PLOS NËMMEN: microRNA-9 Hien der prolifération, Missiounen a Metastasen vun Gastric Cancer BTS duerch gezielt Cyclin D1 an Ets1

Wat VerfÜgung

rezenten Beweiser weist datt verännert microRNA-9 (Mir-9) Ausdrock vun de Werdegang vun gastric Kriibs agebonne gëtt. Allerdéngs bleiwen déi exakt Roll an Basisdaten Mechanisme vum Mir-9 an der Prolifératioun, Iwwerfall a Metastasen vun gastric Kriibs nach onbekannt. An dëser Etude, gouf Mir-9 gin verwandelt-reglementéiert an inversely soll mat den Ausdrock vun cyclin D1 an v-Ets erythroblastosis Virus E26 oncogene homolog 1 (Ets1) zu gastric Kriibs Stoffer an Zell Linnen fonnt. Bioinformatik Analyse réischt de putative Mir-9 bindend Siten an der 3'-untranslated Regiounen (3'-UTR) vun cyclin D1 an Ets1 mRNA. Ectopic Ausdrock oder knockdown vum Mir-9 schéinen responsively verännert Ausdrock vun cyclin D1, Ets1 an hir afgerappt Ziler phosphorylated retinoblastoma an Matrixentgasung metalloproteinase 9 zu cultured gastric Kriibs Zell Linnen SGC-7901 an AGS. An der luciferase reporter System, cibléiert Mir-9 direkt d'3'-UTR vun cyclin D1 an Ets1, an dësen Effekter sech duerch mutating der Mir-9 bindend Siten ofgeschaf. Iwwer-Ausdrock vun Mir-9 Trupen dem Prolifératioun, Invasioun, an Metastasen vun SGC-7901 an AGS Zellen kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung. Restauratioun vum Mir-9-mediated verwandelt-Regulatioun vun cyclin D1 an Ets1 vun flüchteg transfection, gerett de Kriibs Zellen aus Ofsenkung Prolifératioun, Migratioun an Invasioun. Ausserdeem, gefördert anti-Mir-9 inhibitor d'Prolifératioun, Migratioun an Invasioun vun gastric Kriibs Zellen, iwwerdeems Sax Ugrëff vun cyclin D1 oder Ets1 deelweis d'Auswierkunge vun Mir-9 iwwer-Ausdrock phenocopied. Dës Donnéeë weisen, datt Mir-9 den Ausdrock vun cyclin D1 an Ets1 via de bindend Siten op hier 3'-UTR Hien, also d'Prolifératioun, Iwwerfall a Metastasen vun gastric Kriibs inhibiting VerfÜgung

Fro:. Zheng L, Qi T, Yang D, Qi M, Li D, Xiang X, et al. (2013) microRNA-9 Hien der prolifération, Missiounen a Metastasen vun Gastric Cancer BTS duerch Cyclin D1 gezielt an Ets1. PLoS NËMMEN 8 (1): e55719. Doi: 10.1371 /journal.pone.0055719 VerfÜgung

Redakter: Alejandro H. Corvalan, Pontificia Universidad Catolica de Chile, Chile VerfÜgung

Arnaque: 14. September 2012; Akzeptéiert: 29. Dezember 2012; Publizéiert: 31. Januar 2013 zu

Copyright: © 2013 Zheng et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung

Funding:. Der Ënnerstëtzung vun der National Natural Science Foundation of China (Nr 30600278, Nr 30772359, Nr 81071997, Nr 81072073, Nr 81272779), plangen fir New Joerhonnert exzellent Talenter am University (NCET-06-0641), wessenschaftlech Fuerschung Foundation fir de hannescht Export Chinese Geléiert (2008-889), an de Grondrechter Research Suen fir de Central Universitéiten (2012QN224). D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung

Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung

Aféierung VerfÜgung

Gastric Kriibs ass déi véiert stäerkste gemeinsam Kriibs an d'Welt [1]. An trotz der Verbesserung vun Operatiouns- an multimodal Therapie, déi hätt vun fortgeschratt gastric Kriibs bleift nach aarm wéinst dem Terrain, Iwwerfall a Metastasen, mat engem 5-Joer Iwwerliewe Taux ënnert 30% [1]. Eng besser Kenntnisser vun de Mechanismen entholl Werdegang Basisdaten ass wierklech Roman Paradigma fir d'Diagnos a Behandlung vun gastric Kriibs [2] ze entdecken. MicroRNAs (miRNAs), engem kuerzem identifizéiert Kategorie vu klengen a héich noncoding RNAs conserved, kann an der Post-transcriptional Regulatioun vun der Gentherapie Ausdrock duerch partiell ergänzen matmaachen mat den 3 "untranslated Regiounen (3'-UTRs) vun Zil- mRNA bindend, geplatzt respektiv Repressioun oder mRNA ofgeschnidden [3]. Beweiser enstanen weist dass miRNAs vun der biologescher Prozesser am Zesummenhang mat apoptosis, Prolifératioun, dat, Iwwerfall a Metastasen Équipe sinn, iwwerdeems Dereguléierung vun deem un Kriibs Initiatioun an Werdegang entscheedende ass [3]. Et ass am Moment dréngend de Rollen vun miRNAs an hir Zil- Genen vun entholl Werdegang vun experminteller Modeller ze ermëttelen. VerfÜgung

Am Mënsch gastric Kriibs, eng Zuel vun miRNAs gin aberrantly iwwer-ausgedréckt gemellt goufen oder erof-reegelen während de Werdegang vun gastric Kriibs, dorënner Mir-21 [4], Mir-15B [5], Mir-16 [5], an Mir-101 [6]. Dës miRNAs Leeschtung oncogenic oder entholl-suppressive Rollen vun der Regulatioun vun Zell Wuesstem, Migratioun an Invasioun duerch hir Zil- Genen repressing. Zum Beispill, ass oncogenic Mir-21 aberrantly zu gastric Kriibs iwwer-ausgedréckt, a wäert d'Verbreedung an invasiveness vun gastric Kriibs Zellen vun gezielt puer-Pinguin cysteine-räiche FAQ mat Kazal motifs [4]. Mëttlerweil sinn Mir-15B an Mir-16 verwandelt-reglementéiert gastric Kriibs, a via gezielt B-Zell Leukämie /lymphoma 2 [5] bis multidrug Resistenz vun gastric Kriibs Zellen vun modulation vun apoptosis bäidroen. Mir-101 ass erof-reglementéiert gastric Kriibs Stoffer an Zell Linnen, iwwerdeems ectopic Ausdrock vu Mir-101 bremst bedeitend d'Prolifératioun, Migratioun an Invasioun vun gastric Kriibs Zellen vun enhancer vun zeste homolog gezielt 2, cytochrome c oxidase subunit II, a Servicer sinn Zell Leukämie Haaptrei 1 [6]. Dofir, huet et e Schwéierpunkt gouf weider un den Ausdrock a Funktioun vun miRNA an der entholl Biologie vun gastric Kriibs entdecken. VerfÜgung

MicroRNA-9 (Mir-9) éischter als eng vun den essentielle Reglementatioun fir d'Entwécklung identifizéiert ass , Physiologie an wirklech vun nervös System zu puer Organismen, dorënner Villäicht sollte VerfÜgung, zebrafish, an Mamendéieren [7] - [9]. Eng Serie vum Kierzunge Studie berichten iwwer propedeutësch verännert Mir-9 Ausdrock mat der Entwécklung an Werdegang vun Cancers assoziéiert ass [10] - [14]. Virdrun Studie weisen, dass Mir-9 wesentlech verwandelt-reglementéiert gastric Kriibs, potenziellen Rollen an entholl Werdegang ausgeluegt [15] - [18]. Et ass kloer och, dass Mir-9 kënnt via gezielt caudal Typ homeobox 2 (CDX2) [19] an NF-Kappa B (NF-κB) [16] d'Prolifératioun vu gastric Kriibs Zellen well. Allerdéngs, Adjudant der geneeër Funktioun an Basisdaten Mechanisme vum Mir-9 vun de Werdegang vun gastric Kriibs nach weider Enquête. An dëser Etude, déi beweisen mir, fir d'éischte Kéier, datt Mir-9 direkt cyclin D1 an v-Ets erythroblastosis Virus E26 oncogene homolog 1 (Ets1) Ziler, an Hien d'Prolifératioun, Iwwerfall a Metastasen vun gastric Kriibs Zellen zu kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung. VerfÜgung

