Абстрактный
<р> Цель этого исследования для определения корреляции между HIF-1 и экспрессии микроРНК-27а и оценить влияние ингибирование экспрессии HIF-1 на экспрессию микроРНК-27а и лекарственной устойчивости при раке желудка (GC). В настоящем исследовании, в режиме реального времени ПЦР и Вестерн-блот были выполнены, чтобы определить экспрессию HIF-1 в дс тканей и клеточных линий. Затем клетки OCUM-2MD3 /L-OHP трансфицировали HIF-1-миРНК, с микроРНК-27а имитируют или pcDNA-HIF-1, и выживаемость клеток определяли с помощью МТТ-анализе. Выражение HIF-1, MIR-27а и MDR-родственных генов измеряли с помощью в режиме реального времени ПЦР и Вестерн-блоттинга. ЧИП и двойные анализы активности люциферазы проводили для оценки регуляции транскрипции HIF-1 и микроРНК-27а. Результаты показали, что трансфекция с HIF-1-миРНК заметно снизились уровни микроРНК-27а, в результате чего резко усиленного ингибирования скорости пролиферации клеток OCUM-2MD3 /L-ОНР. По сравнению с не-трансфицированных клеток, выживаемость была значительно снижена в клетках, трансфицированных HIF-1-миРНК после лечения с помощью L-ОНР. Коэффициент выживаемости клеток была значительно увеличена в OCUM-2MD3 /L-ОНР клеток, трансфецированных с микроРНК-27а мимике, в то время как HIF-1α избыточная экспрессия не приводит к какой-либо четкой изменения выживаемости клеток. Результаты анализа двойной активности люциферазы показали, что HIF-1α повышает транскрипционную активность промотора miR27a в клетках, трансфицированных репортерной плазмидой, содержащей Входной промоторный регион miR27a вместе с pcDNA-HIF-1. Анализ ЧИП предположил, что HIF-1α непосредственно связывается с промоторной областью miR27a. Ингибирование HIF-1 или выражение miR27a уменьшилось MDR1 /P-Г.П., LRP и экспрессию Bcl-2 в OCUM-2MD3 /L-OHP клеток. Таким образом, мы обнаружили, что HIF-1α тесно связана с МЛУ в GC и что HIF-1α может подавлять MDR1 /P-Г.П., LRP и экспрессию Bcl-2 путем ингибирования экспрессии микроРНК-27а
Образец цитирования:. Чжао Q, Y Ли, Тан Bb, Вентилятор Lq, Ян Пг, Тянь Y (2015) HIF-1α Индуцирует множественная лекарственная устойчивость в клетках рака желудка индуцируя MIR-27а. PLoS ONE 10 (8): e0132746. DOI: 10.1371 /journal.pone.0132746
<р> Редактор: Джин Q. Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center &Amp; Научно-исследовательский институт, США
<р> Поступило: 5 января 2015 г.; Принято: 17 июня, 2015 года; Опубликовано: 20 августа 2015
<р> Copyright: © 2015 Чжао и др. Это статья открытого доступа распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются
<р> Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в пределах своих подтверждающей информации, файлов бумаги и
<р> Финансирование:. работа выполнена при финансовой поддержке гранта следующим:. Провинциальный фонд естественных наук провинции Хэбэй (№ H2013206311 к Цюнь Чжао)
<р> конкурирующие интересы:. авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов
Введение
<р> рак желудка (GC) является одним из наиболее распространенных злокачественных опухолей, наносит серьезный вред во всем мире [1, 2] После нескольких лет технологические достижения в области диагностики и лечения GC, заболеваемость и смертность снизились во всем мире, но остаются высокими в странах Азии [3, 4]. В настоящее время, резекция желудка является единственным доступным методом лечения GC. Тем не менее, трудно достичь полного излечения, несмотря на хирургическое удаление опухоли, так как большинство пациентов страдают от продвинутой GC после постановки диагноза [5, 6]. Таким образом, химиотерапия играет чрезвычайно важную роль в комплексном лечении GC. Хотя химиотерапия значительно продвинулась в отношении лечения поздних стадий GC, [7, 8] прогноз GC остается недостаточным, с 5-летней выживаемости менее чем на 30% [9]. Этот прогноз в первую очередь в связи с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) ГК клеток. МЛУ в GC часто приводит к отказу химиотерапии [10-12]. Таким образом, существует острая необходимость в разработке новых перспективных терапевтических стратегий для эффективного снижения МЛУ в GC.
