PLOS NËMMEN: HIF-1α Induces Multidrug Resistance zu Gastric Cancer BTS vum Pinguin Mir-27a

Wat VerfÜgung

Dës Etude fir d'Korrelatioun tëscht HIF-1α an Ausdrock Mir-27a ze bestëmmen an den Effet vun diskutéieren inhibition vun HIF-1α Ausdrock op Mir-27a Ausdrock an Drogenofhängeger Resistenz zu gastric Kriibs (GC). Am Moment studéieren, Echtzäit-Hinnen alleguer a Western blot sech standing den Ausdrock vun HIF-1α am GC Stoffer an Zell Zeilen ze entdecken. Dunn, goufen OCUM-2MD3 /L-OHP Zellen transfected mat HIF-1α-siRNA, e Bord-27a rescht oder pcDNA-HIF-1α, an Zell Iwwerliewe war via de MTT assay alles. Den Ausdrock vun HIF-1α, Mir-27a, a fir Premier-Zesummenhang Genen war via Echtzäit-Hinnen alleguer a Western blot gemooss. Chips an duebel luciferase Aktivitéit assays sech standing der transcriptional Regulatioun vun HIF-1α an Mir-27a ze bewäerten. D'Resultater Teamchef transfection mat HIF-1α-siRNA Ofstand den Niveau vum Mir-27a ofgeholl, geplatzt dramatesch verstäerkte inhibition vun der Prolifératioun Taux vun OCUM-2MD3 /L-OHP Zellen. Am Verglach zu Net-transfected Zellen, war d'Iwwerliewe Taux vun der Zellen bedeitend reduzéiert transfected mat HIF-1α-siRNA der Behandlung mat L-OHP. D'Zell Iwwerliewe Taux war wiesentlech zu OCUM-2MD3 /L-OHP Zellen mat der Mir-27a rescht transfected fräi hierkommen HIF-1α overexpression net zu all kloer Verännerung Zell Iwwerliewe Resultat gemaach. D'Resultater vun der duebel luciferase Aktivitéit assay bewisen, dass HIF-1α der transcriptional Aktivitéit vun der miR27a Promoter vun Zellen mat engem Rapporteur plasmid wouvun der Offloss Promoteur Regioun vun miR27a zesumme mat pcDNA-HIF-1α transfected verbessert. Chip Analyse ugeholl datt HIF-1α Photo'en direkt un de Promoteur Regioun vun miR27a. Inhibition vun HIF-1α oder miR27a Ausdrock ofgeholl MDR1 /P-GP, LRP, an BCL-2 Ausdrock vun OCUM-2MD3 /L-OHP Zellen. Sou, hunn mir dass HIF-1α enk mat fir Premier am GC verbonnen ass an datt HIF-1α kann duerch inhibiting Mir-27a Ausdrock VerfÜgung

Fro MDR1 /P-GP, LRP an BCL-2 Ausdrock oofgesinn:. Zhao Q, Li Y, Tan mé, Fan Lq, Yang PG, Tian Y (2015) HIF-1α Induces Multidrug Resistance zu Gastric Cancer BTS vum Mir-27a Pinguin. PLoS NËMMEN 10 (8): e0132746. Doi: 10,1371 /journal.pone.0132746 VerfÜgung

Redakter: Jin Q. Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center & Fuerschung Institut, USA VerfÜgung

Arnaque: 5 Januar 2015; Akzeptéiert: 17 Juni, 2015; Publizéiert: 20. August 2015 zu

Copyright: © 2015 Zhao et al. Dëst ass eng oppen Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz CC BY verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt si vum original Auteur an d'Quell Kaiser VerfÜgung

Data Disponibilitéit: All Daten sinn bannent de Pabeier a seng Ennerstëtzung Informatiounen Fichieren VerfÜgung

Funding:.. d'Provincial Natural Science Foundation vun Hebei Province (Nr H2013206311 zu Qun Zhao) VerfÜgung

: Dës Aarbecht vun de folgende Subventiounen ënnerstëtzt gouf konkurréiert Interessen:. d'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung

