PLoS One: Podocalyxin prognosztikus markerként gyomorrákban

absztrakt katalógusa

Háttér katalógusa

Podocalyxin-szerű 1 (PODXL) egy sejt-adhéziós glikoprotein kapcsolódó agresszív tumor fenotípus és rossz prognózissal rákformákat. A cél az volt, hogy vizsgálja PODXL expresszió gyomorrák alkalmazásával két különböző antitest. Katalógusa

Módszerek katalógusa

tumor szöveti microarray és immunhisztokémia értékeltük PODXL kifejezést daganatminták 337 beteg műtéten átesett gyomor adenokarcinóma Helsinki Egyetemi Kórház. Két egymástól különböző antitestek: HPA2110, amely egy poliklonális antitest és egy házon monoklonális antitest úgynevezett HES9, hogy vizsgálja meg a szövetség PODXL expresszió klinikai és patológiai változók és a túlélés. Katalógusa

Eredmények katalógusa

PODXL festés pozitív volt a poliklonális antitest 153 (57,5%) esetben, és a monoklonális antitest 212 (76%). Poliklonális ellenanyag expresszióját összefüggésbe hozták bélrák típusú (p < 0,001). Monoklonális antitest festődést társított feletti életkor 66 (p = 0,001), és bélrák (p < 0,001), és a kis tumorméret (≤ 5 cm; p = 0,024). Mindkét antitestet kapcsolódó magas S-fázis frakció (p = 0,022; p = 0,010), és a magas tumor proliferációs index (Ki-67; p = 0,003; p = 0,001). PODXL pozitivitás a poliklonális antitest jelzett csökkentett gyomor-rák-specifikus 5 éves túlélés 24,0% (95% CI 16,9-31,1), szemben a 43,3% (95% CI 33,7-52,9) betegek számára PODXL negativitás (p = 0,001 ). Az eredmény jelentős maradt többváltozós analízis (HR = 3,17; 95% CI 1,37-7,34, p = 0,007). Katalógusa

Következtetés katalógusa

A gyomorrák, PODXL kifejezés a poliklonális ellenanyag HPA2110 egy független marker a rossz prognózis. katalógusa

Citation: Laitinen a, Böckelman C Hagström J, Kokkola a, fermer C, Nilsson O, et al. (2015) Podocalyxin prognosztikus markerként gyomorrákban. PLoS ONE 10 (12): e0145079. doi: 10,1371 /journal.pone.0145079 katalógusa

Szerkesztő: Yves St-Pierre, INrS, Kanada katalógusa

Beérkezett: szeptember 15, 2015; Elfogadva: november 29, 2015; Megjelent: december 16, 2015 katalógusa

Copyright: © 2015 Laitinen et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra katalógusa

Az adatok elérhetősége: Minden lényeges adatot belül a papír. katalógusa

Forrás: Ez a tanulmány támogatták Finska Läkaresällskapet, a Kurt och Doris Palander Alapítvány, Sigrid Jusélius Alapítvány és medicinska understödsföreningen Liv och Hälsa. Fujirebio Diagnostics AB és Onson Consulting nyújtott támogatás formájában fizetések szerzők CF és ON, de nem volt semmilyen további szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: a szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. katalógusa

Bevezető katalógusa

az elmúlt évtizedekben, az előfordulási gyomorrák csökkent, különösen a nyugati országokban, látszólag miatt a csökkenő előfordulási Helicobacter pylori katalógusa, jobb higiéniai, és a kevésbé zsúfolt élet. Mivel gyomorrák prognózisa rossz, még mindig világszerte a második leggyakoribb oka a rák okozta halál [1]. Az 5 éves túlélési ráta, annak ellenére, gyógyító műtét, csak körülbelül 10-30% [2]. A magas halálozási oka elsősorban késői diagnózis. Katalógusa

A UICC tumor áttét (TNM) besorolás messze a legkövetkezetesebb prognosztikai besorolási rendszere. Azonban, még az azonos szakaszában csoport daganatok, a betegség lefolyásának változhat. Létrehozása módszerek pontosabb értékelésére neoplasia agresszivitás értékes lenne, ha értékeli a prognózist egyedi gyomorrákos betegeknél. Katalógusa

Podocalyxin-szerű 1 (PODXL) egy anti-ragasztó transzmembrán glikoprotein tartozó CD34 család . Ezt fejezik normálisan vese podocytákon [3], vérképzőszervi őssejtek [4], a vaszkuláris belhámjára [5], és az emlő hámsejtek [6]. Katalógusa

