MicroRNA gouf als spillt eng wichteg Roll an tumorigenesis an Metastasen kuerzem unerkannt. Hei, mir mellen, datt Mir-338-3p epigenetically zu gastric Kriibs entsat war, a seng verwandelt-Regulatioun war vill mat gastric Kriibs clinicopathological Fonctioune soll. Contreras, Staatsfinanzen Mir-338-3p Ausdrock vun SGC-7901 gastric Kriibs Zellen inhibited Prolifératioun, Migratioun, Iwwerfall a tumorigenicity kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung, op d'mannst deelweis duerch Pinguin apoptosis. Ausserdeem, weisen mir de oncogene SSX2IP eng Zilscheif vum Mir-338-3p ass. Mir proposéieren, dass Mir-338-3p Funktiounen als entholl suppressor zu gastric Kriibs, an der methylation Status vun hirem CpG Insel als potentiell diagnostic Bewaacher fir gastric Kriibs déngen kéinten VerfÜgung Fro:. Li P, Chen X, Su L, Li C, Zhi Q, Yu B, et al. (2013) Epigenetic Silencing vum Mir-338-3p dréit zu Tumorigenicity zu Gastric Cancer vun SSX2IP gezielt. PLoS NËMMEN 8 (6): e66782. Doi: 10.1371 /journal.pone.0066782 VerfÜgung Redakter: Alfons Navarro, Universitéit vu Barcelona, Spuenien VerfÜgung Arnaque: 17. Januar 2013; Akzeptéiert: 10 Mee, 2013; Publizéiert: 24. Juni 2013 VerfÜgung Copyright: © 2013 Li et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Funding:. Dës Etude déi Subventioune vum National Natural Science Foundation of China (Nummer 30872476, 81072012, 81172324, 91229106, 30900670 oder 81272749), Wëssenschaft an Technologie Kommissioun vu Shanghai Gemeng (Zuelen 10jc1411100, 09DZ1950100, 09DZ2260200, 11jc1407602 an 101409042000) gouf ënnerstëtzt, Shanghai Key Nawell ( S30204), an Key Projetën an der National Science & Technology léit plangen vu China (Zuelen 2008BA152B03 an 2011BA203191), China Postdoctoral Science Foundation (Nummer 2011M500796). D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisiounen ze publizéieren, oder Virbereedung vun mëttelalterlech Handschrëft VerfÜgung Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung Gastric Kriibs ass eng malignancy mat héije Heefegkeet an der zweeter Virwaat Ursaach vum Kriibs Doud weltwäit [1]. Déi fréi diagnostic Taux vun gastric Kriibs ass niddereg, an Patienten sinn normalerweis schwéier diagnostizéiert gin bis de Kriibs an fortgeschratt Etapp oder Metastasen entwéckelt huet. Soumat ass et vu grousser Bedeitung an-Déift ze üben Studium op der pathogenesis vun gastric Kriibs a fir nei molekulare Approchen an therapeutesch Ziler ze kucken. VerfÜgung MicroRNAs si kleng RNAs datt Gentherapie Ausdrock regléieren, an si wollten sinn an enger Rei vu biologesche sécher Weeër [2]. Multiple Studien hunn däitlech Differenz vun microRNAs Ausdrock réischt profiling tëscht entholl Zellen an aus normal Stoffer ofgeleet Zellen, wat beweist, datt microRNAs wichteg Roll an tumorigenesis gespillt hunn [3], [4]. Soumat huet MicroRNAs kuerzem eng Institutioun vun genetesch Diagnos a Behandlung Zil- als Roman oncogenes oder suppressor Genen [5], [6] ginn. Anormal Ausdrock vun microRNAs zu Stoffer oder serum ass enk un Multiple Mënsch malignancies Zesummenhang dorënner gastric Kriibs [7], [8], an e puer erof-reegelen microRNAs zu gastric Kriibs Stoffer entholl suppressing Fonctioun hunn. Zum Beispill, huet de Loosst-7 microRNA Famill éischt als repressor vun RAS, repressing RAS an c-myc Ausdrock um respektiv Niveau [9] fonnt. Den Ausdrock Niveau vun loosse-7A wesentlech zu gastric erhéijen reduzéiert, iwwerdeems Ras FAQ däitlech méi héich zu gastric entholl ass [10]. Desweideren, Mir-15B, Mir-16 an Mir-21 etc hunn zu der Entwécklung a Krankheete Diagnos vun gastric Kriibs verbonne ginn [11], [12]. Eis Grupp huet confirméiert och de anticancer Roll vum Mir-126, Mir-409-3p an Mir-155 zu gastric Kriibs [13] - [15] VerfÜgung MicroRNA microarray war standing der miRNA Profiler an gastric z'entdecken. Kriibs, an hunn mir dat mir-338-3p war vill verwandelt-reegelen (Engels Daten). Mir-338-3p, matzen am chromosome 