Финансирование:. Это исследование при поддержке грантов от Национального фонда естественных наук Китая (номера 30872476, 81072012, 81172324, 91229106, 30900670 и 81272749), науке и технике комиссии муниципалитета Шанхая (номера 10jc1411100, 09DZ1950100, 09DZ2260200, 11jc1407602 и 101409042000), Шанхайский ключевой дисциплиной ( S30204), и ключевые проекты в отечественной науке и Amp; Технология Столб Программа Китая (номера 2008BA152B03 и 2011BA203191), Китай Постдокторское Science Foundation (номер 2011M500796). Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что никакие конкурирующие интересы не существуют
Введение
рак желудка является злокачественная опухоль с высоким уровнем заболеваемости и второй ведущей причиной смерти от рака во всем мире [1]. Ранней диагностики частота развития рака желудка низок, и пациенты, как правило, трудно быть диагностировано, пока рак не развился в продвинутой стадии или метастазов. Таким образом, имеет большое значение для проведения углубленного исследования по вопросу о патогенезе рака желудка и искать новых молекулярных органов и терапевтических целей.
<Р> MicroRNAs являются малые РНК, которые регулируют экспрессию генов, и они участвуют в различных биологических сигнальных путей [2]. Несколько исследований показали существенное различие экспрессии микроРНК профилирующей между опухолевыми клетками и клетками, происходящими из нормальных тканей, что свидетельствует о том, что микроРНК играют важную роль в онкогенеза [3], [4]. Таким образом, MicroRNAs в последнее время стало горячей точкой генетической диагностики и лечения цели в качестве новых онкогенов или генов-супрессоров [5], [6]. Аномальная экспрессия микроРНК в тканях или сыворотке тесно связано с несколькими злокачественных опухолей человека, включая рак желудка [7], [8], и несколько вниз регулируемых микроРНК в тканях желудка рака опухоли подавления функции. Например, микроРНК семейство Пусть-7 впервые был обнаружен как репрессор РАН, подавляя РАН и с-Мус выражение на трансляционной уровне [9]. Уровень экспрессии LET-7а значительно снижается при опухолях желудка, в то время как Ras белка значительно выше в желудочном опухоли [10]. Кроме того, микроРНК-15b, микроРНК-16 и микроРНК-21 и т.д. были связаны с разработкой и клиническим диагнозом рака желудка [11], [12]. Наша группа также сообщила о противораковой роль микроРНК-126, микроРНК-409-3p и микроРНК-155 при раке желудка [13] - [15]
<р> микроРНК микрочипов проводили для определения профилей микроРНК в желудочном. рак, и мы обнаружили, что микроРНК-338-3p была значительно понижающей регуляции (неопубликованные данные). микроРНК-338-3p, расположенный на хромосоме 17q25.3 длиной 22 нт, впервые было сообщено в прион-индуцированной нейродегенерации как выражение MIR-338-3p снижается в мозге мышей, инфицированных мышей адаптированный соскоба [ ,,,0],16]. микроРНК-338-3p может регулировать уровень мРНК этого гена хозяина Апоптоз-ассоциированной тирозин-киназы (AATK) в нейронах крыс [17]. С другой стороны, микроРНК-338-3p была повышающей регуляции у пациентов со спорадическим боковой амиотрофический склероз (SAL), другой вид системы поражений нервной [18]. Важно отметить, что роль микроРНК-338-3p в онкогенеза было ранее предложено как микроРНК-338-3p падает с при раке прямой кишки [19], и регулируется вирусом гепатита X белка (HBX) ингибировать пролиферацию и инвазию из клеток гепатомы путем связывания с генов-мишеней CyclinD1 и сглаживается в гепатоцеллюлярной карциномы [20] - [22]. Тем не менее, роль микроРНК-338-3p в GC до сих пор неизвестно.
