PLoS ONE: HIF-1α inducira višestruke rezistencije na lijekove u rak želuca Stanice Izazivanje Mir 27a

Sažetak pregled

Cilj ovog rada bio je utvrditi povezanost između HIF-1 a i Mir-27a izražavanja i procijeniti učinak inhibicije HIF-1 a izraz na izrazu Mir-27a i otpornosti na rak želuca ( GC). U ovom istraživanju, u stvarnom vremenu-PCR i Western blot su provedena za otkrivanje ekspresiju HIF-1 a u GC tkivima i stanicama. Tada OCUM-2MD3 /L-OHP stanice su transficirane s HIF-1 a-siRNA, a miR-27a oponašati ili pcDNA-HIF-1 a, i opstanak stanice je određen pomoću MTT pokusom. Ekspresija HIF-1 a, Mir-27a i MDR-vezanih gena je mjeren preko realnom vremenu-PCR i Western blot. Chip i dual analize luciferaze aktivnosti provedena su za procjenu regulaciji transkripcije HIF-1 a i Mir-27a. Rezultati su pokazali da transfekcija HIF-1 a-siRNA značajno smanjio razine Mir 27a, čime se znatno poboljšanu inhibiciju stope proliferacije OCUM-2MD3 /L-OHP stanica. U odnosu na ne-transficiranih stanica stopa preživljavanja značajno je smanjena u stanicama koje su transfektirane s HIF-1 a-siRNA nakon tretmana s L-OHP. Stopa preživljavanja stanica bila je značajno povećana u OCUM-2MD3 /L-OHP stanicama transficiranim s miR-27a ličiti, dok HIF-1α prekomjerna ekspresija nije dovela do jasne promjene u staničnom preživljavanju. Rezultati testa aktivnosti luciferaze dvojnog pokazali da HIF-1α pojačava transkripcijsku aktivnost promotora miR27a stanica transfekcijom s reporterskim plazmidom koji sadrži promotorsku regiju uzvodno od miR27a zajedno s pcDNA-HIF-1 a. Chip analiza sugerira da HIF-1α direktno veže za promotorske regije miR27a. Inhibicija HIF-1 a ili miR27a izražavanja smanjio MDR1 /P-gp, LRP i Bcl-2 u OCUM-2MD3 /L-OHP stanica. Dakle, utvrdili smo da HIF-1α je usko povezan s MDR u GC i da HIF-1α može potisnuti MDR1 /P-gp, LRP i Bcl-2 ekspresija inhibiraju ekspresiju Mir-27a pregled

Citation. Zhao Q, Li Y, Tan Bb, Fan LQ, Yang Pg, Tian Y (2015) HIF-1α inducira višestruke rezistencije na lijekove u rak želuca stanice Izazivanje MIR 27a. PLoS ONE 10 (8): e0132746. doi: 10,1371 /journal.pone.0132746 pregled

Urednik: Jin P Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, SAD pregled

Primljeno: 5. siječnja 2015. godine; Prihvaćeno: 17. lipanj 2015; Objavljeno: 20. kolovoz 2015 pregled

Copyright: © 2015 Zhao i sur. Ovo je otvoreno pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan pregled

Podaci Dostupnost: sve relevantne podatke su u radu i njegove popratne podatke datoteka pregled

Financiranje:. Ovaj rad je podržan od strane sljedećem potpore. provincijal Natural Science Foundation provincije Hebei (br H2013206311 na Qun Zhao) pregled

suprotstavljenih interesa. autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

rak želuca (GC) je među najčešćim zloćudnim bolestima, uzrokujući ozbiljnu štetu u svijetu [1, 2] Nakon godina tehnološki napredak u dijagnostici i liječenju GC, njegova incidencija i smrtnost su se smanjili u svijetu, ali i dalje visoka u azijskim zemljama [3, 4]. Trenutno, želuca resekcija je dostupan samo metoda za liječenje GC. Međutim, teško je postići potpuni lijek unatoč kirurškim uklanjanjem tumora, jer većina pacijenata pate od uznapredovalog GC nakon dijagnoze [5, 6]. Dakle, kemoterapija ima izuzetno važnu ulogu u sveobuhvatnom liječenju GC. Iako je kemoterapija znatno napredovala u odnosu na liječenje uznapredovalog GC, [7, 8] prognoza GC i dalje nisu dovoljni, s pet godina stopa preživljavanja od manje od 30% [9]. Ova prognoza je prvenstveno zbog rezistencije na lijekove (MDR) u GC stanicama. MDR u GC često dovodi do neuspjeha kemoterapije [10-12]. Prema tome, postoji hitna potreba da se razviju nove obećavajuće terapijske strategije za učinkovito smanjiti MDR u GC. Pregled

