Sažetak pregled
Helicobacter pylori (H. pylori) pregled je gram-negativna, spiralni obliku bakterija koja inficira više od polovica svjetske populacije, a glavni uzrok želučanog adenokarcinoma. Mehanizmi koje vode H. pylori pregled infekcija želučane karcinogeneze nisu dobro razumjeli. U ovom istraživanju, možemo izvijestiti da je inhibitor Raf-kinaze proteina (RKIP) ima ulogu u indukciji apoptoze u H. pylori Izvor:. Moen EL, Wen S, Anwar T, Cross-Knorr S, Brilliant K, Birnbaum F, et al , (2012) Regulacija RKIP funkcije u Helicobacter pylori Urednik: Yoshio Yamaoka, branitelja Medical Center (111D), United States of America pregled Primljeno: 30. prosinac 2011; Prihvaćeno: 24. travnja 2012; Objavljeno: 25. svibanj 2012 pregled Copyright: © 2012 Moen i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan financiranja. Ovo djelo je podržan od strane Nacionalnog instituta za opće medicinske znanosti National Institutes of Health pod Award broj P20GM103421 (DC); prethodna segment ovog projekta bio je podržan od strane Nacionalnog centra za istraživanje potencijala (NCRR) pod P20 RR 017.695 (DC), R01 CA111533 (SFM) i R21 CA133601 (JMS). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled Uvod pregled rak želuca je četvrti najčešće dijagnosticirana maligna bolest u svijetu. U 2007. godini oko milijun novih slučajeva raka želuca dovodi do približno 800.000 smrtnih slučajeva u svijetu su zabilježene, što je drugi najčešći uzrok smrti od raka [1]. Rak želuca je trenutno sedmi vodeći uzrok smrti od raka u SAD-u, s oko 21.500 novih slučajeva dijagnosticiranih u 2011. godini (http://www.cancer.gov/cancertopics/types/stomach). Gram-negativna, spiralni obliku bakterija Helicobacter pylori (H. pylori) pregled zarazi više od polovice svjetske populacije, te je identificiran kao glavni faktor rizika u želučanom karcinogeneze [2]. Svjetska zdravstvena organizacija i Međunarodna agencija za istraživanje raka je označen kao klasa I kancerogen 1994. godine [3]. Naš trenutni razumijevanje H. pylori pregled induciranu karcinogeneze je da je bakterija, a povezana je kronična upalna reakcija promovirati želučane epitela staničnu smrt apoptoze [4], s naknadnim hiper-proliferaciji [5], a slobodni radikali proizvodnje [6] sve koji pridonose spor i progresivni slijed promjena u sluznici želuca koji u konačnici favoriziraju napredovanje prema raku. Ovaj model je u skladu s izvještajima da su pro-upalni citokin gena polimorfizmi koji povećavaju intenzitet upalnog odgovora koji se odnose na povećani rizik od raka želuca [7]. Pregled H. pylori pregled tijesno prianja na želučani epitelnim stanicama i može direktno inducira apoptozu [8]. CAG (citotoksični povezane gen) patogenosti otok (CAG PAI) u H. pylori pregled je 40 kB segment DNK koji sadrži gene koji kodiraju za komponente sustava za tipa IV bakterijske sekreta [9]. Unutar ovog područja je CagA pregled gen koji kodira CagA, imunodominantnog proteina od 121-145 kDa [9]. H. pylori pregled sojevi posjeduju i koje izražavaju CAG PAI su češće povezani s peptičkog ulkusa i raka želuca u zapadnim populacijama od sojeva koji ne [9]. Danom injekcije preko sustava za izlučivanje Tip IV u domaćina epitelnim stanicama želuca, CagA može naknadno postati fosforiliran Src obitelj tirozin kinaza na C-kraju [10], dovodi CAGA vezati i aktivirati SHP2 i signala putem ERK [11]. Važno je, CagA je također odgovorna za aktiviranje signala sondu i aktivator transkripcije 3 (STAT3) In vitro pregled i In vivo pregled [12], iako to ne mora nužno biti ovisi o fosforilacije CagA [11] pregled STAT proteina konstitutivno izraženi su u nekoliko neoplazmi, uključujući i želuca, dojke, glave i vrata, te raka prostate [13] -. [16]. Po fosforilaciju tirozin 705 