PLoS ONE: L'associazione tra DNA il numero della copia Aberrazioni sul cromosoma 5q22 e gastrico Cancer

Estratto

Sfondo

cancro gastrico è il cancro comune. Alla scoperta di nuovi biomarcatori genetici potrebbe aiutare a identificare i soggetti ad alto rischio. variazione del numero di copie (CNV), è stato recentemente dimostrato di influenzare il rischio per diversi tipi di cancro. Lo scopo del presente studio è stato cercato di verificare l'associazione tra numero di copie in una regione variante e GC.

Metodi

Un totale di 110 pazienti affetti da cancro gastrico e 325 volontari sani sono stati arruolati in questo studio. Abbiamo cercato per un CNV e abbiamo trovato un CNV (Variation 7468) contenente parte del APC
gene, il SRP19
gene e la REEP5
gene. Abbiamo scelto quattro sonde mira a
APC-intron8, APC-exon9
, SRP19
e REEP5
di interrogare questo CNV. sonde Taqman specifici etichettati da diversi fluorofori giornalista sono stati utilizzati in una piattaforma real-time PCR per ottenere numero di copie. Entrambi i dati non interi originali e dati interi trasformati in numero di copie sono stati utilizzati per le analisi.

Risultati

pazienti Caner gastrico ha avuto un numero di copie non intero più bassa rispetto ai controlli per il APC-exon9
sonda (p = 0,026 rettificato) e SRP19
sonda (rettificato p = 0,002). L'analisi del numero intero copia ha prodotto un modello simile, anche se meno significativo (p = 0,07 rettificato per APC-exon9
sonda e rettificato p = 0.02 per SRP19
sonda).

Conclusioni

le perdite di una CNV in 5q22, in particolare nella regione del DNA che circonda APC-esone 9
, può essere associato con un rischio più elevato di cancro gastrico.

Visto : Tsai PC, Huang SW, Tsai HL, Ma CJ, Hou MF, Yang IP, et al. (2014) l'associazione tra DNA il numero della copia Aberrazioni sul cromosoma 5q22 e cancro gastrico. PLoS ONE 9 (9): e106624. doi: 10.1371 /journal.pone.0106624

Editor: Qing-Yi Wei, Duke Cancer Institute, Stati Uniti d'America

Ricevuto: 29 aprile 2014; Accettato: 30 Luglio 2014; Pubblicato: 11 settembre 2014

Copyright: © 2014 Tsai et al. Questo è un articolo ad accesso libero distribuito sotto i termini della Creative Commons Attribution License, che permette l'uso senza restrizioni, la distribuzione e la riproduzione con qualsiasi mezzo, a condizione che l'autore originale e la fonte sono accreditati

disponibilità dei dati:. Il autori confermano che tutti i dati sottostanti i risultati sono completamente disponibili senza restrizioni. Tutti i dati rilevanti sono all'interno del suoi file informazioni di supporto carta e

Finanziamento:. Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni dal Medical Hospital di Kaohsiung University (KMUH98-8I04, KMUH98-8G05, KMUH99-9R03), Eccellenza per il cancro Research center di Grant attraverso il finanziamento da parte del Dipartimento della Salute, executive Yuan, Taiwan, Repubblica di Cina (MOHW103-TD-B-111-05), e il Consiglio nazionale della Scienza della Repubblica di Cina (NSC 99-2320-B- 037-014-MY3, NSC 94-2314B037-104). I fondatori hanno avuto alcun ruolo nel disegno dello studio, la raccolta e l'analisi dei dati, la decisione di pubblicare, o preparazione del manoscritto

Competere interessi:.. Gli autori hanno dichiarato che non esistono interessi in competizione

