PLOS Genetics: Mir-218 Gátolja invázió és metasztázis gyomorrák megcélozva Robo1 receptor

absztrakt katalógusa

A mikroRNS-ek kulcsszerepet játszanak a daganat áttétet. Itt leírjuk a szabályozás és a funkció a miR-218 gyomorrákban (GC) áttétet. miR-218 expresszió csökkent együtt a kifejezés annak egyik fogadó gének Slit3 metasztatikus GC. Azonban Robo1, egy több Hasított receptorok negatívan szabályozza a miR-218, így megteremtve a negatív visszacsatolás. Csökkent a miR-218 szint megszüntetése Robo1 elnyomás, amely aktiválja a rés-Robo1 út keresztül a kölcsönhatás Robo1 és Slit2, így okot tumor áttétek. A helyreállítás miR-218 elnyomja Robo1 kifejezés és gátolja a tumorsejtek invázió és metasztázis in vitro katalógusa és in vivo katalógusa. Mindent összevetve, az eredmények leírására Hasított-miR-218-Robo1 szabályozó áramkör amelyek megzavarása hozzájárulhat GC áttét. Célzás miR-218 nyújthat stratégiát blokkoló tumor metasztázis. Katalógusa

Szerző összefoglaló katalógusa

A mikroRNS azonosították fontos szerepet játszik a tumor metasztázis, de ezek hatása GC áttét lett rosszul tárni. Felismertük, miR-218, amely úgy működik, mint egy szuppresszor tumor metasztázis és összefügg a klinikai stádiumban, nyirokcsomó-metasztázis, és a prognózis betegeknél GC. Eredményeink azt mutatják, hogy a miR-218 része egy szabályozó áramkör magában a hasíték-Robo1 útvonalon. Az áttételes tumorsejtek, miR-218 elnyomták együtt Slit3, annak egyik fogadó géneket. Eközben Robo1, az egyik a több Hasított receptorok felülszabályozott válaszul a csökkenését miR-218, ami viszont indukált reaktív túlszabályzását a hasíték-Robo1 út keresztül az interakció a Slit2, megkönnyítve ezáltal a tumorsejtek migrációját és invázióját. Ezek a megállapítások nem csupán új betekintést a metasztatikus mechanizmusok GC hanem bizonyítékot szolgáltatnak a regény miRNS-közvetített szabályozási mód a receptor jelátvitel. Katalógusa

Citation: Tie J, Pan Y, Zhao L, Wu K, Liu J, a Sun S, et al. (2010) a miR-218 gátolja invázió és metasztázis gyomorrák megcélozva Robo1 receptor. PLoS Genet 6 (3): e1000879. doi: 10,1371 /journal.pgen.1000879 katalógusa

Vágó: Bruce E. Clurman, Fred Hutchinson Cancer Research Center, Amerikai Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: július 15, 2009; Elfogadva: február 10, 2010; Megjelent: március 12, 2010 katalógusa

Copyright © 2010 Tie et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a tanulmány támogatta a Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (No. 30670970, 30873026 számú, No. 30672369, 30530780 számú) és a Nemzeti Alap Research Program of China (No.2010CB529300). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

az előleget a diagnosztikai és terápiás megközelítések vezettek kiváló elvárások a hosszú távú túlélés a korai gyomorrák (GC). Ugyanakkor a prognózis a fejlett GC kiterjedt invázió és metasztázis továbbra is alacsony [1]. Annak érdekében, hogy áttétet, tumorsejtek át kell mennie egy sor egymást követő és a szelektív események, beleértve leválás, a migráció, a helyi invázió, angiogenezis, intravasation, túlélés a keringési rendszerben, extravazáció, és regrowth a különböző szervekben. A metasztatikus kaszkád, invázió GC a környező szövetekbe döntő korai lépés a [2] - [4]. Azonban a mechanizmusok invázió még nem teljesen tisztázott.