17q25.3 mat enger Längt vun 22 optimistesch, war déi éischt vun säi-entschlof neurodegeneration wéi den Ausdrock vun Mir-338-3p gemellt gëtt an d'Käpp vun Mais reduzéiert Krankheet mat Maus-ugepasst scrape [ ,,,0],16]. Mir-338-3p konnt de mRNA Niveau vun hirem Provider Gentherapie Apoptosis-verbonne Tyrosine Kinase (AATK) zu Grenzwäerter Zelle [17] regléieren. Wéinst dem Bord-338-3p up-reglementéiert Patienten mat sporadesch amyotrophic ënnergaangen (Moment), aner Zort vun nervös System lesions [18]. Wichtegst, ass eng Roll vum Mir-338-3p zu tumorigenesis virdrun ugeholl, wéi Mir-338-3p verwandelt an rectal Kriibs reglementéiert ass [19], an ass vun Hepatitis B Virus X FAQ (HBx) gereegelt Prolifératioun an Invasioun zu inhibit hepatoma Zellen vun déi décisiv Genen CyclinD1 an smoothened zu hepatocellular carcinoma ze viséieren [20] - [22]. Allerdéngs ass d'Roll vum Mir-338-3p am GC nach onbekannt. VerfÜgung Am Moment studéieren, weider mir de verwandelt-Regulatioun Ausdrock vu Mir-338-3p am GC Stoffer Verglach mam Patient-stemmt analyséiert normal Stoffer, an alles, datt den Ausdrock Niveau vum Mir-338-3p enk mat der clinicopathologic Verännerlechen vun GC soll war. Ectopic Ausdrock vu Mir-338-3p bremst Prolifératioun, Iwwerfall a Metastasen vun gastric Kriibs Zellen, verklengert der tumorigenic Fähegkeet vun gastric Kriibs Zellen an Sauna Mais, an ënnerstëtzt apoptosis. Mir weisen awer och, datt Mir-338-3p als entholl suppressor duerch direkt gezielt SSX2IP Funktioun kënnen. Sou, proposéiere eis Resultater dass Mir-338-3p e Potential diagnostic Bewaacher geflitzt an therapeutesch Zilscheif vun gastric Kriibs ass. VerfÜgung 1. Zell zesummeféieren a Kultur VerfÜgung De Mënsch gastric Kriibs Zell Linnen SGC-7901, NCI-N87, BGC-823 an AGS sech vu Shanghai Instituter kaaft fir Biologesch Sciences, Chinese Akademie vun de Wëssenschaften [23] - [26]. Kato-III an SNU-1 waren aus der ATCC (American Type Kultur Collection) kaaft [24], [27], MKN28 an MKN45 sech aus der japanescher Cancer Research Resources Bank kritt [28], déi och gastric epithelial Zell Linn, GES -1, war e Cadeau vum Prof. Feng bi (Huaxi Spidol, Effort'en University, Chengdu, Effort'en Province, PR China) [29], [30]. HEK293T, Mënsch Linn embryonal Nier Zell, war an eisem Institut agekacht. D'gastric Kriibs Zell Strecken cultured zu RPMI1640 mat 10% FBS (An et Bovine serum) ergänzt bei 37 ° C an enger humidified Atmosphär vu 5% CO2. HEK293T Zellen sech am DMEM (Dulbecco d'geännert Eagle d'mëttel-) cultured uewe mat der selwechter cultured Conditioun ergänzt. VerfÜgung 2. Ethik breakpoint VerfÜgung Schrëftlech Awëllegung vun der Etude war, aus all Participanten kritt. D'Etude Protokoll war vun der Ethik Comité vun Ruijin Spidol, School vun Medezin, Shanghai JIAO Tong University guttgeheescht. VerfÜgung 3. Ray Echantillon VerfÜgung primär gastric Kriibs Stoffer an der stemmt Net-entholl Stoffer sech aus 66 Patiente gesammelt radikal gastrostomy am Departement vun befënnt amgaang, Ruijin Spidol, Shanghai JIAO Tong University School vun Medezin. Keen vun de Patienten scho preoperative Behandlung. All vun der Otemschwieregkeeten Echantillon waren mat Patienten Awëllegung gesammelt an vun der agebousst Ënnersichung bestätegt, an de histological ennerluecht op d'Lauren d'Klassifikatioun baséiert. D'TNM Klassifikatioun Definitiounen sech no der International Union géint Cancer (2002). VerfÜgung 4. RNS Isolatioun a qPCR VerfÜgung Total RNS war vun Zell Linnen an Otemschwieregkeeten Echantillon isoléiert vun Mir VerfÜgung Váňa ™ miRNA Isolatioun Kit (Obwuel Biosystems, Foster City, CA, USA) no der Taktik vum Produzent. D'Qualitéit an Quantitéit vum RNS Echantillon waren déi Norm electrophoresis an spectrophotometric Methoden évaluéieren. Den Ausdrock Niveau vum Mir-338-3p zu Zell Linnen an Otemschwieregkeeten Echantillon war vun qPCR gemooss a berechent ëmschriwwen [13]. Den Ausdrock Niveau vun SSX2IP mRNA war vun