Aféierung VerfÜgung

Gastric Kriibs (GC) ass ënnert den heefegen malignancies, dauernd weltwäit grave schueden [1, 2] No Joer vun technologesch Fortschrëtter vun der Diagnos a Behandlung vun GC, hunn hir Heefegkeet a veruerteelt Fro weltwäit mee an asiatesch Länner héich bleiwen [3, 4]. Moment, ass gastric resection déi eenzeg sinn Method GC ugewandt. Mä, et ass schwéier e komplett Kur trotz chirurgesch Entfernung vun der entholl ze erreechen, well déi meescht Patienten aus fortgeschratt GC bëssen op Diagnos [5, 6]. Dofir, spillt Chimiotherapie eng extrem wichteg Roll an der ëmfaassend Behandlung vun GC. Obwuel Chimiotherapie daitlech mat Respekt fir den Traitement vun fortgeschratt GC lues, [7, 8] Iwwregens hätt vun GC bleift schwaach, mat engem 5-Joer Iwwerliewe Taux vu manner wéi 30% [9]. Dëst hätt ass fir d'multidrug Resistenz (fir Premier) vun GC Zellen allem duerch. Fir Premier am GC féiert oft zu der Verfehlung vun Chimiotherapie [10-12]. Dofir, et ass eng dréngend brauchen ze Roman villverspriechend therapeutesch Strategien entwéckelen efficacer fir Premier am GC reduzéieren. VerfÜgung

Web- hunn ass verwandelt zu staark erhéijen an ass mat enger Rei vu biologesche Funktiounen assoziéiert. Moment, hypoxia-inducible Faktor (HIF) -1α considéréiert gëtt enk mat hypoxia verbonne ginn. HIF-1α ass vun enger Rei vun malignant erhéijen [13, 14] an Akten als e wesentleche Faktor ze regléieren der adaption vun entholl Zellen ze hypoxia [15] staark ausgedréckt. HIF-1α ass enk ugeholl ze ginn, verbonne mat GC fir Premier [16, 17]. Mä, ass et kloer, déi Passerelle d'Roll vun HIF-1α am GC fir Premier mediates. VerfÜgung

An de leschte Joren, d'Roll vun microRNAs (miRNAs) zu Kriibs ass eng dicht ze propagéieren Mechanismus vun entholl Initiatioun a behandelt ginn. Mir-27a, e Member vun der miRNA Famill, gouf de Premier vun GC zu betreffen dës [18]. Ausserdeem, ass den Ausdrock vun Mir-27a zu engem hypoxic Emwelt fräi [19]. Dës Conclusiounen hindeit datt HIF-1α kann de Begrëff vun Mir-27a an Afloss GC fir Premier regléieren. Allerdéngs hunn de spezifeschen reglementaresche Mechanismen nach opgekläert ginn. Déi heiteg Etude gewisen, datt den Ausdrock vun HIF-1α an Mir-27a vill weider-reglementéiert GC Stoffer an Zell Linnen, besonnesch an resistent Zell uvertraut. VerfÜgung

Transfection mat engem spezifeschen kleng interfering RNS endogenous HIF ze blockéieren -1α e schéinen Reduktioun Mir-27a Ausdrock an der alleviation vun fir Premier am GC Zell Linnen. Dës Roman Conclusiounen hindeit, datt inhibition vun HIF-1α Ausdrock Hien der Reunioun vun de Premier-Zesummenhang Genen MDR1 /P-GP, LRP, an BCL-2 fir Premier vun GC Zellen ze attenuate vun repressing Mir-27a Ausdrock. VerfÜgung

spontan a Methode VerfÜgung

1,1 spontan VerfÜgung

Gastric Zell Linn OCUM-2MD3 vum Professer Masakazu Yashiro an Japan Oita Medical befënnt sech [20]. D'stabil EPO-resistent Zell Linn OCUM-2MD3 /L-OHP2 war via culturing an Auswiel vun eiser Fuerschung Grupp kritt. D'GSE-1 Zell Linn war vun der Zell Ressourcen-Center op Shanghai Institut fir Biologesch Sciences vun der chinesescher Akademie vun de Wëssenschaften kaaft. RPMI 1640 Kultur mëttel- a trypsin sech aus Gibco Company kaaft; Trizol reagent an Lipofectamine 2000 transfection reagent sech aus Invitrogen kaaft. De Géigendeel Transkriptiouns Kit an fluorescence grouss Hinnen alleguer reagents sech aus Promega Corporation kritt. Hinnen alleguer primers a kleng interfering RNS sech duerch Shanghai biologesch Engineering Company Wierderbuch. D'FAQ Extraktioun Kit war vun Beyotime Company, China kritt. Primärschoul antibodies géint HIF-1α, MDR1 /P-GP, GST-π, LRP, BCL-2, TS oder GAPDH sech vu Santa Cruz kaaft. MTT war aus Fläch kritt. Eis Etude war vun der Ethik Comité vun der véierter laizistesch Hospital vun Hebei Medical University guttgeheescht. VerfÜgung