Számos microribonucleic savakat (mikroRNS vagy miRNS) a közelmúltban összefüggésbe a rák metasztázis [5], beleértve a miR-10b, miR-21, miR-126, miR-335, miR-373, miR-146, miR-520C és miR-205 emlőrákban [6] - [11]; miR-224 és miR-21 prosztatarák [12], [13]; miR-29c nasopharyngealis carcinoma [14]; miR-10a, miR-222, miR-125b, miR-7, és a miR-452 urotheliális carcinoma [15]; miR-182 melanoma [16]; miR-92b és miR-09/09 * az agydaganatok [17]; és miR-21 kolorektális rákban [18]. Azonban nagyon kevés miRNS ismert, hogy részt vesz a GC áttétek számoltak be. miRNS természetben előforduló, rövid, nem kódoló RNS-molekulák, amelyek negatívan szabályozzák a génexpressziót [19]. Emlősökben érett miRNS keletkeznek pri-miRNS-ek és a pre-miRNS-ek keresztül szekvenciális feldolgozás által Drosha és Dicer és megtalálhatók számos szervezetben. Ezek közé tartozik a 21-24 nukleotid, integrálódni RNS-indukáló hangtompító komplexek, és párosítani a 3 'nem régióban (3'-UTR) specifikus cél messenger RNS (mRNS) elnyomják fordítás vagy indukálják lebomlását a cél mRNS [20 ]. Emerging vizsgálatok kimutatták, hogy a miRNS-ek kulcsszerepet játszanak a különféle biológiai folyamatokban, beleértve a sejtek differenciálódását, proliferáció, apoptózis, a stressz ellenállás, a zsíranyagcserét, tumorigenezis, metasztázis és [21] - [23]. Jobb megértése a változások miRNS expresszió GC invázió vezethet jobb megértéséhez GC fejlesztés, valamint a lehetséges javítása diagnózis és kezelés előrehaladott GC. Katalógusa

A jelen tanulmányban megállapított magas (MKN28-M és SGC7901-M) és az alacsony invazív sejt altermékvonal (MKN28-NM és SGC7901-nm) használva egy ismétlődő transwell assay in vitro katalógusa. Ezután megvizsgálták a globális miRNS expressziós profil minden cellában alvonalát egy miRNS microarray azonosítani differenciáltan expresszálódó miRNS kapcsolódik az emberi GC invázió. Összesen 45 miRNS mutattunk ki eltérően expresszált invazív vs. non-invazív GC sejteket. Ezek közül a miR-218, szignifikánsan downregulált miRNS erősen invazív sejtek kimutatták, hogy szoros korrelációban GC tumorigenezis és metasztázis betegekben. Újabban, a csökkenés a miR-218 számoltak be számos különféle szilárd tumorok, beleértve a prosztatarákot, a GC, tüdőrák, és a nyaki karcinóma [24] - [27], de ez a csökkenés miRNS-218 egyszerűen kiszűrt , hogy az egyik a több tucat lehetséges miRNS az érdeklődés a rákok a fent leírt. További vizsgálatokat végeztek, hogy értékelje a jelentőségét a miR-218 tumor áttétek. Itt, azt találtuk, hogy csökkent a miR-218 expresszió korrelált előrehaladott klinikai stádiumban, nyirokcsomó-metasztázis, és a rossz prognózissal betegekben, és újbóli expresszióját miR-218 metasztázisos sejtek volt képes gátolni a migráció, invázió, és metasztázis képződés mindkét in vitro katalógusa és in vivo katalógusa. Egy bioinformatikai keresést miR-218 célkitűzéseket, azt derítették ki, receptor Robo1 mint a miR-218 funkcionális célt, és azt megerősítette, hogy a kölcsönhatás a miR-218 és Robo1 kulcsfontosságú volt GC sejtek mozgékonyságát bizonyítja, hogy volt egy inverz korrelációt miR -218 és Robo1 GC sejtvonalak, valamint a GC betegeknél. Továbbá, mi felfedezett egy érdekes negatív visszacsatolási hurkot magában foglaló Hasított, miR-218, és Robo1, amelyben a miR-218 is származhat bármelyik két gén található a intronok két különböző tagjai a hasíték fehérje család. Ezen kívül, a tagok ennek a családnak ligandumai a Robo1 receptort. Kimutattuk, hogy expressziója a két miRNS prekurzor gén (MIR-218-1 és miR-218-2) korrelálnak expressziója a gazdasejt gén (Slit2 és Slit3-kal), és hogy az érett miR-218-t főleg származik a miR -218-2 prekurzor, ezzel együtt csökkentése fogadó Slit3 de nem Slit2 metasztatikus GC sejtekben. Így upregulációját Robo1 válaszul a csökkenését miR-218 által indukált reaktív túlszabályzását a hasíték-Robo1 út keresztül való kölcsönhatása Slit2, megkönnyítve ezáltal a tumorsejtek invázióját és a metasztázist. Eredményeink nem csupán új betekintést a metasztatikus mechanizmusok GC, de ők is kiderült, egy új szabályozási mechanizmust a receptor jelátvitel. Katalógusa

Eredmények katalógusa

létrehozása és jellemzése sejt altermékvonal különböző invazív és metasztatikus potenciálok