<Р> Недостаток кислорода преобладает в солидных опухолях и связано с различными биологическими функциями. В настоящее время, индуцированного гипоксией фактор (HIF) -1α считается, тесно связано с гипоксией. HIF-1α сильно выражен в различных злокачественных опухолей [13, 14] и выступает в качестве важного фактора для регулирования адаптацию опухолевых клеток к гипоксии [15]. HIF-1α было предложено быть тесно связана с GC МЛУ [16, 17]. Тем не менее, неясно, какой путь является медиатором роль HIF-1 в GC MDR.
<Р> В последние годы роль микроРНК (миРНК) при раке стала широко исследован механизм инициирования и лечения опухолей. микроРНК-27а, член семьи микроРНК, было показано, что влияет на МЛУ ГК [18]. Кроме того, экспрессия микроРНК-27а увеличивается в гипоксической среде [19]. Эти данные позволяют предположить, что HIF-1α может регулировать экспрессию микроРНК-27а и влияют на GC МЛУ. Однако конкретные механизмы регулирования еще предстоит выяснить. Данное исследование показало, что экспрессия HIF-1 и микроРНК-27а были значительно повышающей регуляции в дс тканей и клеточных линий, особенно в клеточных линиях, устойчивых.
<Р> Трансфекция с определенной малой интерферирующих РНК блокировать эндогенную HIF -1α привело к снижению уровня экспрессии микроРНК-27а и борьбы с МЛУ в линиях GC клеток. Эти новые данные свидетельствуют о том, что ингибирование экспрессии HIF-1 подавляет транскрипцию МДР-родственных генов MDR1 /Р-Г.П., LRP, и Bcl-2 затухнуть MDR ГХ клеток путем подавления экспрессии микроРНК-27a.
1.1 материалы
<р> Желудочный клеточная линия OCUM-2MD3 был от профессора Масакадзу Ясиро в Японии Оита медицинской хирургии [20]. Стабильная лекарственной устойчивостью клеточная линия OCUM-2MD3 /L-OHP2 был получен с помощью культивирования и отбора нашей исследовательской группой. Клеточная линия GSE-1 был приобретен у Cell ресурсный центр в Шанхае институтом биологических наук Китайской академии наук. RPMI 1640 культуральной среды и трипсина были приобретены у Gibco Общества; Trizol реагент и реагент для трансфекции Липофектамин 2000 были приобретены у Invitrogen. На обратной транскрипции комплект и флуоресцентной количественный ПЦР реагенты получали из Promega Corporation. ПЦР-праймеры и малые интерферирующие РНК были синтезированы Шанхай биологической инженерии компании. Комплект экстракции белка был получен из Beyotime Company, Китай. Первичные антитела против HIF-1, MDR1 /P-Г.П., GST-я, LRP, Bcl-2, TS или GAPDH были приобретены у Санта-Крус. МТТ был получен от фирмы Sigma. Наше исследование было одобрено этическим комитетом четвертой филиал больницы Хэбэй медицинского университета.