Resultater VerfÜgung

Mir-9 war verwandelt-reglementéiert an inversely mat dem Ausdrock vun cyclin D1 an Ets1 zu gastric Kriibs Stoffer soll an Zell Linnen VerfÜgung

fir d'Mir-9 Ausdrock vun gastric Kriibs, gastric Kriibs Stoffer an bascht Net-neoplastic mucosa ermëttelen sech aus 86 Primärschoul Fäll gesammelt. Real-Zäit grouss ëmgedréint Transkriptiouns Hinnen alleguer (RT-Hinnen alleguer) Teamchef Mir-9 war verwandelt-reglementéiert gastric Kriibs Stoffer wéi dat zu bascht Net-neoplastic mucosa ( P VerfÜgung = 0,001, Figebam. 1A). De Mir-9 Ausdrock war wesentlech méi déif an gastric Kriibs Fäll mat verstäerkter gastric Mauer Invasioun ( P VerfÜgung &Si besteet; 0.001), lymph Node Metastasen ( P VerfÜgung &Si besteet; 0.001), wäit Metastasen ( P VerfÜgung = 0.022), an fortgeschratt TNM Etapp ( P VerfÜgung = 0.01) (Table S1). Am Géigesaz, héich cyclin D1 an Ets1 ët Niveauen goufen gastric Kriibs Stoffer ( P VerfÜgung &Si besteet; 0,0001 an P VerfÜgung &Si besteet;.. 0,0001, respektiv, Lalumi 1B an Lalumi 1c) fonnt. Et gouf en ëmgedréit, et gesäit Korrelatioun tëscht Mir-9 Ausdrock an cyclin D1 ët Niveauen am gastric Kriibs Stoffer ( P VerfÜgung &Si besteet;. 0,001, Lalumi 1D). Ausserdeem, war en ëmgedréit, et gesäit Korrelatioun tëscht Mir-9 Ausdrock an Ets1 ët Niveau och an dëse Kriibs Stoffer bemierken ( P VerfÜgung &Si besteet;. 0,001, Lalumi 1E). Ënneschten Mir-9 Ausdrock an héich ët Niveau vun cyclin D1 an Ets1 sech zu gastric Kriibs Zell Linnen ewéi déi zu normal gastric epithelial GES-1 Zellen [20] (Figebam. 1F) observéiert. Immunohistochemical staining war standing den Ausdrock vun cyclin D1 an Ets1 an dëse Kriibs uplanzen (Figebam. S1) ze observéieren. Nuclear cyclin D1 war an 26/86 (30.2%) Fäll, iwwerdeems nuklear an Zytoplasma staining vun Ets1 bemierken war an 58/86 (67.4%) Fäll (Table S1) observéiert. D'immunoreactivity vun cyclin D1 an Ets1 war wiesentlech méi héich an gastric Kriibs Fäll mat verstäerkter gastric Mauer Invasioun ( P VerfÜgung &Si besteet; 0,001 an P VerfÜgung = 0,001), lymph Node Metastasen ( P VerfÜgung &Si besteet; 0,001 an P VerfÜgung &Si besteet; 0,001), wäit Metastasen ( P VerfÜgung &Si besteet; 0,001 an P VerfÜgung &Si besteet; 0,001), an fortgeschratt TNM Etapp ( P VerfÜgung &Si besteet; 0,001 an P VerfÜgung = 0.004) (Table S1). Ënneschten Mir-9 Ausdrock war zu gastric Kriibs Stoffer mat héichen immunostaining vun cyclin D1 ( P VerfÜgung &Si besteet; 0,0001, Lalumi 1G.) Observéiert oder Ets1 ( P VerfÜgung &Si besteet;. 0,0001, Lalumi 1H ). Dës Resultater uginn dass Mir-9 war verwandelt-reglementéiert an inversely mat Ausdrock vun cyclin D1 an Ets1 zu gastric Kriibs Stoffer an Zell Linnen soll. VerfÜgung