Annak megállapítására, a GC-metasztázis modell, létrehoztunk invazív és nem-invazív sejt altermékvonal az emberi GC sejtvonalak SGC7901 és MKN28 felhasználásával ismételt transwell megközelítés (1A ábra, lásd anyagok és módszerek). Röviden, egy ismétlődő invázió vizsgálatot végeztünk, és ezek a sejtek, amelyek nem támadják meg a membránok és a sejteket, amelyek a képesség, hogy vándorolnak a kollagénnel bevont membrán minden szelekciós kört szétválasztjuk. Tíz szelekciós ciklus kaptunk invazív (MKN28-M és SGC7901-M) és a nem-invazív sejt altermékvonal (MKN28-NM és SGC7901-NM). Az áttétes tulajdonságait minden sejt alvonal ezután jellemezte in vitro katalógusa és in vivo katalógusa. Ábrán látható módon az 1B és 1C, a migráció képessége MKN28-M sejteket körülbelül 4-szer nagyobb, mint a MKN28-NM sejteket. Hasonlóképpen, az invazív potenciál körülbelül 5-ször nagyobb, MKN28-M sejtek összehasonlítva MKN28-NM sejteket. A in vivo
tanulmányok, tumorsejt-metasztázis volt megfigyelhető csupasz egerekben. Ábrán látható módon az 1D és 1E, szinte nincs metasztatikus GC sejtet találtak a tüdőben vagy a máj nude egerek 10 hetes befecskendezése után MKN28-NM-sejtek, mivel a legtöbb kezelt egerek MKN28-M sejteket mutatja nyilvánvaló tüdő vagy máj áttétek. Hasonló eredményeket figyeltünk meg a SGC7901-M és SGC7901-NM-sejtekben (adatokat nem mutatjuk). Nem volt szignifikáns különbség a sejtburjánzás vagy sejtciklus-eloszlás észleltek ezek közül sejt altermékvonal (szöveg S1, ábra S1 és S2). Katalógusa

azonosítása metasztázis kapcsolatos miRNS array alapú hibridizáció katalógusa

azonosítani miRNS potenciálisan részt vevő GC invázió megvizsgáltuk globális miRNS expressziós minden cellában alvonalát a mikro-RNS-array (v.10.0, Exiqon, Vedbaek, Dánia), amely 847 elfog próbák érett emberi miRNS. A microarray eredmények azt mutatták, hogy a kifejezés a 124 miRNS szignifikáns különbség volt a rendkívül invazív variáns MKN28-M és a nem-invazív sejt alvonalát MKN28-NM. Ezek közül 83 volt serkentett és 41. downregulált. Összehasonlítva SGC7901-NM, 62 miRNS voltak eltérő módon fejeződnek ki a SGC7901-M sejt alvonalát, köztük 47 downregulált és 15 serkentett miRNS. Összesen 11 miRNS azt találtuk, hogy fokozódik és 34 miRNS arra downregulált mindkét MKN28-M és SGC7901-M sejteket képest a megfelelő nem-invazív altermékvonal (táblázat S1).

A 45 differenciálisán szabályozott miRNS, a miR-218 egyike volt azoknak, hogy szignifikánsan eltérő expressziója. miR-218 leírták, hogy kell downregulált méhnyakrák [25], a GC [26], tüdőrák [27] és prosztatarák [28], jelezve, lehetséges részvétele egyaránt onkogén transzformáció és a tumor metasztázist. Azonban miRNS-218 csak egy volt a sok lehetséges miRNS érdeklődés rák. Ebben a munkában, miR-218 vizsgálták sokkal részletesebben. Hogy érvényesítse a microarray eredmények azt vizsgáltuk, miR-218 expresszió a GC sejt altermékvonal A korábban említett és a halhatatlan gyomornyálkahártya sejtvonal GES segítségével qRT-PCR [29]. miR-218 expresszió szignifikánsan csökkent MKN28-M és SGC7901-M sejtek és alacsonyabb volt, mind a négy GC sejt altermékvonal képest halhatatlanná tett humán gyomornyálkahártya GES sejtek (2A ábra). Továbbá, mi képest miR-218 expresszió a primer tumor GC vs áttétes nyirokcsomók 10 stádiumú III /IV GC segítségével qRT-PCR-rel. Amint azt a 2B ábra érett miR-218 szintek szignifikánsan csökkentek 10-ből 7 áttétes nyirokcsomók, jelezve, hogy a miR-218 lehet oki szerepet játszanak GC metasztázist.