qPCR no der Expression Assays Protokoll (Obwuel Biosystems) TaqMan® Gene gemooss. D'GAPDH mRNA Niveau war fir normalization benotzt. VerfÜgung 5. DNA Isolatioun a Methylation Analys VerfÜgung Frankräich DNA aus Otemschwieregkeeten Echantillon war mat DNAzol (Invitrogen) sidd. Natrium bisulfite Konversioun war mat der QIAGEN Epitect Bisulfite Kit (QIAGEN) gehaal laut den Hiersteller. D'methylation Statuen war vun Methylation spezifesch Hinnen alleguer (MSP) gesuergt. D'primers fir methylated oder unmethylated DNA sech duerch d'Software Duerch Primer Express v1.0 (Abi) Éislek methylation vir primer fir d'CpG vum Mir-338-3p entworf: 5'-GGCGGAGTTTATGGTTTTC-3 "an d'Géigendeel primer: 5 ' -AAACCTAACCGATCCTCG-3 ", der unmethylation vir primer fir d'CpG vum Mir-338-3p: 5'-TGGTGGAGTTTATGGTTTTT-3" an d'Géigendeel primer: 5'-AAACCTAACCAATCCTCACAA-3 "VerfÜgung 6.. Flüchteg Transfection vun miRNA Mimics VerfÜgung miRNA-338-3p mimics an negativ Kontroll mimics aus GenePharma (Shanghai, China) .Cells kaaft huet sech an der Zell Kultur Placke 20 h virun transfection rakommen an 70% Zell Niewebaach ze suergen, Moment vun transfection. Transfection vun miRNA mimics an Zellen war duerchgefouert benotzt Lipofectamine2000 (Invitrogen) no der Prozedur vum Produzent. D'miRNA mimics geschafft an der Finale Konzentratioun vu 100 nm. Um 48 h Post-transfection, qPCR a Western blot waren gesuergt. VerfÜgung 7. Zell prolifération Assay VerfÜgung Zell Prolifératioun war vun WST (Waasser-soluble tetrazolium Salz) assay mat enger Zell Counting Kit-8 (Dojindo) no der Taktik vum Fabrikant évaluéieren. Um 24 h Post-transfection mat miRNA mimics, Zellen (2 × 10 8. Mëllt Agar Kolonie Formatioun Assay VerfÜgung GC Zellen transfected mat miRNA mimics mat 0.3% mëll Agar zu RPMI1640 resuspended waren 10% FBS wouvun an layered op 0.6% Agar zu RPMI1640 Kéier 10% FBS zu 6-gutt Placke mat (1 × 10 9. Zell Migratioun a Missiounen Assay VerfÜgung Migratioun vun Zellen war mat QCM standing 10. Apoptosis Analys VerfÜgung Zell apoptosis Analyse huet mat Annexin V-FITC Apoptosis Detektioun Kit ech (BD) preformed laut den Hiersteller d'Uweisungen. All assay war zu triplicate an widderholl dräimol onofhängeg gesuergt. D'Fonktioun vun der Nuklearenergie ageet mat apoptosis verbonne war vun Hoechst 33342 (Beyotime) huet no der protocol.The Wirklechkeet vun engem unisse microscope visualized war dat um Wellelängt 350 nm a gemooss bei 460 nm opgereegt war. VerfÜgung 11. Bau vun Plasmids an Luciferase Aktivitéit Assay VerfÜgung D'Brochstéck vun Wildwest-Typ (virstellen) 3'UTR vun SSX2IP oder Siten Mann- (Mut) 3'UTR vun SSX2IP der putative Mir-338-3p wouvun Siten bindend waren Wierderbuch . D'Fragmenter sech gekloonten nees pMIR-Verknëppung luciferase Vecteure (Ambion) mat Liichtkäfer VerfÜgung an pMIR /SSX2IP-3'UTR 12. Stabil Transfection vum Mir-338-3p Expression Vecteure VerfÜgung pSilencer-Mir-338-3p Vecteure an pSilencer-Mir-Kontroll Vecteure an SGC-7901 Zellen transfected war bzw. benotzt Lipofectamine2000 (Invitrogen), an ausgewielten mat 100 μg /ml B (Invitrogen) fir 4 Wochen hygromycin. Stably transfected Zell clones waren an d'Halschent vun der Auswiel Konzentratioun ofgeholl an haten. VerfÜgung 13. Entholl Xenograft Model VerfÜgung SGC-7901 Zellen (2 × 10 14. Immunohistochemistry VerfÜgung Detektioun vun SSX2IP war op paraffin Rubriken standing mat der anti-SSX2IP antibody (Abcam, dilution 1:1000). D'immun komplex war mat der Dako REAL visualized 15. Statistique Analys VerfÜgung D'Relatioun tëscht der Mir-338-3p Ausdrock Niveau an clinicopathologic Parameteren war vun der Person analyséiert X VerfÜgung 1. . D'Expression vum Mir-338-3p ass am GC Zell zesummeféieren Down-reglementéiert an Stoffer VerfÜgung d'Roll vum Mir-338-3p am GC ze wëssen, mir Verglach éischt den Ausdrock Niveau vum Mir-338-3p zu aacht gastric Kriibs Zell Linnen mat engem och normal gastric mucosal epithelial Zell Linn (GES-1). Als zu Lalumi gewisen. 