Mir-9 erof-reglementéiert d'Expressioun vun cyclin D1 an Ets1 duerch Post -transcriptional Repressioun VerfÜgung

d'Hypothes ze ermëttelen dass Mir-9 kann de Begrëff vun cyclin D1 an Ets1 zu gastric Kriibs Afloss, computational Cepheid war vun miRNA Datenbanken gesuergt. Potential bindend Siten vum Mir-9 mat héije complementarity waren 2974-2995 vun der cyclin D1 3'-UTR a 2648-2670 vun der Ets1 3'-UTR op Base bemierken (Figebam. 2A). Fir déi direkt Effete vun Mir-9. op den Ausdrock vun cyclin D1 an Ets1 zu gastric Kriibs Zellen ermëttelen, standing mir de miRNA iwwer-Ausdrock Experimenter. Stabil transfection vum Mir-9 Virleefer an SGC-7901 an AGS Zellen schéinen Erhéijung vum Mir-9 Niveauen (Figebam. S2). Western blot, RT-Hinnen alleguer an real-Zäit grouss RT-Hinnen alleguer bewisen, dass iwwer-Ausdrock vun Mir-9 schéinen ofgeholl FAQ a transcriptional Niveau vun cyclin D1 an Ets1 zu gastric Kriibs Zellen wéi déi transfected mat negativen Kontroll Vecteure (mierkt) ( Figebam. 2B, Figebam. 2C, an Figebam. 2D). Zousätzlech, de Niveau vun phosphorylated retinoblastoma (pRB, eng matgeholl effector vun cyclin D1) [21] an Matrixentgasung metalloproteinase 9 (MMP-9, eng matgeholl Gentherapie vun Ets1) [22] goufen Mir-9 iwwer-ausdrécken Kriibs Zellen rofgaang (Figebam. 2B, Figebam. 2C, an Figebam. 2D). Fir weider der suppressive Roll vum Mir-9 an der Expressioun vun cyclin D1 an Ets1 iwwerpréifen, standing mir de Bord-9 knockdown Experimenter vun transfection vun Anti-Mir-9 oder negativ Kontroll (anti-NC) inhibitors an GES-1, SGC -7901 a AGS Zellen. Transfection vun Anti-Mir-9 inhibitor ofgeholl selbstverständlech de endogenous Mir-9 Ausdrock (Figebam. S3A), an upregulated d'FAQ Niveau vun cyclin D1, pRB, Ets1 an MMP-9 wéi déi transfected mat anti-NC (Figebam. 2E an Figebam. S4A). Real-Zäit grouss RT-Hinnen alleguer analyséiert de coopération ët Niveau vun cyclin D1, Ets1 an MMP-9 zu cultured Zellen transfected mat anti-Mir-9 inhibitor zougedréckt, wann zu deenen Verglach transfected mat anti-NC (Figebam. 2F an Figebam. S4B). Am Allgemengen, hien huet dës Resultater dass Mir-9 gefierwt den Ausdrock vun cyclin D1 an Ets1 duerch Post-transcriptional Repressioun inhibited. VerfÜgung