<Р> В настоящем исследовании мы дополнительно анализировали экспрессию понижающей регуляции MIR-338-3p в GC тканях по сравнению с пациентами соответствует нормальным ткани, и определили, что уровень экспрессии микроРНК-338-3p тесно коррелировало с клиникопатологическими переменными GC. Эктопической экспрессии микроРНК-338-3p ингибирует пролиферацию, инвазию и метастазирование клеток рака желудка, снижает онкогенного способность клеток рака желудка у голых мышей, а также способствует апоптозу. Мы также показали, что микроРНК-338-3p может функционировать как подавитель опухоли путем прямого ориентации SSX2IP. Таким образом, наши результаты свидетельствуют о том, что микроРНК-338-3p является потенциальным диагностическим маркером и терапевтической мишенью рака желудка.
1. Клеточные линии и культуры
<р> Линии человеческих клеток желудка, SGC-7901, NCI-N87, КУП-823 и АГС были приобретены из Шанхая институтом биологических наук, Китайской академии наук [23] - [26]. КАТО-III и СНУ-1 были приобретены у АТСС (American Type Culture Collection) [24], [27], MKN28 и MKN45 были получены от японского Cancer Research Resources Bank [28], в увековечена эпители желудка клеточной линии, GES -1, был подарок от профессора Фэн Bi (Хуаси больницы, Сычуань университет, Чэнду, провинции Сычуань, PR Китай) [29], [30]. HEK293T, эмбриональные клетки почки линии человеческого, была сохранена в нашем институте. Желудочные раковых клеточных линий культивировали в RPMI 1640, дополненной 10% FBS (эмбриональной бычьей сыворотки) при 37 ° C в увлажненной атмосфере, содержащей 5% СО2. HEK293T клетки культивировали в среде DMEM (модифицированная среда Игла Дульбекко) с добавлением того же культивируемых условием выше.
6.. Переходный Трансфекция микроРНК мимики
<р> микроРНК-338-3p подражает и отрицательные подражает контроля были приобретены у GenePharma (Шанхай, Китай) .Cells были посеяны в клеточной культуре пластин 20 ч до трансфекции, чтобы обеспечить 70% слияния клеток в то момент трансфекции. Трансфекция микроРНК имитаторов в клетки проводили с использованием Lipofectamine2000 (Invitrogen) в соответствии с методикой производителя. Мимика микроРНК работал в конечной концентрации 100 нМ. В 48 ч после трансфекции, КПЦР и Вестерн-блот были выполнены.
GC клетки, трансфицированные микроРНК мимике ресуспендировали с 0,3% мягком агаре в RPMI1640, содержащей 10% FBS и наслаивали на 0,6% агар затвердевает в RPMI1640, содержащей 10% FBS в 6-луночные планшеты (1 × 10 3 клеток /лунку). Чашки инкубировали при 37 ° С в увлажненной атмосфере, содержащей 5% CO <суб> 2. Колонии, содержащие по крайней мере, 50 клеток подсчитывали. SGC-7901-клеток (2 × 10 6 клеток /мышь), стабильно трансфицированные pSilencer-MIR-338-3p или вектор pSilencer контроля подкожно вводили в 4-недельных самцов голых мышей (Институт зоологии академии наук Китая, Шанхай, Китай) .The мышей проверяются еженедельно, опухолевые узелки были измерены с суппортом. Мыши были умерщвлены через 4 недели после инъекции, а опухоли были удалены и взвешены. Объем опухоли оценивали по следующей формуле:. Объем = (ширина + длина) /2 × ширина × длина × вычисленный были 0.5236.Tumor кривые роста 14. Иммуногистохимия Результаты 1. , Выражение MIR-338-3p подавляется в GC клеточных линий и тканей Как часто микроРНК регулируют экспрессию генов-мишеней, мы искали предполагаемые цели MIR-338-3p, используя онлайн-инструменты для поиска (например, TargetScan, Microrna.org и PicTar). Гены, предсказанные всех используемых программ рассматривались кандидаты целей MIR-338-3p. Среди всех хитов, SSX2IP вызвало наше внимание, предыдущие исследования показали, что SSX2IP является острый миелоидный лейкоз-ассоциированный антиген и потенциальной мишенью иммунотерапии для лейкемии [33] - [35], и наша предыдущая работа показала, что SSX2IP способствует инвазии и миграции гепатоцеллюлярной карциномы клеток и способствует устойчивости к химиотерапии [36]. 