1.2 Séminairen Prouf Virbereedung VerfÜgung

All 65 Patiente mat GC der gastric resection an agebousst Confirmatioun vun der véierter ausgewielt goufen Spidol vun Hebei Medical University, dorënner 42 Männercher an 23 Weibercher vu 60,5 ± 8.1 Joer deen net preoperative radiotherapy Chimiotherapie dobäi haten. Cancer an Para-carcinoma Stoffer (ronn 1.0 cm × 0,5 cm × 0,5 cm) sech aus all Patient geholl, an de Beem uplanzen sech zu flëssegem Stéckstoff séier gefruer an duerno bis -80 ℃ Conservatioun transferéiert. All Participant ënnerschriwwen d'Awëllegung. VerfÜgung

1,3 Zell Kultur an transfection VerfÜgung

D'OCUM-2MD3, OCUM-2MD3 /L-OHP an GSE-1 Zell Linnen an RPMI 1640 mëttelfristeg nà cultured sech mat 10% an et Bovine serum (FBS), 100U /ml penicillin an 100 mg /ml streptomycin. Virun allem, huet de mëttel- vun der OCUM-2MD3 /L-OHP Zellen mat L-OHP op eng Usammlung vun 75μg /ML behandelt hir Drogen-Resistenz phenotype ze erhalen, eng Woch virum Agrëff an d'Behandlung stoppen. . D'Zellen sech zu engem humidified 5% CO _{2 Ambiance bei 37 ° C VerfÜgung}

Dräi HIF-1α-siRNA Message mat Designer BLOCK-et RNAi entworf incubated (Haaptrei 1: GAGGAAACUUCUGGAUGCUGGUGAUtt; Haaptrei 2: GGAUGCUGGUGAUUUGGAUAUUGAAtt; Haaptrei 3: CAGGACAGUACAGGAUGCUUGCCAAtt), all déi mat hire ergänzen Haaptrei an transfected respektiv an d'OCUM-2 MD3 /L-OHP GC Zellen genannt gouf. A Net-spezifesch siRNA Haaptrei (NS-siRNA: GAGUGGGUCUGGGUCUUCCCGUAGAtt) war als negativ Kontroll benotzt. D'miR27a mimetic Haaptrei war 5'-UUCACAGUGGCUAAGUUCCGC-3 ". Mënsch voller-Längt HIF-1α coden Haaptrei war an pcDNA3.1 Vecteure subcloned. pGL3-miR27a-luc, pcDNA-HIF-1α, pGL3-Grondakommes an Praxis-TkLanguage plasmids sech an eiser Labo gebaut an conserved. VerfÜgung

D'GC Zellen zu 6-gutt Placke fir 24 h virun transfection rakommen sech bei eng Dicht vu 4 × 10 5 Zellen /ml. D'plasmid vectors, siRNA oder miR27a rescht war an der GC Zellen oder Drogenofhängeger-resistent Zellen transfected Lipofectamine mat der transfection reagent Fabrikant d'Instruktioune folgenden. Dunn, goufen d'Zellen mat serum-gratis RPMI 1640 subtil Antibiotiken gewäsch. D'transfection Effizienz gouf spéider 24 h gemooss, déi vun der nächster Experimenter gefollegt. VerfÜgung

1,4 MTT assay VerfÜgung

GC Stoffer an normal Para-carcinoma Otemschwieregkeeten war homogenized vun Filter duerch eng 300 eenzel Zell suspensions ze preparéieren -mesh Koffer Gitter. De GC Zellen verdaut 0,02% héich-0,25% trypsin benotzt huet bei enger Dicht vu 5 × 10 4 Zellen /ml am 96-gutt Placke rakommen. Eemol d'Zellen ronn 60% Niewebaach, HIF-1α-siRNA erreecht gouf transfected oder engem chemotherapeutic Drogenofhängeger (150μg /ml vu L-OHP) applizéiert gouf. All Grupp aus sechs Wells. Dunn, 20μl vun 5 mg /ml MTT war fir 4 h virum Enn vun der Experimenter notéiert. D'Zellen sech fir 4 h cultured, an duerno, no der Kultur mëttelfristeg discarded. Next, 150μl vun DMSO war fir all derbäi gutt, an d'sel Wäerter bei 490 nm mat engem microplate Lieser gemooss goufen no der Plack fir 15 min bei Raumtemperatur verzweifelt. Experiment dräi Mol widderholl. VerfÜgung

