Helicobacter pylori (H. pylori) VerfÜgung ass engem Gramm-negativ, Spiralgalaxien-gebuerene Bakterie, datt méi wéi d'Halschent vun der Bevëlkerung an d'Welt infects an ass eng grouss Ursaach vum gastric adenocarcinoma . D'Mechanismen datt Link H. pylori VerfÜgung Wonn ze gastric carcinogenesis sinn net gutt verstanen hunn. Am Moment studéieren, Rapport mir datt de Raf-kinase inhibitor FAQ (RKIP) eng wichteg Roll an der Aféierungs- vun apoptosis vun H huet. pylori VerfÜgung zu gastric epithelial Zellen. Western blot an luciferase Transkriptiouns reporter assays bewisen, datt d'pathogenicity Insel vun H. pylori VerfÜgung phosphorylates séier RKIP, déi un d'Keimzell localizes dann, wou se hir eege Transkriptiouns activéiert an induces apoptosis. Forcéiert overexpression vun RKIP verbessert apoptosis zu H. pylori VerfÜgung -infected Zellen, am Ufank RKIP RNS inhibition der Aféierungs- vun apoptosis vun H Hien. pylori VerfÜgung Wonn. Iwwerdeems Pinguin de phosphorylation vun RKIP, H. pylori VerfÜgung gläichzäiteg Ziler Net-phosphorylated RKIP fir proteasome-mediated ofgeschnidden. D'Erhéijung vun RKIP Transkriptiouns an phosphorylation ass vun mutating RKIP serine 153 abrogated zu valine, datt Regulatioun vun RKIP Aktivitéit Musiktherapie- vun H. pylori VerfÜgung ass ofhängeg RKIP d'S153 lafenden. Zousätzlech, H. pylori VerfÜgung Wonn Erhéijunge vum Ausdrock vun Wéngertsschleek, engem transcriptional repressor vun RKIP. Eis Resultater hindeit, datt H. pylori VerfÜgung entholl suppressor FAQ funktionéiert, RKIP, apoptosis zu gastric Kriibs Zellen ze förderen VerfÜgung Fro:. Moen EL, Wen S, Anwar T, Cross-Knorr S, Brilliant K, BIRNBAUM F, et al . (2012) Reglement vun RKIP Funktioun vun Helicobacter pylori VerfÜgung zu Gastric Cancer. PLoS NËMMEN 7 (5): e37819. Doi: 10.1371 /journal.pone.0037819 VerfÜgung Redakter: Yoshio näämlech, Veterans affaires Medical Center (111D), Vereenegt Staate vun Amerika VerfÜgung Arnaque: 30. Dezember 2011; Akzeptéiert: 24. Abrëll 2012; Publizéiert: Mee 25, 2012 VerfÜgung Copyright: © 2012 Moen et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Funding:. Dës Aarbecht war déi National Institut vun General Medical Sciences vun der National Instituter vun Gesondheet ënner Award Number P20GM103421 (DC) ënnerstëtzt; der viregter Segment vun dësem Projet gouf vun der National Center fir Fuerschung Resources (NCRR) ënnert P20 RR 017695 (DC), R01 CA111533 (SFM) an R21 CA133601 (JMS) ënnerstëtzt. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung Gastric Kriibs ass déi véiert stäerkste dacks diagnostizéiert malignancy vun der Welt. Am Joer 2007, ronn eng Millioun nei gastric Kriibs Fäll Virwaat weltwäit ronn 800.000 Doudesfäll sech opgeholl, se d'zweet Équipe gemeinsam Doudesursaach vum Kriibs nees [1]. Gastric Kriibs ass am Moment de siwenten Virwaat Ursaach vum Kriibs Doudesfäll am US, mat ongeféier 21.500 nei Fäll vun 2011 festgestallte (http://www.cancer.gov/cancertopics/types/stomach). De Gramm-negativ, Spiralgalaxien formt Bakterie Helicobacter pylori (H. pylori) VerfÜgung méi ewéi d'Halschent vun der Welt d'Bevëlkerung infects an huet als Risk Faktor zu gastric carcinogenesis identifizéiert ginn [2]. D'Weltgesondheetsorganisatioun an der Internationaler Agence fir Fuerschung op Cancer et wéi enger Klass designéierte ech 1994 carcinogen [3]. Eis aktuell Versteesdemech vun H. pylori VerfÜgung -induced carcinogenesis ass, datt d'Bakterie an der verbonne chronescher demagogesch Äntwert vun apoptosis gastric epithelial Zell Doud Promotioun [4], mat Perquisitiounen zwéinHyperfeinstrukturniveaue-Prolifératioun [5], an gratis radikal Produktioun [6] all vun deem zu engem bäidroen lues a progressiv Haaptrei vun Ännerungen an der gastric mucosa datt schlussendlech Werdegang Richtung Kriibs dofir. Dëse Modell ass konsequent mat Rapporten, déi pro-demagogesch cytokine Gentherapie schiefgang dass d'Intensitéit vun der demagogesch Äntwert Erhéijung sinn ze iwwerdribblen fir gastric Kriibs Risiko Zesummenhang [7]. VerfÜgung