humane vaskularne endotelne stanice (HUVEC) i izolirane tumori su otkrivene i analizirani. U ksenografta želučane modelu tumora miša, honokiol značajno inhibira peritonealnoj širenje otkrio PET /CT tehnike. Honokiol također učinkovito prigušuje angiogeneze otkrio pilića korioalantonske membrane testu mišjeg Matrigel umetka testu, testu izdanaka endotela aorte prsten stanica štakora, te testa stvaranje cjevčica endotelnih stanica. Nadalje, honokiol učinkovito poboljšana pretvornik signala i aktivator transkripcije (STAT-3) defosforiliranje i inhibiran STAT-3 aktivnošću vezanja DNA u ljudskim stanicama raka želuca i HUVEC, koja je u korelaciji s up-regulaciji aktivnost i ekspresija proteina Src homologija 2 (SH2) -containing tirozin fosfataze-1 (SHP-1). inhibitor kalpaina-II i siRNA transfekcija značajno preokrenuti SHP-1 aktivnost na honokiol izazvanu. Smanjena STAT-3 fosforilacije i povećana SHP-1 ekspresija također su prikazani u izoliranim peritonealnom metastatskih tumora. Honokiol je također bio u stanju inhibirati VEGF generacije, koja bi mogla biti poništena od strane SHP-1 siRNA ubacivanja. Pregled

Zaključci /Značaj pregled

Honokiol povećava ekspresiju i aktivnost SPH-1 koji dodatno deaktivira STAT3 put. Ovi rezultati sugeriraju da honokiol je roman i potentni inhibitor angiogeneze i peritonejsku širenje želuca stanica raka, pruža podršku za aplikacije potencijala honokiol u želučanom terapije protiv raka pregled

Izvor:. Liu SH, Wang KB, Lan KH, Lee WJ, Pan HC, Wu SM, et al. (2012) kalpaina /SHP-1 Interakcija by Honokiol vlaženje peritonejsku distribuciji rak želuca u nu /nu
miševima. PLoS ONE 7 (8): e43711. doi: 10,1371 /journal.pone.0043711 pregled

urednik: Henrik Einwaechter, Klinikum Rechts der Isar der TU München, Njemačka pregled

Primljeno: 17 siječanj 2012; Prihvaćeno: 24. srpnja 2012; Objavljeno: 24. kolovoz 2012 pregled

Copyright: © Liu i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo je podržan od strane istraživačke potpore iz Taichung branitelja Opće bolnice, Tajvan (TCVGH-997314C, TCVGH-1007313C) i Nacionalnog vijeća za znanost Tajvana (NSC99-2320-B-005-003-MY3). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

većina bolesnika (oko 60%), rak želuca su s krajem bolesti pozornice dijagnoze. Rak želuca je drugi najčešći uzrok globalne smrtnosti od raka u razvijenim zemljama i pokazuje metastatske bolesti u vrijeme postavljanja dijagnoze [1]. Kirurgija i kombinacija kemoterapije za rak želuca su pokazala da se stekne samo skromne poboljšanje preživljavanja u naprednim slučajeva, a gotovo 50% pacijenata i dalje umire nakon recidiva [2], [3]. Glavni oblik recidiva peritonejsku širenje. Rast karcinoma i peritonealni metastaze ovisi angiogeneze, proces koji se odvija u nekoliko angiogenih čimbenika, uključujući vaskularni endotelni faktora rasta (VEGF), epidermalnog faktora rasta (EGF), osnovni faktor rasta fibroblasta, prostaglandina E2, interleukin-8, kemokin (CXC motiv) liganda 1, i matrična metaloproteinaza obitelj [4] - [6]. Nekoliko molekularna signale, kao što je signal pretvornika i aktivatora transkripcije 3 (STAT-3), nuklearna faktora-EB, Akt, mitogenima aktivirana proteinska kinaza, ciklooksigenaze-2, lipoksigenaze, inducibilne sintaze dušikovog-oksid, faktor nekroze tumora i ostalih također se pokazalo da su uključene u napredovanje tumora, angiogeneza [7] - [9]. Međutim, stanični i molekularni mehanizmi za razvoj, napredovanje i metastaze karcinoma želuca i dalje biti razjašnjeno. Pregled

