PLoS ONE: podokaliksinu kao prognostički biljeg u želučanom Cancer

Sažetak pregled

Pozadina pregled

podokaliksinu nalik 1 (PODXL) je stanično prianjanje glikoprotein povezan s agresivnim tumorom fenotipom i lošom prognozom u nekoliko oblika raka. Cilj ovog istraživanja bio je ispitati ekspresiju PODXL u rak želuca upotrebom dva različita antitijela. Pregled

Metode pregled

tumor tkiva Microarrays i imunohistokemijski smo ocijenili PODXL izraz kod tumorskih uzoraka od 337 pacijenata koji je podvrgnut operaciji zbog želučanog adenokarcinoma u Helsinkiju sveučilišne bolnice. Koristili smo dva različita antitijela. HPA2110, što je poliklonsko protutijelo i in-house monoklonsko antitijelo zove HES9, da istraži povezanost PODXL izražavanja s kliničko varijabli i preživljavanje pacijenta pregled

Rezultati

PODXL bojanje pozitivnim poliklonskog protutijela u 153 (57,5%) slučajeva i monoklonskih antitijela na 212 (76%). Poliklonalno protutijelo ekspresije bio povezan sa crijevne tipa raka (p < 0.001). Monoklonalno antitijelo obojenje bilo je povezano s dobi iznad 66 (p = 0,001), s raka crijeva (p < 0.001), i uz male veličine tumora (≤ 5 cm; p = 0,024). Oba protutijela su povezane s visokim S-faze frakcija (p = 0,022; p = 0.010) i visoki tumor indeks proliferacije (Ki-67, p = 0,003; p = 0,001). PODXL pozitivnost koju poliklonskog antitijela ukazala smanjena 5-godišnje preživljavanje želuca raka specifičan od 24,0% (95% CI 16,9 - 31,1), u odnosu na 43,3% (95% CI 33,7 - 52,9) za bolesnike s PODXL negativnosti (p = 0,001 ). Rezultat je ostao značajan u multivarijatnog. (HR = 3,17; 95% CI 1,37-7,34, p = 0,007) pregled

Zaključak pregled

U karcinoma želuca, PODXL ekspresijom poliklonskim HPA2110 antitijela je neovisno markera lošom prognozom pregled

Izvor. Laitinen A, Böckelman C Hagström J, Kokkola A, Fermér C, Nilsson o, et al. (2015) podokaliksinu kao prognostički biljeg u rak želuca. PLoS ONE 10 (12): e0145079. doi: 10,1371 /journal.pone.0145079 pregled

Urednik: Yves St-Pierre, INRS, Kanada pregled

Primljeno: 15. rujna 2015. godine; Prihvaćeno: 29. studeni 2015; Objavljeno: 16. prosinca 2015 pregled

Copyright: © 2015 Laitinen et al. Ovo je otvoreno pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan pregled

Podaci Dostupnost: sve relevantne podatke su u radu pregled

Financiranje:. Ova studija je podržan od strane potpore iz Finska Läkaresällskapet, Kurt och Doris Palander zaklade, Sigrid Jusélius temelj, a medicinska understödsföreningen Liv OCH Halsa. Fujirebio Dijagnostika AB i Onson Consulting pruža podršku u obliku plaće za autore CF i dalje, ali nije imao nikakvu dodatnu ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, odluku da objavi, ili pripremu rukopisa. Pregled

suprotstavljenih interesa. autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

u posljednjih desetljeća incidencija karcinoma želuca je u padu, naročito u zapadnim zemljama, očito s obzirom na opada učestalost Helicobacter pylori pregled, kako bi se bolje higijene i manje gužve život. Budući da rak želuca ima lošu prognozu, i dalje je globalno drugi najčešći uzrok smrti od raka povezane s [1]. Stopa preživljavanja 5 godina, unatoč ljekovito operaciju, je samo oko 10-30% [2]. Visoka smrtnost je uglavnom zbog kasne dijagnoze. Pregled