H. pylori VerfÜgung Decisioune enk ze gastric epithelial Zellen an direkt apoptosis induce kann [8]. D'cag (cytotoxic-verbonne Gentherapie) pathogenicity Insel (cag PAI) vun H. pylori VerfÜgung ass eng 40 kb Segment vun DNA datt Genen Zeechesaatz fir Komponente vun enger Zort IV bakteriell secretion System [9] enthält. An dëser Regioun ass déi cagA VerfÜgung Gentherapie déi CagA, eng immunodominant FAQ vun 121-145 kDa [9] encodes. H. pylori VerfÜgung analyséieren: et an ausdrécke der cag PAI sinn méi oft verbonne mat peptic oppent Krankheet an gastric Kriibs am Western Populatiounsschichte wéi analyséieren dass do net [9]. Op hir Sprëtz via den Typ IV secretion System an Provider gastric epithelial Zellen, CagA dono phosphorylated sech kann vun Src-Famill tyrosine kinases bei hirer C-Kappgare [10], Virwaat CagA SHP2 an Signal via Erk zu kruet an aktivéieren [11]. Wichtegst, ass CagA och responsabel fir activating d'Signal Better gëtt reduzéiert a activator vun Transkriptiouns 3 (STAT3) kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung [12], obwuel dat net onbedéngt kann op CagA phosphorylation ofhängeg ginn [11] VerfÜgung aktuelle Wäert Proteinen sinn an e puer neoplasms constitutively ausgedréckt, dorënner gastric, Broscht, de Kapp an den Hals, an Aarbecht Cancers [13] -. [16]. Beim phosphorylation vun der tyrosine 705 lafenden a acetylation um lysine 685, dimerizes STAT3 an enters ervirgaangen wou et Funktiounen ze transcriptionally engem onerfëllt vun Genen regléieren [17], [18]. Konstitutive Aktivatioun vun STAT3 FAQ gouf dës apoptosis ze verhënneren a Zell Prolifératioun an Metastasen zu enger Rei vun Cancers, dorënner gastric Kriibs [19], [20] Erhéijung. VerfÜgung Eng vun de hallmarks vun gastric entholl Werdegang ass de Acquisitioun vun méi invasiv an Opbau phenotypes während der epithelial-mesenchymal Transitioun (EMT). Während EMT, hi gastric epithelial Zellen phenotypic Ännerungen am Zeeche vun de Verloscht vun Zell Haftung Molekülle, besonnesch d'epithelial cadherin (E-cadherin) [21]. D'Transkriptiouns Faktor Wéngertsschleek, engem Zénk-Fanger FAQ, gouf via Nuclear Factor Kappa Beta (NF-kb) [22] a Kierzunge Repressioun vun E-cadherin zu epithelial entholl Zellen wéinst hirer Aktivéierung virdrun als eng wichteg regulator vun EMT charakteriséiert [ ,,,0],23], [24]. Zousätzlech Studie mat falschen-vun-Funktioun a Verloscht-vun-Funktioun Approche Wéngertsschleek als repressor vun RKIP Transkriptiouns zu metastatic Aarbecht Kriibs Zellen identifizéiert hunn [25]. VerfÜgung RKIP ass e Member vun der phosphatidylethanolamine-verbindlech FAQ Famill an engem negative regulator vun der ERK1 /2 (Extracellular Signal-reegelen Kinase) [26], NF-kb [27] an GRK (G Protein-kräftegen Receptor Kinase) [28] Weeër. RKIP also spillt eng wichteg Roll an Regulatioun Zell Iwwerliewe an apoptosis, zousätzlech zu der Efficacitéit vun chemotherapeutic Agenten potentiating [29]. RKIP huet och als Metastasen suppressor FAQ [30], an zu gastric adenocarcinoma Patienten do existéiert e positive Korrelatioun tëscht RKIP Ausdrock an Patient Iwwerliewe an en ëmgedréit, et gesäit Korrelatioun tëscht Ausdrock vun RKIP an STAT3 [19] identifizéiert ginn. RKIP Ausdrock a Funktioun ka per Post-respektiv Modifikatioune reglementéiert gin. Zum Beispill, phosphorylation vun RKIP vun FAQ kinase C um serine-153 evitéiert RKIP d'Fähegkeet fir seng Zil- Protein zu festleeën, doduerch inactivating RKIP Funktioun [31]. RKIP Repressioun via Promoteur methylation vun methylation an histone deacetylase inhibitors [25] kann Weider, iwwerwonne ginn. VerfÜgung Well vun der wichteg Rollen vun RKIP, STAT3 a H. pylori an der pathogenesis vun gastric Kriibs VerfÜgung, ze propagéieren mir ob H. pylori VerfÜgung Signaler duerch RKIP. Eis Studien hindeit, datt eng komplex Interaktioun tëscht H. pylori d'cagPAI VerfÜgung, RKIP, STAT3, an Wéngertsschleek Akte vum modulating RKIP Funktioun gastric epithelial Zell apoptosis zu dysregulate, e Mechanismus, datt fir RKIP zu H eng