1A, Mir-338-3p war vill verwandelt-reglementéiert GC Zell Linnen Verglach mat GES-1. Zu dësem Resultat konfirméieren, mir Verglach och den Ausdrock vun Mir-338-3p am GC Stoffer an bascht Net-entholl Stoffer. 66 GC vläit Echantillon waren an dëser Etude mat abegraff. D'Resultater weisen, datt déi duerchschnëttlech Ausdrock Niveau vum Mir-338-3p zu entholl Stoffer bedeitend erof-reglementéiert war am Verglach zu den zwéin Net-entholl Stoffer (Figebam. 1B). Ausserdeem, opgekläert mir d'Korrelatioun tëscht Mir-338-3p Ausdrock an clinicopathologic Facteuren. Wéi an Table dës 1. 59.1% (39/66) vun GC Echantillon zougedréckt verwandelt-Regulatioun vum Mir-338-3p drënner zwee-Weeër präventive (relativ Ausdrock Verhältnis &Si besteet; 0,5), war dës Situatioun vill verwandelt ginn als -regulated. Baséierend op dësem präventive, waren der 66 Medeziner Fäll an zwou Gruppen ënnerdeelt: Mir-338-3p ënneschten Ausdrock Grupp (n = 39) an Mir-338-3p méi Ausdrock (n = 27). Déi ënnescht Ausdrock Grupp zougedréckt bewegen Richtung groussen entholl Gréisst, méi lymph Node Metastasen, déif lokal Invasioun an eng méi fortgeschratt TNM Bühn, mee keen groussen Korrelatioun mam Alter, Geschlecht oder histological Typ (Table 1). VerfÜgung 2. Mir-338-3p ass Epigenetically zu Gastric Cancer VerfÜgung entsat Als epigenetic silencing eng gemeinsam heescht fir erof-Regulatioun vun miRNA Ausdrock ass [31], [32], huet mir d'CpG Insel Verdeelung vun de Promoteur ze analyséieren Regioun vum Mir-338-3p vun duerch Primer Express v1.0 Software. D'Resultater weisen, datt CpG Inselen existéieren an der Sektioun (-690 bis -241) Offloss vun der Transkriptiouns Start Site (TSS). Mir iwwerpréift der methylation Status vun CpG Inselen an de Promoteur Regioun vun methylation-spezifesch Hinnen alleguer (MSP), Eechenholz der Regioun vun -366 bis -576 (Figebam. 2A). Vun MSP Hëllef, hunn mir datt de Bord-338-3p CpG Insel gouf an de GC Zell Linnen am Verglach zu der gastric mucosal epithelial Zell Linn (GES-1) extensiv methylated. Wéi erwaart, Behandlung mat 5-AZA entschlof bedeitendst demethylation (Figebam. 2B). D'Vertrieder Resultater vun MSP Analyse vum Mir-338-3p am GC entholl Stoffer a reagéiert bascht Net-entholl Stoffer sech an Lalumi gewisen. 2C. D'methylation Tauxe vum Mir-338-3p CpG Inselen am entholl Stoffer an bascht Net-entholl Stoffer aus 66 GC Patienten goufen 78,79% an 24,24%, respektiv (** P VerfÜgung &Si besteet;. 0,01, Lalumi 2D) . Wann der Linn Charakteristiken Receiver Zesummen an der Iwwerfläch Ënner men (AUC) fir methylated Status vum Mir-338-3p am GC berechent huet, war d'AUC 0,773 ± 0,042, vill méi héich wéi déi vun den Texter Hypothes ( P &Si besteet; 3. Mir-338-3p bremst Gastric Cancer BTS prolifération VerfÜgung Well Mir-338-3p ass bedeitend erof-reglementéiert GC, wéi uewe gewisen, et als eng entholl suppressor Funktioun kënnen. Dofir, alles mir nächst ob overexpression vum Mir-338-3p zu gastric Kriibs Zellen Zell Wuesstem Afloss hätt. Synthetesch Mir-338-3p mimics oder negativ Kontroll mimics sech transfected an SGC-7901 Zellen zu wat den Ausdrock Niveau vun der Raumstatioun-338-3p ass den ënneschten, déi vun WST assay duerno Zell Wuesstem ze kontrolléieren. VerfÜgung D' ectopic Ausdrock vu Mir-338-3p zu SGC-7901 Zellen bestätegt gouf duerch qPCR an SGC-7901 Zellen transfected mat Mir-338-3p mimics gewuess vill méi lues wéi d'Kontroll Grupp (Figebam. 3A) (* P Baséierend op d'Iddi, datt Mir-338-3p déngt als entholl suppressor vun GC, mir lant weider hir Auswierkungen op Zell Wanderung an Invasioun, engem kriteschen Datumer vun malignant Werdegang an Metastasen. Als zu Lalumi gewisen. 4, d'Zuel vun Opbau SGC-7901 mat Mir-338-3p mimics transfected Zellen war vill manner wéi d'Kontroll Grupp (105.00 ± 11,16 vs 145,00 ± 7.00, ** P VerfÜgung &Si besteet;.. 0,01 Lalumi 4 a-B), an Zuel vun invasiv SGC-7901 mat Mir-338-3p transfected Zellen manner war vill zu der Kontroll Grupp Verglach (41.33 ± 4,04 vs 76 ± 10,54, ** P VerfÜgung &Si besteet; 0,01. Figebam. 