UICC tumora metastazama (TNM) klasifikacija je daleko najviše dosljedan prognostički sustav klasifikacije danas. Međutim, čak i unutar istih tumora grupi fazi, tijek bolesti može varirati. Izrada metode za točniju procjenu neoplazije agresivnosti bi biti od vrijednosti kod ocjenjivanja prognozu pojedinih bolesnika s karcinomom želuca. Pregled

podokaliksinu nalik 1 (PODXL) je anti-ljepilo transmembranski glikoprotein pripada obitelji CD34 , Izražava se normalno podocytes bubrega [3], hematopoetskih ishodišnih stanica [4], vaskularne endotelin [5] i dojke epitelnih stanica [6]. Pregled

Klinički značaj PODXL u progresiji karcinoma je ispitivan u razne vrste karcinoma, najprije kao matičnih stanica marker na rak testisa [7]. Kasnija nalaz je da tumorske stanice specifični PODXL ekspresija povezana s agresivnijim fenotipom i negativnih rezultata u nekoliko vrsta raka, na primjer, dojci [6], prostate [8], jajnika [9], kolorektalni [10- 12], urothelial mjehura [13], gušterače [14], a periampullary raka [15]. pregled

Cilj ovog istraživanja bio je ispitati ekspresiju PODXL u rak želuca otkriti svoju moguću ulogu u agresivnosti i prognoze. Odlučili smo koristiti dva PODXL antitijela koja prepoznaju različite epitope: monoklonsko u kući HES9 antitijela i komercijalno dostupne poliklonski HPA2110 antitijela. Nedavno smo saznali da su ta dva antitijela su neovisni markeri lošom prognozom u rak debelog crijeva [12]. Dva protutijela se mogu prepoznati dvije skupine bolesnika s kolorektalnim karcinomom, obojica imaju lošu prognozu; Kombinirana upotreba tih antitijela otkrila pacijenta grupu sa još gorom prognozom [16]. pregled

Materijali i metode

Pacijenti

Istraživanje je obuhvatilo 337 uzastopnih pacijenata koji su imali operaciju za histološki provjereno želučane adenokarcinom na Odjelu za kirurgiju, Helsinki University Hospital, od 1983. do 1999. Dijagnoza i postavljanje prema klasifikaciji UICC uvjetom 100 (29,7%) stadij IA-IB, 41 (12,2%), faza II, 96 (28,5%) faza IIIA-IIIB, a 100 (29,7%) faza IV pacijenata. Limfna-čvor metastaze su se dogodili u 184 (55%) i udaljene metastaze u 93 (28%) slučajeva. Medijan dobi bio je 66 godina (raspon 30-87), a 163 (48%) su žene i 174 (52%) muškaraca. Potpuno ili djelomično gastrektomije s druge (D2 D2 +) Limfadenektomija je provedeno u 34 (10%) bolesnika, ukupne gastrektomije s D1-Limfadenektomija u 161 (48%), a ukupan zbir gastrektomije s D1-Limfadenektomija u 142 (42%). Ukupno je 143 (43%) bolesnika operiran je s namjerom izliječenja, a 176 (52%) podvrgnut palijativnu operaciju. Nitko dobila neoadjuvant tretman, ali 32 (9%) bolesnika primila postoperativni tretman kao pomoćnog sredstva (28 kemoterapija, radioterapija 2, 2 dobila oba). Survival podataka i uzrok smrti do studenog 2013. godine došao iz kartona pacijenata, stanovništvo Registracija centar Finske, a statistika Finska. Pregled