9... Эктопическая экспрессия SSX2IP Спасает фенотипов, Вызванные Чрезмерная производящих MIR-338-3p в GC клетки Таким образом, данное исследование впервые описал MIR-338-3p как подавитель опухоли, которая часто замалчивается через эпигенетические гиперметилированием на промотор область рака желудка. Функционально, микроРНК-338-3p ингибирует метастатических особенности GC клеток, таких как пролиферация, миграция и вторжения в пробирке
9. Миграция клеток и вторжения Анализ
<р> Миграция клеток проводили с использованием QCM TM24-Well колометрической анализа миграции Kit (Millipore) в соответствии с инструкциями изготовителя. Для анализа вторжения, Cell Invasion Пробирной Kit (Millipore) использовали в соответствии с инструкциями производителя. Клетки (1 × 10 5) в 300 мкл бессывороточной среды добавляли к горниц и культивировали в течение 48 часов. Немигрирующим или лиц, не вторгаясь клетки были удалены с хлопчатобумажных тампонов, клетки, которые мигрировали или вторгшихся в нижней части мембраны окрашивали с буфером клеток пятен можно найти в комплекте для анализа и подсчитывают под микроскопом и сфотографированы. Три независимые эксперименты проводились на одних и тех же условиях.
10. Апоптоз анализ
<р> Анализ клеточного апоптоза с предварительно аннексина V-FITC Апоптоз Detection Kit I (BD) в соответствии с инструкциями изготовителя. Каждый анализ проводили в трех повторах и повторяли три раза независимо друг от друга. Особенностью ядерной усадкой, связанного с апоптозом было показано с помощью Hoechst 33342 (Beyotime) в соответствии с морфологией protocol.The визуализировали с помощью флуоресцентного микроскопа, который при возбуждении на длине волны 350 нм и измеренной при длине волны 460 нм.
11. Конструирование плазмид и люциферазы Анализ активности
<р> Фрагмент дикого типа (по массе) были синтезированы 3'UTR из SSX2IP или участков мутант (MUT) 3'UTR из SSX2IP, содержащей предполагаемую MIR-338-3p сайты связывания , Фрагменты были клонированы в вектор pMIR-Report люциферазы (Ambion), содержащий Firefly
и назвали pMIR /SSX2IP-3'UTR и pMIR мас /SSX2IP-3'UTR mut.Cells были семя в 24-луночные планшеты за 24 ч до трансфекции. 500 нг pMIR /SSX2IP-3'UTR вес /или SSX2IP-3'UTR Мут pMIR трансфицировали в каждую лунку вместе с 20 нг ПРЛ-TK вектора (Promega), содержащий Renilla
люциферазы и 60 пмоль микроРНК-338-3p или управления мимике. Клетки собирали после 48 ч трансфекции. Firefly
и Renilla
люциферазные деятельности были измерены с помощью Dual-люциферазы репортер (Promega) в соответствии с инструкциями изготовителя.
12. Стабильная трансфекция микроРНК-338-3p Expression Vector
<р> pSilencer-Mir-338-3p вектор и pSilencer-Mir-векторного управления трансфицировали в SGC-7901 клеток соответственно с использованием Lipofectamine2000 (Invitrogen), и выбирается с помощью 100 мкг /мл гигромицина B (Invitrogen) в течение 4-х недель. Стабильно трансфицированные клоны клеток отбирали и поддерживали в половине концентрации селекции.
13. Опухолевой модели ксенотрансплантата
<р> Обнаружение SSX2IP проводили на парафиновых срезах с анти-антителом SSX2IP (Abcam, разведение 1:1000). Иммунный комплекс визуализировали с Dako РЕАЛЬНОГО Система TMEnVision ™ Detection, пероксидазы /DAB, Кролик /мышь (Dako), в соответствии с методикой производителя. Ядра были контрастно гематоксилином.