nedostatka kisika prevladava u solidnih tumora i povezan je s cijelim nizom bioloških funkcija. Trenutno, faktor hipoksije inducibilni (HIF) -1α smatra se da je blisko povezana s hipoksijom. HIF-1α snažno izražava se u različitim malignim tumorima [13, 14] i djeluje kao bitnog čimbenika za reguliranje prilagodbu tumorskih stanica na hipoksiju [15]. HIF-1α je sugerirao da se usko povezana s GC MDR [16, 17]. Međutim, nejasno je koji put posreduje ulogu HIF-1 a na GC MDR. Pregled

U posljednjih nekoliko godina, uloga mikroRNA (miRNAs) u rak je postao široko istražena mehanizam inicijacije i liječenje tumora. Mir-27a, član obitelji Mirna, pokazalo se da utječu na MDR GC [18]. Nadalje, izraz Mir-27a je povećana u nedostatka kisika u okolini [19]. Ovi rezultati ukazuju na to da HIF-1α mogu regulirati ekspresiju Mir-27a i utjecati na GC MDR. Međutim, specifične regulatorne mehanizme tek treba razjasniti. Ova studija je pokazala da je ekspresija HIF-1 a i Mir-27a bili su znatno viša u GC tkiva i staničnih linija, a posebno u rezistentnim staničnim linijama.

TRANSFICIRANJE pregled s određenom malom ometa RNA blokiranja endogene HIF -1α rezultiralo smanjenjem miR-27a ekspresiju i ublažavanje MDR u staničnim linijama GC. Ovi novi rezultati sugeriraju da inhibicija HIF-1 a izraza potiskuje transkripciju MDR-vezanih gena u MDR1 /P-gp, LRP i Bcl-2 za ublažavanje MDR GC stanica koje potiskuju izraz Mir-27A. Pregled

materijal i metode pregled

1,1 Materijali pregled

Želučani stanične linije OCUM-2MD3 je od profesora Masakazu yashiro u Japan Oita Liječnička ordinacija [20]. dobiven Stabilna stanična linija rezistentan na lijekove OCUM-2MD3 /L-OHP2 preko uzgoja i selekcije od strane naše istraživačke skupine. Stanična linija GSE-1 je kupljena od Cell Resource Center u Šangaj instituta za biološke znanosti kineske akademije znanosti. RPMI 1640 kulturi i tripsina su kupljeni od Gibco Društva; Trizol reagensa i Lipofektaminje 2000 transfekciju reagensa su kupljeni od Invitrogen. Reverzna transkripcija kit i fluorescencija kvantitativni PCR reagensi su dobiveni od Promega Corporation. PCR početnice i mali smetaju RNA su sintetizirani Shanghai Biological Engineering Company. Komplet za ekstrakciju proteina koji je dobiven od Beyotime Company, Kina. Primarni antitijela protiv HIF-1 a, MDR1 /P-gp, GST-π, LRP, Bcl-2, TS ili GAPDH kupljeni su od Santa Cruz. MTT je od tvrtke Sigma. Naše istraživanje je odobrilo Etičko povjerenstvo Četvrte SRODNE bolnici Hebei Medicinskom fakultetu Sveučilišta. Pregled

1,2 Klinička priprema uzoraka pregled

Svi 65 bolesnika s GC izabrani su nakon želudac resekcije i patološku potvrdu u četvrtom bolnica Hebei medicinskog sveučilišta, uključujući 42 muškaraca i 23 žena u dobi od 60,5 ± 8,1 godina, koji nisu primili postoperativnog radioterapiju ili kemoterapiju. Rak i para-karcinoma tkiva (otprilike 1,0 cm x 0,5 cm × 0,5 cm) uzeti su od svakog pacijenta, a uzorci su brzo smrznuti u tekućem dušiku te nakon toga prenese u -80 ℃ zaštite. Svi sudionici su potpisali informirani pristanak. Pregled