Introduzione

cancro gastrico (GC) è il quarto cancro più comune e la terza causa principale di decessi per cancro in tutto il mondo negli uomini; il quinto tumore più comune e la quinta causa di morte per cancro nelle donne [1]. Secondo l'Agenzia Internazionale per la Ricerca sul Cancro (IARC), Giappone, Cina e Corea hanno una maggiore incidenza di GC [2]. A Taiwan, GC è stato il sesto principale causa di morte per cancro nel 2010 (http://www.doh.gov.tw/statistic/index.htm, si accede a giugno 2011). cancro gastrico è molto complesso e presenta eterogeneità aspetti clinici, biologici e genetici. fattori ambientali noti che influenzano GC comprendono Helicobacter pylori (H. pylori)
infezione, le abitudini alimentari, il fumo di sigaretta, la storia familiare, e il sesso (un rapporto più elevato maschio-femmina) [3]. Come la storia di famiglia è un importante fattore di rischio per GC, recenti studi si sono concentrati sui fattori genetici che giocano un ruolo in GC. Numerosi ricercatori hanno documentato le alterazioni genetiche che sono coinvolti nello sviluppo di GC [4].

cancro gastrico esibisce spesso presentazione clinica in ritardo, ed è di solito diagnosticata in fase avanzata e comporta una prognosi sfavorevole. La diagnosi precoce di GC è di fondamentale importanza per migliorare l'efficacia terapeutica, e la riduzione della mortalità, di conseguenza, individuando importanti biomarcatori genetici potrebbe aiutare nella diagnosi precoce del GC. Un gran numero di associazioni tra i cambiamenti genomica strutturale e malattie suscettibilità sono stati svelati [5], [6]. Diversi cambiamenti genetici specifici, tra cui la duplicazione e la mutazione sono stati sospettati o dimostrato di essere correlato alla progressione GC [7]. DNA copia variazioni del numero (CNV) sono comuni a diversi tipi di cancro e di altre malattie endpoint. Variazioni nel numero di copie di DNA potrebbe essere un indicatore di rischio elevato di GC in individui. Utilizzando ibridazione genomica comparativa (CGH) /array-CGH (aCGH) analisi, diverse regioni genomiche sono stati trovati in cellule GC o pazienti GC di avere guadagni di regioni del DNA compreso 3q26-28, 7p12-15, 7q21-22, 8q21-24 , 13q21-23, 17q21-22, 20p12, e 20q11-13 e perdite di regioni di DNA, tra cui 4q26-27, 5q14-22, 9p21-23, 17p12-13, e 18q22 [8] - [13]. Questi risultati indicano che i modelli di instabilità cromosomica possono correlare con le caratteristiche cliniche, patologiche di GC.

Studi precedenti hanno documentato anomalie nella poliposi adenomatosa coli ( APC
) gene sul cromosoma 5q22 a risultato nella poliposi adenomatosa familiare (FAP), il cancro del colon ereditario non-poliposi e di altri tumori [14] - [16]. La maggior parte delle perdite frequenti del numero di copie in 5q22 nei pazienti CG di differenza razziale sono riassunti nella tabella S1 in File S1 [8] - [10], [12], [13], [17] - [22]. Gli studi riferito che il 15,4% in Giapponese [10], il 35% in coreano [21], e il 21% in Turk [20] di GC pazienti avevano mutazioni geniche a 5q14-22. Le perdite di numero di copie a cromosoma 5q22 è stato trovato per essere significativamente associato con il tipo istologico [13], [18], [19], lo stato linfonodale [12] e le metastasi [12] in pazienti GC. Oltre al rapporto con cancro gastrico, perdita di 5q è stato spesso coinvolto in fase di pre-maligne [17], [22]. Questi studi hanno indicato che il APC
gene può giocare un ruolo significativo nel GC. Pertanto, in questo studio, abbiamo testato l'associazione del numero di copie in 5q22 con GC nella popolazione di Taiwan.