Janus-aktivirani kinaza (Jak) /STAT signalni put ima važnu ulogu u regulaciji stanični rast, angiogeneze, diferencijaciju, migraciju i metastaza [10]. Aktivacija STAT puteva, posebno STAT-3 je povezan s raznim humanim malignim bolestima. Uporan STAT-3 fosforilaciju je primijećeno u različitim humanim karcinomima kao što su solidni tumori želuca, debelog crijeva, jetre, prostate, dojke, pluća, glave i vrata, kao i krv malignoma [8], [10]. Prethodna studija pokazala je da fosforilacija STAT-3 i VEGF ekspresiju proteina je povećana kod humanog želučanog tumorskom tkivu, što pak podići angiogenetsku fenotip i doprinijeti razvoju i progresiji želuca [11] raka. S druge strane, određeni fosfataze se zna da tumor supresori, a mogu igrati važnu ulogu u inhibiciji ili kontrolu rasta raka [12] - [15]. Protein tirozin fosfataze (PTP), uključujući i SH2 domene koji sadrži tirozin fosfataze (SHP) -1, SHP-2, mogu negativno regulirati STAT signala tirozin defosforiliranje nekoliko komponenata u srodne signalnih putova [13] - [15] , Kontinuirano Aktivacija STAT-3 u tumorima može biti olakšana barem djelomično gubitak funkcije ovih fosfataza. Kalpaina II je pokazala da igraju ulogu u endoplazmatski retikulum (ER) stresa regulira tumorogeneze, koji je uključen u mehanizmu honokiol inhibiciju želučane tumorigenesis [16]. Osim toga, prethodna studija je također pokazala da SHP-1 je endogeni supstrat kalpaina nakon A23187 potaknuto aktivacije trombocita [17]. Dakle, kalpaina /SHP-1 regulira STAT-3 i VEGF put može biti uključen u angiogenezu, rast, te peritonealni širenje želuca stanicama karcinoma. Pregled

Honokiol, male molekularne težine prirodni proizvod je glavni aktivni biphenolic spoj Magnolia officinalis pregled, koji je poznat za ublažavanje mikrobne infekcije, upale i gastrointestinalne poremećaje u tradicionalnim azijskim ljekovitim sustava [18]. Naša prethodna studija pokazala je da honokiol inhibira želučano tumorigenesis aktivacijom 15-lipoksigenaze-1 i kao posljedicu inhibiciju peroksisomski proliferator-activated receptor-A i COX-2 je ovisan o signalima [19]. Honokiol je pokazano da inducira ER stres i aktiviraju kalpainom II posredovane reguliran glukozom protein-94 cijepanja i apoptozu u ljudskim stanicama raka želuca [16]. Pokazano je da je VEGF ekspresija može biti osjetljiv na stanja deprivacije ishranu, koji uzrokuju ER stres [20], [21]. Osim toga, aktivator ER stres tunikamicin nađeno je da se značajno spriječio razvoj mikrovaskulaturi, što ukazuje da ova ER stres induktor može imati moguću ulogu u liječenju tumora dojke [21]. Učinci honokiol na ER stresom korelaciji angiogeneze i želučane tumorske metastaze su još uvijek nejasni. Evo, pretpostavili smo da honokiol inhibira angiogenezu i peritonealnoj širenje želuca stanica raka kroz kalpaina /SHP-1 uređenom STAT-3 i VEGF puta. Rezultati su pokazali da honokiol izrazito inhibiran angiogeneza i peritonejsku širenje želuca stanice raka putem kalpaina /SHP-1 interakcija se aktivira STAT-3 defosforiliranje i VEGF-dolje reguliranje puta. Pregled