1,5 RNS Isolatioun a grouss RT-Hinnen alleguer VerfÜgung

Total RNS ofgebaut gouf Trizol eent-Schrëtt Methode benotzt, an 2μg RNS war fir ëmgedréint Transkriptiouns benotzt Skelett cDNA ze generéieren. Der relativer mRNA Niveauen sech via grouss Hinnen alleguer alles, zerwéiert GAPDH wéi eng intern Referenzmaterial Gentherapie. D'Hinnen alleguer Parameteren sech als verfollegen: 95 ° C fir 5 min vun 45 Zykle vun denaturation bei 94 ° C duerno fir 30 s an annealing bei 60 ° C fir 30 ass. D'primer Message mat Primer 5.0 entworf a sech fir Spezifizitéit gesichte. D'primer Message gi wéi follegt: HIF-1α (93 BP): (F) 5'-GACAGCCTCACCAAACAGAG-3 "a (R) 5'-CTCAAAGCGACAGATAACACG-3"; MDR1 (126 BP): (F) 5'-GAATGTTCAGTGGCTCCGAG-3 "a (R) 5'-ACAATCTCTTCCTGTGACACC-3"; GST-π (151 BP): (F) 5'-ATACCATCCTGCGTCACCTG-3 "a (R) 5'-TCCTTGCCCGCCTCATAGTT-3"; BCL-2 (98 BP): (F) 5'-TGTGTGGAGAGCGTCAACC-3 "a (R) 5'-TGGATCCAGGTGTGCAGGT-3"; LRP (129 BP): (F) 5'-TTTCTGACGGCAACTTCAAC-3 "a (R) 5'-AGTCCAATGTCCAGCCCAT -3 '; TS (129 BP): (F) 5'-TTTCTGACGGCAACTTCAAC-3 "a (R) 5'-AGTCCAATGTCCAGCCCAT -3 '; an GAPDH (138bp): (F) 5'-GACCCCTTCATTGACCTCAAC-3 "a (R) 5'-CGCTCCTGGAAGATGGTGAT-3". Déi grouss Hinnen alleguer Resultater waren der 2 berechent benotzt -ΔΔCt Method VerfÜgung

1,6 Western blot VerfÜgung

D'Otemschwieregkeeten an Zell Echantillon lysed benotzt Ripa lysis gefiermt:. 1% Triton X-100, 150 mm NaCl, 10 mm Tris-HCl, pH 7.4, 1 mm héich, 1 mm EGTA, pH 8.0, 0,2 mm Na3VO4, 0,2 mm phenylmethylsulfonyl fluoride, an 0,5% NP-40. Gläich Montanten vun de FAQ Echantillon waren op der polyacrylamide SDS gels (SDS-PAGE) 10% trennt sech zu engem polyvinylidene fluoride (PVDF) Membran (Amersham Pharmacia Biotech) electrotransferred. D'Schläimhait sech mat 5% BSA fir 2 h an incubated mat der Primärschoul antibody Nuecht op 4 ° C gespaart. D'Schläimhait sech fir 2 h an enger horseradish peroxidase-conjugated Secondaire antibody incubated. D'Zil Bands sech mat enger verstäerkter chemiluminescence (ECL) erkennen Kit (Santa Cruz, USA) fonnt. β-actin war als endogenous Kontroll Gentherapie benotzt. D'Experimenter gouf dräi Mol Rollenger. VerfÜgung