ostatka i acetilacije na lizina 685, STAT3 dimerizira i ulazi u jezgru gdje funkcionira na prepisivanje regulirati široku lepezu gena [17], [18]. Aktivacija STAT3 proteina je pokazala da se spriječi apoptoze i povećanje stanične proliferacije i metastaziranja u brojnim raka, uključujući rak želuca [19], [20]. Pregled jedan od simbola želučane napredovanja tumora je stjecanje više invazivnih i migracijskih fenotipova tijekom tranzicije epitelnog-mezenhimalne (EMT). Tijekom EMT, želučanih epitelne stanice prolaze fenotipske promjene koje karakterizira gubitak molekula stanične adhezije, posebno epitelnog kadherina (E-kadherina) [21]. Faktor transkripcije puž, cink 'finger' protein, je prethodno naznačeno kao važan regulator EMT zbog uključivanja putem nuklearne faktora kappa beta (NF-kB), [22] i zatim represiju E-kadherina u epitelnim stanicama tumora [ ,,,0],23], [24]. Osim toga, studije koje koriste dobitak-of-funkcije i gubitak-of-funkcije pristupi su identificirani puž kao represor RKIP transkripciju u metastatskih stanica raka prostate [25]. Pregled RKIP je član fosfatidiletanolamina-vezujući protein obitelj i negativni regulator ERK1 /2 (izvanstaničnim signalom-regulirane kinaze) [26], NF-kB [27] i Grk (G proteinski vezani receptor kinaza) [28] putove. RKIP tako ima važnu ulogu u regulaciji staničnog preživljavanja i apoptozu, osim potenciranje efikasnost kemoterapijskih agensa [29]. RKIP također je identificiran kao metastaze supresorski protein [30], te u bolesnika želučanog adenokarcinoma postoji pozitivna korelacija između ekspresije RKIP i preživljavanje bolesnika i inverzni korelacija između ekspresije RKIP i STAT3 [19]. RKIP izražavanja i funkcija može se regulirati post-translacijske modifikacije. Na primjer, fosforilacija RKIP proteinske kinaze C u serin-153 sprječava RKIP sposobnost da se veže za ciljane molekule, čime deaktivaciju RKIP funkciju [31]. Nadalje, RKIP represija preko promotora metilacije može prevladati metilacije i histona inhibitora deacetilaze [25]. Pregled Zbog važnih uloga RKIP, STAT3 i H. pylori Materijali i metode pregled Reagensi pregled Svi reagensi i kemikalije nabavljene su od Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO), osim ako ako nije drugačije navedeno. MG-132 nabavljen je od Calbiochem (Gibbstown, NJ) otopljeno je u DMSO i korištena u koncentraciji od 10 mM. Interleukin-6 (IL-6), nabavljen je od BD Biosciences (San Diego, CA). Kvantifikacija reagensi proteina dobivene su od Bio-Rad Laboratories, Inc. (Hercules, CA). Hemiluminiscencija reagensi i sekundarni miša i zečja hren peroksidaza-konjugirano za Western blot analize su iz GE Healthcare (Piscataway, NJ). Aktin-HRP, fosforilirani-RKIP (pRKIP) i STAT3 antitijela su kupljena od Santa Cruz Biothechnology (Santa Cruz, CA). Protutijela na STAT3 pS727 i pY705 i PARP su dobivena od tvrtke Cell Signaling Technology (Beverly, MA) i protutijela RKIP od Millipore-a, Billerica, MA. Antitijelo se puž je kupljen od Abcam (Cambridge, MA). Pregled Stanice i plazmida pregled stanične linije ljudskog karcinoma želuca AGS (CRL-1739) je kupljen od American Type Culture Collection (Manasas , VA). MKN28 stanice su donirani od strane Dr. Richard Peek Sveučilišta Vanderbilt, Nashville, TN i izvorno su kupili od Riken Cell Bank, Ibaraki, Japan. Ekspresijski plazmidi za pcDNA3, c-myc STAT3, CMV-HA-RKIP (HA-RKIP) i CMV-HA prazan vektor (EV) su bili opisani [18], [26]. RKIP S153V plazmid je od Dr. Marsha Rosner, University of Chicago, Chicago, IL. Pregled H. pylori Divlji tip H. pylori pregled sojeva ili Izogena H. pylori pregled mutanata su ko-kultiviran s AGS ili MKN želuca stanične linije kao što je opisano [32] pri čemu je multiplicitet infekcije (MOI) od 100:1 u svim