Rezultati

Honokiol blokiran Peritonealni metastaziranje raka želuca in vivo

rak često karakterizira povećanom unosu [ ^{18F]-fluoro-2-deoksi-D-glukoza (FDG) i [ 18F] -FDG /PET može poslužiti kao surogat mjera terapeutske efikasnosti. procijenjen je funkcionalna mogućnost male životinje slike pomoću kliničke PET /CT skener s FDG. Istraživana su četiri skupine miševa za peritonejsku eksperimenata metastaza. Izjava /slika metastaza situacija je prikazan na slici 1. Mi iskoristiti [ 18F] -FDG-PET /CT otkriti peritonealnih metastaze u miševa s ljudskim stanicama raka želuca (MKN45 ili SCM-1), sa ili bez honokiol tretman. Kao što je prikazano na slici 2, predviđeno samo intenzitet generiran tipičan predstavnik miševa. Peritonealna metastaze zabilježen je u kontrolnih miševa (lijevi dio), te je učinkovito poništavaju obradom honokiol (desni panel). Ove slike su jasno pokazali da je neinvazivna [ 18F] -FDG uptakes u peritonealnoj metastatskih tumora kontrolnih miševa bila mnogo veća od onih u miševa honokiol tretirani. Kvantifikacija intenziteta prikazani na slici 3A. Intraperitonealna injekcija honokiol (5 mg /kg, dva puta /tjedno) značajno smanjio procjenu radioaktivnosti broji i specifični unos vrijednosti (SUV) utvrđene FDG-PET /CT u miševa kojima želučanih stanica raka (sl. 3). Štoviše, mnogi metastatskih čvorova pronađeni su u peritonealnoj šupljini (mezenterijum) od kontrolnih miševa kojima MKN45 i SCM-1 (sl. 2) stanica. Nasuprot tome, peritonealni tumor čvorovi su uočeni sporadično u miševa tretiranih s honokiol. Kvantifikacija kvržica po polju prikazan je na slici 3B. Pregled}

Honokiol inhibirana angiogeneze in vivo pregled, ex vivo pregled i in vitro

endotelne stanice kritične za procesa angiogeneze, što je potrebno za rast tumora i metastaza. Sljedeće smo istraživali angiogenog učinka honokiol pomoću korioalantonske testa membranski pilića ( CAM pregled test), test Matrigelove utikač aorte prsten klijanje ispitivanje, a stvaranje cjevčica endotelnih stanica. Kao što je prikazano na slici 4A, honokiol učinkovito inhibira nastajanje neo-vaskularni na CAM
ispitivanju bez vidljivog učinka na prethodno postojećih krvnih žila. Kvantitativna analiza je pokazala da honokiol izazvala 2,5-struko smanjenje broja novoformiranih krvnih sudova u usporedbi s onom od srednje kontrole. Pregled

Matrigel čepa ispitivanju Matrigelove sadrže VEGF (100 ng /ml gel) sa ili bez honokiol (10 ug /ml) se potkožno implantira u gole miševe. Nakon 21 dana od implantacije, formirani Matrigel čepovi su izdvojeni i fotografirane. Utikači samo s VEGF izrazito pruge, vaskularni i crvene boje. Čepovi sadrže VEGF i honokiol su blijedo ukazuje ne manje ili stvaranjem krvnih žila (Sl. 4B-a). Utvrđivali smo i gustoću plovila i oblika posude u dijelu koji se čep s H & E bojenje i imunohistokemijsko bojanje s protutijelom CD31, marker endotelnih stanica. Zbog dobre vaskularizacije u honokiol + VEGF skupine bila je značajno smanjena u usporedbi s samim skupinom VEGF (Sl. 4B-b). Kvantifikacija vaskularizacije računajući žile i predstavio endotelnih stanica otkrila da je vaskularni gustoća u skupini honokiol liječenih bio značajno smanjen (Sl. 4B-c i 4B-d). Pregled

Nakon toga, endotelne stanice su inducirane proklijati s izoliranim štakorskim prstenima aorte u prisutnosti Matrigel i ECGM (endotelnih stanica mediju rasta) koji sadrži angiogeničnih citokina, kao što su VEGF i bazičnog čimbenika rasta fibroblasta. Opsežna endotelnih stanica izrastao iz štakora aorte prstena eksplanata zabilježeno je u kontrolnoj skupini (Sl. 5A). Honokiol liječenje rezultiralo značajnim (~five puta) smanjenje endotelne izdanak i klijanja s prstenima aorte (Sl. 5a i 5c). Nadalje, morfološko diferencijacija stvaranje cjevčica endotelnih stanica ispitana je pomoću dvodimenzionalne metode Matrigel. Kao što je prikazano na Slici 5B, nasađivanja HUVEC u Matrigelu dovodi do stvaranja strukture krvnih žila cjevast. Honokiol učinkovito inhibira stvaranje cjevčica endotelnih stanica redukcijom cjevastu strukturu dužini i širini (Sl. 5B i 5D). Pregled

Honokiol ukinuta STAT-3 Signalizacija u ljudskim karcinoma želuca stanica, HUVEC i tumori