1,7 Chromatin immunoprecipitation (Chip) assay VerfÜgung

Chip assays sech standing no der Method vum Wang et al. [21]. Zellen mat ënnerschiddlech Behandlung sech fir 15 min bei Raumtemperatur, mat 1% formaldehyde fix a vun enger Finale Konzentratioun vun 0,125 M glycine anzehalen. Dunn huet Zellen mat 300μl lysis gefiermt lysed (50 mm Tris-HCl, pH 8.0, 150 mm NaCl, 5 mm héich, 1% Nonidet P-40, 0,5% deoxycholate, an protease inhibitors). D'Zell lysates waren an Äis Waasser Bad sonicated zu chromatin Fragmenter iwwer 600 BP gesinn, wéi déi agarose gelies electrophoresis évaluéieren. No centrifugation fir 10 min bei 13.000 Ziichter, goufen d'supernatants geholl a fir 15 min mat 30μl vun FAQ A-Sepharose Glaspärelen bei 4 ° C via incubation Pre-Ausgläich an Saumon presuméierten DNA sheared. No centrifugation fir 5 min bei 13.000 Ziichter, goufen d'supernatants an dräi gläich Deeler opgedeelt: ee fir Input, déi aner zwee fir immunoprecipitation mat oder ouni HIF-1α antibody. Den nächsten Dag, den immun investéiert goufen mat FAQ A-Sepharose Glaspärelen Preisen a Saumon presuméierten DNA sheared, da waren d'Glaspärelen gesammelt no zweemol mam wäschen gefiermt ech (20 mm Tris-HCl, pH 8.1 150 mm NaCl, 0,1% zou SDS, 1% Triton X-100, an 2 mm héich), gefollegt vun wäschen gefiermt II (20 mm Tris-HCl, pH 8.1 500 mm NaCl, 0,1% SDS, 1% Triton X-100, an 2 mm héich) , an wäschen gefiermt III (10 mm Tris-HCl, pH 8.1, 0,25 M LiCl, 1% Nonidet P-40, 1% deoxycholate, an 1 mm héich), an der Finale wäschen gefiermt IV (10 mm Tris-HCl, pH 8.1, an 1 mm héich). D'immunoprecipitates sech duerch 200μl elution Prellbock (1% SDS an 0,1 M NaHCO _{3), gefollegt vun incubation bei 65 ° C Iwwernuechtung eluted. Den nächsten Dag, war DNA vun all Prouf isoléiert, an Hinnen alleguer war standing de Promoteur Segmenter zu Meenungsfreiheet nennt eng HIF-1α bindend Site mat. VerfÜgung}

1,8 Luciferase assays VerfÜgung

BTS zu 70% Niewebaach ugebaut a duerno goufen zu triplicate mat pGL3-Mir-27a-luc, pcDNA-HIF-1α oder pGL3-Grondakommes, zesumme mat Praxis-TkLanguage transfected. No 48 h vu transfection, sech gesammelt Zellen an der luciferase Aktivitéit war mat der Dual-Luciferase Reporter Assay System (Promega, Madison, allem) laut gemooss un de Protokoll d'Hiersteller. D'luciferase Aktivitéite vun Praxis-TkLanguage sech als intern Kontroll zerwéiert. VerfÜgung

1,9 statistique Analyse VerfÜgung

D'Resultater sinn als Mëttel ± S.D. presentéiert ANOVA, an DUNNETT d'Test war mat SPSS 11,5 Software gesuergt. VerfÜgung

Resultater VerfÜgung

1 HIF-1α an miR27a sinn differentially tëscht gastric Para-carcinoma Otemschwieregkeeten an GC Otemschwieregkeeten VerfÜgung

D'ausgedréckt Ausdrock vun HIF-1α am GC Otemschwieregkeeten Verglach mat gastric Para-carcinoma Otemschwieregkeeten war via qRT-Hinnen alleguer a Western blot, an der Empfindlechkeet vun den L-OHP Zellen war via de MTT assay sech alles. HIF-1α (Lalumi 1A, 1B an 1c, qPCR a Western blot) an miR27a (Lalumi 1D, qPCR Resultater) sech weider-reglementéiert GC Otemschwieregkeeten Verglach zu gastric Para-carcinoma Otemschwieregkeeten. D'MTT assay bewisen, dass d'Zell Iwwerliewe Tarif am GC Otemschwieregkeeten grouss war wéi an gastric Para-carcinoma Otemschwieregkeeten wann L-OHP zu der Single-Zell Otemschwieregkeeten suspensions (Lalumi 1E, ugëtt Resultater) dobäi war. VerfÜgung