zentral Roll definéiert. pylori VerfÜgung -associated gastric carcinogenesis. VerfÜgung Reagents VerfÜgung All reagents a Chemikalien aus Fläch chemesche Co. (St. Louis, MO) kaf goufen, ausser anescht uginn. MG-132 gouf aus Calbiochem (Gibbstown, NJ) opgeléist an DMSO kaaft an am Konzentratiounslager vun 10 mm benotzt. Interleukin-6 (IL-6) gouf vum BD Biosciences (San Diego, CA) kaaft. Protein quantification reagents sech aus Bio-Rad Laboratoiren Galaxy (Hercules, CA) kritt. Verstäerkte chemiluminescence reagents a Secondaire Maus an Kanéngchen Päerd banne peroxidase-conjugated fir Western blot Analyse waren aus GE Gesondheetswiesen (Piscataway, NJ). D'actin-HRP, phosphorylated-RKIP (pRKIP) an STAT3 antibodies sech vu Santa Cruz Biothechnology (Santa Cruz, CA) kaaft. D'antibodies zu STAT3 pS727 an pY705 an PARP sech aus Zell sécher Technology (Beverly, MA) an der antibody zu RKIP aus Millipore, Billerica, MA kaaft. D'antibody zu Wéngertsschleek war vun Abcam (Cambridge, MA) kaaft. VerfÜgung BTS an Plasmids VerfÜgung De Mënsch gastric carcinoma Zell Linn AGS (loosen-1739) vum amerikanesche Type Kultur Collection kaaft huet (Manasas , VA). MKN28 Zellen sech duerch Dr. Richard Peek, Vanderbilt University, gesteiert, TN Virstellungen a sech ursprénglech aus Riken Zell Bank, Ibaraki, Japan kaaft. Den Ausdrock plasmids fir pcDNA3, c-myc STAT3, CMV-ha-RKIP (ophaalen-RKIP) an CMV-ophaalen eidel Vecteure (ev) hunn beschriwwe ginn [18], [26]. D'plasmid RKIP S153V war vun Dr. fr.svg Rosner, Universitéit vun Chicago, Chicago, IL gëtt. VerfÜgung H. pylori VerfÜgung analyséieren a Kultur Konditioune VerfÜgung Wild Typ H. pylori VerfÜgung analyséieren oder isogenic H. pylori VerfÜgung mutants sech Co-cultured mat der AGS oder MKN gastric Zell Linnen wéi virdru beschriwwen [32] op enger Zuel vun Wonn (MOI) vun 100:1 zu all Experimenter anescht dohinnergestallt. VerfÜgung Transfection vun AGS BTS VerfÜgung AGS Zellen transiently transfected sech mat der GenJet plasmid transfection reagent (Signagen Laboratoiren, Gaithersburg, MD) no de Protokoll d'Produktioun fir e 6-gutt zappen Format. Total DNA Quantitéite vun tëscht 1 an 2 μg sech pro Prouf transfected. Transfection ware vun Analyse vun Zellen mat engem Green D'Protein (GFP) -expressing RKIP plasmid transfected évaluéieren an optimiséiert. Transfection efficiencies sech konsequent an der Gamme vun 75-85%. VerfÜgung Protein erauszéien a Western Blot Analys VerfÜgung Total Zell dovu an subcellular fractionations sech bereet an immunoblotted wéi virdru beschriwwen [29], [32 ]. Protein Konzentratioune sech mat der BCA Protein Assay (Thermo Wëssenschaftlech) alles. Densitometry vun Western blots war no un de Protokoll am folgende Site opgezielt gesuergt:. Http://lukemiller.org/journal/2007/VerfÜgung Realtime Hinnen alleguer VerfÜgung Zwee μg vun RNS getraff huet cDNA benotzt RevertAid éischt-Strand cDNA Synthes Kit (Thermo wëssenschaftlech). Chemeschen real-Zäit Hinnen alleguer war mat 2 × QIAGEN QuantiFast SYBR Green ech (Roche) gesuergt. D'primers fir Wéngertsschleek sech freeën: AGCTCTCTGAGGCCAAGGATCT, ëmgedréint: TGTGGCTTCGGATGTGCAT a Beta-actin: vir: CTGGCACCACACCTTCTACAA, ëmgedréint: CAGCCTGGATAGCAACGTACA. Déi folgend typesch Profil Mol gebraucht goufen fir 40 Monaco: en éischte Schrëtt bei 95 ° C fir 10 min, gefollegt vun 95 ° C fir 15 s an 60 ° C fir 1 min. Der relativer Ausdrock Niveau war Method mat der 2-ΔΔCT berechent wéi virdru beschriwwen [33]. VerfÜgung STAT3 an RKIP Luciferase Reporter Assays VerfÜgung BTS (2 × 10 Apoptosis Assays VerfÜgung Apoptosis zu trennen assays laachen war duerch onkontrolléiert cytometry an DNA véiermol Elisa. Fir Flux cytometry, de Prozentsaz vun apoptotic Zellen (Sous-G O) war duerch onkontrolléiert cytometric Analyse vun propidium Kaliumiodid Kierchefënster Zellen [29] alles. Cytoplasmic histone-verbonne DNA véiermol war mat der Zell Death Detektioun Elisa Plus Kit (Roche, Indianapolis, IN) gemooss no der Taktik vum Produzent. VerfÜgung Cytoplasmic histone-verbonne