Prethodne studije su pokazale snažnu korelaciju između aktivirane STAT-3 i angiogeneze fenotipa [11]. Se dalje objasniti učinak honokiol na fosforilaciju STAT-3 u ljudskim stanicama raka želuca (MKN45 i AGS) i HUVEC. Kao što je prikazano na slici 6, honokiol smanjio tirozina (Tyr705) fosforilacije STAT-3 na vremenski ovisan način sa oko dva puta smanjenja u 1-2 sata u AGS stanicama (Sl. 6A) i 3 do 10 struko smanjenje na 0.5-24 sati u MKN45 stanica (Sl. 6b). Začudo, honokiol izazvana STAT-3 defosforilaciju Tyr705, ali ne i Ser727, ostatke u tim ljudskim stanicama raka želuca. Međutim, honokiol istovremeno inhibirana oba Tyr705 i Ser727 fosforilaciju STAT-3 u HUVEC (Sl. 6c). Kvantitativna analiza proteinskih traka u Western blot pomoću slika-Pro Plus softver prikazan je na slici 7. Rezultati analize s konfokalne mikroskopom je također pokazala da honokiol ukinula tirozina (Tyr705) fosforilacija STAT-3 u AGS stanicama i HUVEC (slika . 8A). pregled

dalje ispitali fosforilaciju STAT-3 u peritonealnim metastatskih tumora izoliranim iz golih miševa kojima MKN45 stanicama uz ili bez honokiol (5 mg /kg) liječenja. Imunohistokemijska analiza pokazala je da je p-STAT-3 ekspresiju i nakupljanje u regiji tumora, uključujući jezgre i citoplazme, značajno je obrnut honokiol liječenja (Sl. 8b). U Western blot analizi, honokiol značajno smanjio nakupljanje p-STAT3 kod tumora u usporedbi s kontrolom vozila (Sl. 9A). Izraz konstitutivne STAT3 nije mijenjalo. Osim toga, veznu aktivnost DNA STAT-3 je nadalje potvrđena EMSA. Kao što je prikazano na slici 9B, honokiol smanjeno povećane aktivnosti vezanja na DNA STAT-3 ljudskih stanica raka želuca. Honokiol također inhibira VEGF-povećava STAT-3 DNA vezujuću aktivnost u HUVEC (Sl. 9B). Pregled

Honokiol inducirane SHP-1 regulirane STAT-3 defosforilacija u Gastric stanice raka, stanica endotela i stanica Tumori

SHP-1 je ne-transmembranski PTP [12]. Potom smo ispitali da li honokiol mogu regulirati ekspresiju i aktivnost SHP-1. Kao što je prikazano na Slici 10A, honokiol poboljšanu ekspresiju proteina SHP-1, ali ne i SHP-2, u HUVEC i AGS stanica u vremenski ovisan način. Farmakološka inhibitor PTP i SHP-1 siRNA transfekcija učinkovito je ukinuo honokiol izazvanu STAT-3 defosforilaciju u HUVEC i AGS stanica (sl. 10B-a). Slični rezultati SCM-1 stanica i SV-40 imortaliziranih mišjeg mikrovaskularne endotelne stanice (SVECs) tretiranih honokiol prikazane su na Slici 10B-b. Potom smo ispitali da li endogenog SHP-1 modulira honokiol. Honokiol je sposoban evociraju aktivnost na SHP-1 u stanicama raka želuca, HUVEC i SVECs u vremenski ovisan način (sl. 11A). Honokiol također poboljšana izraz SHP-1 proteina u peritonealnoj metastatskih tumora izoliranih iz MKN45-inokuliranih miševa što je otkriveno imunohistokemijske analize (Sl. 11b). Mi dodatno istražiti interakciju između SHP-1 i STAT-3 metodama ko-imuno i Western blot. Kao što je prikazano na Slici 11C, SHP-1, specifično se povezuje sa STAT-3 u AGS stanicama i HUVEC u prisustvu honokiol usporedbi s IgG kontrolom. Pregled

Honokiol Altered ER morfologiju, inducirana kalpaina II regulira SHP -1 inducirana STAT-3 defosforilacija i Smanjena VEGF Generation pregled

Prethodne studije pokazale su da ER stres igra važnu ulogu u angiogeneze [20], [21]. Potom smo ispitali učinak honokiol na ER mikrostrukture pod transmisijskim elektronskim mikroskopom. Kao što je prikazano na Slici 12A, ER dilatacija i fragmentacija su izloženi u honokiol liječenih SCM-1 želučanih stanica raka i HUVEC. Pregled