Metodi

Studio popolazione

Un totale di 110 pazienti e GC 325 controlli sani sono stati arruolati da Kaohsiung Medical University Hospital di Taiwan. Tutti i pazienti erano o taiwanese o cinese terraferma. La presenza di GC è stato anche confermato patologicamente. Il grado istologico è stato classificato in base ai criteri di Lauren [23]. La messa in scena tumore era in conformità con la Joint Committee on Cancer sistema (AJCC) messa in scena [24]. I soggetti con altri tumori maligni sono stati esclusi dallo studio. I soggetti di controllo erano volontari sani che hanno partecipato a controlli periodici della salute nello stesso ospedale. Nessuno dei controlli ha avuto storia personale di cancro o altri disturbi gastrici significativi diagnosticati al momento dell'iscrizione. I protocolli e metodi di studio è stato approvato dal Comitato Etico di Kaohsiung Medical University Hospital. Tutti i partecipanti hanno fornito consenso informato scritto prima dell'inizio dello studio.

Seleziona candidato CNV di GC legati

Il candidato CNV che comprende il APC
gene sul cromosoma 5q22 sono stati recuperati da una banca dati pubblica (database di varianti genomiche, DGV, http://projects.tcag.ca/variation~~number=plural). Fino a novembre 2010, la banca dati elencati posizioni fisiche per 66,741 CNV situate in 15,963 regioni comuni CNV. Tra di loro c'era una CNV (Variation 7468) in 5q22 che si estendono su 127,5 kb (posizione cromosomica: 112.138.707 a 112.266.194, sulla base di NCBI costruire 36 versione /hg18) copre una parte del APC
gene e SRP19
gene al filamento di DNA in avanti e il REEP5
gene al filamento di DNA inverso. Sulla base dei CGH array dati di 50 uomini sani francesi, la frequenza di guadagno e perdita di copie in questa regione erano 2% e 2%, rispettivamente [25]. La letteratura mostra sei mutazioni nella regione alternativamente-impiombato dell'esone 9 del APC
gene per essere associati con FAP [26] e il cancro del colon [27], ma nessuno è stato segnalato in relazione alla GC.

Abbiamo scelto due sonde vicini interrogatori intron8 e exon9 del APC
gene, rispettivamente, una sonda per l'em> SRP19
gene <, e una sonda per il REEP5
gene per rilevare il numero di copie di questo CNV, mentre RPPH1
è stato utilizzato come gene di riferimento. Queste sonde sono disponibili in commercio da TaqMan (Applied Biosystems Inc. (ABI), CA, USA) e le loro informazioni dettagliate sui genomi (build 36 /hg18) è indicato nella tabella S2 in file S1 e S1 figura in S1 File.

la preparazione del DNA genomico e real-time PCR per la copia di rilevamento numero

isolamento del DNA è stata effettuata utilizzando disponibili in commercio kit di isolamento del DNA (QIAamp DNA mini kit, Qiagen, Amburgo, Germania). RNasi A (Qiagen) è stato usato per digerire RNA a singolo filamento per l'isolamento di DNA libero-RNA. Il DNA genomico è stato estratto da leucociti di sangue periferico. DNA è stata quantificata la prima volta da assorbimento UV (Beckman DU 640 spettrofotometro, Beckman Coulter, Brea, CA, USA) e poi amplificato da Real-Time PCR. concentrazioni di DNA sono stati adeguati a 10 ng /ml prima di genotipizzazione. Real-Time PCR è stata effettuata utilizzando le sonde Taqman in uno strumento ABI 7900HT Real-Time PCR (ABI). Disponibile in commercio FAM sonde dye-etichetta sono stati progettati per amplificare il APC
, SRP19
e REEP5
. VIC dye-etichettata ribonucleasi P RNA componente H1 (RPPH1)
è stato utilizzato come controllo endogeno perché RPPH1
ha esattamente due copie per genoma umano diploide, che si trova sul cromosoma 14q11.2 [ ,,,0],28]. I primer e le sonde sono state progettate da sequenza genomica (build 36 /hg18) utilizzando il software proprietario ABI. Il saggio TaqMan numero di copie conteneva 1 ml APC, SRP19 o REEP5
sonda (20x, FAM etichettati), 1 ml RPPH1
mix sonda (20x, VIC etichettati), 10 ml TaqMan Universal PCR master Mix (2x), 1,5 microlitri DNA genomico e 6,5 ml di acqua. Il protocollo di amplificazione utilizzato per la reazione è di 95 ° C per 10 minuti, seguito da 95 ° C per 15 sec e 60 ° C per 1 min per 40 cicli. Una soglia ciclo manuale soglia (Ct) di 0,2 e una linea di base automatica sono stati usati per rilevare la quantità template di geni bersaglio e RPPH1
gene da un software di sistema di rilevamento di sequenza (ABI, versione 2.4). Per ogni campione, quattro sonde ( APC-intron8, APC-exon9, SRP19,
e REEP5
) sono state eseguite con un controllo interno. Le sonde di destinazione e di controllo interno sono stati caricati nello stesso pozzo e ogni reazione è stata eseguita in quadruplicates. software CopyCaller (ABI, versione 1.0) è stato utilizzato per calcolare il numero intero copia di ogni sonda sulla base dei dati real-time PCR. Abbiamo calcolato la media e la deviazione standard (SD) di quadruplicates di ΔCt per ogni soggetto. Per controllare la qualità dei dati, i dati sono stati filtrati utilizzando tre fasi. Solo i soggetti che hanno superato tutte e tre le fasi del controllo di qualità dei dati sono stati utilizzati nelle analisi successive.