2 HIF -1α an miR27a sinn tëschent engem gastric mucosa epithelial Zell Linn an engem GC Zell Linn VerfÜgung

den Ausdrock vun HIF-1α war den héchsten zu OCUM-2MD3 /L-OHP an OCUM-2MD3 Zellen differentially ausgedréckt, Rei, an huet de niddregsten an GES-1 Zellen (Lalumi 2A, 2B an 2C, qPCR a Western blot). Desweideren, ugewisen dem Wëllen vun miR27a der selwechter Trend, an déi OCUM-2MD3 /L-OHP Zellen der héchster Ausdrock ugewisen, gefollegt vun OCUM-2MD3 Zellen, an GSE-1 Zellen ugewisen déi ënnescht Ausdrock vu Mir-27a (Lalumi 2D, qPCR Resultater). D'MTT assay verroden, datt wann L-OHP fir déi dräi Zell Linnen derbäi war, OCUM-2MD3 /L-OHP Zellen héchste Zell Iwwerliewe Taux Schatzkummer, gefollegt vun OCUM-2MD3 Zellen, an déi GSE-1 Zellen Schatzkummer déi ënnescht Zell Iwwerliewe Tarif (Lalumi 2E, ugëtt Resultater). VerfÜgung

3 HIF-1α-siRNA Hien den Ausdrock vun miR27a an der Drogen- Resistenz vun OCUM-2MD3 /L-OHP Zellen VerfÜgung

Western blot Analyse gewisen, datt der mRNA an FAQ Niveau vun HIF-1α erofgaangen fir verännerlech Grad an OCUM-2MD3 /L-OHP mat dräi Puer HIF-1α-siRNA transfected Zellen, am Ufank HIF-1α Ausdrock vun der mat Kontroll-siRNA transfected Zellen änneren rauszesichen. HIF-1α Ausdrock wossten stäerkste steeply zu Réckgang, vun ongeféier 90%, HIF-1α-siRNA-2 (Lalumi 3A) benotzt. Als zu Lalumi 3B gewisen, HIF-1α ofgeholl Ausdrock vun dësen Zellen an enger Portioun-ofhängeg Manéier, an déi HIF-1α Ausdrock vun méi wéi 95% vun Zellen transfected mat 80 nm HIF-1α-siRNA-2, ofgeholl wann HIF- bei enger Portioun 20 nm, 40 nm oder 80 nm 1α-siRNA-2 war weider transfected. Ausserdeem war den Bäschten inhibitory Effekt 48 h der transfection (Lalumi 3C) fonnt. VerfÜgung

miR27a Ausdrock war ofgeholl vill folgenden transfection vun der OCUM-2 MD3 /L-OHP Zellen mat HIF-1α-siRNA-2 (Lalumi 3D). D'MTT assay uginn dass d'Zell Iwwerliewe Taux wesentlech folgenden Behandlung vun HIF-1α-siRNA-2-transfected OCUM-2 MD3 /L-OHP Zellen mat L-OHP Verglach zu Net-transfected Zellen (Lalumi 3) verkierzt huet.

4 Effects vun miR27a op de Premier vun OCUM-2MD3 /L-OHP Zellen VerfÜgung

den Ausdrock vun miR27a up-reglementéiert war, wann d'miR27a rescht war co transfected an dës Drogen-resistent GC Zellen déi mat HIF-1α-siRNA (Lalumi 4A) transfected schonn haten. Allerdéngs war kee groussen Ënnerscheed zu den Ausdrock vun HIF-1α erwëscht an OCUM-2MD3 /L-OHP Zellen der transfection (Lalumi 4B an 4C, qPCR a Western blot). VerfÜgung

D'MTT assay datt d'Iwwerliewe bewisen Taux vun OCUM-2MD3 /L-OHP Zellen war folgenden transfection mat der miR27a rescht (Lalumi 4D, ugëtt Resultater) däitlech geklommen. VerfÜgung

5 HIF-1α induces der Reunioun vun miR27a zu OCUM-2MD3 Zellen VerfÜgung

den Ausdrock vun HIF-1α war zu OCUM-2MD3 Zellen transfected mat der eukaryotic Ausdrock plasmid pcDNA-HIF-1α fir 48 h (Lalumi 5A) däitlech geklommen. Doriwwer eraus, war miR27a Ausdrock kloer an gereegelt-(Lalumi 5B). Sou, proposéiert dëse Resultater datt HIF-1α enger kritescher Faktor ass, datt d'Reunioun vun miR27a betreffen. Dofir, gegrënnt mir eng luciferase reporter Gentherapie plasmid engem 2 KB Haaptrei Offloss vun de Promoteur Regioun vun miR27a Droen, déi mat pcDNA-HIF-1α an d'Zellen Co-transfected war. D'DLA Donnéeë gewisen, datt HIF-1α de Promoteur Aktivitéit vun miR27a folgenden Co-transfection (Lalumi 5C) verstäerkt. Chip Analys confirméiert weider dass HIF-1α direkt gebonnen un de Promoteur Regioun vun miR27a (Lalumi 5D). D'Resultater uginn dass HIF-1α kann duerch direkt bindend fir de Promoteur Regioun vun miR27a. VerfÜgung