Također smo željeli utvrditi da li aktivacija kalpaina-II je potreban za SHP-1 aktivnost u honokiol tretiranih stanica. Farmakološka inhibitor kalpaina i kalpaina II siRNA transfekcija učinkovito smanjiti SHP-1 aktivnost honokiol-poboljšana u AGS stanicama i HUVEC (sl. 12b). Stanice tretirane su s rekombinantnim kalpaina-II, kao pozitivna kontrola, pokazalo je povećanje je 4 do 5 puta u SHP-1 aktivnost (sl. 12B). VEGF je poznato da sadrže STAT-3 promoter vezanja. Potom smo ispitali da li honokiol mogu regulirati ekspresiju VEGF. Honokiol značajno smanjio VEGF generaciju AGS stanicama i HUVEC, a taj učinak je obrnuta pomoću SHP-1 siRNA transfekcije (sl. 12C). Osim toga, transfekcija mutant-STAT-3 plazmida u stanice također inhibira VEGF generacije. Kombinacija s honokiol mutant-STAT-3 plazmida transfekcije u stanicama sinergistički smanjuju proizvodnju VEGF u usporedbi sa unosom samog tretmana (Sl. 12C). Kako bi se dodatno potvrdili interakciju između kalpaina-II i SHP-1, ko-imunoprecipitaciju i Western blot su provedena u želučanim stanicama raka. Kao što je prikazano na Slici 12D, kalpaina II posebno je povezan s SHP-1 u AGS stanica u prisutnosti honokiol (20 uM) u usporedbi s kontrolom IgG. Isto tako, honokiol inducirane kalpaina /SHP-1 interakcija je također pronađena u HUVEC (podaci nisu prikazani). Pregled

Rasprava pregled

Honokiol je glavna komponenta Magnolia officinalis pregled , što je prijelazni medicina u Aziji [18]. Honokiol ima antioksidativni i protuupalni učinak In vitro
i In vivo pregled [22] - [25]. Honokiol je pokazano da pokazuju jaku antiproliferativnu aktivnost na endotelne stanice in vitro
i anti-tumorske učinke protiv angiosarkom u golih miševa [26]. U ovom istraživanju, pokazali smo po prvi puta da se honokiol je potentni inhibitor angiogeneze i peritonealni metastaziranja raka želuca. Naše istraživanje je usmjereno na efekte i mogućih mehanizama honokiol na peritonealnoj metastaza i angiogeneze pomoću PET /CT, CAM pregled uzorka, Matrigel plug test, endotela aorte prsten stanica nicanje ispitivanje, stvaranje cjevčica endotelnih stanica, i in vitro eksperimentima
stanica. Rezultati su pokazali da honokiol može suzbiti angiogeneze i peritonealni širenja kroz kalpainom II aktivirane SHP-1 aktivacije signalne kaskade. Aktiviranje fosfataze SHP-1 pomoću honokiol dalje vodi u nizvodnom regulacijom STAT-3 aktivaciju VEGF produkcije, što rezultira u inhibiciji angiogeneze i potrbušnici metastaze. Međutim, inhibicije angiogeneze i inhibiciju metastaziranja stanica raka koje honokiol mogu biti odvojena aspekta, jedan se efekt honokiol na angiogenezu izravno, a drugi učinak honokiol na stanice raka. Pregled

Tijekom proteklih nekoliko godina brojne su studije pokazale su da aktivacija STAT obitelji, posebno STAT-3 je povezan sa staničnom proliferacijom, angiogeneze i metastaziranje [10], [11], [27] - [30]. Povećana aktivacija STAT-3 ekspresije je nađena u raznim tumor potječe stanice i uzorke od ljudskog tkiva raka. Deregulirani STAT-3 aktivacija je sugerirao da igraju važnu ulogu u Prekomjerna ekspresija VEGF-a povećala angiogene fenotipova u karcinomu želuca, što može doprinijeti razvijanju želuca [11] raka. U ovom istraživanju, otkrili smo da honokiol može učinkovito inhibira fosforilaciju STAT-3 u HUVEC (oba Tyr705 i Serine727 stranice), ljudskih želučanih stanica raka (Tyr705 mjesto), te peritonealni metastatskih tumora (Tyr705 stranica). Kao onkogeni aktivacija tirozin kinaze je zajedničko obilježje karcinoma naglasak je na ulogu Tyr705 fosforilacije STAT-3. Pregled