A klinikai jelentősége PODXL a daganatos progresszió már vizsgálták különböző típusú carcinoma, először mint őssejt marker hererák [7]. Egy későbbi megállapítás, hogy tumor-sejt-specifikus PODXL expresszió társított agresszívabb fenotípust és kedvezőtlen kimenetele számos ráktípus, például a mell [6], a prosztatában [8], petefészekrák [9], a kolorektális [10- 12], urotheliális hólyag [13], a hasnyálmirigy [14], és periampullaris rák [15]. katalógusa

A cél az volt, hogy vizsgálja PODXL kifejezés a gyomorrák, hogy felfedje a lehetséges szerepét agresszivitás és a prognózis. Úgy döntöttünk, hogy két PODXL felismerő antitestek különböző epitóp: monoklonális házon HES9 antitest és egy kereskedelmi forgalomban kapható poliklonális ellenanyag HPA2110. Nemrégiben kiderült, hogy ez a két antitest független marker a rossz prognózis kolorektális rák [12]. A két antitest képes felismerni két csoportban a kolorektális rákban szenvedő betegeknél, akik mindketten egy rossz prognózist; kombinált alkalmazását az ellenanyagok mutatott a betegcsoportban még rosszabb prognózissal [16]. katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

A betegek katalógusa

A tanulmányba 337 egymást követő beteg műtéten átesett a szövettanilag ellenőrzött gyomor adenokarcinóma a Sebészeti Osztály, Helsinki University Hospital, 1983-tól 1999-diagnosztikája és átmeneti szerint UICC előírt osztályozás 100 (29,7%) szakaszban IA-IB, 41 (12,2%) szakasz II, 96 (28,5%) IIIA-IIIB és 100 (29,7%) szakaszban IV beteg. Nyirokcsomó-áttétek történt 184 (55%) és a távoli metasztázisok 93 (28%) esetben. Az átlagéletkor 66 év (30-87), és 163 (48%) nő volt, és 174 (52%) a férfiak. Teljes vagy részleges gastrectomia bővített (D2-D2 +) nyirokcsomó végeztünk 34 (10%) beteg, a teljes gastrectomia D1-lymphadenectomiával 161 (48%), csaknem gastrectomián D1-lymphadenectomiával 142 (42%). Összesen 143 (43%) beteg műtétre kuratív, míg 176 (52%) esett át palliatív műtét. Semmi neoadjuváns kezelést, de 32 (9%) beteg kapott posztoperatív adjuváns kezelés (28 kemoterápia, sugárterápia 2; 2 is kapott). Túlélési adatok és a halál okát, amíg november 2013 jött beteg nyilvántartás, a népesség-nyilvántartás Központ, a Finn és a Finn Statisztikai. Katalógusa

A vizsgálat által jóváhagyott Sebészeti Etikai Bizottsága Helsinki University Hospital (Dnro HUS 226 /E6 /06 mellék TMK02 §66 2013/04/17) és a nemzeti felügyeleti hatóság a Szociális és egészségügyi adott engedélyt a szövetminta nélkül egyedi hozzájárulása a retrospektív vizsgálatban (Valvira Dnro 10041 /06.01.03.01 /2012). katalógusa

a szövetminták

a formalinban fixált és paraffinba ágyazott sebészeti szövetminták jött a levéltár a Department of Pathology. A beteg szöveteket de-azonosítottak és vizsgáltak névtelenül. Szövettanilag reprezentatív területek tumor mintákat meghatározott és tüntetve haematoxylin- és eozin festett metszeteken. Három magok egyes tumor blokk mintát vettek a 0,6 mm-es lyukasztó és beágyazva egy új paraffin blokk egy félautomata szövet microarrayer (Tissue arrayer 1, Beecher Instruments Inc., Silver Spring, MD, USA). A hat szöveti array tömb elő, mindegyik tartalmaz 24-192 tumor mintákban. Szakaszai 4 um egyes vágták és feldolgozott immunhisztokémiai. Katalógusa

antitestek katalógusa

képest két PODXL elleni antitestek különböző epitópjai. A poliklonális antitest (HPA2110, Atlas Antibodies, Stockholm, Svédország) ellen egy peptidet az aminosavmaradékok 278-415 a PODXL, valamint a monoklonális házon ellenanyag HES9 [12] elismeri az aminosavak 189-192 a PODXL . Mindkét epitóp fordulhat elő az extracelluláris része a PODXL molekula. Az epitóp szekvenciáját HPA2110 mérkőzések három fehérjét kódoló PODXL splice variánsok 100% (PODXL 001, 005, és 201, az emberi fehérjét Atlas). A negyedik hasítási variáns mérkőzések 87% (PODXL 202). Az epitóp szekvenciái HES9 megegyezik a 100% az összes splice variánsokat. Az antitestek részletes leírása [12,17,18].