Mir-9 direkt geziilte cyclin D1 an Ets1 zu gastric Kriibs Zellen VerfÜgung

Fir festzestellen, ob Mir-9 konnt géint sech den Ausdrock vun cyclin D1 an Ets1 vun gezielt seng décisiv Siten an der 3'-UTR, déi Hinnen alleguer Produiten wouvun intakt Zil- Siten oder stattfannen vum Mir-9 Som Unerkennung Message (Figebam. 3A) hin an der luciferase reporter Vecteure. D'plasmids waren an gastric Kriibs Zellen transfected stably mat negativen Kontroll Vecteure (mierkt) transfected oder Mir-9 Virleefer. D' Renilla VerfÜgung luciferase Aktivitéiten normalized zu deene vun Liichtkäfer huet bedeitend reduzéiert an SGC-7901 an AGS Zellen stably transfected mat Mir-9 Virleefer (Figebam. 3B), an dës Auswierkunge goufen duerch mutating der putative ofgeschaf Mir-9 verbindlech Siten am 3'-UTR vun cyclin D1 an Ets1 (Figebam. 3B). Desweideren, knockdown vum Mir-9 mat anti-Mir-9 inhibitor der luciferase Aktivitéiten am GES-1 fräi, SGC-7901 an AGS Zellen (Figebam. 3C an Figebam. S4C), während stattfannen vum Mir-9 Unerkennung Site ofgeschaf dës Auswierkunge (Figebam. 3C an Figebam. S4C). Dës Resultater uginn dass Mir-9 direkt a speziell mat der Zil- Siten an der 3'-UTR vun cyclin D1 an Ets1 Experten. VerfÜgung

Mir-9 Trupen dem kënschtlech VerfÜgung Prolifératioun vu gastric Kriibs Zellen duerch cyclin D1 VerfÜgung gezielt

Well virun Beweiser gewisen, datt Mir-9 der cyclin D1 Ausdrock, an där d'Fakten inhibited datt D1 spillt eng kritesch Roll an der Zell Zyklus Werdegang a Verbreedung vu Kriibs Zellen [21] cyclin, mir propagéieren weider d'Auswierkunge vun mir-9 iwwer-Ausdrock a viséieren Gentherapie Restauratioun op cultured gastric Kriibs Zellen. Western blot an real-Zäit grouss RT-Hinnen alleguer uginn dass transfection vun cyclin D1, awer net vun Ets1, gerett der Mir-9-entschlof verwandelt-Regulatioun vun cyclin D1 (Figebam. 4A an Figebam. 4B). An Kolonie Opstellung assay, attenuated Mir-9 iwwer-Ausdrock de Wuesstem vun SGC-7901 an AGS Zellen, wann zu deenen Verglach transfected mat negativen Kontroll Vecteure (mierkt) (Figebam. 4C). Flow uginn cytometry dass Mir-9 iwwer-Ausdrock entschlof Zell Zyklus verhaft um G _{0 /G 1 Phase vun SGC-7901 an AGS Zellen (Figebam. 4D). Zousätzlech, transfection vun cyclin D1, awer net vun Ets1, an SGC-7901 an AGS Zellen restauréiert der Prolifératioun inhibition an Zell Zyklus verhaft entschlof vun iwwer-Ausdrock vun Mir-9 (Figebam. 4C an Figebam. 4D). Wéinst dem iwwerpréift mir d'Effete vun Mir-9 knockdown op GES-1, SGC-7901 an AGS Zellen. Aféierung vun Anti-Mir-9 inhibitor an dësen Zellen schéinen Eck Fähegkeeten vun Prolifératioun (Figebam. S3B) an Zell Zyklus Werdegang (Figebam. S3C). Dës Resultater uginn dass Mir-9 bemierkenswäert der kënschtlech VerfÜgung Prolifératioun an Zell Zyklus Werdegang vun gastric Kriibs Zellen duerch gezielt cyclin D1 opgeléist. VerfÜgung}

Mir-9 attenuated der kënschtlech
Wanderung an Invasioun vun gastric Kriibs Zellen duerch Ets1 VerfÜgung gezielt