Csökkent miR-218 expresszió GC társult előrehaladott klinikai stádiumban, nyirokcsomó áttét, és a szegény beteg prognózisa katalógusa

az egyes potenciális klinikopatológiai következményeit megváltozott miR-218 expressziós megvizsgáltuk expressziós szintjét miR-218 40 GC szövetekben (T) és nem-tumor nyálkahártya (N) által qRT-PCR. A kifejezés -ΔCt leírására használták expressziós szintjének miR-218. Összhangban a fenti adatok, az eredmények igazolták, hogy a miR-218 expressziós szintje GC (-13,81 ± 0,15, átlag ± SE) szövetekben jelentősen alacsonyabb volt, mint a nem-daganatos nyálkahártya (-11,62 ± 0,15, átlag ± SE) ( P katalógusa < 0,0001, t = 10,62, páros t katalógusa próba) (3A). Közötti korrelációk a miR-218 expressziós szintje és klinikopatológiai jellemzőit GC táblázatban foglaljuk össze 1. Statisztikailag szignifikáns összefüggést a miR-218 expressziós szintje és a klinikai szakaszban, és a miR-218 expressziós szintje és a GC metasztázis észleltek ebben a vizsgálatban. A medián kifejezése miR-218 volt -14,25 ± 0,17 a 22 esetben előrehaladott stádiumú (stage III és IV) a betegség, míg a medián expresszió -13,27 ± 0,20 ( P katalógusa = 0,0010, Mann-Whitney teszt) a 18 esetben a korai stádiumú (szakaszaiban I és II) betegség. A 29 doboz GC nyirokcsomó áttét, a medián kifejezése miR-218 volt -14,09 ± 0,16 volt, ami lényegesen alacsonyabb, mint a medián kifejezése (-13,07 ± 0,24), a 11 nem áttétes GC esetekben ( P katalógusa = 0,0036). A kifejezés a miR-218 GC beteg egyáltalán nem korrelál az életkorral, nemmel, a tumor mérete, vagy a sejt differenciálódás. Sőt, azt vizsgáltuk, hogy a szint a miR-218 expressziós társult betegek túlélésének GC. A betegeket ezután osztva alacsony expressziós (n = 20) és magas expressziós csoportban (n = 20) alapuló miR-218 szintek nagyobb vagy kisebb, mint az átlagos (-13,81) (3B ábra). A Kaplan-Meier-féle túlélési analízis kimutatta, hogy a betegeknél, akiknek a primer tumor megjelenik alacsony expressziója miR-218 volt a rövidebb átlagos túlélési idő. A három éves túlélési arány a betegek alacsony miR-218 expressziója 30% volt, ami lényegesen alacsonyabb a túlélési arány betegek nagy miR-218 expresszió (65%; P katalógusa = 0,0012, log rank teszt; 3C, ábra). katalógusa

Méhen kívüli kifejezése miR-218 gátolja a tumorsejtek invázióját és metasztázis in vitro katalógusa és in vivo Matton

a tanulmány a szerepe a miR-218 GC metasztázis, MKN28-M sejteket transzfektáltunk pGenesil-1-miR-218 vagy egy kontroll expresszáló vektort egy nemspecifikus miRNS, cel-miR-67, Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA ). A sejteket ezután a kiválasztott 400 mg /l G418 generálni MKN28-M-miR-218 és MKN28-M-miR-Control stabil sejtek. Azt találtuk, hogy a méhen kívüli expressziója miR-218 eredményezett körülbelül három-szeres csökkenést migráció és invazivitását. Annak meghatározására, hogy a veszteséget a miR-218 elősegítik a migráció vagy invázió a rákos sejtek, akkor elhallgattatta miR-218 egy antiszensz oligonukleotid inhibitort MKN28 nm-es sejtvonal, ami a három-négy-szeres növekedését sejtmigráció és invazív (4a ábra és 4B). Annak tesztelésére, ha a tumor invázió miR-218 által okozott rontó az invazív képességét tumorsejtek, kizártuk a hatás a miR-218 a proliferációt és sejtciklus eloszlása ​​gyomor rákos sejteket. Túlzott expressziója miR-218 nem befolyásolta a proliferáció és a sejtciklus eloszlása ​​MKN28-M sejteket in vitro katalógusa (ábra S5A és S5D). Ahhoz, hogy tovább vizsgáljuk a gátlása in vivo
tumor metasztázis által miR-218, mi beültetett MKN28-M-miR-218 sejteket, amelyek stabilan expresszáló miR-218 vagy kontroll sejtek csupasz egerekbe keresztül az oldalsó farokvénába. Tüdőben és a májban metasztázis GC nyilvánvaló volt injektált egerekben MKN28-M-miR-kontroll sejtek. Ezzel szemben, a kevés metasztázisos daganatok mutattunk injektált egerekben MKN28-M-miR-218 sejteket (4C). Továbbá, mi egyszerre megfigyelhető a növekedés a primer tumor és az előfordulási távoli áttét, a nude egerekben szubkután MKN28-M-miR-218 sejtek vagy kontroll sejtek. Az eredmények azt mutatták, tüdő, máj metasztázis nyilvánvaló volt 3 10 egerek fecskendeznek MKN28-M-miR-kontroll sejtek; éles ellentétben, nem metasztázis találtak injektált egerekben MKN28-M-miR-218 sejtek (ábra S5E). Ezek az eredmények összhangban vannak nyert adatokat farokvénából esszék, hogy értékelje a rák metasztázis és azt jelzik, hogy a miR-218 képes elnyomni metasztázis befolyásolása nélkül sejtburjánzást.