DNA véiermol mat der Zell Death Detektioun Elisa Plus gemooss gouf Kit (Roche, Indianapolis, IN) no der Taktik vum Produzent. D'Experiment 3 Mol widderholl an am zweete gesuergt. VerfÜgung Lentivirus-mediated Knockdown vun RKIP VerfÜgung pLKO.1 Puro-Resistenz lentiviral RHS3979-97070798 bauen an RHS3979-98492779 sech aus Open Biosystems (Huntsville, AL) kaaft. Déi gesond aus engem puromycin Auswiel Bewaacher geflitzt an huet zu Luria läschen wouvun ampicillin bei 37 ° C ugebaut. Déi läschen war um 10.000 × centrifuged g VerfÜgung fir 10 min. an der supernatant discarded. DNA aus der Pellets war mat der QIAGEN Plasmid Plus Maxi Kit sidd. VerfÜgung 293T Verpackungen Zellen zu niddereg-Antibiotike Wuesstem Medien rakommen waren (DMEM, 10% Hëtzt inactivated FBS, 0,1 × Penicillin /Strepomycin /Glutamine). Zellen sech fir 24 h incubated (37 ° C, 5% CO 2), oder bis si ronn ~70% a Spuenien wär goufen. D'Medien op der 293T Verpackungen Zellen war mat héije Wuesstem Medien wouvun DMEM ersat. Eng Mëschung vun de transfection plasmids sech bereet wéi follegt:. Verpackungen plasmid (ΔVpr.89), Enveloppe plasmid (VSV-G), hairpin-pLKO.1 an eidel Vecteure VerfÜgung FUGENE transfection reagent zu DMEM bereet war laut zu Producteure kritt. Kuerz, goufen déi 3 plasmids dropwise zu der FUGENE an DMEM a gemëscht notéiert. Déi Mëschung ass dann fir 20-30 min ze incubate erlaabt. bei Raumtemperatur. D'transfection mix war dann un der Verpakung Zellen extra derbäi. D'Zellen sech fir ronn 18 h incubated. D'transfection Medien hunn doropshin discarded folgend Moien an ersaat mat héije-Wuesstem Medien. Zellen sech fir 24 h incubated. Lentivirus wouvun Medien war recoltéiert containingand zousätzlech héich-Wuesstem Medien notéiert. Zellen sech fir 24 h incubated an de Medien recoltéiert. Typesch Kollektioun war fir 2-3 Zäit Punkten. All Haren Recolte sech hinzeginn. VerfÜgung AGS Zellen sech zu ronn 50% Niewebaach ugebaut. D'Haren supernatants sech mat polybrene notéiert. Zwielef Stonnen folgenden Wonn, war d'Haren Medien discarded an ersaat mat Haren Medien an incubated fir eng zousätzlech 12 h. D'Medien war discarded a mat Ham d'F12 mëttelfristeg ersat. Zellen sech fir 24 h incubated. Zellen sech an Auswiel Medien opgespléckt vun puromycin wouvun a fir 24 h ze incubate erlaabt. VerfÜgung zu statistique Method All Zell Kultur Experimenter op d'mannst 3 Mol widderholl huet, wann et net anescht uginn, a vläit heeschen Chinchilla Tester goufen benotzt statistesch Bedeitung ze bestëmmen. VerfÜgung H. pylori VerfÜgung Wonn Erhéijung Phosphorylation vun RKIP VerfÜgung RKIP bremst puer Zell Iwwerliewe Weeër, inklusiv deenen mediated duerch NF-kb an Jak /aktuelle Wäert [22]. Fir d'Wierkung vun H entschlësselen. pylori VerfÜgung Harnweeër op RKIP zu gastric Zellen, goufen AGS Zellen Krankheet mat H. pylori VerfÜgung an recoltéiert 2 h an 6 h drop. Als zu Lalumi gewisen. 1A, Niveaue vun phosphorylated RKIP (pRKIP) waren der 2 h nik (3.126-fantastesch) a 6 h (2,9-fantastesch) no H. pylori VerfÜgung Wonn hierkommen total RKIP FAQ Ausdrock fräi 1,4-fantastesch no 2 h an 1,75-fantastesch no 6 h vun H. pylori VerfÜgung Wonn. Ähnlech Resultater goufen och mat MKN gastric Kriibs Zellen kritt (cf. Dorënner S1). VerfÜgung H. pylori VerfÜgung entschlof Phosphorylation vun RKIP ass PKC-ofhängeg VerfÜgung D'phosphorylation vun RKIP op serine 153 vun FAQ kinase C (PKC) seng Fähegkeet Raf un kruet abrogates an inhibit kinase afgerappt MAP sécher [31]. Mir iwwerpréift ob phosphorylation vun RKIP vun H. pylori VerfÜgung war PKC-ofhängeg. AGS Zellen sech mat H infizéiert. pylori VerfÜgung fir 6 h, an d'Presenz oder Feele vun 40 μM bisindolylmaleimide (Bis, engem PKC inhibitor). Eis Resultater weisen, datt de Niveau vun phosphorylated RKIP inhibited war 3,9-fantastesch an RKIP 1.36-fantastesch no H. pylori VerfÜgung Wonn an der Präsenz vun der PKC inhibitor suggeréiert datt RKIP phosphorylation vun H. pylori VerfÜgung doranner, mä vläicht net oofhängeg sinn op, d'PKC-reegelen Passerelle (Figebam. 