eksperimentu, ukoliko nije drugačije navedeno. pregled Transfekcija AGS stanice pregled AGS stanice prolazno su transfecirane upotrebom GenJet plazmida transfekcijski reagens (Signagen Laboratories, Gaithersburg, MD) prema uputama proizvođača za formatu 6 jamica. Ukupna DNK količinama između 1 i 2 ug su transfektirane po uzorku. Transfekcije uvjeti bili procjenjivani i optimiziran analizom stanica transficiranih zeleni fluorescentni protein (GFP) -eksprimirajući RKIP plazmida. Efikasnosti transfekcije su dosljedno u rasponu od 75-85%. Pregled Protein Ekstrakcija i Western blot analize pregled Ukupno stanični ekstrakti i subeelularnim fractionations dobije se imunoblot kako je ranije opisano [29], [32 ]. Koncentracije proteina su određene pomoću BCA protein ispitivanja (Thermo Scientific). Denzitometrija Western blot provedena je u skladu s protokolom navedenim na sljedećoj stranici. Http://lukemiller.org/journal/2007/~~HEAD=pobj pregled Stvarno PCR pregled Dva J..lg RNA pretvoren je u cDNA pomoću RevertAid Prva Strand cDNA Synthesis Kit (Thermo Scientific). Kvantitativno u realnom vremenu PCR je proveden uporabom 2 × Qiagen QuantiFast SYBR Green I (Roche). Primeri za puža bili naprijed: AGCTCTCTGAGGCCAAGGATCT, obrnuti: TGTGGCTTCGGATGTGCAT i beta-aktin: naprijed: CTGGCACCACACCTTCTACAA, obrnuti: CAGCCTGGATAGCAACGTACA. Sljedeće tipične puta profila korišteni su za 40 ciklusa: inicijalnog koraka 95 ° C tijekom 10 minuta, a nakon toga 95 ° C tijekom 15 s i 60 ° C tijekom 1 min. Relativna razina ekspresije je izračunata primjenom metode 2-ΔΔCT kao što je prethodno opisano [33]. Pregled STAT3 i RKIP luciferaze testovima Stanice (2 x 10 5 stanica /dobro 6 jamica) prijelazno su transficirane s 0.1 ug (STAT3, RKIP) ili 0,05 ug (NF-kB) reporterskog plazmida koji sadrži ili STAT3 vezanja sie-fragment promotorske regije gena mišjeg IRF1 (p2xSIE-Luc) ili regija koja promovira RKIP plus naznačeni plazmidi kako je ranije opisano [18]. Približno 24 sati nakon transfekcije, stanice su tretirane s naznačenim lijekom ili zaraženo H. pylori pokusima apoptoze Apoptoza je kvantitativno određen u odvojenim pokusima protočnom citometrijom i DNA fragmentaciju ELISA. Za protočnu citometriju, postotak apoptičnih stanica (sub-G O) određena je protočnom citometrijskom analizom propidiumjodidom stanica obojenih [29]. Citoplazmatski histona povezano DNA fragmentacije izmjerena je Cell Death Detection ELISA plus priborom (Roche, Indianapolis, IN) u skladu s uputama proizvođača. Pregled citoplazmatski histona povezano DNA fragmentacije izmjerena je Cell Death Detection ELISA plus kit (Roche, Indianapolis, IN) u skladu s uputama proizvođača. Eksperimenti su ponavljani 3 puta i izvodi se u dva primjerka. Pregled lentivirusom posredovana obaranje RKIP pregled lentivirasa konstrukti. Pregled pLKO.1 puro otpornost lentivirusni konstruirati RHS3979-97070798 i RHS3979-98492779 su kupljeni od otvorenog Biosystems (Huntsville, AL). Konstrukti sadržavao puromicina odabir markera i rasle su u Luria Broth koji sadrži ampicilin pri 37 ° C. Se bujon centrifugira pri 10.000 × g lentivirus proizvodnje. 293T stanice za pakiranje su posađene na niskim antibioticima medijima za rast (DMEM, 10% toplinom inaktiviranog FBS, 0.1 × penicilin /Strepomycin /glutamin). Stanice se inkubiraju tijekom 24 sata (37 ° C, 5% CO 2), odnosno dok su otprilike ~70% proraštene. Mediji o stanicama 293T pakiranje je zamijenjeno s medijima visok rast sadržavao DMEM. Smjesa transfekcijskim plazmida su pripravljeni kako slijedi: a. Pakiranja plazmid (ΔVpr.89) omotnica plazmid (VSV-G), ukosnice-pLKO.1 i prazan vektor pregled Fugene transfekcijski reagens, proizveden je u skladu DMEM uputama proizvođača. Ukratko, 3 plazmidi se doda kap po