1,3 Stanična kultura i transfekcija pregled

OCUM-2MD3, OCUM-2MD3 /L-OHP i GSE-1 uzgajane su u RPMI 1640 mediju 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS), 100 U /ml penicilina i 100 mg /ml streptomicina. Posebice, medij od OCUM-2MD3 /L-OHP stanica je tretirana sa L-OHP, u koncentraciji od 75μg /ml za održavanje njihove otpornosti na lijek fenotip, tjedan dana prije operacijskog zahvata da se zaustavi tretman. Stanice su inkubirane u vlažnom 5% CO _{2 atmosferi na 37 ° C pregled}

Tri HIF-1α-siRNA sekvence su izrađeni pomoću blok-to RNAi dizajner (sekvencu 1:. GAGGAAACUUCUGGAUGCUGGUGAUtt; sekvencu 2: GGAUGCUGGUGAUUUGGAUAUUGAAtt slijed 3: CAGGACAGUACAGGAUGCUUGCCAAtt), od kojih je svaki sa svojim kali komplementarnim slijedom i transfektirana, odnosno u OCUM 2 MD3 /L-OHP GC stanicama. Ne-specifična sekvenca siRNA (NS-siRNA: GAGUGGGUCUGGGUCUUCCCGUAGAtt) je korišten kao negativna kontrola. Mimetički slijed miR27a je 5'-UUCACAGUGGCUAAGUUCCGC-3 '. Humani pune duljine HIF-1α Coden sekvencu je subkloniran u vektor pcDNA3.1. pGL3-miR27a-Luc, pcDNA-HIF-1α, pGL3-Basic i pRL-TK plazmidi su konstruirani i konzerviran u našem laboratoriju. pregled

GC stanice su posađene na ploče sa 6 jažica 24 sata prije transfekcije na gustoća od 4 × 10 ^{5 stanica /ml. Plazmidne vektore, siRNA ili miR27a mimic transficira se u GC stanica ili stanica rezistentnih pomoću reagensa Lipofectamine transfekcije u skladu s uputama proizvođača. Zatim, stanice su isprane s antibioticima seruma RPMI 1640 nedostaje. Učinkovitost transfekcije je izmjeren 24 sata kasnije, a nakon toga naknadnim eksperimentima. Pregled}

1.4 MTT test pregled

GC tkiva i normalno tkivo para-karcinom je homogenizirana pripremiti suspenzije pojedinih stanica filtriranjem kroz 300 -mesh bakar mreža. GC stanice probavlja pomoću 0.02% EDTA 0,25% tripsina su nasađene u gustoći od 5 × 10 ^{4 stanica /ml u 96-jažica. Nakon što su stanice dostigle oko 60% ušće, HIF-1α-siRNA bilo je ubačeno ili se primjenjuje kemoterapijski lijek (150μg /ml L-OHP). Svaka skupina se sastojala od šest bušotina. Zatim 20 ul 5 mg /ml MTT doda se 4 sata prije kraja eksperimenta. Stanice su uzgajane tijekom 4 h, a zatim je medij za kulturu je uklonjen. Sljedeći, 150μl DMSO se doda u svaku jažicu, a OD vrijednosti izmjerene su pri 490 nm na čitaču mikrotitarskih pločica mućka ploče 15 min na sobnoj temperaturi. Eksperimenti su ponovljeni tri puta. Pregled izolacija}

1,5 RNA i kvantitativna RT-PCR

Ukupna RNA je ekstrahirana pomoću trizolne metode jednog koraka i 2 ug RNA uporabljen je za reverznu transkripciju za generiranje šablone cDNA. Relativne mRNA razine su određene pomoću kvantitativnog PCR, GAPDH je služio kao interni referentni gen. PCR parametri bili su kako slijedi: 95 ° C tijekom 5 minuta, a zatim 45 ciklusa denaturacije na 94 ° C kroz 30 s i zagrijavanjem na 60 ° C tijekom 30 s. Sekvencijama su izrađeni pomoću Primer 5.0 te su tražili specifičnosti. Nizovi primera su kao što slijedi: HIF-1α (93 bp): (F) 5'-GACAGCCTCACCAAACAGAG-3 'i (R) 5'-CTCAAAGCGACAGATAACACG-3'; MDR1 (126 bp): (F) 5'-GAATGTTCAGTGGCTCCGAG-3 'i (R) 5'-ACAATCTCTTCCTGTGACACC-3'; GST-π (151 bp): (F) 5'-ATACCATCCTGCGTCACCTG-3 'i (R) 5'-TCCTTGCCCGCCTCATAGTT-3'; Bcl-2 (98 bp): (F) 5'-TGTGTGGAGAGCGTCAACC-3 'i (R) 5'-TGGATCCAGGTGTGCAGGT-3'; LRP (129 bp): (F) 5'-TTTCTGACGGCAACTTCAAC-3 'i (R) 5'-AGTCCAATGTCCAGCCCAT 3'; TS (129 bp): (F) 5'-TTTCTGACGGCAACTTCAAC-3 'i (R) 5'-AGTCCAATGTCCAGCCCAT 3'; i GAPDH (138bp): (F) 5'-GACCCCTTCATTGACCTCAAC-3 'i (R) 5'-CGCTCCTGGAAGATGGTGAT-3'. Kvantitativni rezultati PCR izračunate su pomoću 2 ^{-ΔΔCt Postupak pregled}