Istraživanje je odobreno od strane Kirurški etičkog povjerenstva u Helsinkiju Sveučilišne bolnice (Dnro HUS 226 /E6 /06, proširenje TMK02 §66 2013/04/17) i Nacionalno nadzorno tijelo za skrb i zdravstvo dao dozvolu za korištenje uzorke tkiva, bez pojedinačnog pristanka u ovom retrospektivnom istraživanju (Valvira Dnro 10041 /06.01.03.01 /2012). pregled

uzorci tkiva

formalinom fiksne i parafin uklopljenih uzoraka kirurški tkiva došao iz arhiva Zavoda za patologiju. Tkiva bolesnika su de-identificirani i analizirani anonimno. Patohistološki definirani su reprezentativni prostori tumorskih uzoraka i označen na haematoxylin- i eozinom umrljane slajdova. Tri jezgre iz svakog bloka tumora su uzorci sa 0,6 mm Punchers i ugrađen u novi parafinskog bloka od poluautomatske microarrayer tkiva (tkiva Arrayer 1, Beecher Instruments Inc., Silver Spring, MD, USA). Od šest tkiva-array blokovi pripremljeni, a svaki je sadržavao 24-192 uzoraka tumora. Sekcije od 4 um svakog se izreže i obrađeni za imunohistokemijski. Pregled

Antitijela pregled

Usporedili smo dva PODXL antitijela protiv različitim epitopima. Poliklonska antitijela (HPA2110, Atlas Antibodies, Stockholm, Sweden) je potaknuto protiv peptida s aminokiselinskim ostacima 278-415 u PODXL, i monoklonalno antitijelo u kući HES9 [12] prepoznaje aminokiselinski ostaci 189-192 u PODXL , Oba epitopa javljaju u izvanstaničnoj dijelu PODXL molekule. Epitop slijed HPA2110 utakmice tri protein kodirane PODXL inačicama povezivanja sa 100% (PODXL 001, 005 i 201, humani protein Atlas). Četvrti povezana varijanta podudara s 87% (PODXL 202). Epitop sekvence HES9 odgovara 100% sa svim inačicama povezivanja. Antitijela opisane su detaljno [12,17,18]. Pregled

Imunohistokemija pregled

Sekcije su fiksirane na stakalca i suši 12 do 24 sata na 37 ° C, zatim se deparafmizirani u ksilenu i rehidrirane postupno smanjuje koncentracija etanola u destiliranoj vodi. Za dohvat antigen, sekcije su tretirani na prethodne obrade modula (Lab Vision, Fremont, Corp. CA, USA) u Tris-HCl puferu (pH 8.5) tijekom 20 minuta pri 98 ° C. Sekcije su obojene u Autostainer 480 (Lab Vision) u sustavu Dako REAL EnVision Detection, peroksidaza /DAB +, zec /Miš (Dako, Glostrup, Danska). Stakalca su tretira tijekom 5 minuta sa 0.3% Dako real-peroksidaze Otopina za blokiranje radi blokiranja endogene peroksidaze. Zatim se inkubira tijekom 1 sata sa poliklonalna (razrjeđenje 1: 250 = 2,5 ug /ml) ili monoklonskim antitijelom (razrjeđenje 1: 500 = 5 ug /ml) na sobnoj temperaturi. Kao pozitivna kontrola za svaku bojenje seriji smo koristili uzorke iz bubrežnog tkiva. Pregled

bodovanje imunoreaktivnost pregled

HPA2110 i HES9 immunopositivity ocijenjena u svim dostupnim tumorskih jezgara. Citoplazmatski PODXL i HES9 immunopositivity ocijenjena je kao 0 do 3 temelji na intenzitetu stanica karcinoma imunog, a najviša ocjena od tri jezgre služio za daljnju analizu. Negativan imunoreaktivnost je zabio kao 0, difuzni slabu citoplazmatski pozitivnost kao 1, umjereno pozitivno ili fokalno jako pozitivna intenzitet kao 2 i homogeno jak intenzitet kao 3. Svi uzorci su označeni kao samostalno dva istraživača (AL i JH) zaslijepljeni kliničkog statusa i rezultata podaci. Uzorci s oprečnim rezultatima ponovno su procijenjene, a konsenzus rezultat je služio za daljnju analizu. Mi smo bili u mogućnosti obraditi i rezultat HPA2110 mrlje na 266 i HES9 bojenja 279 uzoraka. pregled