Immunhisztokémia

A metszeteket tárgylemezekre rögzített és szárítjuk 12-24 órán át 37 ° C-on, majd arra paraffint xilolban és rehidratált keresztül fokozatosan csökkenő koncentrációjú etanol desztillált vízzel. Az antigén-visszanyerés, metszeteket kezeltük előkezelési modul (Lab Vision Corp., Fremont, CA, USA) Tris-HCl-pufferben (pH = 8,5) 20 percig 98 ° C-on. Metszeteket egy Autostainer 480 (Lab Vision) a Dako REAL EnVision Detection System, peroxidáz /DAB +, nyúl /egér (Dako, Glostrup, Dánia). A tárgylemezeket kezeltük 5 percig 0,3% -os Dako REAL Peroxidáz-blokkoló oldatot, hogy blokkolja az endogén peroxidázok. Ezt követően, a metszeteket 1 órán át inkubáltuk egy poliklonális (hígítás 1: 250 = 2,5 ng /ml) vagy monoklonális antitesttel (hígítás 1: 500 = 5 ug /ml), szobahőmérsékleten. Mint pozitív kontroll minden festés sorozatban használt mintákat vese szövetben. Katalógusa

pontozása immunreakciót katalógusa

HPA2110 és HES9 immunpozitivitása osztályoztuk az összes rendelkezésre álló tumor magot. Citoplazmatikus PODXL és HES9 immunpozitivitása pontozzuk, mint 0-3 alapuló intenzitása a rákos sejtek immunreaktivitás és a legmagasabb pontszámot a három magot szolgált további elemzés céljából. Negatív immunreakciót pontozni 0, diffúz citoplazmatikus gyenge pozitivitást mint 1, mérsékelten pozitív vagy erősen pozitív fokálisan intenzitást 2, és egyenletesen erős intenzitású 3. Minden mintát lőtt függetlenül két kutató (AL és JH) vak klinikai állapot és eredmény adat. Példányok disszonáns pontszámok újraértékelik, és a konszenzus eredménye szolgált további elemzés céljából. Voltunk képesek feldolgozni és pontszám HPA2110 festés 266 és HES9 festés 279 mintát. Katalógusa

A statisztikai elemzés katalógusa

Egyesületek között HPA2110 és HES9 pozitivitás és klinikopatológiai változók mérte fel a chi-négyzet próba, vagy Fisher-féle egzakt tesztet. Közötti összefüggés két podocalyxin antitesteket értékelte a Spearman korrelációs tesztet. Betegség-specifikus túlélés számított időpontja műtét halál gyomorrák. Katalógusa

A túlélési görbéket vettünk szerint Kaplan-Meier-módszerrel, és összehasonlítják a log-sor teszttel. Mert univariable és többváltozós túlélési analízis a Cox volt a következő kovariánsok be: életkor, nem, színpadi, grade, Laurens osztályozás, a tumor mérete, helye, PODXL kifejezés által meghatározott HPA2110 festéssel és HES9 festés, DNS ploiditás, S- fázis frakció, a Ki-67 expresszió, és a p53 expressziós. Stage, fokozat, Laurens osztályozás, a daganat mérete, a DNS ploiditás, S-fázis frakció, és kifejezése PODXL, HES9, Ki-67 és p53 belépett kategorikus kovariánst. DNS ploiditás és az S-fázis frakció már korábban értékelték áramlási citometriával, valamint a p53, és a Ki-67 szöveti expressziós immunhisztokémiai [19,20]. A p-érték < 0,05 értéket tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Minden statisztikai analízist végezni IBM SPSS Statistics verzió 20.0 for Mac (IBM Corporation, Armonk, NY, USA). Katalógusa

Eredmények katalógusa

Az immunhisztokémiai katalógusa

A citoplazmatikus HPA2110 reaktivitás értékelték 266 esetben negatív volt 113 (42,5%), enyhén pozitív 120 (45,1%), mérsékelten pozitív 29 (10,9%), és erősen pozitív 4 (1,5%) esetben. A 279 esetben sikeresen megfesteni a citoplazmatikus expresszió HES9, 67 (24,0%) negatív volt, 137 (49,1%) a gyengén pozitív, 54 (19,4%) mérsékelten pozitív, és 21 (7,5%) erősen pozitív. A végső elemzésben, gyenge erősen pozitív HPA2110 és HES9 immunreakció (pontszámok 1-3) volt tekinthető pozitív kifejeződése. Reprezentatív képei immunfestéssel vannak ábra 1. Mindkét HPA2110 és HES9 festett egyenletesen a citoplazmában, a nukleáris és nem sejt membrán pozitivitást észrevehető. A citoplazma kifejezése podocalyxin a két különböző antitest HPA2110 és HES9 korrelációt (r _{s = 0,455, p < 0001, Spearman korrelációs tesztet). Katalógusa}