kap u Fugene i DMEM i pomiješa. Smjesa se zatim ostavi da se inkubira 20-30 min. na sobnoj temperaturi. Transfekcijska smjesa je zatim pažljivo dodan stanicama pakiranja. Stanice su inkubirane tijekom otprilike 18 sati. Transfekcija mediji tada je odbačena sljedeće jutro i zamijeniti s medijima visoku stopu rasta. Stanice se inkubiraju 24 sata. Lentivirus sadrži medij se sakuplja containingand dodatni mediji visok rast dodan. Stanice su inkubirane tijekom 24 sata, a mediji se prikupe. Tipičan skup je za 2-3 vremenskim točkama. Svi virusni vršidbe su skupljene. Pregled lentivirasa infekcija AGS stanica. AGS stanice su rasle na oko 50% spajanja. Virusni supernatanti doda polibren. Dvanaest sati nakon infekcije, virusna medij je uklonjen i zamijenjen s virusnim medija i inkubira tijekom dodatnih 12 h. Medij je uklonjen i zamijenjen s Ham F12 mediju. Stanice se inkubiraju 24 sata. Stanice su podijeljene u selektivni medij koji sadrži puromicina te ostavi inkubirati 24 sata. Pregled Statističke metode Svi eksperimenti za staničnu kulturu su ponovljeni najmanje 3 puta, ako nije drugačije naznačeno, i uparena t testovi su korišteni za određivanje statističkog značaja. pregled Rezultati pregled H. pylori pregled Infekcija Povećava fosforilaciju RKIP pregled RKIP inhibira nekoliko putova preživljavanja stanica, uključujući i one posredovana NF-kB i JAK /STAT [22]. Da se razjasni učinak H. pylori pregled infekcija na RKIP u želučanim stanicama, AGS stanice su zaražene s H. pylori pregled i prikupe 2 sata i 6 sati kasnije. Kao što je prikazano na slici. 1A, razina fosforiliranog RKIP (pRKIP) su povišene nakon 2 sata (3,126 puta) i 6 sati (2,9 puta), nakon H. pylori pregled infekcija dok izražavanja ukupno RKIP proteina porasla 1,4 puta, nakon 2 sata i 1,75 puta nakon 6 sati od H. pylori H. pylori pregled inducirane Fosforilacija RKIP je PKC ovisan pregled Fosforilacija RKIP na serinu 153 do protein kinaze C (PKC), prekida njegovu sposobnost da se vežu na i inhibira Raf nizvodno MAP signalnu kinazu [31]. Ispitali smo da li fosforilacija RKIP u H. pylori pregled je PKC-ovisna. AGS stanice su zaražene s H. pylori IL-6 izaziva fosforilaciju RKIP i H. pylori- pregled Aktiviranje STAT3 pregled S obzirom da postoji inverzan odnos između RKIP i STAT3 izražavanja u želučanim uzoraka raka [19], istražili smo je li STAT3 i njegov ključni regulator IL-6 [17] utječe pRKIP izraz. IL-6 liječenje u dozi od 25 ili 50 ng /ml povišene razine proteina pRKIP 1,8 i 1,35 fold, respektivno i ukupne ekspresije proteina RKIP smanjena 0.8 i povećano 1.05-struko, odnosno (Sl. 2A). Fosforilacija RKIP kao odgovor na IL-6 je bio PKC-ovisne (podaci nisu prikazani). Ovi podaci pokazuju da je IL-6 također može izazvati fosforiliranje RKIP u želučanim stanicama koje se mogu pojaviti, djelomično, na PKC ovisan put, pregled Makrofazi otpuštaju citokine, uključujući IL-6 tijekom H. pylori pregled infekcija [34] što dovodi do STAT3 aktivacije [17]. Da bi istražili učinke H. pylori pregled infekcije na aktivaciju STAT3, AGS stanice privremeno su transfecirane sa IRF-1 reporterskim konstruktom [18] i ko-kultiviranih s H. pylori Fosforilirani RKIP inducira vlastiti Transkripcija pregled Mi smo koristili jedan RKIP reporterski Luciferaze istražiti učinke H. pylori H. pylori pregled induciranu RKIP fosforilacija Ovisi o H. pylori je CAG pregled Patogenost Island i RKIP serin 153 pregled Kako bi se procijenila uloga specifičnih H. pylori pregled čimbenika u fosforilaciju RKIP, divlji tip h. pylori pregled i izogeni mutanti koji nemaju cijelu CAG Pai ili Kako bi istražili da li mutacija serina 153 utječe na H. pylori H. pylori pregled infekcije Rezultati u RKIP degradacija i indukcija puž Netlogu Zbog povećane RKIP