1.6 Western blot pregled

tkiva i stanica uzorci su lizirani pomoću RIPA pufer lizina. 1% Triton X-100, 150 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl, pH 7.4, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, pH 8,0, 0,2 mM Na3VO4, 0,2 mM fenilmetilsulfonil fluorid, 0,5% NP-40. Jednake količine proteina uzoraka su odvojeni na 10% poliakrilamidnim gelovima u SDS (SDS-PAGE), te su na electrotransferred polivinilidenfluorid (PVDF) membranu (Amersham Pharmacia Biotech). Membrane su blokirane s 5% BSA u trajanju od 2 sata i inkubiraju s primarnim antitijelom preko noći na 4 ° C. Membrane se inkubiraju tijekom 2 sata na peroksidaza-konjugiranog sekundarnog antitijela. Ciljne bendovi su detektirani pomoću poboljšane chemiluminescence (ECL) otkrivanje kit (Santa Cruz, USA). β-aktin korišten je kao endogeni kontrolnog gena. Eksperiment ponovljena su tri puta. Pregled

1,7 kromatina imunoprecipitacije (Chip) testa pregled

čip ispitivanja su izvršena u skladu s postupkom iz Wang et al. [21]. Stanice s različitim tretmana su fiksirane s 1% -tnim formaldehidom 15 minuta na sobnoj temperaturi i prekine konačnu koncentraciju od 0,125 M glicina. Potom stanice su lizirane korištenjem 300 ml pufera za lizu (50 mM Tris-HCl, pH 8,0, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 1% Nonidet P-40 inhibitora, 0,5% dezoksikolat, i proteaze). Stanični lizati su ultrazvukom u kupelji s ledenom vodom, čime se dobije kromatina fragmente oko 600 bp, kao što je procijenjeno elektroforezom na agaroznom gelu. Nakon centrifugiranja na 13.000 okretaja u minuti tijekom 10 minuta, supernatanti su uzeti i prethodno nastavi tijekom 15 minuta na 4 ° C preko inkubacija s 30μl protein A-Sepharose kuglica i presječena DNA sperme lososa. Nakon centrifugiranja na 13.000 okretaja u minuti tijekom 5 minuta, a supernatant su bili podijeljeni u tri jednaka dijela: jedan za ulaz, a druge dvije za imuno sa ili bez HIF-1α antitijela. Sljedećeg dana, imuni kompleksi su istaloženi s proteinskim A-Sepharose kuglica i presječena DNA iz sperme lososa, zatim su kuglice su sakupljene nakon isprane dva puta s puferom za ispiranje I (20 mM Tris-HCl, pH 8,1, 150 mM NaCl, 0,1% SDS, 1% Triton X-100 i 2 mM EDTA), a zatim puferom za ispiranje II (20 mM Tris-HCl, pH 8,1, 500 mM NaCl, 0,1% SDS, 1% Triton X-100 i 2 mM EDTA) i puferom za ispiranje III (10 mM Tris-HCl, pH 8,1, 0,25 M LiCl, 1% Nonidet P-40, 1% deoksikolata, i 1 mM EDTA), a konačna puferom za ispiranje IV (10 mM Tris-HCl, pH 8.1, i 1 mM EDTA). Imunoprecipitati su eluirani 200 ul puferom za ispiranje (1% SDS-a, 0,1 M NaHCO _{3), nakon čega slijedi inkubacija na 65 ° C preko noći. Slijedeći dan, DNA iz svakog uzorka je izoliran i PCR je izveden da bi se proširio promotora segmente koji sadrže mjesto vezanja HIF-1α. Pregled}