Statistička analiza pregled

povezanosti HPA2110 i HES9 pozitivnosti i kliničko varijabli su ocijenjeni od strane hi-kvadrat testa ili Fisherov egzaktni test. Korelacije između dvije podokaliksinu antitijela su ocijenjeni od strane Spearman korelacije testa. preživljenja bez znakova bolesti specifične izračunata je iz datuma operacije do smrti od raka želuca.

Krivulje preživljavanja su izgrađene u skladu sa Kaplan-Meier metodi i usporedbi s testom logrank. Za Univarijatnom i multivarijatnog opstanak, Cox modelu proporcionalnog opasnost imale su sljedeće kovarijable ušli su: dob, spol, stupanj, stupanj, Laurens klasifikacija, veličina tumora, mjesto tumora, PODXL izraz određuje HPA2110 bojenja i HES9 bojenje, DNA brojem kromosoma, S- faza frakcija, Ki-67 ekspresija i ekspresije p53. Stage, razred, Laurens klasifikacija, veličina tumora, DNK ploidnosti, S-faze frakcija, a izraz PODXL, HES9, Ki-67 i p53 su ušli kao kategoričan kovarijanata. DNA ploidnosti i S-faze frakcija je ranije ocjenjuje protočnom citometrijom i p53, te ekspresija Ki-67 tkivo imunohistokemijski [19,20]. P-vrijednost 0,05 smatrana je statistički značajnom. Sve statističke analize su učinili s IBM SPSS Statistics verzija 20.0 za Mac (IBM Corporation, Armonka, NY, USA). Pregled

Rezultati pregled

Imunohistokem pregled

citoplazmatske HPA2110 reaktivnost, ocjenjuje se u 266 predmeti, bio negativan u 113 (42,5%), slabo pozitivno u 120 (45,1%), umjereno pozitivno u 29 (10,9%), i jako pozitivna u 4 (1,5%) slučajeva. Od 279 slučajeva uspješno obojenih za citoplazmatski ekspresiju HES9, 67 (24,0%) bili negativni, 137 (49,1%) slabo pozitivan, 54 (19,4%) umjereno pozitivno, a 21 (7,5%) snažno pozitivno. U konačnoj analizi, slabo do jako pozitivnih HPA2110 i HES9 imunoreaktivnost (ocjene 1-3) bio je smatran pozitivnim izražavanja. Reprezentativne slike immunostainings su na slici 1. Obje HPA2110 i HES9 obojeni ravnomjerno tijekom citoplazmi, nuklearnom, niti stanica membranske immunopositivity primjetne. Citoplazmatski izraz podokaliksinu od dva različita antitijela HPA2110 i HES9 korelaciji (r _{s = 0.455, p < 0001, Spearman je rang korelacija test). Pregled}

Udruga HPA2110 i HES-9 s kliničkopatološkim varijabli i biomarkeri

udruge HPA2110 i HES9 s kliničkopatološkim varijabli i molekularnih biomarkera su kako slijedi: pozitivno (rezultati 1-3) HPA2110 bojanje povezane s crijevne vrste raka (p < 0,001), pozitivno HES9 bojenje bio povezan s dob iznad 66 (p = 0,001), a raka crijeva (p < 0,001), te s malim (≤ 5 cm) veličine tumora (p = 0,024). I HPA2110 i HES9 su povezani s visokim S-faze frakcije (SPF, p = 0,022; p = 0.010), a visok indeks proliferacije tumora (Ki-67, p = 0,003; p = 0,001) (Tablice 1 i 2). pregled