15. Статистический анализ
<р> Связь между уровнем микроРНК-338-3p экспрессии и клиникопатологическими параметров анализировали с помощью Человека X
2 теста. Различия между группами были проанализированы с использованием Student т
теста. Все статистические анализы проводились с использованием программного обеспечения SPSS 13.0 (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс, США), и P
&л; 0,05 считали значимым
<р> Чтобы исследовать роль микроРНК-338-3p в GC, мы сначала сравнили уровень экспрессии микроРНК-338-3p в восемь клеток желудка линии с иммортализованной нормальной слизистой оболочки желудка линии эпителиальных клеток (GES-1). Как показано на рис. 1А, микроРНК-338-3p значительно вниз регулируется в линиях GC клеток по сравнению с ГЭС-1. Для подтверждения этого результата, мы также сравнили выражения MIR-338-3p в дс тканях и прилегающих к ним тканей неопухолевыми. 66 GC парные образцы были включены в данное исследование. Результаты показывают, что средний уровень экспрессии микроРНК-338-3p была значительно подавляется в опухолевых тканях по сравнению с соседними неопухолевых тканей (рис. 1, б). Кроме того, мы выяснены корреляцию между экспрессией микроРНК-338-3p и клиникопатологическими факторов. Как показано в таблице 1. 59,1% (39/66) образцов ГХ показал понижающую регуляцию MIR-338-3p ниже двухкратного отсечкой (относительное соотношение экспрессии &лт; 0,5), эта ситуация считалась значительно вниз -regulated. На основании этого отсечкой, 66 клинических случаев были разделены на две группы: микроРНК-338-3p ниже выражение группы (п = 39) и выше выражение-338-3p микроРНК (п = 27). Чем ниже выражение группа показала склонность к большему размеру опухоли, более метастазов в лимфатических узлах, более глубокого локального вторжения и более продвинутой стадии TNM, но никакой значимой корреляции с возрастом, полом или гистологического типа (таблица 1).
2. микроРНК-338-3p эпигенетически глушителем в рак желудка
<р> Как эпигенетические глушителей является распространенным средством для понижающей регуляции экспрессии микроРНК [31], [32], мы решили проанализировать распределение острова CpG в промоторной область MIR-338-3p программным обеспечением Метил Primer Express, версии 1.0. Результаты показали, что CpG островки существуют в секции (-690 до -241) вверх по течению от сайта инициации транскрипции (TSS). Мы исследовали статус метилирования CpG островков в промоторной области путем метилирования специфической ПЦР (ССП), охватывающий область -366 до -576 (рис. 2А). Используя ПМП, мы обнаружили, что микроРНК-338-3p остров CpG широко метилируется в линиях клеток GC по сравнению с в слизистой желудка эпителиальной клеточной линии (GES-1). Как и ожидалось, лечение с помощью 5-аза индуцированный значительную деметилирования (рис. 2в). Представительные результаты анализа MSP MIR-338-3p в ГЦ опухолевых тканях и совпадающим прилегающих тканей неопухолевыми были показаны на рис. 2C. Скорости метилирования микроРНК-338-3p островков CpG в опухолевых тканях и прилегающих к ним тканей неопухолевыми от пациентов 66 ГК были 78,79% и 24,24%, соответственно (** P
&л;. 0.01, рис 2D) , Когда были рассчитаны характеристики кривой приемника Рабочая и площадь под кривой (AUC) для денатурированного состояния MIR-338-3p в GC, АУК был 0,773 ± 0,042, что значительно выше, чем у нулевой гипотезы ( P &л;
0,001), а 95% доверительный интервал был 0,690 до 0,856 (рис. 2д). Таким образом, статус метилирования микроРНК-338-3p острова CpG может служить в качестве потенциального молекулярного маркера для GC.