4 C-D). Konsequent, inhibition vun Mir-338-3p entschlof Wanderung an Invasioun vun SGC-7901 Zellen (Lalumi S3 an Fichier S1, * P VerfÜgung &Si besteet;. 0,05). Par contre, hu Mir-338-3p keen Afloss op Migratioun vun GES-1 (Figebam. S1 E zu Datei S1), wahrscheinlech well GES-1 Zellen der Migratioun an invasiv Natur vun Kriibs Zellen opgepasst. Dës Resultater gewisen eng Roll vum Mir-338-3p zu inhibiting souwuel Wanderung an Invasioun vun GC Zellen. VerfÜgung 5. Mir-338-3p kann Gastric Cancer BTS Apoptosis VerfÜgung Induce Fir de Mechanismus vum Mir-338-3p op GC Zell Wuesstem inhibitory Effekter entschlësselen, getest mir apoptosis Analyse vun Flux cytometry. D'Resultater uginn, datt d'apoptotic Taux wesentlech zu Mir-338-3p mimics transfected Grupp huet sech am Verglach zu der Kontroll mimics transfected Grupp (** P VerfÜgung &Si besteet; 0.01) (. Lalumi 5A-B). Mir iwwerpréift weider der morphologic Charakteristike vun apoptosis dorënner kondenséiert chromatin an nuklear véiermol vun Hoechst 33342 staining, an Neits, datt déi apoptotic Taux an Mir-338-3p mimics transfected Zellen fräi war (Figebam. 5C). Konsequent, inhibition vun Mir-338 inhibited apoptosis vun SGC-7901 Zellen (Lalumi S4 am Fichier S1, * P VerfÜgung &Si besteet;. 0,05). Ähnlech Resultater goufen an der Kontroll GES-1 Zellen (. Lalumi S1 C-D am Fichier S1, ** P VerfÜgung &Si besteet; 0.01) observéiert. Dës Resultater uginn dass overexpression vum Mir-338-3p induces apoptosis am GC Zellen, déi fir de Wuesstem inhibitory Eegeschafte vum Mir-338-3p bäidroen kéinten. VerfÜgung 6. Mir-338-3p bremst Tumorigenicity an d'Erhéigung Apoptosis zu VIVO Mir ob nächst getest ectopic Ausdrock vu Mir-338-3p de Wuesstem an apoptosis vun gastric entholl Afloss konnt zu VIVO . VerfÜgung SGC-7901 Zellen sech mat der Raumstatioun-338-3p Ausdrock Vecteure (p Silencer VerfÜgung -miR-338-3p) oder d'Kontroll Vecteure transfected (p Silencer VerfÜgung -miR -control). D'stabil clones mat entweder p Silencer VerfÜgung -miR-338-3p oder p Silencer VerfÜgung -miR-Kontroll ausgewielt goufen an heijen subcutaneously an Sauna Mais, an der entholl Opstellung iwwerwaacht gouf. SGC-7901 Zellen transfected mat Mir-Kontroll zougedréckt II Wuesstem mä huet inhibited wann ectopic Ausdrock vu Mir-338-3p. No 28 Deeg, huet d'Sauna Mais euthanized, an der entholl Gewiichter a Volumen goufe gemooss (Figebam. 6 A-E). D'Moyenne Gewiicht vun erhéijen aus pSil doraus encer VerfÜgung -miR-338-3p Zellen Grupp war vill manner wéi erhéijen aus p Silencer VerfÜgung -miR-Kontroll Zellen Grupp (1200 ± 193,26 mg vs 1800 ± 229,52 mg, ** P VerfÜgung &Si besteet;. 0.01) VerfÜgung fir iwwerpréifen, ob apoptosis dréit zu dëser observéiert zu VIVO VerfÜgung entholl Wuesstem inhibition upon Mir-338-3p iwwer -expression, TUNEL assay war an der entholl Stoffer gesuergt. D'Resultater weisen, datt entholl Stoffer aus p Silencer VerfÜgung -miR-338-3p enthale vill méi positive staining Zellen am Verglach mat Kontroll Grupp (** P VerfÜgung &Si besteet;. 0,01, Lalumi 6F-G ). Sou, uginn eis Resultater dass Mir-338-3p gastric tumorigenesis bremst zu VIVO VerfÜgung, op d'mannst deelweis duerch apoptosis zu situ Pinguin. VerfÜgung 7. Mir-338-3p Ziler der 3'-UTR vun der Oncogene SSX2IP Wéi oft miRNAs den Ausdrock vun Zil- Genen regléieren, mir gesichte Mir-338-3p d'putative Ziler online Sich Tools benotzen (zB TargetScan, Microrna.org an PicTar). D'Genen vun all de benotzt Programmer virausgesot huet Kandidat Ziler vum Mir-338-3p considéréiert. Ënnert all de Hits, SSX2IP eis Opmierksamkeet ëmmer, uginn virdrun Studien dass SSX2IP ass eng grouss Servicer sinn Leukämie-verbonne antigen an e Potential immunotherapy Zil fir Leukämie [33] - [35] an eiser leschter Aarbecht gewisen, datt SSX2IP ënnerstëtzt d'Invasioun an Migratioun vun hepatocellular carcinoma Zellen an dréit zu der Chimiotherapie Resistenz [36]. VerfÜgung One Potential Mir-338-3p bindend Site war am 3'UTR vun SSX2IP virausgesot (Figebam. 