GC клетки высевают в 6-луночные планшеты за 24 ч до трансфекции в плотность 4 × 10 5 клеток /мл. Плазмидные векторы, миРНК или miR27a имитируют трансфицировали в ГХ клеток или устойчивых к лекарственным препаратам клеток с использованием Липофектамина реагента для трансфекции в соответствии с инструкциями изготовителя. Затем клетки промывали бессывороточной средой RPMI 1640 не хватает антибиотиков. Эффективность трансфекции измеряли через 24 ч, а затем в последующих экспериментах. ткани GC и нормальная пара-карцинома ткани гомогенизируют подготовить суспензии отдельных клеток путем фильтрации через 300 -mesh медной сетки. ГХ клетки перевариваются с использованием 0,02% ЭДТА-0,25% трипсина, высевали при плотности 5 × 10 4 клеток /мл в 96-луночные планшеты. После того, как клетки достигали около 60% сплошности, HIF-1α-миРНК трансфицировали или наносили химиотерапевтическое лекарственное средство (150 мкг /мл L-ОНР). Каждая группа состояла из шести скважин. Затем, 20 мкл 5 мг /мл МТТ добавляли в течение 4 ч до окончания эксперимента. Клетки культивировали в течение 4 ч, а затем культуральную среду отбрасывали. Затем 150 мкл ДМСО добавляли в каждую лунку, и значения ОП были измерены при длине волны 490 нм с использованием микропланшет-ридера после встряхивания пластины в течение 15 мин при комнатной температуре. Эксперименты повторяли три раза. 1.6 Вестерн-блот 1 HIF-1α и miR27a дифференцированно выражены между желудочной ткани пара-карциномы и GC ткани экспрессия HIF-1 в GC ткани по сравнению с желудочным пара-карцинома ткани определяли с помощью QRT-PCR и Вестерн-блоттинга, а чувствительность L-ОНР клеток определяли с помощью МТТ-анализе. HIF-1α (рис 1А, 1В и 1С, КПЦР и Вестерн-блот) и miR27a (рис 1D, результаты КПЦР) были повышающей регуляции в GC ткани по сравнению с желудочной пара-карцинома ткани. Анализ МТТ показали, что выживаемость клеток была больше в GC ткани, чем в желудочном пара-карцинома ткани, когда L-ОНР, добавляли к суспензии отдельных клеток ткани (рис 1E, результаты гистограмма). 3 HIF-1α-миРНК подавляет экспрессию miR27a и лекарственной устойчивости OCUM-2MD3 клеток /L-OHP 4 эффекты miR27a на MDR из OCUM-2MD3 клеток /L-OHP 5 HIF-1α индуцирует транскрипцию miR27a в клетках OCUM-2MD3 Обсуждение
1.4 МТТ
1.5 Выделение РНК и количественный RT-PCR
<р> Суммарную РНК экстрагировали с использованием тризола методом одностадийного и 2 мкг РНК использовали для обратной транскрипции кДНК для генерирования шаблона. Относительные уровни мРНК определяли с помощью количественной ПЦР, GAPDH, служил в качестве внутреннего контрольного гена. Параметры ПЦР были следующие: 95 ° С в течение 5 мин с последующим 45 циклов денатурации при 94 ° С в течение 30 с и отжига при 60 ° C в течение 30 сек. Последовательности праймеров были разработаны с использованием праймера 5.0 и были искали специфичности. Последовательности праймеров следующие: HIF-1α (93 п.н.): (F), 5'-GACAGCCTCACCAAACAGAG-3 'и (R), 5'-CTCAAAGCGACAGATAACACG-3'; MDR1 (126 пар оснований): (F), 5'-GAATGTTCAGTGGCTCCGAG-3 'и (R), 5'-ACAATCTCTTCCTGTGACACC-3'; GST-π (151 пар оснований): (F), 5'-ATACCATCCTGCGTCACCTG-3 'и (R), 5'-TCCTTGCCCGCCTCATAGTT-3'; Bcl-2 (98 п.н.): (F), 5'-TGTGTGGAGAGCGTCAACC-3 'и (R), 5'-TGGATCCAGGTGTGCAGGT-3'; LRP (129 пар оснований): (F), 5'-TTTCTGACGGCAACTTCAAC-3 'и (R), 5'-AGTCCAATGTCCAGCCCAT -3'; TS (129 п.н.): (F) 5'-TTTCTGACGGCAACTTCAAC-3 'и (R) 5'-AGTCCAATGTCCAGCCCAT -3'; и GAPDH (138bp): (F), 5'-GACCCCTTCATTGACCTCAAC-3 'и (R), 5'-CGCTCCTGGAAGATGGTGAT-3'. Количественные результаты ПЦР были рассчитаны с использованием -ΔΔCt метод 2-
<р> тканевых и клеточных образцов подвергали лизису с использованием буфера для лизиса РИПА:. 1% Тритон Х-100, 150 мМ NaCl, 10 мМ Трис-HCl, рН 7,4, 1 мМ ЭДТА, 1 мМ EGTA, pH 8,0, 0,2 мМ Na3VO4, 0,2 мМ фенилметилсульфонилфторида, и 0,5% NP-40. Равные количества образцов белка были разделены на 10% полиакриламидном геле SDS (SDS-PAGE) и были electrotransferred к поливинилиденфторид (PVDF) мембрану (Amersham Pharmacia Biotech). Мембраны блокировали 5% БСА в течение 2 ч и инкубировали с первичным антителом в течение ночи при температуре 4 ° С. Мембраны инкубировали в течение 2 ч в конъюгированного с пероксидазой хрена вторичного антитела. Целевые полосы были обнаружены с использованием набора для обнаружения усиливается хемилюминесценции (ECL) (Santa Cruz, США). β-актина, использовали в качестве гена эндогенного контроля. Эксперимент повторяли три раза.