3. микроРНК-338-3p Угнетает клетки рака желудка пролиферации
<р> Так как микроРНК-338-3p значительно вниз регулируется в GC, как показано выше, она может функционировать как супрессор опухоли. Таким образом, мы в следующий раз определить, является ли избыточная экспрессия микроРНК-338-3p в раковых клетках желудка может повлиять на рост клеток. Синтетические микроРНК-338-3p подражает или отрицательные подражает управления трансфицировали в SGC-7901 клеток, в которых уровень экспрессии микроРНК-338-3p является самым низким, с последующим WST анализа для контроля роста клеток.
<Р> эктопическая экспрессия микроРНК-338-3p в SGC-7901 клеток было подтверждено КПЦР и SGC-7901 клеток, трансфицированных микроРНК-338-3p мимике вырос значительно медленнее, чем в контрольной группе (рис. 3А) (* P <бр> &л; 0,05, ** P &л;
0,01). Для дальнейшего характеризуют влияние MIR-338-3p на рост клеток, мягких Агер Анализ образования колонии проводили. Мы обнаружили, что число колоний из СГК-7901 клеток, трансфицированных микроРНК-338-3p мимике было значительно меньше, чем у контрольной группы (рис 3В-C.) (** P
≪ 0,01) , Последовательно, ингибирование микроРНК-338 индуцирует пролиферацию SGC-7901 (рис S2 в S1 файла, * P
&л; 0,05.). Аналогичные результаты наблюдались в контрольной GES-1 клеток (рис S1 A-B в File S1, * P
&л; 0,05.). Таким образом, эти результаты свидетельствуют о том, что микроРНК-338-3p подавляет скорость роста обоих GC клеток и эпителиальных клеток желудка в системе АВбис витро.
4. микроРНК-338-3p Препятствует миграции и инвазии GC клеток в пробирке
<р> Исходя из идеи, что микроРНК-338-3p служит в качестве опухолевого супрессора GC, мы дополнительно изучить его воздействие на миграцию клеток и инвазию, критическое детерминированной злокачественной прогрессии и метастазирования. Как показано на рис. 4, число мигрирующих SGC-7901 клеток, трансфицированных микроРНК-338-3p мимике было значительно меньше, чем в контрольной группе (105,00 ± 11,16 против 145.00 ± 7.00, ** P
&л;.. 0,01 Рис 4 A-B), и количество инвазивных SGC-7901 клеток, трансфицированных MIR-338-3p была значительно меньше по сравнению с контрольной группой (41,33 ± 4,04 против 76 ± 10,54 ** P
&л; 0,01. рис. 4 С-D). Последовательно, ингибирование микроРНК-338-3p индуцированной миграции и вторжения в SGC-7901 клеток (рис S3 в файле S1, * P
&л;. 0,05). В противоположность этому, микроРНК-338-3p не имели никакого влияния на миграцию ГЭС-1 (рис. S1 E в файле S1), вероятно, потому, что клетки ГЭС-1 не хватает миграции и инвазивный характер раковых клеток. Эти результаты продемонстрировали роль микроРНК-338-3p в подавлении как миграцию и вторжение в GC клетки.
5. микроРНК-338-3p может вызвать рак желудка клетки Апоптоз
<р> Для выяснения механизма MIR-338-3p на ингибирующие эффекты роста ГХ клеток, мы тестировали анализ апоптоза с помощью проточной цитометрии. Результаты показали, что апоптическая скорость была значительно увеличена в микроРНК-338-3p имитирует трансфицированных группе по сравнению с контрольной группой подражает трансфицированных (** P
≪ 0,01) (. Фиг.5А-B). Кроме того, мы исследовали особенности морфологической апоптоза в том числе конденсированного хроматина и фрагментации ядер с помощью Hoechst 33342 окрашивание, и подтвердил, что апоптическая ставка была увеличена в микроРНК-338-3p мимике трансфицированные клетки (рис. 5в). Последовательно, ингибирование микроРНК-338 заторможенной апоптоз SGC-7901 клеток (рис S4 в файле S1, * P
&л;. 0,05). Аналогичные результаты наблюдались у контрольных ГЭС-1 клеток (рис S1 C-D в File S1, ** P
&л;. 0,01). Эти результаты показали, что избыточная экспрессия микроРНК-338-3p индуцирует апоптоз в клетках GC, что может способствовать ингибирующие свойства роста MIR-338-3p.