7A). Fir dës Interaktioun validéieren, huet mir eng Wildwest-Typ oder Mann- 3'UTR Brochstéck vun SSX2IP an der pMIR-Dobäi luciferase Vecteure. D'entstoent gesond waren mat Mir-338-3p mimics oder Kontroll mimics an HEK293T Zellen Co-transfected, gefollegt vun luciferase reporter assay. Der relativer luciferase Aktivitéit vun pMIR /SSX2IP-3'UTR Mir iwwerpréift nächst der Afloss vum Mir-338-3p op den Ausdrock vun SSX2IP, vun der mRNA an FAQ Niveau vun SSX2IP Moossen no SGC-7901 Zellen mat Mir-338-3p oder Kontroll mimics transfecting. Als zu Lalumi gewisen. 7C-D, hu Mir-338-3p keen Effet op d' SSX2IP VerfÜgung Niveau mRNA wéi vun qPCR gemooss, mä ëmmer däitleche Minus vun der SSX2IP FAQ Verglach mat Kontroll-transfected. Dës Resultater hindeit, datt Mir-338-3p Hien den Ausdrock vun SSX2IP am Post-transcriptional Niveau, wahrscheinlech duerch de 3'UTR vun SSX2IP obligatoresch. Beispill, mir hunn och déi capase-3 an procasepase-3, zwee wichteg apoptosis Genen, sech unzepassen ofgeholl (Figebam. 7C). VerfÜgung 8. D'Expression vum Mir-338-3p ass Inversely soll mat der Expression Level vun SSX2IP Protein an Gastric Cancer VerfÜgung Mir-338-3p Minus vun gastric Kriibs reglementéiert an SSX2IP ass zu engem Zil Gentherapie vum Mir-338 ënnerstëtzt -3p, et gefördert eis ze spekuléieren, datt SSX2IP overexpression net-entholl Stoffer zu gastric Kriibs Stoffer a relativ zu reagéiert ginn. VerfÜgung Immunohistochemical Analyse vun SSX2IP antigen réischt d'Situatioun vun staining fir SSX2IP FAQ zu entholl Stoffer an ë.a. Net-entholl Stoffer zu 66 gastric Kriibs samples.65% (43/66) vun gastric Kriibs Stoffer ugewisen nik immuostaining fir SSX2IP FAQ Verglach mat reagéiert Net-entholl Stoffer. Besonnesch, 84% (31/37) vun gastric Kriibs Stoffer ugewisen nik immunostaining am GC Echantillon vun der Raumstatioun-338-3p niddereg-Ausdrock Grupp, während d'Donnéeën 41% (12/29) am Mir-338-3p ass héich-Ausdrock Grupp. Sou, confirméiert d'Analyse vun den Ausdrock vun Mir-338-3p an SSX2IP zu gastric Kriibs Stoffer d'Existenz vun ëmgedréit, et gesäit Korrelatioun tëschent den Ausdrock vun Mir-338-3p a seng Zil- Gentherapie SSX2IP (Person Chi-Feld Test: P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, Korrelatioun Spearman: r = -0,442, P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, Lalumi 8) VerfÜgung 9... Ectopic Expression vun SSX2IP Marine de ëmmer Phenotypes vun dene-produzéiert Mir-338-3p am GC BTS VerfÜgung Wann SSX2IP enger haapt Ziel vum Mir-338-3p am GC, ectopic Ausdrock vun SSX2IP opgeléist ass d'phenotypes Rettungsplang soll vum Mir-338-3p iwwer Produktioun vun GC Zellen verursaacht. Fir Test dëser Iddi, an SSX2IP Ausdrock Vecteure oder eidel Vecteure war individuell an SGC-7901 transfected, gefollegt vun cytological assays Zell Prolifératioun, Migratioun, Iwwerfall a apoptosis ze moossen. Wéi erwaart, overexpression vun SSX2IP deelweis reverses oder vollstänneg der inhibitory Effet vum Mir-338-3p am GC Zellen op all Aspekt mir (Figebam. 9 A-D) iwwerpréift. Op der aner Hand, huet SSX2IP keen Afloss op den Ausdrock vun Mir-338-3p (Figebam. S5 am Fichier S1). Sou, ofgeschloss mir datt de Kriibs suppressor Funktioun vum Mir-338-3p am GC ass op d'mannst deelweis duerch seng Zil- Gentherapie SSX2IP suppressing. VerfÜgung An dëser Etude, fonnt mir dass déi niddreg -expression vum Mir-338-3p war klinesch mat groussen entholl Gréisst, méi lymph Node Metastasen, déif lokal Invasioun an fortgeschratt TNM Etapp assoziéiert. Um cytological Niveau, an-Regulatioun vum Mir-338-3p inhibited Prolifératioun, Kolonie Opstellung, Iwwerfall a Migratioun vun gastric Kriibs Zellen. Desweideren, iwwer-ausdrécken Mir-338-3p zu gastric Kriibs Zellen bedeitend reduzéiert tumorigenesis an Sauna Mais zu VIVO VerfÜgung. Geholl zesummen, eis Resultater proposéiere staark entholl