1.7 иммунопреципитации хроматина (ЧИП) анализ
<р> ChIP анализы проводили в соответствии с методикой из Wang и др. [21]. Клетки с различной обработкой фиксировали 1% формальдегидом в течение 15 мин при комнатной температуре, и заканчивается в конечной концентрации 0,125 М глицина. Затем клетки подвергали лизису с использованием 300 мкл буфера для лизиса (50 мМ Трис-HCl, рН 8,0, 150 мМ NaCl, 5 мМ ЭДТА, 1% Nonidet ингибиторы Р-40, 0,5% дезоксихолата, и протеазы). Клеточные лизаты обрабатывали ультразвуком в водяной бане со льдом, чтобы получить фрагменты хроматина около 600 пар оснований, как определено с помощью электрофореза в агарозном геле. После центрифугирования при 13000 оборотах в минуту в течение 10 мин, были взяты надосадочную жидкость и предварительно очищен в течение 15 мин при 4 ° С с помощью инкубации с 30 мкл белка А-сефарозы и фрагментированной ДНК спермы лосося. После центрифугирования при 13000 оборотах в минуту в течение 5 мин, надосадочную жидкость разделены на три равные части: один для ввода, два других для иммунопреципитации с использованием или без HIF-1α антителом. На следующий день, иммунные комплексы были осаждены с протеин А-сефарозы и фрагментированной ДНК спермы лосося, затем гранулы были собраны после того, как дважды промывали буфером для промывки I (20 мМ Трис-HCl, рН 8,1, 150 мМ NaCl, 0,1% SDS, 1% Тритон Х-100, и 2 мМ ЭДТА), а затем промывочного буфера II (20 мМ Трис-HCl, рН 8,1, 500 мМ NaCl, 0,1% SDS, 1% Тритон Х-100, и 2 мМ ЭДТА) , и промывочный буфер III (10 мМ Трис-HCl, рН 8,1, 0,25 М LiCl, 1% Нонидет Р-40, 1% дезоксихолата, и 1 мМ ЭДТА), а конечную промывку буфер IV (10 мМ Трис-HCl, рН 8,1, и 1 мМ ЭДТА). Иммунопреципитаты элюировали 200 мкл буфера для элюции (1% SDS и 0,1 М раствором NaHCO <суб> 3), с последующей инкубацией при 65 ° С в течение ночи. На следующий день, ДНК каждого образца выделяли и проводили ПЦР для амплификации сегментов промотора, содержащие сайт связывания HIF-1α.
1.8 люцифераза анализы
<р> Клетки выращивали до 70% слияния и затем трансфицировали в трех экземплярах с pGL3-MIR-27a-Luc, pcDNA-HIF-1 или pGL3-Basic, наряду с ПРЛ-ТЗ. После 48 ч трансфекции клетки собирали, и активность люциферазы измеряли с использованием Dual-люциферазы систему анализа (Promega, Madison, WI) в соответствии с протоколом производителя. Люциферазы деятельность PRL-ТЗ служила в качестве внутреннего контроля.