6. микроРНК-338-3p Угнетает туморогенности и способствует апоптозу В естественных условиях
<р> Затем мы проверили, действительно ли эктопическая экспрессия микроРНК-338-3p может повлиять на рост и апоптоз желудка опухоли в естественных условиях .
SGC-7901-клетки трансфицировали с микроРНК-338-3p вектора экспрессии (р Глушитель
-miR-338-3p) или вектор управления (р Глушитель
-miR -контроль). Стабильные клоны с либо р Silencer
-miR-338-3p или р Глушитель
-miR-контроль были отобраны и вводили подкожно голым мышам, и формирование опухоли контролировали. SGC-7901 клетки, трансфицированные MIR-контролем показали прогрессивный рост, но тормозились когда эктопической экспрессии микроРНК-338-3p. Через 28 дней, безволосые мыши были умерщвлены, и измеряли массы опухолей и объема (рис. 6 А-Е). Средний вес опухолей в результате pSil encer
-miR-338-3p клетки группа была значительно меньше, чем опухоли, от р Глушитель
-miR-контрольные клетки группы (1200 ± 193,26 мг против 1800 ± 229.52 мг, ** P
&л;. 0,01)
<р> чтобы проверить, способствует ли апоптоз к этому наблюдается в естественных условиях
ингибирование роста опухоли при MIR-338-3p над -expression, TUNEL-анализ проводили в опухолевых тканях. Результаты показали, что опухолевые ткани от р Глушитель
-miR-338-3p содержал значительно более положительное окрашивание клеток по сравнению с контрольной группой (** P
&л;. 0.01, рис 6F-G ). Таким образом, наши результаты показали, что микроРНК-338-3p ингибирует желудочную туморогенез В естественных условиях
, по меньшей мере, частично за счет индукции апоптоза на месте.
7. микроРНК-338-3p Мишени 3'-UTR онкогена SSX2IP
<р> Один потенциальный сайт микроРНК-338-3p связывание было предсказано в 3'UTR из SSX2IP (рис. 7А). Для проверки этого взаимодействия, мы помещаем дикого типа или мутантный 3'UTR фрагмент SSX2IP в люциферазы вектор pMIR-REPORT. Полученные конструкции котрансфицируют с микроРНК-338-3p подражает или имитаторы управления в клетках HEK293T, с последующим люциферазы репортера. Относительная активность люциферазы pMIR /SSX2IP-3'UTR вес, но не pMIR /SSX2IP-3'UTR Мут, была значительно подавлена MIR-338-3p (** P
≪.. 0,01) по сравнению с таковой в контрольной мимике (фиг.7В), указывая, что микроРНК-338-3p непосредственно связывается с 3'-UTR от SSX2IP функционировать как супрессор
<р> Затем мы исследовали влияние СИК-338-3p на экспрессию SSX2IP, путем измерения уровней мРНК и протеина SSX2IP после трансфекции SGC-7901 клеток с микроРНК-338-3p или управления мимике. Как показано на рис. 7С-D, микроРНК-338-3p не имел никакого влияния на SSX2IP
уровне мРНК как измерено кПЦР, но вызвало значительное снижение уровня белка SSX2IP по сравнению с контролем-трансфицировали. Эти результаты свидетельствуют о том, что микроРНК-338-3p подавляет экспрессию SSX2IP на пост-транскрипционном уровне, вероятно, через связывание с 3'-UTR из SSX2IP. Следует отметить, что мы также обнаружили, что capase-3 и procasepase-3, два гена важный апоптоз, были соответственно уменьшается (рис. 7С).