1B). VerfÜgung IL-6 Induces Phosphorylation vun RKIP a H. pylori- VerfÜgung activéiert STAT3 VerfÜgung Well et en ëmgedréit, et gesäit Relatioun tëscht RKIP an STAT3 Ausdrock vun gastric Kriibs uplanzen [19] ass, évaluéiert mir ob STAT3 a seng Schlëssel regulator IL-6 [17] pRKIP Ausdrock betreffen. IL-6 Behandlung bei enger Dose vu 25 oder 50 Dummeldéng /ml fräi Niveau vun pRKIP FAQ 1,8 an 1,35 fantastesch, respektiv an total RKIP FAQ Ausdrock ofgeholl 0,8 a fräi 1.05 fantastesch, bzw. (Figebam. 2A). D'phosphorylation vun RKIP an Äntwert ze IL-6 war PKC-ofhängeg (Donnéeën net gewisen). Dës Donnéeë weisen, datt IL-6 och phosphorylation vun RKIP zu gastric Zellen induce kann dat geschéie kann, an en Deel, fir eng PKC-ofhängeg Passerelle. VerfÜgung Macrophages release cytokines, dorënner IL-6 während H. pylori VerfÜgung Wonn [34] flénke STAT3 Aktivéierung [17]. Ze ermëttelen d'Auswierkunge vun H. pylori VerfÜgung Wonn op der Aktivatioun vun STAT3, goufen AGS Zellen mat enger IRF-1 reporter bauen transiently transfected [18] a Co-cultured mat H. pylori VerfÜgung um uginn Gamme vun Zuel vun Wonn (MOI) fir 24 h. Eis Resultater weisen, dass bei enger MOI tëscht 10-200:1, H. pylori VerfÜgung gebass STAT3 Transkriptiouns (Figebam. 2C) an STAT3 pY705 phosphorylation (Figebam. 2B) bannent 6 h vu Wonn ze induce. Mir alles nächst ob IL-6 och STAT3 Transkriptiouns zu AGS Zellen stimuléieren konnt. AGS Zellen sech mat IRF-1 a mat Print an oder c-myc-afp STAT3 transiently transfected an dann no 24 h Zellen behandelt mat entweder IL-6 (50 Dummeldéng /ml) oder Co-cultured mat H. pylori VerfÜgung um MOI vun 100:1. D'Resultat, vun Lalumi duergestallt. 2D, déi beweisen, datt IL-6 (p &Si besteet; 0.0003) an H. pylori VerfÜgung (p &Si besteet; 0.0005) waren all méiglech ze vill STAT3 Transkriptiouns ureegen, en Effekt dass verstäerkte war wann AGS Zellen mat STAT3 a Personal mat H transfected goufen. pylori VerfÜgung (p &Si besteet; 0.0000023). Der Opléisung vun STAT3 Aktivéierung war wiesentlech méi wéi AGS Zellen mat IL-6 Co-behandelt goufen an H. pylori VerfÜgung wou mat IL-6 (p &Si besteet; 0.000028) ze behandelen Verglach oder H. pylori VerfÜgung (p &Si besteet; 0.0003). gehalen VerfÜgung Phosphorylated RKIP Induces eegene Transkriptioun VerfÜgung Mir en RKIP luciferase reporter assay benotzt d'Auswierkunge vun H ze ermëttelen. pylori VerfÜgung Harnweeër op RKIP transcriptional Aktivitéit. H. pylori VerfÜgung vill fräi RKIP Transkriptiouns (p &Si besteet; 0.002) mat engem méi wéi 10-fantastesch Erhéijung mat RKIP overexpression Preretraite an enger méi wéi 16-fantastesch Erhéijung mat der Kombinatioun vun H. pylori VerfÜgung an RKIP (p &Si besteet; 0.0003) (Lalumi 3A.) wann Verglach zu onbehandelt AGS Zellen mat eidelen Vecteure transfected. Et war eng däitlech Steigerung (p &Si besteet; 0.0001) zu RKIP Transkriptiouns mat H. pylori VerfÜgung Wonn an RKIP overexpression wann Verglach zu Zellen transfected mat RKIP ouni Wonn (Figebam. 3A). Mir widderhuelen dës Experimenter an der Präsenz vun Bis PKC Aktivitéit zu inhibit d'Erhéijung vun RKIP Transkriptiouns zu phosphorylation war wéinst bestëmmen. An der Presenz vun der PKC inhibitor, H. pylori VerfÜgung fräi RKIP Transkriptiouns an RKIP overexpression och zu der Opléisung vun RKIP Promoteur Aktivitéit duerchgesat. Bis manner RKIP Transkriptiouns vun RKIP overexpression entschlof an H. pylori VerfÜgung Wonn méi wéi 4-fantastesch, wann am Verglach zu Zellen an mat RKIP overexpression a seet, datt dës Auswierkungen op RKIP phosphorylation (Figebam. 3A) ofhängeg waren. Mir iwwerpréift d'Lokalisatioun vun RKIP no H. pylori VerfÜgung Wonn. Immunoblotting subcellular AGS Zellen ufale bewisen, dass pRKIP zu ervirgaangen en der ass iwwerdeems RKIP der Wonn haaptsächlech am Zytosol bleift, (Figebam. 