Robo1 volt közvetlen funkcionális cél miR-218 GC metasztázis katalógusa

Annak megállapítására, hogy milyen alacsony a miR-218 expresszió hozzájárul az invázió és metasztázis GC kerestük a lehetséges szabályozási célok miR-218 segítségével előrejelző eszközöket, beleértve a Miranda, PicTar és TargetScan. Bár több száz különböző célokat megjósolta, azok részt vevő gének a migráció vagy invázió lehet a vonatkozó célok tekintetében a biológiai funkcióit miR-218. Ezután végre egy funkcionális osztályozása megjósolt célok a DAVID programot (http://david.abcc.ncifcrf.gov/). Ezen gének, Robo1 tekinteni, mint egy proto-onkogén és kikötők migráció elősegítő aktivitás [30] - [35]. Mertsch et al.
Kimutatták, hogy Robo1 megkönnyíti glióma sejtek migrációját által közvetített Slit2 [36]. Schmid et al.
Találták, hogy az emlő tumor sejtek migrációját indukálja a Slit2-Robo1 kölcsönhatás in vitro katalógusa [37]. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy Robo1 célpontja lehet a miR-218. Ahhoz, hogy tovább teszteljük a hipotézisünket, elemeztük a kifejezés a miR-218 és Robo1 a GES és non-invazív (MKN28-NM és SGC7901-NM) és invazív (MKN28-M és SGC7901-M) GC sejteket. Az eredmények azt mutatták, negatív korreláció szintje közötti miR-218 és Robo1 mRNS ezekben a sejtekben (ábra S3A). Továbbá megfigyeltük, hogy Robo1 mRNS (ábra S3B) és fehérje (ábra 5B2) szint csökkenhet, ha a miR-218 fejezte ki pGenesil-1-miR-218 MKN28-M sejtek (ábra 5B1). A fordított volt megfigyelhető Robo1 kifejezést, amikor a miR-218 ütötték le MKN28-NM-sejtek (ábra 5C1 és 5C2 ábra). Az inverz közötti kapcsolat miR-218 és Robo1 expresszióját tovább igazoltuk immunhisztokémiai (Text S1) 40 esetben a gyomorrák, a kiegyenlített szomszédos normál szövetekben is felhasználásra került klinikopatológiai tanulmányokat, valamint a 29 párosított áttétek. Az eredmények azt mutatják, hogy a Robo1 ben fokozódik GC, különösen a metasztatikus GC (ábra S4), amelyben a miR-218 viszonylag alacsony expressziót.

Ahhoz, hogy a további közvetlen bizonyíték arra, hogy Robo1 célpontját miR-218 megvizsgáltuk a kötőhely a miR-218, a 3'-UTR Robo1 mRNS (5A ábra). Mi épített egy luciferáz riporter (Luc-Robo1), amelyben a nukleotidok a Robo1 3'-UTR komplementer miR-218 (NT 971-978) inszertáltunk be az pMIR-Report miRNS expressziós riporter vektor [38]. Ennek megfelelően, mi is generált mind a mutáns riporter (Luc-Robo1-MU), amelyben az első hat nukleotid a miR-218 mag-régió kiegészítő telephelyek törölték, és egy kontroll riporter, amely tartalmazta a nem rokon fragmens cDNS (Luc-Ctrl). miR-218-expressziós plazmidokat együtt transzfektáltuk Luc-Robo1, Luc-Robo1-mu, vagy Luc-Ctrl figyelembe MKN28-M sejteket. A vizsgálatok azt mutatták, hogy a luciferáz aktivitást a Luc-Robo1-transzfektált sejtek szignifikánsan csökkent összehasonlítva a luciferáz aktivitást a mutáns és a negatív kontroll sejtek ( p
< 0,05), ami arra utal, hogy a miR-218 csökkentette a luciferáz aktivitását Luc-Robo1 de nem volt hatással a Luc-Robo1-MU (5D ábra). Ezért arra a következtetésre jutottunk, hogy a behelyezett fragmentuma Robo1 (NT 971 -
978) volt a cél a miR-218.