La qualità della copia numero di controllo

Per il controllo di qualità dei dati, il numero di copie di ogni sonda da vero e proprio -time PCR è stato filtrato da tre fasi. Nella prima fase, i dati dei singoli in tempo reale piste PCR sono stati esaminati. I seguenti criteri è stato applicato per l'esclusione per l'analisi: 1) VIC Ct > 32, probabilmente a causa di un guasto per amplificare il segnale interno RPPH1
, 2) qualsiasi sonda con ΔCt > 4.0 o 3) FAM Ct > 40 . Dati che incontrato con gli ultimi due criteri suggerito il fallimento di amplificazione sonde bersaglio, e quindi i dati sono stati considerati inattendibili. Dopo il primo passo, abbiamo calcolato la media ΔCt per ogni studio soggetto
.

Il secondo passo è stato quello di escludere il valore anomalo di media ΔCt usando ± 3 DS come tagli. Dopo la prima e seconda fase, il numero di copie di ciascuna sonda per ogni individuo è stato calcolato con la formula 2 ^{-ΔΔCt × 2. Di conseguenza, il numero di copie non può essere un numero intero. Dato che il numero di copie è teoricamente un numero intero, abbiamo seguito ulteriormente gli orientamenti di software CopyCaller per stimare il numero intero di ciascun numero di copia utilizzando il metodo di analisi rischio massimo automatico, basato sulla distribuzione di densità di probabilità per tutti i campioni.}

Infine , secondo la distribuzione del numero intero di copia, un standardizzata z punteggio e il valore di confidenza sono stati calcolati. Un valore più alto in assoluto per il standardizzata z punteggio e un valore inferiore di confidenza implicita maggiore variazione. Come suggerito dalle linee guida d'uso del software CopyCaller (ABI, versione 1.0), il terzo passo per il controllo della qualità dei dati è quello di escludere i campioni che hanno incontrato con entrambi i seguenti criteri: 1) il valore assoluto della z score > 2,65 e 2) il valore di confidenza < 0.9. Solo i partecipanti che hanno superato tutte le tre fasi del controllo di qualità dei dati sono stati utilizzati nelle analisi successive.

Analisi statistica

Perché solo alcuni dei partecipanti ha avuto un numero di copie superiore a 3 o meno di uno, il numero di copie è stato classificato in tre gruppi (≤1, = 2 o ≥ 3). Per verificare l'associazione tra la categoria del numero di copie per ogni stato della sonda e la malattia, abbiamo usato la regressione logistica con aggiustamenti per età e sesso. sono stati calcolati gli odds ratio (OR) e le loro 95% intervallo di confidenza (IC). Abbiamo inoltre calcolato il tasso di concordanza di categoria numero di copie attraverso i quattro sonde. Il test di tendenza Cochran-Armitage è stato utilizzato per trovare la relazione lineare tra il numero di copie di sonde bersaglio e rischio GC. t di Student e Mann-Whitney U (se non normalmente distribuito) sono stati utilizzati per confrontare il numero di copie di ciascuna sonda tra i pazienti CG e controlli sani. Un valore di p due code < 0,05 è stato considerato statisticamente significativo. Le analisi statistiche sono state eseguite da JMP versione del software 9.0 (SAS Institute Inc., NC, USA).