SHP-1 ima potencijalnu funkciju tumorskih supresorskih te je negativan regulator JAK /STAT signalni put [15]. Također je pokazano da SHP-1 fosfataza može vezati na fosforilirani Y1173 domene koja dovodi do EGFR defosforiliranje [31]. Y429 u citoplazmatske domene eritropoetina receptora je predloženo da se vezno mjesto za protein tirozin fosfataze SH-PTP1B, koja može igrati važnu ulogu u zaustavljanju proliferacije signala [32]. SHP-1 također je pokazano da je antagonist s faktorom rasta signalizacije u epitelnim i hematopoetskih stanica [15]. SHP-1 je bio posebno istaknut kao potencijalni fiziološke antagonist VEGFR signalizacije [33]. U endotelnim stanicama, SHP-1 je fizički povezana s VEGFR2 i također je potreban i za TNFa posredovanih tkiva inhibitor metaloproteinaze (TIMP) posredovanog inhibicijom angiogeneze [31]. Dakle, SHP-1 aktivacija može imati važne posljedice za regulaciju proliferacije i angiogeneze. U ovom istraživanju, otkrili smo da honokiol specifično poboljšane ekspresiju SHP-1, ali ne i SHP-2, u stanicama raka želuca, endotelne stanice i peritonealnim metastatskih tumora. Ovi rezultati ukazuju na to da honokiol može spriječiti endotelnih stanica angiogeneze i stanica raka metastaze, koje može biti putem SHP-1 inducirane STAT-3-dolje reguliranje put u. Pregled

Prethodne studije su predložili važnu ulogu za ER stresa u molekularni mehanizam angiogenezu i rast stanica raka [16], [20], [21]. Koyama i suradnici su također predložili da ER izazvana stresom poremećaj kalcij može biti uključen u indukciju nakupljanja amiloidnih beta i angiogeni faktor ekspresiju u retini pigmentnog epitela [34]. Nedavna studija je pokazala da je ER stres reguliran IRE-1α signalizacija ima važnu funkciju u posteljici razvoju i embrionalnog održivosti, naglašavajući odnos ER stresa i angiogeneze u posteljicu tijekom trudnoće [35]. Kim i suradnici su pokazali da i SHP-1 i SHP-2 su endogeni supstrat za kalpaina, koji je uključen u kontekstu Entamoeba histolytica pregled induciranu smrt stanica domaćina [36]. Naime, kalpaini postaju aktivni kada je unutarstanični kalcij ([Ca ^{2+] i) koncentracija je povišen; m-kalpaina (kalpaina II) zahtijeva [Ca 2+] i na milimolara opsega, ali mikromolarne koncentracije [Ca 2+] i dovoljno za aktiviranje μ-kalpaina (kalpain I) [37 ], [38]. Pokazano je da je visoka razina [Ca 2+] i sprječava aktivnost protein tirozin kinaze, kao rezultat aktivacije kalpaina tijekom stimulacije ionofora u trombocitima [39]. Honokiol bio sposoban pobuditi [Ca 2 +] i mobilizaciju u živčanim stanicama [40]. Nedavno, tunikamicin je izvijestila da inhibiraju angiogenezu in vivo
. Naša ranija istraživanja koja bi pokazala da honokiol inducira ljudski rak želuca staničnoj apoptozi i inhibira tumorigenesis kroz posredovano kalpainom reguliran glukozom protein-94 cijepanja [16]. U ovom istraživanju smo se izravno pokazali da je ER su se raširile i fragmentiran u honokiol tretiranih stanica raka želuca i HUVEC. Štoviše, farmakološka inhibitor kalpaina i kalpaina II siRNA transfekcije učinkovito smanjiti SHP-1 aktivnost honokiol poboljšane u želučanim stanicama raka i HUVEC. Naime, naši rezultati za prvi put je pokazao da kalpaina /SHP-1 interakcija izravno je potaknuta honokiol inhibicije STAT-3 fosforilacije u želučanih stanica raka. Ovi rezultati pokazuju da honokiol može izazvati ER stres i potaknuti kalpaina-II-aktiviran SHP-1 aktivnost želučanih stanica raka i endotelne stanice. Pregled}

Na kraju, rezultati ovog istraživanja pružaju in vivo ex vivo pregled i in vitro pregled dokaz za inhibiciju angiogeneze i potrbušnici širenje želuca stanice raka honokiol i molekularna osnova za njegovih učinaka. Ovi podaci ukazuju na uključenost ER kalpain i protein tirozin fosfataze SHP-1 signalizacije u honokiol-inhibiran STAT-3 aktivaciju VEGF proizvodnje u želučanih stanica raka i endotelne stanice (Sl. 13). Ovi rezultati također pokazuju da je down-regulacije STAT-3 i VEGF signala inducira kalpain /SHP-1 može biti obećavajući terapijska strategija za želučane liječenja raka.