1.9 Статистический анализ
<р> Результаты представлены как среднее значение ± S.D. ANOVA и Даннета тест проводили с использованием программы SPSS 11.5 программного обеспечения.
Результаты
2 ОПО -1α и miR27a дифференцированно выражены между линией эпителиальных клеток слизистой оболочки желудка и линии
GC клеток <р> выражение HIF-1 был самым высоким в OCUM-2MD3 /L-ОНР и клеток OCUM-2MD3, последовательно, и был самым низким в GES-1 клеток (рис 2А, 2В и 2С, КПЦР и Вестерн-блот). Кроме того, выражение miR27a продемонстрировал ту же тенденцию, в которой OCUM-2MD3 /L-ОНР клетки имеют самую высокую экспрессию, а затем клетки OCUM-2MD3, и клетки GSE-1, наименьшие экспрессию микроРНК-27а (рис 2D, результаты КПЦР). Анализ МТТ показали, что, когда L-ОНР был добавлен в трех клеточных линий, OCUM-2MD3 /L-ОНР клетки демонстрировали самый высокий уровень выживаемости клеток, а затем клетки OCUM-2MD3, и что клетки GSE-1 показала самую низкую выживаемость клеток скорость (рис 2E, результаты гистограммы).
<р> Вестерн-блот-анализ показал, что уровни мРНК и белковые HIF-1 уменьшилось в разной степени в OCUM-2MD3 /L-ОНР клеток, трансфецированных с тремя парами HIF-1-миРНК, тогда как HIF-1α выражение не изменялась в клетках, трансфицированных контрольной-миРНК. HIF-1α появилось выражение снижение наиболее резко, примерно на 90%, используя HIF-1-миРНК-2 (рис 3А). Как показано на фиг.3В, HIF-1α экспрессия уменьшается в этих клетках в зависимости от дозы, в которых HIF-1α выражение уменьшилось более чем на 95% в клетках, трансфицированных 80 нМ HIF-1α-миРНК-2, когда HIF- 1α-миРНК-2 трансфектировалась далее в дозе 20 нМ, 40 нМ или 80 нМ. Кроме того, максимальный ингибирующий эффект был обнаружен через 48 ч после трансфекции (фиг.3С).
<Р> выражение miR27a значительно уменьшилось после трансфекции из OCUM-2 MD3 /L-ОНР клеток с HIF-1α-миРНК-2 (рис 3D). Анализ МТТ показали, что выживаемость клеток была значительно снижена после лечения HIF-1α-миРНК-2-трансфецировали OCUM-2 MD3 /л-ОНР клеток с L-ОНР по сравнению с не-трансфицированных клеток (рис 3e).
<р> выражение miR27a было повышающей регуляции в клетках OCUM-2MD3 /L-OHP, когда miR27a имитируют был со- трансфицируют в этих устойчивых к лекарственным средствам GC клетки, которые были трансфицированных с HIF-1-миРНК (фиг.4А). Тем не менее, никаких существенных различий в экспрессии HIF-1 был обнаружен в OCUM-2MD3 /L-ОНР клеток после трансфекции (фиг 4В и 4С, кПЦР и Вестерн-блоттинга).
<Р> Анализ МТТ показали, что выживаемость скорость клеток OCUM-2MD3 /L-OHP был явно увеличен после трансфекции с miR27a имитатор (рис 4D, результаты гистограммы).
<р> выражение HIF-1 была значительно увеличена в клетках OCUM-2MD3 трансфицированных с эукариотической плазмиды экспрессии pcDNA-HIF-1 в течение 48 ч (рис 5А). Кроме того, выражение miR27a явно повышающей регуляции (рис 5B). Таким образом, эти результаты свидетельствуют о том, что HIF-1α является критическим фактором, который влияет на транскрипцию miR27a. Таким образом, мы установили, репортерным геном люциферазы плазмиды, несущей последовательность 2 т.п.н. выше промотора области miR27a, который был котрансфицируют pcDNA-HIF-1 в клетки. Данные DLA показали, что HIF-1α усиливает промоторную активность miR27a следующих котрансфекцией (фиг.5С). Анализ ЧИП также подтвердил, что HIF-1α непосредственно связан с промоторной областью miR27a (рис 5D). Результаты показали, что HIF-1α может способствовать транскрипцию miR27a в клетках OCUM-2MD3 путем прямого связывания с промоторной областью miR27a.