Survival analize pregled

Pozitivna HPA2110 izraz ukazuje na rak želuca-specifični 5-godišnje preživljenje od 24% (95% CI 16,9 - 31,1), u odnosu na bolesnike s negativnim HPA2110 mrlja s 5-godišnje preživljavanje od 43% (95% CI 33,7 - 52,9) (p = 0,001 log-rank test) (Slika 2 i Tablica 3). Želučana rak-specifični 5-godišnje preživljenje bolesnika s HES9-pozitivnih tumora bojanjem bio je 30% (95% CI 23,1 - 36,1), a za one s negativnim bojanjem, 40% (95% CI 27,7 - 52,1; p = 0,130 log -rank test) (Slika 2). pregled

u analize podskupina, HPA2110 je značajan pokazatelj loše prognoze u skupinama mlađih bolesnika (dob ispod 66 godina) (p = 0.006), a za muški spol (p = 0,002), raka difuzni tip (p = 0,001), a Faza i bolesnika (p = 0,048) (slika 3 i Tablica 3). U ostale podskupine studirao, HPA2110 nije služio kao prognostički biljeg pregled

Izraz HPA2110 ostala značajna u multivarijatnog. (HR = 3,17; 95% CI 1,37-7,34; p = 0.007; tablica 4). Drugi nezavisni prognostički faktori u multivarijatnog su fazi, grade, i DNA ploidnosti. Pregled

Rasprava pregled

ovdje pokazuju da je rak-specifični 5-godišnje preživljavanje je bilo znatno bolje za pacijente s rakom želuca koji imaju PODXL -negativno tumora. Zapravo, među fazi 1 bolesnika s PODXL-negativnim tumorima, samo je jedan pacijent umro od raka. U multivarijatnog, pozitivno PODXL izraz služio kao nezavisni marker lošu prognozu. Pozitivna PODXL izraz obje strane poliklonskim HPA2110 protutijela i monoklonskim antitijelima HES9 bio je povezan s visokim zaštitnim faktorom pomoću protočne citometrije i Ki-67 bojenja, oboje su markeri visoki proliferaciju stanica raka, a time i lošiju prognozu. Pregled

Pozitivna izraz PODXL oba antitijela bila povezana s crijevnom vrste raka, ali PODXL negativnih tumora pokazala da ne bude prognostički marker u raka crijeva. Isto tako, rak-specifični 5-godišnje preživljavanje u podskupini difuznog raka tipa bila je značajno lošija za bolesnike s PODXL-pozitivnih tumora. Općenito, difuzni karcinom vrsta je povezana s lošijim prognozama nego ima crijevnu tip [21]. Pregled

Koliko je nama poznato, mi smo prvi prijaviti prognostičku vrijednost za PODXL kod raka želuca. To je vidljivo iz nekoliko drugih vrsta raka, kao što su dojke [6], prostate [8], jajnika [9], debelog crijeva [10-12], urothelial mjehura [13], gušterače [14], a periampullary raka [15] , Istraživanje provedeno na rak debelog crijeva pokazuju podudarnost između primarnih tumora i odgovarajućih metastaze limfnih čvorova u pojedinih bolesnika, a PODXL izražavanja također ostaje nepromijenjen neoadjuvant zračenja. Ovi rezultati podržavaju kliničku korisnost PODXL kao pokazatelj lošom prognozom [22]. Ovdje nismo proučavati izraz PODXL u metastaza u limfnim čvorovima kod raka želuca, a nitko od pacijenata u ovoj skupini primili preoperativna kemoterapija, iako je trenutno prilično rutina. Ovi učinci preoperativne kemoterapije na PODXL izražavanja u rak želuca treba daljnju procjenu. Pregled