Materijali i metode pregled

Stanice Kultura i pregled

ljudskog želučanog raka stanične linije, uključujući kavkaski staničnoj liniji (AGS, umjereno /slabo (mješoviti) diferenciranih stanica adenokarcinoma) i azijske stanične linije (MKN45 i SCM-1, nediferencirane stanice adenokarcinoma) dobiveni su iz stanična banka Taipei branitelja Opće bolnice (Tajvan). Stanice su održavane u RPMI1640 mediju koji sadrži 10% FCS i streptomicin /penicilina u vlažnom 5% CO _{2 atmosfere. Pregled}

HUVECs su dobiveni iz pupkovine vena obradom kolagenazom kako je prethodno opisano [41]. Ova studija u skladu s načelima za korištenje ljudskih tkiva navedenih u Deklaraciji Helsinkija. Protokol istraživanja je odobren od strane Etičkog Review odbora Taichung branitelja Opće bolnice, Taichung, Tajvan (odobreni dokument TCVGH-C0062-1). Korišteni su HUVEC na trećem prolazu. Učinkovitost transfekcije (> 80%), pomoću lipofektin reagens (Invitrogen) određena je na treći prolaz. U nekim eksperimentima, SV-40 imortaliziranih miša mikrovaskularne endotelne stanice (SVECs) uzgojene su u Dulbeccovom modificiranom Eagle mediju (DMEM), s dodatkom 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS), i 1% penicilina /streptomicina. SVEC stanična linija ljubazno je nadaren dr KH Lan (Cancer Center, Taipei Glavna branitelja bolnice, Tajvan). Pregled

Honokiol je dobiven od Wako Chemical Company (Osaka, Japan), a utvrđeno je da je najmanje 99% čist prema HPLC. Različite koncentracije honokiol su bili korišteni u ovom istraživanju, ovisno o osjetljivosti lijeka naznačenog IC50 vrijednosti (20 um u AGS, 40 uM u MKN45 i SCM-1). MKN45 i SCM-1 stanica, ali ne i AGS stanice, su pokazala da učinkovito inducira tumora u modelu ksenograft tumora miša. Pregled

Životinje pregled

Sve za životinje njega i eksperimentalni postupci su odobreni i provodi Odbor za životinjama, National University Chung Hsing, Taichung, Tajvan (odobren dokument NCHU-100-26). Četiri do šest tjedana stari mužjaci BALB /c golih miševa nabavljeni su od NLAC (Taipei, Tajvan). Miševi uzgojeni su i održavani u specifičnim uvjetima bez patogena, sterilna hrana i voda ad libitum pregled i smješteni u ograđenoj ustanovi sa 12-satnom ciklusu svjetlo /tama. Pregled

tumorskih miša Model pregled

Da bi se procijenila peritonealnoj metastaziranja, uzgojene stanice ljudskog raka želuca (4~5 × 10 ^{6 stanice) su inokulirani u peritonealnu šupljinu BALB /c bezdlakih miševa [42]. Peritonealni tumor kod golih miševa su uspostavljeni tijekom 7 dana nakon injektiranja želučanih stanica raka u kojima su tumori označenim od PET /CT nadzora. Zatim, miševi su injicirani intraperitonealno honokiol (5 mg /kg /dva puta tjedno) tijekom 28 dana. Učinak honokiol na peritonealnoj širenje je procijenjena PET /CT. Izjava /slika metastaza stanja opisana je na Slici 1. Zatim, miševi su žrtvovani, pod anestezijom pentobarbitala () i proučen makroskopski na prisutnost peritoneal metastaza. Tumori su bili izrezani, razrezani u blokove, fiksirane u 10% formalinu i uronjeni u parafinske blokove ili smrznuti u tekućem dušiku. Pregled}

tomografija emisije pozitrona /kompjuterizirana tomografija (PET /CT) Skeniranje pregled