transkripcija izazvana H. pylori pregled infekcija nije bila povezana s povećanim steady state izražavanja ukupno RKIP proteina, ispitali smo je li H. pylori pregled bi istovremeno povećanje brzine degradacije proteina RKIP razgradnjom proteazoma posredovane, kao što je prethodno predložen [35]. MG132 povećana razina RKIP proteina u prisustvu ili odsustvu H. pylori Drugi mehanizam koji bi mogao objasniti nedostatak promjene RKIP proteina ili mRNA ekspresije bi transkripcije represija RKIP nakon H. pylori RKIP Poboljšava H. pylori pregled posredovanih Apoptoza pregled H. pylori pregled uzrokuje želučane epitelnih stanica apoptoza [8]. Od RKIP mogu promovirati apoptozu [29], ispitali smo ako je indukcija pRKIP nakon H. pylori pregled infekcija, može biti odgovoran za H. pylori Rasprava pregled kronični gastritis i izmijenjen stanični promet izazvana H. pylori pregled infekcija promicati razvoj distalnog želučanog adenokarcinoma [36]. H. pylori pregled može regulirati želučane epitela apoptozu kroz nekoliko mehanizama. Na primjer, nakon infekcije i pridržavanje želuca epitelnih stanica, sustav izlučivanja cag služi za promjenu unutarstanični prijenos signala koja dovodi do aktivacije NF-kB. NF-kB može translocira se u jezgru za aktiviranje transkripcije proapoptotska genima [37]. H. pylori pregled može izazvati apoptozu povećanjem ekspresije FAS ligand i njegov (FasL) koji vodi do aktivacije vanjsko apoptoze puta [38]. Paradoksalno, H. pylori pregled također aktiviraju putove koji potiskuju apoptozu [39], posebno navečer tijekom kronične infekcije [40]. Ovaj adaptivni odgovor epitelnih stanica odoljeti apoptoze u kroničnoj H. pylori pregled infekcija može doprinijeti H. pylori pregled induciranu želuca karcinogeneze [41]. Apoptozni odgovor želučanih epitelnih stanica u H. pylori pregled ovisi io strain specifične čimbenika virulencije. Na primjer, infekcija s CAG PAI-pozitivni sojevi može izazvati apoptozu brže nego CAG PAI-negativnih sojeva [42]. H. pylori Vaca pregled genski proizvod potiče unutarnju apoptoze vodi do mitohondrija oslobađanje citokroma c, i kaspaza-3 aktivacije [43]. Vaca inducirana apoptoza je povezana sa smanjenjem STAT3 koji vodi u smanjenom Bcl-2 i Bcl-X L [43]. U drugoj studiji, pokazano je da H. pylori pregled inducira apoptozu staza uključuje sekvencijalni indukciju apikalni kaspaze-8 aktivnosti, proapoptotska proteini loš i ponudu, kaspaza-9 aktivnost, a sredstva za povećanje kaspaze-3 aktivnosti [44]. pregled Naša studija opisuje još jedan mehanizam kojim H. pylori pregled infekcija može promovirati apoptoze u želučanih stanica raka, posebno promicanjem RKIP fosforilacija. Sposobnost RKIP da inhibira Raf /MAPK signalizacije [26], [27] i promicati apoptoza je dobro dokumentirano [29]. Interakcija teza putova i stupnjeve RKIP ekspresije bila je uključena u niz koraka nastajanje tumora i /ili progresije [30]. Nadalje, prekomjerna ekspresija rezultira RKIP u inhibiciji metastaza i invazivnosti u raznim modelima tumora [45] - [48]. Temeljni mehanizam diferencijalne ekspresije pRKIP i RKIP nije poznat. Imali smo očekivali da relativno viša razina pRKIP nakon infekcije može korelirati s nižim razinama RKIP. No, otkrili smo da H. pylori pregled, zaraza je nastala u razgradnji RKIP proteina, vjerojatno čime MAPK signalizacije i indukcija apoptoze kod raka želuca nakon H. pylori CAG-pozitivni H. pylori Infekcije s cagPAI-posjedovanje sojeva H. pylori pregled povezane su s jačim upalnog odgovora u želucu i predstavljati veći rizik od razvoja peptičkog ulkusa ili raka želuca nego sojeva nedostaje CAG otok [36]. H. pylori pregled uzrokuje intenzivan upalnog odgovora i lokalno visoke razine nekih citokina, uključujući interleukin 6 (IL-6) [34].