Imali smo dvije antitijela koja prepoznaju PODXL, komercijalno dostupnog poliklonski HPA2110 antitijela i in-house monoklonsko antitijelo HES9 [16]. Immunoexpression od HES9 monoklonskih antitijela bio veći nego kod poliklonalnih antitijela. Oba antitijela obojeni ravnomjerno po citoplazmi, a ni obojeni jezgre niti staničnu membranu. Raznolikost u bojenje intenziteta i distribuciji bio manjeg kada koristite poliklonsko protutijelo, što je bodovanje teže. Uglavnom PODXL je transmembranski molekula, i zato je iznenađujuće da je ne naći na stanične membrane u stanice želuca karcinoma bilo antitijela. Značenje citoplazmi, non-opneni, izražavanje PODXL, njegovu ulogu i funkciju, potrebna daljnja evaluacija. Pregled

Ove različite protutijela smo koristili prepoznati nejednake dijelove PODXL molekule, vjerojatno objašnjavajući zašto je njihov izraz u nekim od primjeraka razlikovala i rezultati nisu bili jednaki. Kaprio et al. [16], a koristi te iste antitijela u raka debelog crijeva, i našao zanimljivu razliku između obrazaca bojanja. Poliklonska pozitivnost protutijela su membranski [9,10], ali se monoklonsko antitijelo pozitivna je vidljivo uglavnom u citoplazmi. U rakom debelog crijeva, jaka pozitivnost s obje monoklonskih ili poliklonskih antitijela pokazala podskupinu pacijenata s još gorom preživljavanja. Nismo pronašli ovu vrstu povezanosti u uzorcima s rakom želuca. Sve u svemu, pozitivnost među pacijentima s rakom želuca bila je niža nego u bolesnika s rakom debelog crijeva. U kolorektalni karcinom oko 94% slučajeva su bili pozitivni na PODXL s ova dva antitijela, dok je u želučanoj pozitivnost raka pojavio u 76% slučajeva s monoklonskim antitijelima, a u 58% s poliklonalnih antitijela. Učestalost PODXL pozitivnosti u rak želuca bio blizu da se vidi u dojke i raka jajnika (40% i 67%) [6,9]. Pregled

PODXL je transmembranski glikoprotein. Pokazano je da mucina, koji su također glikoproteini igraju ulogu u epitela na mezenhimalnog prijelaz (EMT) [23,24]. Uloga PODXL kod raka je nepoznata, ali može se nagađa da je također PODXL može imati ulogu u EMT. EMT može objasniti zašto bolesnici s visokim PODXL izraza imaju lošije preživljenje. Pregled

Snaga ove studije je velika kohorta bolesnika s karcinomom želuca i dugo follow-up s pouzdanim kliničkog praćenja vremena i podataka preživljavanja. Do TMA tehnici, samo mjestimično tumora vrednuju u odnosu na dijelove cijelog tkiva. U kolorektalni karcinom, Larsson et al. [22] je utvrdio da upotreba cijelih sekcija dozvoljeno identifikacija većeg broja tumora kao PODXL pozitivne gore nego TMA analizu. Zbog PODXL izraz raznovrsna upotreba TMA tehnike može dovesti do podcjenjivanja pozitivnih slučajeva. Bodovanje oba monoklonskih protutijela, i izražavanja poliklonski-antitijelo je za neke primjerke teške; slučajevi samo nekoliko stanica i oni u kojima je vrijednost stanica raka bio moguće utvrditi su stoga isključeni iz analize. To djelomično objašnjava veliki broj isključenih slučajeva. S druge strane, TMA tehnika omogućuje analizu velikih skupina pacijenata s homogenim metodom bojenja. Pregled

Zaključno PODXL imunološko služi kao samostalni marker lošom prognozom u raka želuca. To je, na naše znanje, prvo izvješće o prognostičku vrijednost PODXL izražavanja u raka želuca. Buduća istraživanja trebala bi potvrditi ovu asocijaciju i riješiti mehanizme kojima PODXL utječe na razvoj i ponašanje raka želuca. Pregled

Izvori pregled

Zahvaljujemo Päivi Peltokangas i Elina Aspiala za njihovu izvrsnom tehničku pomoć.