6 ингибирование HIF-1 с использованием миРНК подавляет экспрессию лекарственной резистентности, связанной с гены
<р> Как показано на рисунке 6, ингибирование HIF-1 резко подавляется экспрессия MDR1 /P-Г.П., LRP и Bcl-2 в клетках OCUM-2MD3 /L-OHP, но существенно не изменяет экспрессия GST-π или TS. (Рис 6).
7 Подавление miR27a уменьшает сопротивления связанных экспрессии генов наркотиков в OCUM-2MD3 клеток /L-OHP
<р> miR27a был репрессирован в лекарственной устойчивостью GC OCUM-2MD3 /клетки L-ОНР, трансфицированных последовательностью анти-miR27a (Фиг.7А). Кроме того, после этого трансфекцией экспрессия MDR1 /P-Г.П., LRP и Bcl-2 значительно снизилась, тогда как никакой существенной разницы не было обнаружено в экспрессии GST-π или TS (рис 7В, 7С и 7D, кПЦР и Западной блот). (Рис 7)
<р> Несмотря на то, во всем мире уровень заболеваемости ГК, похоже, снизилось в последние годы, высокий уровень заболеваемости ГК сохраняется, серьезную угрозу здоровью людей в Азии [22] , MDR ГХ клеток способствует неблагоприятным прогнозом ГК, в котором дефицит кислорода играет решающую роль. В настоящем исследовании мы установили стабильную клеточную линию OCUM-2MD3 /L-OHP, который устойчив к L-ОНР. Наши данные указывают на то, что GC тканей и клеточных линий проявляют сильную устойчивость к лекарству, чем нормальные желудочных эпителиальных тканей и клеточных линий. Мы также обнаружили, что лекарственно-устойчивые клетки развиваются гораздо сильнее MDR. Наши результаты показали повышенную экспрессию HIF-1 в GC тканей и клеточных линий, и самое высокое выражение HIF-1 был обнаружен в клеточной линии лекарственной устойчивостью. Таким образом, мы предполагаем, что HIF-1α способствует развитию МЛУ в GC клетки.
<Р> HIF-1α ген кодирует белок, который состоит из 826 аминокислот с молекулярной массой 120 кДа [23]. Многие исследования подтвердили, что повышенная экспрессия HIF-1 тесно связан с возникновением и развитием опухолей [24-28]. Другие исследования показали, что избыточная экспрессия HIF-1 усиливает лекарственной устойчивостью свойств различных опухолевых клеток [29-32]. Кроме того, наше исследование показало, что GC ткани и клеточные линии демонстрируют более сильную устойчивость к химиотерапевтическим препаратам, чем желудочных тканей пара-карциномы и желудочных линий клеток слизистой оболочки. Мы также обнаружили самое мощное лекарственную устойчивость в GC клетки. Однако механизмы, с помощью которых HIF-1α регламентирует MDR еще быть четко определены в GC клетки. Таким образом, мы дополнительно исследовали влияние HIF-1 на свойства MDR ГК клеток посредством генной интерференции и методов клонирования. РНК-интерференция (RNAi) продемонстрировал преимущества в специфичности, эффективности и долговечности для регуляции экспрессии гена-мишени [33]. Наши данные свидетельствуют о том, что ингибирование HIF-1 значительно снижается устойчивость к лекарству в клетках OCUM-2MD3 /L-ОНР. Более того, мы показали, что резистентность к лекарственным средствам резко возрастает, когда pcDNA-HIF-1α, который был использован для гиперэкспрессией HIF-1, трансфицировали в немедикаментозных устойчивых GC клеточных линий. Наши результаты показали, что HIF-1α играет существенную роль в развитии МЛУ в GC.