Robo1 kimutatták, hogy több mint expresszálódik a rákos sejtekben, és ismert, hogy elősegítik a tumor angiogenesis és a metasztázis keresztül kölcsönhatás Hasított [39], [40]. Annak tesztelésére, hogy Robo1 funkcionálisan szabályozza miR-218, mi generált Robo1 expressziós konstrukció, amely csak egy töredéke a megjósolt miR-218 kötőhely és Robo1 mutáns expressziós vektort teljesen hiányzik a 3'-UTR. Arról is a Robo1 siRNS. MKN28-M-miR-218 sejtek, amelyek stabilan expresszált miR-218 ektopikusan, tranziensen transzfektáltunk a Robo1 létre, vagy a mutáns konstrukciót (nincs miR-218 kötőhely) és MKN28-M sejteket transzfektáltunk Robo1 siRNS vagy egy negatív kontroll siRNS. MKN28-M-miR-218 sejteket transzfektáltunk a Robo1 mutáns konstrukciót mutatott 3,8-szeres növekedést invázió képességét összehasonlítva transzfektált sejtek a Robo1 konstrukcióval. Ezek az eredmények azt jelzik, hogy bevezetése mutáns Robo1 cDNS hogy hiányzott a miR-218 kötőhely a miR-218-overexpresszáló sejtek megfordította a hatása miR-218 által közvetített elnyomását sejt invázió. A hatás azonban a Robo1 ben leverte a miR-218 jelenlétében a Robo1 3'-UTR tartalmazó miR-218 kötőhely. Kiütése Robo1 által siRNS MKN28-M gátolt sejtek sejtek invázióját, mely csökkent szintje hasonló megfigyelt transzfektálás után a miR-218-et kifejező vektor (5E ábra és 5F). Ezek a megfigyelések arra utalnak, hogy a miR-218 közvetlenül gátolja Robo1 mediált sejt invázió. Katalógusa

Slit2, de nem Slit3, kölcsönhatásba léphet a Robo1, gazdagodik hiánya miR-218, hogy támogassák GC invázió katalógusa

Kétféle miRNS létezik: intergénikus és intronikus. Az előbbi található nem kódoló régiók között a gének, és a megfelelő pri-miRNS-ek általában átíródott saját promotereket az RNS-polimeráz II. Az utóbbit belül található intronok a gazda génjei, és azok biogenézis vezérli a fogadó gén promoterek [41], [42]. miR-218 egy intronikus miRNS. Két kódolnak érett miR-218, miR-218-1 és miR-218-2, amelyek székhelye intron 15 Slit2 és intron 14. Slit3 volt (6A). Az intron helyét a két miR-218 gén ösztönzött minket, hogy kérdezni, hogy a miR-218-1 és miR-218-2 átírt együtt a gazdaszervezet gén mRNS. Ezen hipotézis használtuk qRT-PCR vizsgálni a kifejezés az miR-218-1 prekurzor, a miR-218-2 prekurzor, érett miR-218, Slit2 mRNS és Slit3 mRNS GC szövetekben használt túlélési elemzés. Statisztikai analízis A korrelációs együttható a qRT-PCR eredmények azt mutatták, szignifikáns pozitív korreláció szintje Slit2 mRNS és miR-218-1 és szintje közötti Slit3 mRNS és miR-218-2 (6B és 6C). Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a miR-218 kódoló gének, miR-218-1 és miR-218-2, íródnak együtt a gazda génjei, Slit2 és Slit3, ill. A szignifikáns pozitív korreláció szintje miR-218 és miR-218-2 (6D ábra) volt látható GC; azonban nem ilyen láttak korrelációt szintje miR-218 és miR-218-1 (ábra 6E). Ezek az eredmények azt mutatják, hogy downregulációját miR-218 GC segíti elő csökkenése miR-218-2, de nem miR-218-1. Összhangban ezzel a következtetéssel, Slit3 expressziója szignifikánsan csökkent a GC (-22,43 ± 0,21, átlag ± SE), mint a normális gyomor szöveti (-20,79 ± 0,23, átlag ± SE), ( P katalógusa < 0,0001, t = 7,67, páros t katalógusa próba) (ábra 6F), míg Slit2 kifejezés nem volt szignifikáns különbség ( P katalógusa = 0,0772, páros t katalógusa próba) ( ábra 6g). Összefoglalva, a kísérleti eredmények azt mutatják, hogy jelentős túlszabályzását a Robo1 gén válaszul eltávolítása miR-218 indukálhat későbbi túlszabályzását a rés-Robo1 útvonal való kölcsönhatása révén Slit2, megkönnyítve a tumorsejtek migrációját és invázióját. Katalógusa