Risultati

I soggetti dello studio

Tutti i 110 pazienti CG e 325 soggetti di controllo hanno avuto copiare le informazioni sul numero per almeno una delle quattro sonde a 5q22. La distribuzione dei valori del numero di copie per ogni sonda è mostrato in Figura 1. pazienti CG erano significativamente più anziani rispetto ai controlli sani (età; media ± DS: i pazienti GC = 66,5 ± 13,8, Controlli = 62,5 ± 9,7; p = 0,001). Gli uomini hanno rappresentato una quota maggiore (61,8%) dei pazienti GC, ma costituite solo il 46,4% dei controlli sani (p = 0.005). Tra i pazienti GC, 55 avevano H. pylori
infezione, 28 non sono stati infettati da H. pylori,
e 27 non avevano tali informazioni. 37 dei pazienti CG ha avuto la classificazione istologica di Lauren (19 diffusa, 16 intestinale, e 2 sottotipi misti); 34 avevano grado di differenziazione (3 ben differenziato, 9 moderatamente differenziato e 22 scarsamente differenziato); 45 avevano AJCC stadio del tumore (12 stadio I, 7 stadio II, 13 fase III, e 13 stadio IV).

associazione tra CNV e cancro gastrico

Come previsto, la maggior parte dei partecipanti lo studio aveva 2 copie del segmento CNV vicina: vanno 78,2-92,6% tra le 4 sonde nei controlli e 87,3-93,6% nei pazienti GC. Il tasso concorde per il numero di copie attraverso le 4 sonde variava 80,5-93,1% (Tabella S3 in File S1). Questo numero di copie è stato spesso variabile in una regione più ampia di nota funzionale APC
e SRP19
. Pertanto, le variazioni potrebbero spiegare la lunghezza distanza e variazioni funzionali (Tabella S3 in File S1). Per la sonda di APC-exon9
, il 9,1% dei pazienti GC apparteneva a copiare numero di categoria 3, mentre il 17,5% dei controlli erano in categoria 3 (OR = 0,48, 95% CI: 0,22-0,93; greggio p = 0,04, l'età /sesso-adjusted p = 0,07, tabella 1). Analogamente, meno pazienti GC erano in categoria 3 rispetto ai soggetti di controllo per gli altri tre sonde, ma le differenze non erano significative (Tabella 1). Inoltre, è stata osservata una relazione dose-dipendente tra GC e il numero di copie della sonda per APC-exon9
(Tabella 1). Ciò implica che i controlli tendevano ad avere una più alta percentuale di guadagno del numero di copie di casi con un valore di tendenza p di 0.026 (età /sesso regolato p = 0,067 per il test di tendenza).

Dato che il numero di copie è stato sulla base dei dati real-time PCR, il numero di copia originale non era un intero e non normalmente distribuita. Pertanto, abbiamo anche verificare l'associazione non parametrico tra i dati non interi sul numero di copie e lo stato della malattia. Le mediane e range interquartili (IQRs) del numero di copie di ciascuna sonda ( APC-intron8, APC-exon9, SRP19,
e REEP5
) sono stati confrontati tra i pazienti CG e controlli sani ( Tabella 1). Simile ai risultati del numero intero di copia, i pazienti GC avevano un numero di copie significativamente inferiore rispetto ai controlli per la APC-exon9
(greggio p per il test t = 0.006, p greggio per Mann-Whitney U test = 0,013, il sesso /età aggiustato p = 0,026) e SRP19
(greggio p per il test t = 0,0004, p greggio per Mann-Whitney U test = 0.017, il sesso /età aggiustato p = 0,002) sonde (Figura 1B e Figura 1C). Non vi era alcuna differenza significativa per le altre due sonde CNV ( APC-intron8
e REEP5
) (Figura 1A e Figura 1D). Ulteriori analisi delle correlazioni tra numero di copie e GC clinici classificazioni patologiche, i risultati hanno mostrato un rilevante copia differenza numero alla esone-9 di APC
gene indipendentemente istologico, gradi di differenziazione o stadio TNM, che potrebbe a causa di campioni di piccole dimensioni (Tabella 2).