3B). Zesummen, zou deenen Donnéeën déi H. pylori VerfÜgung kann de br vun pRKIP an den helle förderen wou et RKIP Transkriptiouns aktivéieren kann. VerfÜgung H. pylori VerfÜgung -induced RKIP Phosphorylation weieng op H. pylori d'cag VerfÜgung Pathogenicity Island an RKIP Serine 153 VerfÜgung Fir d'Roll vun spezifesch H diskutéieren. pylori VerfÜgung Faktoren an der phosphorylation vun RKIP, wëll Typ H. pylori VerfÜgung an isogenic mutants subtil de ganze cag PAI oder VerfÜgung der oipA VerfÜgung Gentherapie mat AGS Zellen fir 6 h Co-cultured goufen. D' H. pylori VerfÜgung Mann- der cag subtil PAI VerfÜgung ass knapp RKIP phosphorylation zu induce hierkommen d'Wëld Typ stain an der oipA VerfÜgung Mann- staark entschlof RKIP phosphorylation (Figebam. 4A). D'selwecht Trend gouf op STAT3 pY705 observéiert. Dës Resultater hindeit, datt Genen bannent H. pylori d'VerfÜgung cagPAI sinn néideg fir d'Aféierungs- vun RKIP an STAT3 phosphorylation. VerfÜgung Fir ermëttelen wann stattfannen vun serine 153 schellt H. pylori VerfÜgung -mediated RKIP phosphorylation an transcriptional Aktivéierung, goufen AGS Zellen mat enger RKIP transiently transfected bauen an déi serine mat valine op Positioun 153 (S153V) an dann Co-cultured mat H agesprong war. pylori VerfÜgung. Kéier observéiert mir eng grouss dann 16-fantastesch Erhéijung vun RKIP Promoteur Aktivitéit vun Zellen mat RKIP overexpression a H. pylori VerfÜgung Wonn (p &Si besteet; 0.0005). Allerdéngs, an Zellen mat RKIP S153V virum H transfected. pylori VerfÜgung Wonn, et war eng 2,5-fantastesch Reduktioun vun transcriptional Aktivitéit (p &Si besteet; 0.0003) wann am Verglach zu der H. pylori VerfÜgung Wonn am Wildwest Typ RKIP overexpressing Zellen (Figebam. 4C). Zousätzlech, overexpression vun S153V RKIP inhibited H. pylori VerfÜgung -mediated RKIP phosphorylation (Figebam. 4B). Geholl zesummen, weg dës Resultater datt d'phosphorylation an transcriptional Aktivatioun vun RKIP ass ofhängeg H. pylori d'VerfÜgung cagPAI an och op phosphorylation vun RKIP um S153. VerfÜgung H. pylori VerfÜgung Wonn Resultater am RKIP ofgeschnidden an d'Schulung vun Wéngertsschleek VerfÜgung Well fräi RKIP Transkriptiouns vun H entschlof. pylori VerfÜgung Wonn net war, verbonne mat méi roueger Staat total RKIP FAQ Ausdrock, mir iwwerpréift ob H. pylori VerfÜgung kéint d'Quote vun ofgeschnidden vun RKIP FAQ duerch proteasome-mediated ofgeschnidden gläichzäiteg Erhéijung, wéi virdrun [35] ugeholl. RKIP FAQ Niveauen an der Presenz oder Feele vun H MG132 fräi. pylori VerfÜgung Wonn, konsequent mat H. pylori VerfÜgung waarden proteasomal RKIP ofgeschnidden (Figebam. 5A). VerfÜgung weideren Mechanismus, datt fir d'Feele vun Verännerung RKIP FAQ oder mRNA Ausdrock nom H wier transcriptional Repressioun vun RKIP Kont konnt. pylori VerfÜgung Wonn. Wéngertsschleek engem Transkriptiouns Faktor datt eng wichteg Roll an EMT [23] grad sou engem bekannte transcriptional repressor vun RKIP an Aarbecht Kriibs Zellen [25] spillt. Ze ermëttelen d'Auswierkunge vun H. pylori VerfÜgung Wonn op der Ausdrock vun Wéngertsschleek an RKIP, goufen AGS Zellen Co-cultured mat H. pylori VerfÜgung op engem MOI vun 100 Wéngertsschleek mRNA Ausdrock staark no 2-4 h vu Krankheet entschlof war (Figebam. 5D) Western blot Analyse uginn dass H. pylori VerfÜgung Wonn e schéinen Zäit an dodrunner hänkt Erhéijung vun de Wéngertsschleek FAQ Niveauen (Figebam. 5B /C). Dëst Resultat ass mat eisen Daten op RKIP Transkriptiouns no H net konsequent. pylori VerfÜgung Wonn (Figebam. 3) an seet dass H. pylori VerfÜgung Wonn kann an der Aféierungs- vun FAQ (s), dass den Effet vun Wéngertsschleek op RKIP Transkriptiouns abrogate géif. Mir sinn enquêtéiert elo dës Méiglechkeet vun Mass Spectometry Analyse mat den Elteren an RKIP knockdown Zellen (Figebam. 6). VerfÜgung RKIP verbessert H. pylori VerfÜgung -mediated Apoptosis VerfÜgung H. pylori VerfÜgung induces gastric epithelial Zell apoptosis [8]. Zanter RKIP apoptosis Promotioun ka [29], iwwerpréift mir wann der Aféierungs- vun pRKIP no H. pylori VerfÜgung Wonn, kéint fir H responsabel gin. pylori VerfÜgung -induced apoptosis. AGS Zellen sech mat RKIP oder eidelen Vecteure transiently transfected, Krankheet mat H. pylori VerfÜgung fir 16 h an apoptosis via PARP Rëss bewäert Flux cytometry an DNA véiermol. An e puer Experimenter RKIP war vun lentivirus-mediated RKIP knockdown inhibited. Als zu Lalumi gewisen. 