Nakon najmanje 6 sati posta, miševi su dobili 7,4 MBq (0.2 mCi) doze ^{18F-FDG oralno prije ispiranja s 1 ml vode. Miševi su anestezirani s izofluranom isparivačem prije svakog skeniranja. Eksperimenti za male životinje slike su izvedeni s kombiniranim PET /CT skenera (Discovery ST; GE Medical Systems). Korištena je multidetektorskom red spiralni CT skener. Tehnički parametri koji se koriste u CT dio PET /CT bili su kako slijedi: Vrsta skeniranje CT sa 0.5 sekunde punom spiralnim skeniranje, konfiguracije detektor red od 16 × 1,25 mm, interval prostora od 2,75 mm, debljine presjeka od 1,25 mm , pitch od 1.75:1 (visoka kvaliteta mod), brzina 17,5 mm po rotaciji, veliki polje-of-view (FOV), napon 120 KVP i struja od 200 mA. Tehnički parametri korišteni za PET dijela PET /CT su kako slijedi: 10.0 min svaki krevet, FOV odabran za rekonstrukciju slike je 20 cm, a PET Rezolucija je bila oko 4,5 mm pune širine na pola visine maksimuma (FWHM). U rekonstruktivnih parametri bili vrsta 3D iteracija kao 21 podskupova i 2 ponavljanja. Da bi se procijenila kvantifikaciju sposobnost PET /CT skener u male životinje slike, područje interesa (ROI) je postavljen na manjim FOV transaksijalno PET slike u potpunosti okružuju područja FDG uzimanja u promatranim tkiva, a izbjegavajući blizini tkiva. Srednja vrijednost aktivnosti svaki piksela unutar svakog ROI je snimljen i izražena kao Bq /ml. Pregled}

Chick Test korioalantonske membrane ( CAM pregled pokusa) pregled

Kako istražiti in vivo pregled angiogena aktivnost, modificirana pile cijela životinja CAM pregled ispitivanje provedeno je kao što je ranije opisano [43]. Oplođena jaja chick su inkubirani u vlažnom kontinuirano jaje uzgajivača na 37 ° C. Nakon 3 dana inkubacije, chick embriji su prebačene u posudu za kulturu. Dvadeset ul honokiol uhvaćenog u kolagena tipa smjesa se nanosi na diskove za oblaganje, te polimerizira uz zagrijavanje. Diskovi su učitani na CAM Netlogu 6 dana starih embrija. Nakon 24 sati inkubacije, područje oko ukrcanog disk fotografirana s Nikon digitalni fotoaparat, a broj novonastalih krvnih žila se broje dva promatrača na način dvostruko slijepo. Testovi za svakog ispitivanog uzorka se provodi upotrebom 10-13 jaja. Pregled

Matrigel dodatka test pregled

Goli miševi ili C57BL /6 miševima je injektirano subkutano 0,6 ml matrigelu sadrži naznačene količine kapsaicina 100 ng VEGF, i 10 jedinica heparina. Ubrizganog Matrigel brzo, sačinjavali jedan čvrsti čep gel. Nakon 7-21 dana, koža miša lako se povukli izložiti Matrigel čep, koji je ostao netaknut. Hemoglobina je mjeren korištenjem Drabkin postupak i kit reagensa Drabkin 525 (Sigma, St. Louis, MO) za kvantifikaciju formiranja krvnih žila. Koncentracija hemoglobina je izračunata iz poznate količine hemoglobina ispituje usporedno. Slike su fotografirane s Nikon digitalni fotoaparat, a broji broj novonastalih mikro-žila. Pregled

ex vivo pregled, test aortalni Ring pregled

aorte su izolirani od 6 -week stari Sprague-Dawley štakora. Ploče (48 jažica) obložene su s 120 uL Matrigela. Aorta izolirana iz miševa su očišćeni od periadventitial masti i vezivnog tkiva, i izrezati na ~1 mm duge do 1,5 mm dugo zvoni. Nakon isprane pet puta s endotelnom mediju za staničnu bazi aorti su postavljeni na Matrigel pokrivene jažica i prekrivena sa još 100 uL Matrigela. Honokiol ili nosača dodano je u jažice u konačnom volumenu od 250 ul medija.

• PLoS ONE: Odnos između negativnih i pozitivnih limfnih čvorova je pogodan za vrednovanje prognozu rak želuca bolesnika s pozitivnom Node Metastasis
• PLoS ONE: Visoka γ-zračenja osjetljivosti povezana je s povećanim rizikom raka želuca u kineskom Han Stanovništvo: case-control Analysis