Vita katalógusa

a tanulmány egy olyan betegség, létfontosságú, hogy állítson össze egy ideális modell. A jelen tanulmányban azt elszigetelt invazív és non-invazív sejt populációk az állandó emberi GC sejtvonalak felhasználásával ismételt transzwell megközelítést, amely sikeresen alkalmazható számos vizsgáló tumormetasztázisban [43] - [48]. Az eredmények áttétes vizsgálat in vitro katalógusa és in vivo katalógusa azt mutatták, hogy a kialakult sejt altermékvonal volt különböző invazív és metasztatikus képességeit. Itt mi átvizsgáljuk nemcsak sejt altermékvonal származó GC sejtvonalak nagy inváziós potenciált, hanem az alacsony-invazív potenciál. Kivéve a metasztatikus képességek, a kijelölt cella altermékvonal mindketten nagyon hasonló, hiszen ugyanazt a genetikai háttér. Mivel a fő különbség a két típusú altermékvonal áttétes képesség, a gének, amelyek különböznek az ezeket jól korrelálnak metasztázis. Sőt, mi a módszer képes megkülönböztetni invázió szakaszáig metasztázis, és lehetővé teszi a tanulmány a konkrét lépéseket metasztázis, amelyet nem lehet értékelni az élő állat modell. Katalógusa

Az utóbbi időben miRNS számoltak támogatása [49] [50] vagy elnyomni [51] - [54] tumor áttét, amely új perspektívát a metasztatikus folyamatban. Ennek ellenére, a szerepe a miRNS-ek a GC metasztázis hiányzik. Ebben a jelentésben, feltártuk és kapott először 45 metasztázis kapcsolatos miRNS GC alapján jól megalapozott metasztázis sejt modell. Az a megállapítás, hogy a miR-218-ben downregulált áttétes GC érdekes, mivel csökkent miR-218 szintje számoltak be többféle szolid tumorok [24] - [27], [55], jelezve, hogy a veszteség a miR-218 egy közös esemény a tumorok. A jelen tanulmány témája a hatását a miR-218 GC áttét, és bizonyította, hogy a miR-218 működik tumorszuppresszorként GC áttétet. Restaurálása miR-218 csökkentett sejt migrációs és behatolás in vitro katalógusa és metasztázis in vivo katalógusa. Ahhoz, hogy stabil sejtvonalak, hogy a túlzott expresszált miR-218, mi transzfektált MKN28-M sejtek miR-218 plazmidok és átvizsgáljuk G418. Azért választottuk a tizenkét sejt kolóniákat miR-218-transzfektált csoport, és megállapította, 10-ből 12-telepek kiállított meglehetősen egységes, stabil és magas szintű kifejeződését miR-218. Továbbá három véletlenszerűen kiválasztott monoklonális sejtvonalban hasonló csökkenéséhez invazív ablility. Azonban plazmid transzfekciós stratégiákat gyakran eredményez alacsonyabb integráció hatékonysága, mint a virális expressziós vezető lehetőségét sztochasztikus kiválasztásának ritka funkcionálisan heterogén változatok a kezdeti tömeges populáció. Ezért a jövőbeli használata virális expressziós rendszerek hozzon létre egy elfogulatlan kiindulási populáció hogy kipróbálja a hipotézist. Katalógusa

Ennek része a kutatás, hogy a veszteség a miR-218 befolyásolja GC áttét, azt bizonyította, hogy Robo1 volt kritikus downstream célpontja miR-218. Ismeretes, hogy a Robo egy axon útmutatás receptora rés és konzervált állatok kezdve gyümölcslegyek emlősökre. Emlősökben három hasíték (Slit1-3) és négy Robo (Robo1-4) géneket is leírtak [56], [57]. A rés-Robo kölcsönhatások jeleket közvetít taszító jelek a axonok és a növekedési kúpok alatt idegi fejlődés és részt vesznek a T-sejt és monocita kemotaxis [58] - [64]. Mint más fejlődési utak, aberráns expresszióját a hasíték -
Robo gének figyeltek meg a különböző tumortípus [65] - [68]. Például az emlőkarcinóma szövetminta, Robo1 kimutatták, hogy több mint expresszált, és bebizonyosodott, hogy indukálják a migráció a mellrák sejtvonalakban [37]. Slit2-Robo1 jelátviteli megkönnyíti glióma sejtek migrációját [36], és részt vesz az angiogenezis növelésével mikroerek sűrűségét és a tumor tömege egy tumor xenograft modellben [30]. Wang et al.
Kimutatták, hogy a túlzott expressziója Robo1 az új erek daganatok indukál rák neovaszkularizáció és a növekedés keresztül közötti kölcsönhatás Robo1 és liganduma, Slit2. Azt is azonosították foszfoinozitid-3-kináz (PI-3K) A downstream effektora Slit2 /Robo1 jelátvitelt. Ez azt sugallja, hogy létezik egy rés Robo1-PI-3K kaszkád, ami a a generációs foszfoinozitol-3,4,5-trifoszfát és az azt követő aktiválását kis GTP-ázok, amelyek közvetítik sejt mozgás és remodelling az aktin citoszkeleton [30] [35]. Ezzel szemben a többi tanulmány szerint a downregulációját Robo1 okozta kiesések vagy epigenetikai módosítások szerepet játszhatnak a progresszió [69] - [73]. Javasoljuk, hogy a szövet-specifikus expressziós mintázat létezik a rés-Robo géneket. Katalógusa