6 Inhibition vun HIF-1α benotzt siRNA Hien dem Wëllen vun Drogenofhängeger Resistenz-Zesummenhang mat der Reunioun vun miR27a zu OCUM-2MD3 Zellen Promotioun Genen VerfÜgung

Als zu Lalumi 6 gewisen, d'inhibition vun HIF-1α Trainer den Ausdrock vun MDR1 /P-GP opgeléist, LRP, an BCL-2 zu OCUM-2MD3 /L-OHP Zellen awer net vill gemaach ofzeänneren den Ausdrock vun GST-π oder TS. (Lalumi 6). VerfÜgung

7 Inhibition vun miR27a verklengert vun Drogenofhängeger Resistenz-Zesummenhang Gentherapie Ausdrock vun OCUM-2MD3 /L-OHP Zellen VerfÜgung

miR27a war an Drogenofhängeger-resistent GC repressed OCUM-2MD3 /L-OHP Zellen transfected mat der anti-miR27a Haaptrei (Lalumi 7A). Ausserdeem, folgende dëser transfection, den Ausdrock vun MDR1 /P-GP, LRP an BCL-2 war vill rofgaang hierkommen kee groussen Ënnerscheed zu den Ausdrock vun GST-π oder TS fonnt gouf (Lalumi 7B, 7C a 7D, qPCR a Western blot). (Lalumi 7) VerfÜgung

Diskussioun VerfÜgung

Obwuel de weltwäit Heefegkeet Taux vun GC schéngt an de leschte Joeren ofgeholl ze hunn, eng héich Heefegkeet vun GC bestoe bliwwen, eeschthaft d'Gesondheet vu Persounen an Asien Klima [22] . De Premier vun GC Zellen dréit zu der aarmséileg hätt vun GC, an déi Sauerstoff hunn eng kritesch Roll spillt. Am Moment studéieren, gegrënnt mir de stabil OCUM-2MD3 /L-OHP Zell Linn dass zu L-OHP resistent ass. Eis Donnéen uginn, datt GC Stoffer an Zell Linnen staark Drogenofhängeger Resistenz wéi normal gastric epithelial Stoffer an Zell Linnen. Mir hunn och, datt Drogenofhängeger-resistent Zellen entweckelen méi staark fir Premier. Eis Resultater zougedréckt Ausdrock vun HIF-1α am GC Stoffer an Zell Linnen fräi, an der héchster Ausdrock vun HIF-1α gouf zu engem Alkohol--resistent Zell Linn fonnt. Dofir, proposéiere mir, datt HIF-1α zu der Entwécklung vun fir Premier am GC Zellen dréit. VerfÜgung

D'HIF-1α Gentherapie eng FAQ encodes dat mat engem molekulare Gewiicht vun 120 kDa vun 826 Aminosaier Saieren besteet [23]. Vill Studien hu confirméiert, datt fräi Meenungsäusserung vun HIF-1α staark mat der Optriede an Entwécklung vun erhéijen [24-28] verbonnen ass. Aner Studien hunn, datt iwwer-Ausdrock vun HIF-1α der Drogenofhängeger-resistent Eegeschafte vun enger Rei vun entholl Zellen verbessert [29-32]. Zousätzlech, eiser Etude bewisen, dass GC Stoffer an Zell Linnen staark Resistenz zu chemotherapeutic Drogen wéi gastric Para-carcinoma Stoffer an gastric mucosa Zell Linnen. Mir nogewise och déi mächtegst EPO-Resistenz am GC Zellen. Allerdéngs hunn d'Mechanisme vun deem HIF-1α reguléieren fir Premier nach haut am GC Zellen identifizéiert ginn. Dofir, ze propagéieren mer weider d'Auswierkunge vun HIF-1α op der fir Premier Eegeschafte vun GC Zellen via Gentherapie Amëschen an Klone Techniken. RNS Amëschen (RNAi) huet Virdeeler an Spezifizitéit, Effizienz an Plazverbrauch fir d'Regelung vun der Zil- Gentherapie Ausdrock ugewisen [33]. Eis Daten weg datt inhibition vun HIF-1α vill Alkohol- Resistenz reduzéiert an OCUM-2MD3 /L-OHP Zellen. Desweideren, hien huet mir datt Drogenofhängeger Resistenz ausgebaut huet, wann pcDNA-HIF-1α, déi gebraucht gouf HIF-1α zu overexpress, an Net-Drogen-resistent GC Zell Linnen transfected war. Eis Resultater uginn dass HIF-1α eng wesentlech Roll an der Entwécklung vun fir Premier am GC spillt. VerfÜgung