1,8 za luciferazu testovima pregled

Stanice uzgojene do 70% -tne konfluencije i onda su prenijeti u tri primjerka s pGL3-Mir-27a-Luc, pcDNA-HIF-1 a ili pGL3-Basic, uz PRL-TK. Nakon 48 sati transfekcije, stanice su skupljene, a aktivnost luciferaze je mjerena korištenjem Dual-Luciferase reporter Assay System (Promega, Madison, WI) prema protokolu proizvođača. Luciferaze aktivnosti PRL-TK su služili kao unutarnje kontrole. Pregled

1.9 Statistička analiza pregled

Rezultati su prikazani kao sredstvo ± S.D. ANOVA i Dunnett test je izveden korištenjem SPSS 11,5 softvera. Pregled

Rezultati pregled

1 HIF-1α i miR27a različito izraženi između želuca para-karcinom tkiva i GC tkiva pregled

ekspresija HIF-1 a u GC tkivu u usporedbi s želučanom tkivu para-karcinom je određena pomoću QRT-PCR i Western blot i osjetljivost L-OHP stanica određena je pomoću MTT pokusom. HIF-1α (Slika 1A, 1B i 1C, qPCR i Western blot) i miR27a (Slika 1D, rezultati qPCR) bila viša u GC tkivu u odnosu na želučanu tkivo para-karcinoma. MTT je pokazala da je stopa preživljavanja stanica bio je veći u GC tkivu nego u želučanom para-karcinom tkiva kada je L-OHP doda se suspenzija pojedinačnih stanica tkiva (Slika 1E, rezultira histogram). Pregled

2 HIF -1α i miR27a različito izraženi između epitelnih stanica linije želučane sluznice i linije Netlogu GC stanica

izraz HIF-1 a bila je najviša u OCUM-2MD3 /L-OHP i OCUM-2MD3 stanica, sekvencijalno, i bio je najmanji u GES-1 stanice (slika 2a, 2b i 2c, qPCR i Western blot). Štoviše, izraz miR27a prikazuje isti trend, u kojem OCUM-2MD3 /L-OHP stanice prikazuje najviši izraz, a nakon toga OCUM-2MD3 stanica, a GSE-1 stanice prikazuje najnižu izraz Mir-27a (Slika 2D, Rezultati qPCR). MTT su otkrili da je L-OHP doda se tri stanične linije, OCUM-2MD3 /L-OHP stanice pokazivale najvišu stopu preživljavanja stanica, a nakon OCUM-2MD3 stanica i koji GSE-1 stanice pokazivale preživljavanje najnižu staničnog stopa (Sl 2E, rezultati histogram). pregled

3 HIF-1α-siRNA potiskuje izražavanje miR27a i otpornost na lijek od OCUM-2MD3 /L-OHP stanica pregled

Western blot analiza je pokazala da je mRNA i proteina nivoi HIF-1 a smanjena u različitim količinama u OCUM-2MD3 /L-OHP stanice transficirane s tri para HIF-1 a-siRNA, dok HIF-1α ekspresija nije se mijenjala u stanicama koje su transfektirane s upravljačke siRNA. HIF-1α izraz pojavio se smanjivati ​​najviše strmo, s oko 90%, korištenjem HIF-1 a-siRNA-2 (Slika 3a). Kao što je prikazano na slici 3B, HIF-1α ekspresija smanjena u tim stanicama na način ovisan o dozi, pri čemu HIF-1α ekspresija smanjila za više od 95% u stanicama koje su transfektirane s 80 nM HIF-1α-siRNA-2, pri HIF- 1α-siRNA-2 je dalje transfektirati u dozi od 20 nM, 40 nM ili 80 nM. Osim toga, maksimalni inhibitorski učinak otkriven 48 h nakon transfekcije (Slika 3C). Pregled

ekspresija miR27a značajno se smanjuje nakon transfekcije s OCUM-2 MD3 /L-OHP stanica s HIF-1α-siRNA-2 (Slika 3d). MTT je pokazala da je omjer preživljavanja stanica bila je značajno smanjena nakon tretmana HIF-1α-siRNA-2-transfektirane OCUM-2 MD3 /L-OHP stanice s L-OHP u odnosu na ne-transfektirane stanice (Slika 3e).