A jelenlegi vizsgálat során azt találtuk, hogy Robo1 gyakran nagy mennyiségben kifejeződik az invazív sejtek alacsony szinten nem invazív sejtek , míg a miR-218 jelenik meg az ellenkező expressziós mintázat. Amikor a transzfektált a miR-218-expressziós vektorba, és gátolja oligonukleotidok beépítését MKN28-M és MKN28-NM-sejtek, illetve inverz expressziós mintázat volt megfigyelhető között miR-218 és Robo1, azaz, ha a miR-218 expresszió magas volt, Robo1 expresszió alacsony volt, és fordítva. Ez az eredmény alátámasztotta a klinikai minták és a luciferáz aktivitás vizsgálatokban. Azt is megfigyeltük, hogy az indukció expressziójának Robo1 által Robo1 mutáns konstrukciót nélkül a miR-218 kötőhely megfordíthatja miR-218 által közvetített elnyomását a tumorsejtek invázióját. Ezzel szemben, a kiütése Robo1 génexpresszió RNSi hatással volt csökkentve a tumorsejtek invázióját hasonló a helyreállítása miR-218, bár Robo1 kiütése egyedül bizonyította gyenge hatást. Ez azért lehet, mert Robo1 nem az egyetlen cél a miR-218, ami releváns tumor metasztázis. Ezek az eredmények azt jelzik, hogy az invázió elnyomása hatását miR-218 legalább részben közvetített csökkenését Robo1 kifejezést. Ez is az első tanulmány, amely azt mutatja, hogy a tumor-asszociált gén Robo1 negatívan szabályozza a miR-218-n keresztül adott célterületre (nt 971-978) a 3'-UTR. A Robo1 receptor kulcsfontosságú a válasz extracelluláris jelek és celluláris fenotípusos változásokat; Ezért szigorú szabályozására a Robo1 receptor miR-218 megkönnyítheti erőteljesebb jelátvitelt. Anti-Robo1 monoklonális antitest leírták, hogy egy hatékony kezelés Robo1-t expresszáló rákok [30], [33]. A jelen vizsgálatban, találtunk egy új inhibitor Robo1, miR-218, amely esetlegesen kezelésére használhatók bizonyos típusú rákban.

Ahogy fentebb említettük, Slit1, Slit2, és Slit3 tartalmazzák a rés család fehérjéket. Bár a gének között átfedés van, az expressziós mintázat és funkciói különbözőek. Az előbbi két fehérje ismert, hogy részt vesz axon útmutatást és a sejtmigrációt [37], [74], míg a Slit3 részt vesz a fejlesztés a szervek és szervrendszerek, beleértve a membrán, és a vese [75]. Egyetértésben ezeket az adatokat, azt találtuk, hogy Slit2, de nem Slit3, kölcsönhatásba Robo1 elősegítése GC invázió. Katalógusa

Ezen kívül azt bizonyította, hogy a miR-218 kódoló géneket található és átírt együtt Hasított gének , amelyek Robo1 ligandumok, így egy negatív visszacsatolás, amely szabályozza Hasított /Robo1 jelzés. Sailen Barik kimutatták, hogy egy intronikus miRNS, a miR-338, hangtompítós géneket, amelyek funkcionálisan antagonisztikus a host gén terméke, így egy pozitív visszacsatolási hurok, amely segíti az élettani szerepe a fogadó gén [76].

• PLoS One: Érrendszeri CXCR4 Expression - a regény antiangiogén Cél gyomorrákban?
• PLoS One: hangtompító claudin-11 összefüggésbe hozható a megnövekedett invazív Gyomorrák Cells