8. Выражение MIR-338-3p обратно коррелирует с уровень экспрессии белка в SSX2IP рака желудка
<р> микроРНК-338-3p падает с при раке желудка и SSX2IP поддерживается с целевым геном MIR-338 -3p, он способствовал нам предположить, что SSX2IP может быть избыточная экспрессия в опухолевых тканях желудка и по отношению к совпавших тканей неопухолевыми.
<р> иммуногистохимический анализ SSX2IP антигена показал ситуацию окрашивания для белка SSX2IP в опухолевых тканях и соответствием неопухолевой ткани в 66 желудка samples.65 рака% (43/66) желудка тканей рака отображается повышенное immuostaining для белка SSX2IP по сравнению с согласованными тканей неопухолевыми. В частности, 84% (31/37) желудка раковых тканей выводится повышенное иммунное окрашивание в образцах ГХ микроРНК-338-3p с низким уровнем экспрессии группы, в то время как данные 41% (12/29) в MIR-338-3p высокой экспрессии группы. Таким образом, анализ экспрессии микроРНК-338-3p и SSX2IP в желудочном раковых тканей подтвердили существование обратной корреляции между выражением MIR-338-3p и его гена-мишени SSX2IP (Person критерий хи-квадрат: P
&л; 0,001, Спирмен Корреляция: г = -0,442, P
&л; 0,001, рис 8)
<р> Если SSX2IP является основной мишенью подавляется MIR-338-3p в GC, эктопическая экспрессия SSX2IP должна спасти фенотипов вызванные MIR-338-3p над производством в GC клетки. Чтобы проверить эту идею, и выражение SSX2IP вектор или пустой вектор индивидуально трансфецировали в SGC-7901, с последующим цитологических анализов для измерения клеточной пролиферации, миграции, инвазии и апоптозу. Как и следовало ожидать, избыточная экспрессия SSX2IP частично или полностью изменяет ингибирующее действие MIR-338-3p в GC клетки на каждом аспекте мы рассмотрели (рис. 9 A-D). С другой стороны, SSX2IP не оказывает никакого влияния на экспрессию микроРНК-338-3p (рис. S5 в файле S1). Таким образом, мы пришли к выводу, что функция подавитель рак MIR-338-3p в GC по меньшей мере, частично за счет подавления его гена-мишени SSX2IP.
Обсуждение
<р> В этом исследовании мы обнаружили, что низкий -expression из MIR-338-3p был клинически связан с большим размером опухоли, более метастазов в лимфатических узлах, более глубокого локального вторжения и продвинутой стадии TNM. На цитологическом уровне, повышающей регуляции микроРНК-338-3p заторможенной пролиферацию, образование колоний, инвазию и миграцию клеток рака желудка. Кроме того, сверхэкспрессией микроРНК-338-3p в желудочном раковых клеток значительно снижается онкогенеза у голых мышей в естественных условиях
. Взятые вместе, наши результаты убедительно свидетельствуют о подавителя опухоли роль микроРНК-338-3p для рака желудка.
<Р> МикроРНК были недавно признаны в качестве важнейших регуляторных факторов ассоциированных с опухолью. Хотя механизм регулирования экспрессии микроРНК в онкогенеза до сих пор неясно, эпигенетические регулирование было предложено играть важную роль [31], [32]. Метилирование ДНК происходит в основном на острове CpG обычно расположенный в промоторной области гена, приблизительно 70% промоторных областей в геноме человека, богата CpG острова [37]. Сокращенные выражения MIR-34b, микроРНК-129 и MIR-10b все вызваны гиперметилированием в промоторов [38], [39]. В соответствии с этим понятием, уровень метилирования CpG острова MIR-338-3p в желудочных тканях рака действительно обнаружили выше, чем у совпавших прилегающих тканей неопухолевыми, предполагая, что микроРНК-338-3p эпигенетически замолчать в GC. Причиной этого эпигенетического молчания MIR-338-3p при раке желудка остается неуловимым, и мы предполагаем, что такие факторы, как CagA, которые были ранее сообщалось эпигенетически влиять на экспрессию микроРНК в развитии рака желудка [40], могут участвовать в этом регулировании , Важно отметить, что статус гипер-метилирование микроРНК-338-3p промотор является потенциальным биомаркером для диагностики рака желудка.