6A, H VerfÜgung. pylori VerfÜgung entschlof de Rëss vun PARP, en Effekt datt duerch ectopic Ausdrock vun RKIP fräi war. Flow cytometry Analyse uginn dass H. pylori VerfÜgung Wonn duerchgesat an eng ronn 4-fantastesch Erhéijung vun apoptosis (p &Si besteet; 0.0008), RKIP overexpression, engem 3-fantastesch Erhéijung (p &Si besteet; 0.003) an der Kombinatioun enger 6-fantastesch Erhéijung (p &Si besteet; 0.0005) wann am Verglach zu onbehandelt AGS Zellen (Figebam. 6B). An der Elisa-baséiert DNA véiermol assay, fräi apoptotic Aktivitéit: 2,5 fantastesch (p &Si besteet; 0.000063) zu Zellen Krankheet mat H. pylori VerfÜgung; 1.8 fantastesch (p &Si besteet; 0.006) an Zellen transiently mat RKIP transfected; an 3,5 fantastesch (p &Si besteet; 0.0007) mat der Formatioun (Lalumi 6C.). Fir erauszefannen, ob RKIP war responsabel fir H. pylori VerfÜgung -mediated apoptosis, Trupen mir RKIP Ausdrock benotzt lentivirus-mediated RNS inhibition an observéiert der Reduktioun vun RKIP enger Reduktioun vun RKIP FAQ Niveau vun Western blot Analyse Musiktherapie- an onbehandelt an H. pylori Krankheet AGS Zellen (Figebam. 6D). An eiser DNA véiermol Analyse, an Elteren AGS Zellen H. pylori VerfÜgung Krankheet Goalkeeper vun engem 2-fantastesch Erhéijung (p &Si besteet; 0.0007) zu apoptosis (Lalumi 6E.). An der RKIP AGS Zellen knockdown, H. pylori VerfÜgung Krankheet Goalkeeper vun engem 1,5-fantastesch Erhéijung vun apoptosis (p &Si besteet; 0.003) (. Lalumi 6E). D'Reduktioun vun apoptosis tëscht Elteren a RKIP knockdown AGS Zellen war statistesch relevant (p &Si besteet; 0.0006). Dës Resultater weisen, datt RKIP ass néideg fir H. pylori VerfÜgung -mediated apoptosis. VerfÜgung Kliniken gastritis a verännert bewosst Ëmsaz entschlof vun H. pylori VerfÜgung Wonn der Entwécklung vun distal gastric adenocarcinoma Promotioun [36]. H. pylori VerfÜgung kann gastric epithelial apoptosis duerch verschidde Mechanismen regléieren. Zum Beispill, folgende Wonn an onvergläichleche zu gastric epithelial Zellen, déngt der cag secretion System intracellular Signal transduction ze vergréisseren an den Aktivéierungscode vu NF-kb doraus. NF-kb kann un den helle translocates Transkriptiouns vum pro-apoptotic Genen ze aktivéieren [37]. H. pylori kann VerfÜgung och apoptosis induce vum Ausdrock vun Sekondär waarden a seng ligand (FASL) zu der Aktivatioun vun der extrinsic apoptosis Passerelle Virwaat [38]. Nët, H. pylori VerfÜgung kann aktivéieren och Weeër datt apoptosis [39], besonnesch spéit am Laf vun chronescher Krankheet [40] downregulate. Dëse Lycée Äntwert vun epithelial Zellen apoptosis chronescher H ze widderstoen. pylori VerfÜgung Wonn kann zu H bäidroen. pylori VerfÜgung -induced gastric carcinogenesis [41]. D'apoptotic Äntwert vun gastric epithelial Zellen ze H. pylori VerfÜgung ass och ofhängeg Deformatioun-spezifesch virulence Facteuren. Zum Beispill, Wonn mat cag PAI-positiv analyséieren kann apoptosis méi séier wéi cag PAI-negativ analyséieren [42] induce. D' H. pylori vacA VerfÜgung Gentherapie Produit koum d'Ausriichtung apoptotic Passerelle fir d'Kënschtlech release vun cytochrome c Virwaat, an caspase-3 Aktivéierung [43]. VacA-entschlof apoptosis ass mat enger Reduktioun vun STAT3 verbonne zu der downregulation vun BCL-2 Haaptfiguren an BCL-X L [43]. An anere studéieren, war et bewisen dass H. pylori VerfÜgung induces apoptosis vun enger Passerelle der mi Aféierungs- vun enger steriler caspase-8 Aktivitéit, déi pro-apoptotic Proteinen Bad an Offer, caspase-9 Aktivitéit, an effector caspase-3 Aktivitéit [44] sensibiliséieren. VerfÜgung eis Etude beschreift anere Mechanismus duerch deen H. pylori VerfÜgung Wonn kann apoptosis zu gastric Kriibs Zellen förderen, speziell vun Spur RKIP phosphorylation. D'Kapazitéit vun RKIP Raf /MAPK sécher ze inhibit [26], [27] an