4 Učinci miR27a o MDR od OCUM-2MD3 /L-OHP stanica pregled

izraz miR27a je viša u OCUM-2MD3 /L-OHP stanice kada je miR27a imitacija je ko transfektirani u ovim rezistentnih GC stanicama koje su transfektirane s HIF-1 a-siRNA (Slika 4A). Međutim, nema značajne razlike u ekspresiji HIF-1 a otkriven je u OCUM-2MD3 /L-OHP stanica nakon transfekcije (Slika 4B i 4C, qPCR i Western blot). Pregled

MTT ispitivanje pokazalo da preživljavanje stopa OCUM-2MD3 /L-OHP stanica jasno je povećana nakon transfekcije s miR27a oponaša (slika 4D, s rezultatima histogram). pregled

5 HIF-1α inducira transkripciju miR27a u OCUM-2MD3 stanica pregled

ekspresija HIF-1 a je značajno povećana u OCUM-2MD3 stanica transfeciranih eukariotski ekspresijski plazmid pcDNA-HIF-1 a za 48 sata (Slika 5A). Nadalje, miR27a izraz lica bio je jasno regulira prema gore (slika 5B). Dakle, ti rezultati sugeriraju da HIF-1α je ključni faktor koji utječe na transkripciju miR27a. Stoga, uspostavili smo luciferaza reporter gen koji nosi plazmide 2 kb slijed uzvodno od promotorske regije miR27a, koji je ko-transfecirane sa pCDNA-HIF-1 a u stanicama. Podaci DLA pokazali da HIF-1α pojačan promotora aktivnost miR27a sljedeće kotransfekcije (Slika 5c). Chip analiza je potvrdila da nadalje HIF-1α izravno vezan na promotorsku regiju miR27a (Slika 5D). Rezultati su pokazali da HIF-1α može promovirati transkripciju miR27a u OCUM-2MD3 stanica izravno obvezuje promotorske regije miR27a. Pregled

6 Inhibicija HIF-1 a pomoću siRNA potiskuje ekspresiju droga otpora vezanih uz geni

Kao što je prikazano na slici 6, inhibicija HIF-1 a značajno suprimira ekspresiju MDR1 /p-gp, LRP i Bcl-2 u OCUM-2MD3 /L-OHP stanica, ali nije signifikantno promijenio izraz GST-π ili TS. (Slika 6). Pregled

7 Inhibicija miR27a smanjuje otpora vezanih gena droga u OCUM-2MD3 /L-OHP stanica pregled

miR27a ugušena otporne na lijekove GC OCUM-2MD3 /L-OHP transfektirane su s anti-miR27a sekvencije (slika 7A). Osim toga, nakon ovog transfekcije, ekspresija MDR1 /P-gp, LRP i Bcl-2 bila je značajno smanjena, dok nije uočena značajna razlika u ekspresiji GST-π ili TS (Sl 7B, 7C i 7D, qPCR i zapadne mrlja). (Slika 7) pregled

Rasprava pregled

Iako se čini da su se smanjila u posljednjih nekoliko godina u svijetu incidencija stopa GC, visoka incidencija GC i dalje postoji, teško ugrozi zdravlje ljudi u Aziji [22] , MDR GC stanica pridonosi lošom prognozom GC, u kojoj nedostatak kisika ima ključnu ulogu. U ovom istraživanju, osnovali smo stabilna OCUM-2MD3 /L-OHP staničnu liniju koja je otporan na L-OHP. Naši podaci pokazuju da GC tkiva i stanične linije pokazuju veću otpornost na lijekove od normalnih želučane epitelnih tkiva i stanične linije. Također smo otkrili da su stanice otporne na lijekove razvija puno jači MDR. Rezultati su pokazali povećanje ekpresije HIF-1 a u GC tkivima i stanicama, a najviše ekspresija HIF-1 a otkriven je u staničnoj liniji rezistentne. Stoga predlažemo da HIF-1α doprinosi razvoju MDR u GC stanicama, pregled