suppressor Roll vum Mir-338-3p fir gastric Kriibs. VerfÜgung MiRNAs hunn als kruziaalt entholl-verbonne reglementaresche Faktoren kuerzem unerkannt ginn. Obwuel de reglementaresche Mechanismus vun miRNAs Ausdrock vun tumorigenesis nach net kloer ass, huet epigenetic Reglement ugeholl gouf eng wichteg Roll ze spillen [31], [32]. DNA methylation existeiert haaptsächlech an der CpG Insel allgemeng an der Promoteur Regioun vun der Gentherapie läit, ongeféier 70% vun de Promoteur Regiounen am mënschleche Nepgen ass räich an CpG Insel [37]. D'reduzéiert Ausdrock vu Mir-34b, Mir-129 an Mir-10b sinn all déi hypermethylation zu Promoteuren [38], [39] verursaacht. Konsequent mat dëser Virstellung, war d'methylation Niveau vun CpG Insel Mir-338-3p zu Stoffer gastric Kriibs jo méi séier wéi déi vun de reagéiert bascht Net-entholl Stoffer, suggeréiert datt Mir-338-3p epigenetically am GC entsat ass. D'Ursaach vun dëser epigenetic Hammers vum Mir-338-3p zu gastric Kriibs bleift Synch, a mir spekuléieren, datt Facteure wéi CagA, déi epigenetically virdrun gemellt gouf zu dem Wëllen vun microRNAs zu gastric Kriibs Afloss [40], an dës Regelung deelhuelen kann . Wichtegst, ass d'zwéinHyperfeinstrukturniveaue-methylation Status vum Mir-338-3p Promoteur e Potential uweist fir gastric Kriibs Diagnos. VerfÜgung Well miRNAs Funktioun duerch den Ausdrock vun hirem afgerappt Genen Regulatioun, de Schlëssel Fro betreffend wéi Mir-338- 3p dréit zu GC ass déi Gene (s) en reguléieren. VerfÜgung Hei hu mer festgestallt SSX2IP als eng wichteg Roman Zil vum mir-338-3p, a gëtt souwuel Zesum- menaarbecht mat histological Beweiser proposéiert de entholl-Spur Roll vun SSX2IP am GC. Vill Studien uginn dass SSX2IP ass eng grouss Servicer sinn Leukämie-verbonne antigen an e Potential immunotherapy Zil fir Leukämie [33] - [35]. Wichtegst, SSX2IP war an eiser leschter Studie gewisen der motility, Iwwerfall a Migratioun an Chimiotherapie Resistenz vun hepatoma Zellen ze förderen, hir wichteg Roll an der Entwécklung an Metastasen ugëtt. Seng homologous Gentherapie zu Nager ass ADIP VerfÜgung (afadin DIL Domain-proposéiert FAQ), de Aminosaier Haaptrei vun ADIP FAQ zu Maus an Grenzwäerter zougedréckt a 88% an 87% Identitéit mat SSX2IP FAQ, bzw.. ADIP zu Zell-Zell en der adherens junctions, an et kann een duerch activating Rac1 duerch Vav2 [41], [42] Zell Mobilitéit förderen. Et gëtt spekuléiert, dass SSX2IP konnt Zell motility, Iwwerfall a Metastasen duerch activating Rac1 förderen. VerfÜgung Spannen, den Ausdrock vun Rac1 zu Stoffer gastric Kriibs méi héich war, wéi an de reagéiert bascht Net-entholl Stoffer, war seng Ausdrock Niveau bedeitend mat TNM Etapp assoziéiert. An 7 gastric Kriibs Zell Linnen, huet den Ausdrock vun Rac1 héich wéi zu gastric mucosal epithelial Zell Linn (GES-1) [43], dee mat de Phänomen coincided war mir mat Mir-338-3p zu gastric Kriibs Zellen an Stoffer fonnt. Dës Resultater hindeit, datt Mir-338-3p, wéi eng inhibitory Faktor vun gastric Kriibs, kann de Begrëff vun Zil- Gentherapie SSX2IP reduzéieren zu Rac1 Aktivéierung oofgesinn. D'Abannung vun SSX2IP zu Multiple Cancers verstärkt déi biologesch a Fro gestallt Bedeitung vun der Raumstatioun-338-3p /SSX2IP CASCADE zu Kriibs Entwécklung, an huet eis Suite de Status vun Mir-338-3p /SSX2IP an aner Zorte vun Cancers fir weider z'ënnersichen. Identifikatioun aner potentiell Ziler vum Mir-338-3p ass och eng Aarbecht an Fortschrëtt. VerfÜgung Am Resumé, dës Etude beschriwwen éischt Mir-338-3p als entholl suppressor, déi dacks duerch epigenetic hypermethylation um Promoteur entsat ass Regioun an gastric Cancers. System, Mir-338-3p bremst den metastatic Charakteristike vun GC Zellen wéi Prolifératioun, Migratioun an Invasioun kënschtlech VerfÜgung, an verklengert der tumorigenicity vun GC Zellen vun apoptosis Pinguin zu VIVO VerfÜgung. Desweideren, identifizéiert mir SSX2IP als kruziaalt Zil- Gentherapie vum Mir-338-3p am GC Entwécklung.