u želučanim epitelnim stanicama. Western blot i transkripcija luciferaze testovi pokazuju da je patogenost otok H. pylori pregled brzo fosforilira RKIP, koji se zatim lokaliziranja do jezgre gdje aktivira svoj transkripciju i izaziva apoptozu. Prisilno pojačanom ekspresijom RKIP poboljšava apoptozu u H. pylori
-infected stanice, dok RKIP RNK inhibicija potiskuje indukciju apoptoze u H. pylori
infekcije. Dok inducira fosforilaciju RKIP, H. pylori pregled istovremeno cilja nisu fosforilirani RKIP za razgradnju proteasomalni posredovane. Porast RKIP transkripcije i fosforilacija se poništava sa mutira RKIP serina 153 u valin, pokazujući da regulacija RKIP aktivnosti u H. pylori pregled ovisi o RKIP je S153 ostatka. Osim toga, H. pylori pregled infekcija povećava ekspresiju puž, a transkripcijski represor RKIP. Naši rezultati ukazuju na to da H. pylori pregled koristi tumor supresorski protein, RKIP, promicati apoptoze u želučanim stanicama raka pregled
u rak želuca. PLoS ONE 7 (5): e37819. doi: 10,1371 /journal.pone.0037819 pregled
u patogenezi karcinoma želuca, istraživali smo da li H. pylori
signale putem RKIP. Naša istraživanja pokazuju da složene interakcije između H. pylori je cagPAI pregled, RKIP, STAT3 i puž djeluje na dysregulate želučane epitelnih stanica apoptozu modulacijom RKIP funkcija, mehanizam koji određuje centralnu ulogu RKIP u H. pylori pregled -associated želuca karcinogeneze. pregled
Sojevi i kulture uvjetima
preko noći ili se ne liječi. Aktivnost luciferaze iz citosolne supernatanta je određen primjenom Luciferase Reporter Assay (Promega) i izmjerena pomoću luminometra za procjenu transkripcijske aktivnosti [18]. Pregled
10 min. i supernatant je odbačen. DNA iz peleta pročišćava pomoću QIAGEN Plasmid Maxi Kit Plus. Pregled
infekcije. Slični rezultati su dobiveni s MKN stanica raka želuca (vidi Sliku S1). Pregled
6 sati, u prisustvu ili odsustvu 40 uM bisindolylmaleimide (Bis, inhibitor PKC). Naši rezultati pokazuju da su razine fosforilirane RKIP je inhibirana 3,9 puta i RKIP 1,36 puta nakon H. pylori
infekcije u prisutnosti inhibitora PKC, pokazujući da je fosforilacija RKIP u H. pylori pregled uključuje, ali se ne može u potpunosti ovisi o, PKC-regulirana put (Sl. 1b). pregled
na označenom rasponu mnogostrukosti infekcije (MOI) tijekom 24 h. Naši rezultati pokazuju da na moi između 10-200:1, H. pylori pregled je bio u stanju izazvati STAT3 transkripcije (Sl. 2c) i STAT3 pY705 fosforilaciju (sl. 2b) u roku od 6 sati od infekcije. Potom smo utvrditi da li IL-6 također može potaknuti STAT3 transkripciju u AGS stanica. AGS stanice prolazno su transfecirane IRF-1 i EV a ili c-myc-označeni STAT3, a zatim nakon 24 h stanicama tretiranim ili IL-6 (50 ng /ml) ili ko-kultivirane s H. pylori
na MOI 100:1. Rezultati, prikazani na slici. 2D pokazuju da IL-6 (p < 0.0003) i H. pylori pregled (p < 0.0005) svaki su mogli značajno stimulirati transkripciju STAT3, učinak koji je pojačana kada AGS stanice su transfektirane s STAT3 i inficirane s H. pylori pregled (p < 0,0000023). Poboljšanje aktivacije STAT3 značajno povećava kada AGS stanice je istovremeno tretirani s IL-6 i H. pylori
u odnosu na liječenje s IL-6 (p < 0,000028) ili H. pylori pregled (p < 0.0003). sami pregled,
infekciju na RKIP transkripcije aktivnosti. H. pylori pregled značajno povećao RKIP transkripcije (p < 0.002), s više od 10-struko povećanje se javljaju sa RKIP prekomjernom ekspresijom i veće od 16-struko povećanje s kombinacijom H. pylori pregled i RKIP (p < 0.0003) (Slika 3A). u usporedbi s netretiranim AGS stanice transfektirane s praznim vektorom. Došlo je do značajnog povećanja (p 0,0001) u RKIP transkripcije s H. pylori infekcije i pregled RKIP pojačana ekspresija u usporedbi sa stanicama presječenim samo sa RKIP bez infekcije (Sl. 3A). ponavlja se te pokuse, u prisutnosti bis za inhibiciju aktivnosti PKC za određivanje povećanje RKIP transkripcije je zbog fosforilacije. U prisutnosti inhibitora PKC, H. pylori