Discussione

Questo studio ha utilizzato 4 sonde per studiare l'associazione tra variazione del numero di copie sul cromosoma 5q22 e GC. Questa regione si estende su tre geni: 'fine del APC
gene, l'intero SRP19
gene, e il 3' del 3 del REEP5
gene. Per la sonda di APC-exon9
, il controllo ha avuto valori del numero di copie superiore a quello dei pazienti GC in tutte e tre le analisi (cioè, copiare numero di categoria, test di tendenza, e il numero di copie non intero). La sonda di SRP19
avuto anche un numero di copie significativamente più alto (sulla base di copia numero di categoria e non intero di analisi) nei controlli rispetto ai pazienti GC. Per il APC-intron8
e REEP5
sonde, i valori del numero di copie non erano significativamente differenti tra i pazienti CG e il gruppo di controllo in una qualsiasi delle tre analisi. I risultati di questo studio indicano che un numero copia ridotta nella regione del CNV può essere associato ad un più alto rischio di cancro gastrico.

APC
gene contenente 15 esoni si trova sul cromosoma 5q21-22. La maggior parte delle mutazioni del APC
gene sono state osservate in esone 15 in pazienti con FAP [26] e pazienti CG [29]. Sei mutazioni nella regione alternativamente-impiombato dell'esone 9 sono stati documentati per essere associati con FAP [26] e del colon [27], ma non sono stati segnalati queste mutazioni per essere associate a GC. Questo studio è il primo a segnalare l'associazione tra il numero di copie a APC-exon9
e GC. Una possibile Wnt /β catenina /TCF segnalazione via di trasduzione associata ad APC è stato riportato per GC [30]. Una funzione principale di APC è pensato per regolare libera β catenina e quindi perdita di funzione APC può determinare l'instabilità della β complesso catenina e l'accumulo cellulare di catenina β. Su traslocazione al nucleo, catenina β serve come un attivatore di cellule T fattore di trascrizione-dipendente, portando ad un aumento dell'espressione di molti geni bersaglio specifici che possono essere coinvolti nella comparsa di lesioni gastriche che vanno dalla gastrite cronica, l'atrofia gastrica, metaplasia intestinale , displasia finalmente adenocarcinoma gastrico [31].

La piattaforma CGH è stato ampiamente utilizzato per studi sul cancro, e le sonde di questa piattaforma spesso coprono una regione di DNA della regione di DNA più di 1 kb. Pertanto, l'approccio CGH è limitata a individuare segmenti CNV quando i cambiamenti sono meno di 1 kb. In questo studio, abbiamo utilizzato sonde TaqMan specifiche etichettati da diversi fluorofori Reporter (VIC e FAM) in una singola reazione. Questo approccio ci ha permesso di rilevare un cambiamento del DNA più sottile. PCR per ogni sonda test sulla base di ABI TaqMan sono state valutate per essere efficace quasi al 100% [32]. Recentemente, questo metodo è stato ampiamente utilizzato per altre malattie, come la degenerazione maculare legata all'età e l'asma allergica [33], [34]. Prima di numero di copie genotipizzazione, i nostri concentrazioni di DNA genomico sono stati rigorosamente quantificati e controllati utilizzando due metodi indipendenti: assorbanza UV (gamma razionale rapporto di OD 260/280: 1.8 ± 0.2) e l'amplificazione PCR di RPPH1
(gamma razionale Ct di VIC: 25-27). Amplificazione di RPPH1
è stata eseguita alla stessa e la sonda per la protezione contro variazioni artificiali (come differenze loading DNA o rilevamento errato del genotipo nullo). Pertanto, il metodo può essere considerato affidabile per la caratterizzazione quantitativa del fragmental CNV. Sulla base degli esperimenti CGH precedenti studi hanno riportato che il 2% di copie di perdita e 2% di copie guadagno a 5q22 negli uomini francesi sani [25]. Abbiamo usato sonde TaqMan, che hanno una risoluzione maggiore per rilevare una regione più piccola di variazione del numero di copie, e abbiamo trovato che la percentuale di perdita di copie nelle 4 sonde scala da 0 a 2,7% in Taiwan sani. Tuttavia, una percentuale maggiore di copie di guadagno che vanno dal 2,7% ( REEP5
) al 14,1% ( APC-exon9
), sono stati osservati negli uomini sani. Simile ai dati per i partecipanti di sesso maschile, la frequenza di copie di guadagno di APC-exon9
è stato anche elevato per i partecipanti di sesso femminile (20,2% di copie di guadagno). Tuttavia, un altro studio che ha valutato la popolazione giapponese ha anche riferito una percentuale più elevata (20,6%) del numero di copie di guadagno a 5q in cui si trova la nostra indagato CNV [9].