rezenten Etuden hunn uginn, datt fir Premier enk mat miRNAs zu erhéijen [34-36] Zesummenhang ass. Hu huet confirméiert, dass Mir-27a inactivating de Premier Eegeschafte vun GC Zellen kann ëmgedréint [18]. Ausserdem, huet et gemellt ginn, datt Mir-21, Mir-27a, Mir-210 an Mir-181b sech weider-reegelen via de HIF Passerelle an der hypoxic Ëmwelt baséiert op engem Gene-Chip assay [19]. Am Aklang mat eisem Resultater, HIF-1α war positiv mat dem Ausdrock vun Mir-27a am GC Stoffer an Zell Linnen verbonnen, an inhibition vun HIF-1α ofgeholl Mir-27a. Am Géigesaz, iwwer-Ausdrock vun HIF-1α entschlof den Ausdrock vun Mir-27a. Dës Resultater uginn dass HIF-1α den Ausdrock vun Mir-27a reguléieren. Ausserdeem, eis Etude gewisen, datt Mir-27a mimics der Drogenofhängeger-Resistenz Eegeschafte vun HIF-1α-knockdown Zellen gerett. Wichteg, HIF-1α Photo'en direkt un an ënnerstëtzt miR27a Transkriptiouns, wat beweist, datt HIF-1α de Premier vun GC via Mir-27a reguléieren. VerfÜgung

Mir zeechne dem Wëllen vun Genen déi enk verbonne gi mat fir Premier, dorënner MDR1 /P-GP, GST-π, LRP, BCL-2 an TS, virun an no der modulation vun HIF-1α Ausdrock am GC Zellen déi de Mechanismus, fir d'HIF-1α-Mir-27a Passerelle déi fir Premier vun GC reguléieren . Mir bewisen datt inhibition vun HIF-1α Ausdrock den Ausdrock vun MDR1 /P-GP, LRP an BCL-2 reduzéiert. Den Ausdrock Niveau vun deene Genen huet vill fräi wéi d'Zellen mat der Mir-27a transfected huet rescht, iwwerdeems den Ausdrock Niveau vun GST-π an TS sech net vill verännert. An Aklang mat dëser fannen, iwwer-Ausdrock vun HIF-1α potently den Ausdrock vun MDR1 /P-GP, LRP, an BCL-2 am GC OCUM-2MD3 Zell Linn an-reegelen. Dofir, beweisen eiser Donnéeën datt d'HIF-1α-Mir-27a Passerelle GC fir Premier Eegeschaften an duerch Pinguin MDR1 /P-GP, LRP an BCL-2 Ausdrock mediates. VerfÜgung

Eis Studien weisen dass HIF-1α an Mir -27a sinn am GC Stoffer an Zell Mall-reegelen. HIF-1α Akten als Offloss regulator vum Mir-27a. HIF-1α-Mir-27a sécher verbessert d'Eegeschafte vun fir Premier vun Pinguin den Ausdrock vun MDR1 /P-GP, LRP an BCL-2 zu GC. Dës Resultater hindeit, datt d'HIF-1α-Mir-27a Passerelle eng wichteg Roll bei der Initiatioun vu fir Premier an mënschlechen GC spillt, deen als Roman therapeutesch Zil fir fir Premier am GC déngen kann. VerfÜgung

Ennerstëtzung Informatiounen VerfÜgung S1 Fichier. Date vun MTT a Western VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0132746.s001 VerfÜgung (ernannte) VerfÜgung

• PLOS NËMMEN: Multidrug-Resistance Contenu Long Non-Coding RNS Expression Profil Analys vun Gastric Cancer
• PLOS NËMMEN: Regulatioune B Zell Funktioun vum fëmmen an Den zu H. Trupen Ass pylori-Krankheet Themen a Ass mat nik Risk vun Gastric Cancer