gen HIF-1α kodira protein koji se sastoji od 826 aminokiselina s molekulskom masom od 120 kDa [23]. Mnoga istraživanja su potvrdila da povećana ekspresija HIF-1 a snažno je povezana s pojavom i razvojem tumora [24-28]. Druga istraživanja su pokazala da prekomjerna ekspresija HIF-1 a pojačava svojstva rezistentne na lijek iz raznih tumorskih stanica [29-32]. Osim toga, naša studija pokazala je da GC tkiva i stanične linije pokazuju veću otpornost na lijekove za kemoterapiju od želučanog tkiva para-karcinoma i želučane sluznice staničnim linijama. Također smo otkrili najsnažnije droge otpornost na GC stanicama. Međutim, mehanizmi kojima HIF-1α regulira MDR još moraju biti jasno definirana u GC stanicama. Stoga smo dodatno istražili učinke HIF-1 a na MDR svojstva GC stanicama putem gena smetnji i tehnika kloniranja. RNA interferencije (RNAi) pokazao prednosti u specifičnosti, učinkovitost i trajnost za regulaciju ekspresije ciljnih gena [33]. Naši podaci pokazuju da inhibicija HIF-1 a značajno smanjuje otpornost na lijek u OCUM-2MD3 /L-OHP stanica. Štoviše, pokazali smo da otpornost na lijek je dramatično povećana kada pcDNA-HIF-1α, koja je korištena u svrhu ekspresije HIF-1 a, bio je transficiran u ne-drug-rezistentnih GC staničnih linija. Naši rezultati pokazuju da HIF-1α igra bitnu ulogu u razvoju MDR u GC. Pregled

Nedavna istraživanja su pokazala da MDR usko povezana s miRNAs u tumorima [34-36]. Hu je izvijestio da deaktivaciju Mir 27a može preokrenuti MDR svojstva GC stanicama [18]. Osim toga, to je izvijestio da je Mir-21, Mir-27a, Mir-210 i Mir-181b su up-regulirana putem HIF puta u nedostatka kisika u okolini temelji na gen-chip testu [19]. U skladu s našim rezultatima, HIF-1α je pozitivno povezana s izrazom Mir-27a u GC tkiva i staničnih linija, te inhibicija HIF-1 a smanjena MIR 27a. Za razliku od toga, prekomjerna ekspresija HIF-1 a inducira ekspresiju Mir-27a. Ovi rezultati pokazuju da HIF-1α regulira ekspresiju Mir-27a. Nadalje, naša studija pokazala je da Mir-27a oponaša spasio svojstava lijeka otpornog HIF-1 a-obaranje stanice. Ono što je najvažnije, HIF-1α izravno se veže i promiče miR27a transkripciju, što znači da HIF-1α regulira MDR GC preko Mir-27a. Pregled

karakterizira smo ekspresiju gena koji su usko povezane s MDR, uključujući MDR1 /P-gp, GST-π, LRP, Bcl-2 i TS, prije i nakon modulacije HIF-1α ekspresije u GC stanicama za razjašnjavanje mehanizam kojim HIF-1α-miR-27a put regulira MDR GC , Pokazali smo da je inhibicija HIF-1 a izrazu smanjen izražaj MDR1 /P-gp, LRP i Bcl-2. Razina ekspresije tih gena značajno povećava kada se stanice su transfektirane s miR-27a oponašaju, a razinu ekspresije GST-π i TS nisu značajno promijenjene. U skladu s ovim nalazom, prekomjerna ekspresija HIF-1 a snažno regulira prema gore ekspresiju MDR1 /P-gp, LRP i Bcl-2 u staničnoj liniji GC OCUM-2MD3. Dakle, naši podaci pokazuju da je HIF-1α-Mir-27a put posreduje MDR nekretnine u GC zbog izazivanja MDR1 /P-gp, LRP i Bcl-2 izraz. Pregled

Naša istraživanja pokazuju da HIF-1α i miR -27a se regulira prema gore u GC tkivima i stanicama. HIF-1α djeluje kao uzvodno regulator Mir-27a. HIF-1α-miR-27a signaliziranje pojačava svojstva MDR induciranjem ekspresije MDR1 /P-gp, LRP-a i Bcl-2 u GC. Ovi rezultati ukazuju na to da HIF-1α-Mir-27a put igra ključnu ulogu u pokretanju MDR u ljudskom GC, a može poslužiti kao novi terapijski cilj za MDR u GC. Pregled

popratne podatke pregled S1 datoteke. Podaci o MTT i zapadne pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0132746.s001 pregled (ZIP) pregled

• PLoS ONE: više lijekova-Resistance Srodno Long nekodirajuće analiza RNA Izražavanje Profil želučane Cancer
• PLoS ONE: Propisi B stanica Funkcija je potisnut od pušenja i pretilosti u H. pylori-om iu korelaciji je s povećanim rizikom od želučane Cancer