Come previsto, la maggior parte dei partecipanti hanno avuto 2 copie del CNV segmento tra i quattro sonde in tutte le materie. è stato osservato solo un tasso di concordanza dell'80% tra il numero di copie misurata dalla sonda APC-exon9
e SRP19
sonda (Tabella S3 in S1 File). Questo è in realtà il tasso di concordanza più basso di tutte le tariffe a coppie tra le sonde, tuttavia, entrambe le sonde sono risultati significativamente associati con GC. E 'possibile che la variazione 7468 non è un CNV continuo, ma è considerata così perché è stato identificato utilizzando CGH array, una tecnica con una risoluzione inferiore a quelli disponibili oggi (cioè, potrebbe essere costituito da più regioni più brevi con numeri di copie variabile) . Pertanto, il limite variabile del gene potrebbe essere ridotto da APC-exon9 per SRP19
. Per quanto riguarda la parte anteriore del APC-exon9
è interessato, se esistono altre regioni variabili associate alla GC richiede ulteriori esplorazioni. In questo studio, non vi erano differenze significative nel numero di copie tra pazienti e controlli GC in APC-intron8
e anche APC-intron7
(dati non riportati).

Come è il caso con la maggior parte gli sforzi di ricerca, il nostro studio ha limitazioni. La dimensione del campione utilizzato in questo studio non sarebbe stato sufficiente per rilevare un CNV con un piccolo effetto. Informazioni Inoltre, abbiamo limitato sulla clinica caratteristiche patologiche (come H. pylori
infezione, grado istologico, grado di differenziazione e stadio del tumore, rendendo difficile per l'interazione sperimentazione di CNV e questi parametri. sono stati necessari più soggetti per confermare questo risultato in futuro. in conclusione, le perdite di CNV a 5q22 (variazione 7468), in particolare nella regione di DNA che circondano APC-esone 9, può essere associato ad un rischio maggiore di cancro gastrico. una perdita di questo CNV può servire come un romanzo biomarcatore per identificare i soggetti ad alto rischio. Tuttavia, una grande associazione-studio è garantito per confermare l'utilità di questo biomarker e il meccanismo dettagliato resta da chiarire.

Informazioni Sostenere il trasferimento File S1.
in combinazione Sostenere file di informazioni. Tabella S1 in S1 File. anomalia genetica sul cromosoma 5q22 negli studi GC. Tabella S2 in S1 file. Informazioni da quattro sonde a cromosoma 5q22 e sonda interna al cromosoma 14q11. Tabella S3 in S1 File. La concordanza di numero compreso tra ciascuna sonda adiacente (110 pazienti CG e 325 controlli sani) copiare. Figura S1 in S1 file. Le posizioni dei quattro sonde al CNV contenente APC /SRP19 /REEP5
geni
doi:. 10.1371 /journal.pone.0106624.s001
(DOCX)

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