förderen apoptosis gutt dokumentéiert gouf [29]. Der Interaktioun vun theses Weeër a RKIP Ausdrock Niveauen gouf op ville Schrëtt vun entholl Opstellung agebonne an /oder Werdegang [30]. Ausserdeem, overexpression vun RKIP Resultater am inhibition vun Metastasen an invasiveness zu verschiddenen entholl Modeller [45] - [48]. D'Basisdaten Mechanismus vun den Ënnerscheed Ausdrock vun pRKIP an RKIP ass net bekannt. Mir haten erwaart datt relativ héichen Niveau vun pRKIP der Wonn mat manner RKIP Niveauen vergläichen kéint. Allerdéngs fonnt mir dass H. pylori VerfÜgung Krankheet Goalkeeper vun der ofgeschnidden vun RKIP FAQ, méiglecherweis Délaie MAPK sécher an apoptosis Aféierungs- zu gastric Kriibs nom H. pylori VerfÜgung Wonn. PKC-mediated RKIP phosphorylation der Fähegkeet vun RKIP zu Raf un kruet desorganiséieren kann an MAPK sécher inhibit [31], allerdéngs hunn et virdrun net ginn all Rapporten iwwert d'Roll vun pRKIP zu der Regelung vun apoptosis. Virdrun Etuden aus eiser Labo hunn dass RKIP overexpression Resultater am direkte Aktivéierungscode vu pro-caspase 8 [29] gewisen. Obwuel phosphoryation Resultater vun nuklearem relocalization, vun RKIP Aktivéierungscode vu sengen eegene Transkriptiouns gefollegt, Erhéijung vum Niveau vun RKIP FAQ do net. Dat seet en aner Mechanismus vun RKIP Regulatioun wéi virdrun erwähnt gouf. Mir sin waat am Moment de Mechanismus vun deem pRKIP apoptosis zu gastric Kriibs Zellen no H Wandel. pylori VerfÜgung Wonn. VerfÜgung Cag-positiv H. pylori VerfÜgung bedeitend der EMT-verbonne Genen Wéngertsschleek, Slug an vimentin zu Associatioun mat der Aféierungs- vun MMP-7, proposéiert Iech eng Roll fir dësen Proteinen am gastric Kriibs Entwécklung [49] upregulate. An eiser Etude observéiert mir d'rapid Aféierungs- vun pRKIP FAQ no H. pylori VerfÜgung Wonn, an eng Erhéijung vun RKIP Transkriptiouns, an eng upregulation vun Wéngertsschleek mRNA an FAQ Ausdrock. Obwuel Wéngertsschleek als transcriptional repressor vun RKIP identifizéiert war [25], eiser Etude beweist, dass et wahrscheinlech keen Effet op d'phosphorylated Form vun RKIP huet, säit der Wonn hu mir net eng Repressioun vun RKIP Transkriptiouns fest. VerfÜgung Aids mat analyséieren vun H cagPAI-: et. pylori VerfÜgung mat enger staark demagogesch Äntwert am Mo. a stellen eng grouss Gefor vun den Entwécklungslänner peptic ulcers oder Mo. Kriibs wéi analyséieren suivéiert d'cag Insel verbonne ginn [36]. H. pylori VerfÜgung induces eng enorm demagogesch Äntwert an lokalen héijen Niveau vun e puer cytokines dorënner interleukin 6 (IL-6) [34].
Aféierung VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
Lentivirus gesond. VerfÜgung
Lentivirus Produktioun. VerfÜgung
Lentivirus Wonn vun AGS Zellen. VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
Allgemeng Pilz op der Haut kann entzündlech Darmkrankheet verursaachen
Erstellt eng kierperlech a genetesch Kaart vu Cannabis sativa
Darmmikrobiota kéint d'Gravitéit vum COVID-19 viraussoen
Heartburn verstoen
D'Halschent vun den Drogen, déi am Gebrauch sinn, beschiedegen Darmbakterien,
Patienten op Immuntherapie solle méi Faser konsuméieren,
COVID-19 Restriktiounen hunn zu 86 Prozent erofgaang an Norovirus Infektiounen an den USA gefouert,
fënnt Studie Den Ufank vun der COVID-19 Pandemie huet zu der Opsetze vu verschiddenen net-pharmazeuteschen Interventiounen (NPIs) weltwäit gefouert. Wärend dBierger an den USA iwwer dBerodung geschwat
Darmbakterien verbonne mat metabolesche Verännerungen an Autismus an enger neier Studie
Fuerscher um California Institute of Technology hunn eng wichteg Entdeckung gemaach, déi erkläre kann wéi Darmbakterien zu autismusähnleche Verhalen bäidroe kënnen. DTeam huet festgestallt datt wa M
Konnt mikroalgen ofgeleet antiviral Verbindunge géint SARS-CoV-2 an aner Virussen bekämpfen?
Mam Entstoe vun der lafender Coronavirus Krankheet 2019 (COVID-19) Pandemie, verursaacht vum schwéieren akuten Atmungssyndrom Coronavirus 2 (SARS-CoV-2), eng frendlech Sich no effektiven a séchere Ant