povećana RKIP transkripcija i RKIP pretjerana ekspresija također je rezultiralo u poboljšanju RKIP promotorske aktivnosti. Bis smanjena RKIP transkripciju izazvanu RKIP prekomjernom ekspresijom i H. pylori infekcija pregled veća od 4 puta, u usporedbi sa stanicama s RKIP prekomjernom ekspresijom i ukazuje da su ti učinci su ovisni o RKIP fosforilacije (Sl. 3A). Ispitali smo lokalizaciju RKIP nakon H. pylori
infekcije. Imunobloting subeelularnim AGS stanica frakcije su pokazali da pRKIP lokaliziran na jezgru, a RKIP ostaje uglavnom u citosolu nakon infekcije (Sl. 3B). Zajedno, ovi podaci upućuju na to da H. pylori pregled može promicati translokacije pRKIP u jezgru gdje se može aktivirati RKIP transkripciju. pregled
oipA pregled gena su ko-kultiviran s AGS stanica za 6 h. H. pylori pregled mutant nedostaje CAG PAI pregled je bio u stanju inducirati fosforilaciju RKIP, a divljeg tipa mrlju i oipA pregled mutant snažno inducirane fosforilacije RKIP (Sl. 4a). Isti trend zabilježen je na STAT3 pY705. Ovi rezultati ukazuju na to da geni unutar H. pylori je
cagPAI su potrebne za izazivanje RKIP i STAT3 fosforilaciju. pregled
posredovano fosforilaciju RKIP i aktivacije transkripcije, AGS stanice prolazno su transfecirane sa RKIP konstrukt u kojem je serin zamijenjen valinom na položaju 153 (S153V) i zatim ko-kultivirane s H. pylori
. Još jednom smo uočili veću tada 16-struko povećanje aktivnosti RKIP promotora u stanicama s RKIP prekomjernom ekspresijom i H. pylori infekcija pregled (p < 0,0005). Međutim, u stanicama transficirane RKIP S153V prije H. pylori pregled infekcija, došlo je do 2,5 puta smanjenje transkripcije aktivnosti (p < 0,0003) u odnosu na H. pylori pregled infekcije u divlji tip RKIP ekspresijom stanice (Sl. 4C). Osim toga, prekomjerna ekspresija S153V RKIP inhibirana H. pylori pregled posredovanih fosforilacija RKIP (Sl. 4B). Uzeti zajedno, ovi rezultati pokazuju da fosforilacija i transkripcijska aktivacija RKIP ovisi H. pylori je pregled cagPAI i na fosforilaciju RKIP na S153. pregled
infekcije, u skladu s H. pylori
veći proteasoma RKIP degradaciju (sl. 5a). pregled
infekcije. Puž je transkripcijski faktor koji igra važnu ulogu u EMT [23] kao i da je poznata transkripcijski represor RKIP u stanicama raka prostate [25]. Da bi istražili učinke H. pylori pregled infekcije na ekspresiju puža i RKIP, AGS stanice su ko-kultiviran s H. pylori
na moi 100. puž mRNA ekspresije snažno izazvanog nakon 2-4 sata od infekcije (Sl. 5D) Western blot analiza je pokazala da su H. pylori infekcija pregled rezultirao bi u vremenu i o dozi ovisnom povećanju razine puž proteina (Sl. 5B /C). Ovaj rezultat nije u skladu s našim podacima o RKIP transkripcije nakon H. pylori
infekcije (Sl. 3) i predlaže da se H. pylori pregled infekcija može u indukciji proteina (e) koje bi poništilo učinak puž na RKIP transkripcije. Trenutačno istražujemo tu mogućnost masenom spektrometrijom analize pomoću roditeljske i RKIP obaranje stanice (Sl. 6). Pregled
pobuđenog apoptozu. AGS stanice prolazno su transfecirane RKIP ili praznim vektorom, zaražena H. pylori