Aféierung
spontan a Methode VerfÜgung
luciferase an 60 pmol vun der Raumstatioun-338-3p oder Kontroll mimics. Zellen sech no 48 h transfection recoltéiert. Liichtkäfer VerfÜgung a Renilla VerfÜgung luciferase Aktivitéiten waren andems Dual-luciferase reporter assay (Promega) laut den Hiersteller d'Instruktioune gemooss. VerfÜgung Resultater VerfÜgung
0.001), an der 95% Vertraue November war 0,690 bis 0.856 (Figebam. 2E). Sou, konnt de methylation Status vum Mir-338-3p CpG Insel als potentiell molekulare Bewaacher fir GC déngen. VerfÜgung
&Si besteet; 0,05, ** P &Si besteet; VerfÜgung 0.01). Fir weider den Effet vum Mir-338-3p op Zell Wuesstem, Soft-ager Kolonie Opstellung assay Markenzeeche war gesuergt. Mir hunn erausfonnt, datt d'Zuel vun de Kolonien aus SGC-7901 Zellen transfected mat Mir-338-3p mimics dass vill manner war wéi vun der Kontroll Grupp (Lalumi 3B-C.) (** P VerfÜgung &Si besteet; 0.01) . Konsequent, inhibition vun Mir-338 der Verbreedung vun SGC-7901 (.; 0,05 Lalumi S2 am Fichier S1, * P VerfÜgung &Si besteet) entschlof. Ähnlech Resultater goufen an der Kontroll GES-1 Zellen (.; 0,05 Lalumi S1 A-B an Fichier S1, * P VerfÜgung &Si besteet) observéiert. Am Resumé, proposéiert dëse Resultater dass Mir-338-3p den Taux vun zwee GC Zellen an gastric epithelial Zellen zu VerfÜgung kënschtlech.
4 Hien. Mir-338-3p bremst Migratioun a Missiounen GC BTS kënschtlech
Diskussioun VerfÜgung
Haushënn onwahrscheinlech SARS-CoV-2 ze iwwerdroen,
Änneren iewescht respiratorescht Mikrobiom bei Kanner am Zesummenhang mat der SARS-CoV-2 Empfindlechkeet
Darmbakterien verbonne mat metabolesche Verännerungen an Autismus an enger neier Studie
Mouthwash beaflosst d'Auswierkunge vun der Übung
Eng Multi-Omics Approche fir d'Entwécklung vun Drogen géint COVID-19
Darmbakteriell Profil kann den Darmschued no der Radiotherapie viraussoen
Kuerzkette Fettsäure -Ergänzung verbessert den Erhuelung vum Schlag,
Mais Studie weist Ergänzung vum Kierper vu kuerze Ketten Fettsäuren kann dSchlagerhuelung verbesseren, laut Fuerschung bei Mais kierzlech verëffentlecht am JNeurosci. Kuerzkette Fettsäure-Ergänzung ka
Eng schmuel Esophagus opmaachen
Wann Dir laangfristeg Probleemer mat Heartburn hutt, dëst kann Narben an Ärer Speiseröh verursaacht hunn. Den heefege Reflux vun der Magesäure ass zouzeschreiwen. Elo, dNarbegewebe huet e schmuele Por
Kaffi hëlleft gesond Darmmikroben z'entwéckelen an hëlleft den Darmbewegungen
Et gouf anekdotesch Beweiser datt Kaffi Drénken bei hirer Moiesbecher fir normal Moiesdarmbewegungen schwieren. Eng nei Studie vu Fuerscher an Texas huet gewisen datt Kaffi wierklech an den Darmbewegu