Szövetsége HPA2110 és HEK-9 klinikopatológiai változók és biomarkerek

A társulásai HPA2110 és HES9 klinikopatológiai változókra és molekuláris biomarkerek a következők voltak: pozitív (pontszámok 1-3) HPA2110 festés kapcsolódó bélrák típusú (p < 0,001), pozitív HES9 festést társult kor felett 66 (p = 0,001), és bélrák (p < 0,001), és a kis (≤ 5 cm) tumor mérete (p = 0,024). Mindkét HPA2110 és HES9 jártak magas S-fázis frakció (SPF, p = 0,022; p = 0,010) és a magas proliferációs index a tumor (Ki-67, p = 0,003; p = 0,001) (1. és 2. táblázat).

Survival elemzések katalógusa

Pozitív HPA2110 kifejezés jelzi a gyomorrák-specifikus 5 éves túlélés 24% (95% CI 16,9-31,1), míg a negatív betegeknél HPA2110 festés 5 év túlélése 43% volt (95% CI 33,7-52,9) (p = 0,001 log-rank teszt) (2. ábra és 3. táblázat). A gyomorrák-specifikus 5 éves túlélési betegek HES9-pozitív tumor festéssel 30% volt (95% CI 23,1-36,1), és azok számára, akik a negatív festéssel, 40% (95% CI 27,7-52,1; p = 0,130 log -rank teszt) (2. ábra). katalógusa

a alcsoport-analízis HPA2110 szignifikáns marker a rossz prognózis csoportokban fiatalabb beteg (életkor alatti 66 év) (p = 0,006), és a férfi nemi (p = 0,002), a diffúz típusú rák (p = 0,001), és I. stádiumú betegeknél (p = 0,048) (3. ábra és 3. táblázat). A többi alcsoport vizsgált HPA2110 nem szolgálhat prognosztikai marker. Katalógusa

A HPA2110 kifejezés jelentős maradt többváltozós analízis (HR = 3,17; 95% CI 1,37-7,34; p = 0,007; 4. táblázat). Más független prognosztikai faktorok többváltozós elemzés stádiumú volt, grade, és a DNS ploiditás. Katalógusa

Vita katalógusa

Megmutatjuk, hogy itt a rák-specifikus 5 éves túlélés szignifikánsan jobb volt a gyomorrákos betegek amelynek PODXL -kizáró tumor. Tulajdonképpen között 1. fokozat betegek PODXL-negatív tumorok, csak egy beteg meghalt rákban. A többváltozós elemzés pozitív PODXL kifejezés szolgált független marker a rossz prognózis. Pozitív PODXL kifejezés mind a poliklonális antitest HPA2110 és a monoklonális ellenanyag HES9 társult magas SPF áramlási citometriával és a Ki-67 festődés, mivel mindkettő markerek magas proliferáció a rákos sejtek és így a prognózisa rosszabb.

Pozitív kifejezése PODXL mindkét ellenanyag járt bélrák típus, hanem egy PODXL-negatív tumor nem bizonyult olyan prognosztikai bélrák. Fordítva, a rák-specifikus 5-éves túlélés alcsoportjában diffúz típusú rák szignifikánsan rosszabb a betegek egy PODXL-pozitív tumor. Általában diffúz típusú rák járt a rosszabb prognózisú, mint az a bél típusa [21]. Katalógusa

A legjobb tudásunk szerint, mi az első jelentést a prognosztikai értéke PODXL gyomorrákban. Ez volt nyilvánvaló számos egyéb ráktípusok, mint például a mell [6], a prosztatában [8], petefészekrák [9], a kolorektális [10-12], urotheliális hólyag [13], a hasnyálmirigy [14], és periampullaris rák [15] . Egy tanulmány végbélrák mutatják egyezését primer tumor és a megfelelő nyirokcsomó áttétek egyes betegek, és PODXL kifejezés is érintetlen marad neoadjuváns sugárkezelés. Ez alátámasztja azt a klinikai hasznosságát PODXL mint marker rossz prognózist jelent [22]. Itt nem foglalkoztunk PODXL kifejezést nyirokcsomó metasztázisok gyomorrák, és sem a betegek ebben a betegcsoportban kapott preoperatív kemoterápia, bár ez jelenleg csak rutin. Ezek a hatások a preoperatív kemoterápia PODXL kifejezés gyomorrákban további vizsgálatokat igényel. Katalógusa