<Р> Так как функции микроРНК посредством регуляции экспрессии генов, их вниз по течению, ключевой вопрос относительно того, как микроРНК-338- 3p способствует GC является какой ген (ы) он регулирует.
<р> Здесь мы определили SSX2IP в качестве важного нового целевого показателя в MIR-338-3p, и при условии, как цитологические и гистологические данные, свидетельствующие о роли опухолевый продвижении SSX2IP в GC. Многие исследования показали, что SSX2IP является острый миелоидный лейкоз-ассоциированный антиген и потенциальной мишенью иммунотерапии для лейкемии [33] - [35]. Важно отметить, что SSX2IP было показано в наших предыдущих исследованиях для содействия моторику, инвазию и миграцию и устойчивость к химиотерапии клеток гепатомы, что указывает на его важную роль в развитии и метастазирования. Его гомологичный ген у грызунов <ЕМ> ADIP
(afadin двухрядным домен-взаимодействующий белок), последовательность аминокислот белка ADIP у мышей и крыс показали, соответственно 88% и 87% идентичность с SSX2IP белка, соответственно. ADIP локализованы в межклеточных слипчивых соединений, и это может способствовать мобильности клеток путем активации Rac1 через Vav2 [41], [42]. Он предположил, что SSX2IP может способствовать подвижность клеток, инвазию и метастазирование через активацию Rac1.
<Р> Интересно, что экспрессия Rac1 в желудочном раковых тканей была выше, чем в соседних тканях совпавших неопухолевыми, уровень его экспрессии значительно связано со стадией TNM. В 7-желудочных линий раковых клеток, выражения Rac1 были выше, чем в слизистой оболочке желудка эпителиальной клеточной линии (GES-1) [43], который совпал с явлением мы нашли с MIR-338-3p в раковых клетках желудка и тканей. Эти результаты свидетельствуют о том, что микроРНК-338-3p, как фактора ингибирования рака желудка, может привести к снижению экспрессии гена-мишени SSX2IP подавлять активацию Rac1. Участие SSX2IP в нескольких видов рака усиливает биологическое и физиологическое значение каскада микроРНК-338-3p /SSX2IP в развитии рака, и побудило нас к дальнейшему изучению состояния MIR-338-3p /SSX2IP в других типах рака. Определение других потенциальных целей MIR-338-3p также работа в продвижении
.
и уменьшает туморогенности GC клеток путем индукции апоптоза В естественных условиях
. Кроме того, мы определили SSX2IP в качестве важнейшего целевого гена MIR-338-3p в развитии GC.
Исследование описывает исходную базовую базу данных здорового кишечного микробиома и профиль численности
Западная диета может увеличить риск «смертельного сепсиса»,
Новые взаимодействия хозяина, вируса и микробиома во время COVID-19 могут определить исход
Анти-коронавирусные молекулы микробов могут стать ключом к новым методам лечения
Что такое ERCP?
Определение кислотонейтрализующей способности безрецептурных антацидов
Нил Белл назначен директором по развитию Avacta Life Sciences
Avacta Group plc, разработчик Affimer ® биотерапевтические препараты и реагенты, рада объявить о немедленном назначении Нила Белла директором по развитию Avacta Life Sciences. Нил будет отвечать за
Кислый pH усиливает инфекцию SARS-CoV-2 за счет активации рецептора ACE2
Продолжающаяся пандемия коронавирусного заболевания 2019 года (COVID-19), вызванная новым коронавирусом, а именно, тяжелый острый респираторный синдром коронавирус 2 (SARS-CoV-2), унесло более 4,6 мил
Метформин может помочь при повышенной кишечной проницаемости
Команда исследователей из Калифорнийского университета, Сан Диего, успешно использовали органоиды кишечника в своей лаборатории, чтобы продемонстрировать действие лекарств для лечения таких состояний,