16 h i apoptoze ocijenjeni preko cijepanja PARP protočne citometrije i DNA fragmentacije. U nekim eksperimentima RKIP je inhibirana lentivirusom posredovane RKIP obaranje. Kao što je prikazano na slici. 6A, H pregled. pylori pregled izazvana cijepanja PARP, što je učinak koji je povećan za izvanmaternične izražavanja RKIP. Protočna citometrija analize pokazuju da H. pylori pregled infekcija rezultiralo je približno 4-struko povećanje apoptoze (p < 0.0008), RKIP nadekspresije, 3-struko povećanje (p < 0.003), te kombinacije 6-struki porast (p < 0,0005) u usporedbi sa netretirane AGS stanice (Sl. 6B). U fragmentaciju testu DNK ELISA-based, apoptoze aktivnost porasla: 2,5 puta (P '0.000063) u stanicama inficiranim H. pylori
; 1,8 puta (p < 0.006) u stanicama koje su prijelazno transficirane s RKIP; i 3.5 puta (p < 0.0007) u kombinaciji (Slika 6c.). Da bi se utvrdilo da li RKIP bio odgovoran za H. pylori pregled posredovanih apoptozu, potiskuje se izraz RKIP pomoću inhibicije RNK lentivirusom posredovanih opaženo smanjenje razine RKIP proteina pomoću Western blot analize pokazuju smanjenje RKIP u netretiranih i H. pylori inficirane AGS stanicama (Sl. 6D). U našoj DNA fragmentaciju analize, u roditeljskim AGS stanicama H. pylori infekcija pregled rezultirao 2-struko povećanje (p < 0.0007) u apoptozu (Slika 6E.). U RKIP obaranje AGS stanica, H. pylori infekcija pregled rezultirao 1,5-struko povećanje apoptoze (p < 0.003) (Sl. 6e). Smanjenje apoptoze između roditelja i RKIP obaranje AGS stanica bila je statistički značajna (p < 0.0006). Ovi rezultati pokazuju da RKIP je potrebno za H. pylori
posredovano apoptozu. pregled
infekcije. RKIP fosforilacija PKC-posredovana može poremetiti sposobnost RKIP da se vežu na Raf i inhibira MAPK signalizacije [31] Međutim, tamo nisu bili ranije bilo izvješća o ulozi pRKIP u regulaciji apoptoze. Prethodne studije iz našeg laboratorija pokazuju da se RKIP Prekomjerna ekspresija rezultate u izravnom aktivacijom pro-kaspaze 8 [29]. Iako phosphoryation rezultira nuklearne relokalizaciju, zatim RKIP aktivacije vlastitu transkripciju, razina proteina RKIP ne povećavaju. To ukazuje na drugačiji mehanizam regulacije RKIP nego što je to ranije bio prijavljen. Trenutno se ispituju mehanizam kojim pRKIP izaziva apoptozu u stanicama raka želuca nakon H. pylori pregled infekcija. pregled
znatno pojačanog je EMT povezane gene puž, cjevčica i vimentin u suradnji sa izazivanjem MMP-7, što ukazuje na ulogu ovih proteina u razvoju raka želuca [49]. U našoj studiji smo promatrali brzu indukciju pRKIP proteina nakon H. pylori pregled, infekcija, te povećanje RKIP transkripcije, a uzlazni puž mRNA i proteina. Iako je puž je identificiran kao transkripcijski represor RKIP [25], naša studija pokazuje da to vjerojatno nema nikakvog utjecaja na fosforilirani oblik RKIP, jer nakon infekcije nismo promatrati represiju RKIP transkripcije.
Istraživači se nadaju da bi krvni test koji točno dijagnosticira fibromialgiju mogao biti dostupan u roku od pet godina
Istraživači Sveučilišta Ohio State imaju dokaze da uzorci krvi mogu pouzdano otkriti fibromijalgiju, bolest koja se često pogrešno dijagnosticira zbog svojih općih simptoma koji karakteriziraju niz dr
Novi super aktivirajući receptor makrofaga mogao bi objasniti hiperinflamaciju u teškom obliku COVID-19
Imunitet je zanimljiva stvar. Iako je bitan u zaštiti tijela od invazije patogena i stranih antigena, također se može okrenuti protiv tijela i pokrenuti destruktivne imunološke procese. Nova studija o
Funkcija jetre može biti važna u riziku od Alzheimerove bolesti
Nova studija pokazuje snažnu vezu između promijenjene funkcije jetre i razvoja Alzheimerove bolesti (AD). To je u korelaciji s nedavnim podacima o ulozi bolesti koje utječu na sistemski metabolizam, p