Két egymástól felismerő antitestek PODXL, a kereskedelmi forgalomban kapható poliklonális ellenanyag HPA2110 és egy házon monoklonális antitest HES9 [16]. Immunoexpression monoklonális antitest által HES9 erősebb volt, mint a poliklonális antitest. Mindkét ellenanyag festett egyenletesen a citoplazmában, és sem festett sejtmagok sem sejtmembránon. A választék a festés intenzitása és eloszlása ​​kisebb mértékű, ha a poliklonális ellenanyag, ami a pontozást nehezebb. Alapvetően PODXL egy transzmembrán molekula, és ezért meglepő volt, hogy nem találják meg a sejtmembránokon a gyomorrák sejtek bármelyik antitest. Jelentése citoplazmatikus, nem hártyás, kifejezése PODXL, szerepe és funkciója, szükség további értékelésre. Katalógusa

Ezek a különböző antitesteket használtuk felismerik egyenlőtlen részre a PODXL molekula, talán megmagyarázza, hogy miért a kifejezést egyes példányok eltértek és az eredmények nem voltak azonosak. Kaprio et al. [16], használják ezeket azonos antitestek colorectalis rák, és egy érdekes különbség a festődési minták. A poliklonális antitest pozitivitás volt hártyás [9,10], de a monoklonális antitest-pozitivitás volt nyilvánvaló főleg a citoplazmában. Kolorektális rák, erős pozitivitást mind a monoklonális és poliklonális ellenanyag kiderült betegek alcsoportjában még rosszabb túlélést. Mi nem találtunk ilyen összefüggést a gyomorrák mintákban. Összességében, pozitivitás között gyomorrákos betegek alacsonyabb volt, mint a vastagbél rákos betegeknél. Kolorektális rák mintegy 94% -ában volt pozitív PODXL ezzel a két antitest, míg a gyomorrák pozitivitást megjelent 76% esetben a monoklonális antitesttel, és 58% a poliklonális antitest. A frekvencia PODXL pozitivitás gyomorrák közel volt ahhoz, ami a mell- és a petefészekrák (40%, illetve 67%) [6,9]. Katalógusa

PODXL transzmembrán glikoprotein. Bebizonyosodott, hogy a mucinok, amelyek szintén glikoproteinek, szerepet játszanak a epithelialis a mesenchymalis átmenet (EMT) [23,24]. A szerepe PODXL rákos ismeretlen, de lehet feltételezi, hogy is PODXL szerepe lehet az EMT. EMT megmagyarázhatja, hogy miért betegek magas PODXL kifejezés rosszabb túlélést. Katalógusa

Az erőssége a tanulmány egy nagy pácienscsoporton gyomorrák és a hosszú utánkövetés megbízható klinikai utánkövetés és túlélési adatok alapján. A TMA technika, csak kis területeken a tumor értékeljük képest egész szöveti metszeteken. Kolorektális rák, Larsson és munkatársai. [22] megállapította, hogy a használata egész szakaszok megengedett azonosítását nagyobb számú tumorok PODXL-pozitív, mint volt TMA elemzést. Mivel PODXL kifejezés heterogén, használja a TMA technika vezethet alulértékelését pozitív esetek. A pontozás két monoklonális antitest és poliklonális antitest kifejezés volt néhány példány nehéz; esetben csak néhány rákos sejteket, és azokat, amelyekben az érték a rákos sejtek volt azonosíthatatlan ily módon elemzésből kizártuk. Ez részben magyarázza a nagyszámú kizárt esetek. Másrészt, a TMA technika lehetővé teszi elemzése nagy betegcsoportok homogén festési eljárással.

Összefoglalva, PODXL immunfestés szolgál, mint egy független marker rossz prognózissal gyomorrák. Ez az, hogy tudomásunk szerint az első jelentés a prognosztikai PODXL kifejezés a gyomorrák. További vizsgálatok fogják megerősíteni ezt a kapcsolatot és oldja meg a mechanizmusok, amelyek révén PODXL befolyásolja a fejlődését és viselkedését gyomorrák. Katalógusa

Köszönetnyilvánítás katalógusa

Köszönjük Päivi Peltokangas és Elina Aspiala a kiváló technikai segítséget.

• Típusú gyomor cancer
• PLoS One: DBGC: Adatbázis humán gyomornyálkahártya Cancer