<Р> Недавние исследования показали, что MDR тесно связана с микроРНК в опухолях [34-36]. Ху сообщил, что инактивирующего MIR-27a может изменить свойства MDR ГК клеток [18]. Кроме того, сообщалось, что микроРНК-21, микроРНК-27а, микроРНК-210 и микроРНК-181b были повышающей регуляции через HIF пути в гипоксической среде, основанной на анализе гена-чип [19]. В соответствии с нашими результатами, HIF-1α была положительно связана с экспрессией микроРНК-27а в GC тканях и клеточных линиях, а также ингибирование HIF-1 снизился MIR-27а. В противоположность этому, избыточная экспрессия HIF-1 индуцирует экспрессию микроРНК-27а. Эти результаты показали, что HIF-1α регулирует экспрессию микроРНК-27а. Кроме того, наше исследование показало, что микроРНК-27а подражает спас свойства лекарственной резистентности HIF-1-нокдаун клеток. Самое главное, что HIF-1α непосредственно связывается и способствует miR27a транскрипцию, указывая, что HIF-1α регулирует MDR ГХ с помощью микроРНК-27а.
<Р> Мы охарактеризовали экспрессию генов, которые тесно связаны с МЛУ, в том числе MDR1 /P-зм, GST-π, LRP, Bcl-2 и TS, до и после модуляции HIF-1α экспрессии в GC клетки, чтобы выяснить механизм, с помощью которого HIF-1α-микроРНК-27а путь регулирует МЛУ ГК , Мы показали, что ингибирование экспрессии HIF-1 снижала экспрессию MDR1 /P-Г.П., LRP и Bcl-2. Уровни экспрессии этих генов были значительно увеличены, когда клетки трансфицировали микроРНК-27а мнемосхема, в то время как уровни экспрессии GST-π и TS не были значительно изменены. В соответствии с этим выводом, избыточная экспрессия HIF-1 сильнодействующий повышающей регуляции экспрессии MDR1 /P-Г.П., LRP и Bcl-2 в клеточной линии ГХ OCUM-2MD3. Таким образом, наши данные показывают, что HIF-1α-микроРНК-27а путь опосредует свойства MDR в GC путем индукции MDR1 /P-Г.П., LRP и экспрессии Bcl-2.
<Р> Наши исследования показывают, что HIF-1α и микроРНК -27a являются повышающей регуляции в GC тканях и клеточных линиях. HIF-1α выступает в качестве вышестоящего регулятора MIR-27а. сигнализации HIF-1α-микроРНК-27a усиливает свойства MDR путем индукции экспрессии MDR1 /P-Г.П., LRP и Bcl-2 в GC. Эти результаты свидетельствуют о том, что HIF-1α-микроРНК-27а путь играет решающую роль в инициации МЛУ в человеческом GC, который может служить в качестве новой терапевтической мишени для МЛУ в GC.
Поддержка Информация
S1 файла. Данные МТТ и Западной
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0132746.s001
(ZIP)
Самые полезные кишечные бактерии с растительной или средиземноморской диетой
Растительная пища может передавать человеку устойчивые к антибиотикам супербактерии
Заболевание раздраженного кишечника увеличивает риск деменции
Как укрепить свою иммунную систему для борьбы с коронавирусом
Сильный микробиом в раннем возрасте связан с меньшим количеством респираторных инфекций
Клещи теперь переносят множество болезней,
Бактериальные изменения кишечника влияют на результаты лечения волчанки во время беременности
Течение беременности, как настоящая любовь, не всегда проходит гладко, когда у вас волчанка, правильно называется системной красной волчанкой (СКВ). Это аутоиммунное заболевание иногда бывает сильным,
Водородное дыхание исходит не с атолла Бикини
В эти дни со всеми глупыми разговорами о ядерной войне, когда вы видите слово «водород», вы можете сразу подумать об этом бедном маленьком острове в Тихом океане, Атолл Бикини, где они испытали все эт
Дырявый кишечник и микробный дисбактериоз могут способствовать цитокиновому шторму в тяжелых случаях COVID-19
По мере того, как мир приближается к мрачной вехе в три миллиона смертей от болезни COVID-19, новый препринт исследовательской работы размещен в bioRxiv * сервер показывает, что присутствие кишечных