Well virdrun Studien déi wichteg Roll vun Ets1 an der Invasioun an Metastasen vun Kriibs Zellen weg [23], [24], mir propagéieren weider d'Auswierkunge vun miR- 9 iwwer-Ausdrock a viséieren Gentherapie Restauratioun op der Migratioun an Invasioun vun gastric Kriibs SGC-7901 an AGS Zellen. Western blot an real-Zäit grouss RT-Hinnen alleguer uginn dass transfection vun Ets1, awer net vun cyclin D1, gerett der Mir-9-entschlof verwandelt-Regulatioun vun Ets1 (Figebam. 5A an Figebam. 5B). An transwell Migratioun assay, presentéiert gastric Kriibs Zellen stably transfected mat Mir-9 Virleefer en leider Migratioun bliwwe wéi déi transfected mat negativen Kontroll Vecteure (mierkt) (Figebam. 5C). An matrigel Invasioun assay, Mir-9 iwwer-Ausdrock attenuated der invasiveness vun SGC-7901 an AGS Zellen (Figebam. 5D). Zousätzlech, transfection vun Ets1, awer net vun cyclin D1, an SGC-7901 an AGS Zell Linnen restauréiert der Mir-9-meditaed inhibition op der Migratioun an Invasioun (Figebam. 5C an Figebam. 5D). Ausserdeem, iwwerpréift mir d'Effete vun Mir-9 knockdown op GES-1, SGC-7901 an AGS Zellen. Transfection vun Anti-Mir-9 inhibitor schéinen Eck Wanderung an Invasioun vun deenen Zellen (Figebam. S3D an Figebam. S3E). Dës Resultater uginn dass Mir-9 bemierkenswäert der attenuated kënschtlech VerfÜgung Wanderung an Invasioun vun gastric Kriibs Zellen duerch gezielt Ets1. VerfÜgung

Mir-9 attenuated de Wuesstem an Metastasen vun gastric Kriibs Zellen zu VIVO

Mir der Efficacitéit vum Mir-9 nächst propagéieren géint entholl Wuesstem an Metastasen zu VIVO VerfÜgung. Stabil transfection vum Mir-9 Virleefer an SGC-7901 oder AGS Zellen schéinen ofgeholl Wuesstem a Gewiicht vun subcutaneous xenograft erhéijen an athymic Sauna Mais, wann zu deenen Verglach stably transfected mat negativen Kontroll Vecteure (mierkt) (Figebam. 6A an Figebam. 6B ). Ausserdem, huet den Ausdrock vun cyclin D1, Ets1 an afgerappt MMP-9 verréngert stabil transfection vum Mir-9 Virleefer (Figebam. 6C). D'CD31-positiv mengen Zuchstreck Dicht war bannent erhéijen vun Sprëtz vun Kriibs Zellen stably transfected mat Mir-9 Virleefer (Figebam. 6D) gemaach reduzéiert. An der experimentell Metastasen Studien, SGC-7901 oder AGS Zellen stably mat Mir-9 Virleefer etabléierten statistesch manner haett metastatic Kolonien transfected wéi mierkt Grupp (Figebam. 6E). Dës Resultater ugeholl, datt Mir-9 de Wuesstem an Metastasen vun gastric Kriibs Zellen inhibited zu VIVO VerfÜgung. VerfÜgung

Knockdown vun cyclin D1 an Ets1 phenocopied Mir-9 iwwer-Ausdrock-mediated inhibition op d'Prolifératioun , Migratioun an Invasioun vun gastric Kriibs Zellen kënschtlech

Well virun Resultater déi negativ Regulatioun vun cyclin D1 an Ets1 Ausdrock vum mir-9 uginn, mir dass knockdown vun cyclin D1 an Ets1 Hypothes kéint vollt ähnlechen Auswierkungen op cultured gastric Kriibs Zellen. Déi kleng interfering RNAs (siRNAs) d'Zeechesaatz Regioun vun cyclin D1 an Ets1, si-CCND1 a si-Ets1 gezielt, waren an SGC-7901 an AGS Zellen entworf an transfected. Transfection vun si-CCND1 a si-Ets1 schéinen ofgeholl an Ausdrock vun cyclin D1, pRB, Ets1 an MMP-9 zu gastric Kriibs Zellen, respektiv, wann am Verglach zu deenen transfected mat Alaister siRNA (si-Scb) (Figebam. 7A, Lalumi . 7D an Figebam. S5). Knockdown vun cyclin D1 Trupen dem Zouhuelen an entschlof Zell Zyklus verhaft um G _{0 /G 1 Phase vun SGC-7901 an AGS Zellen (Figebam. 7B an Figebam. 7C). Zousätzlech, knockdown vun Ets1 zu SGC-7901 an AGS Zellen schéinen ofgeholl Capacitéite vu Migratioun an Invasioun (Figebam. 7 an Figebam. 7F). Dës Resultater ugeholl datt knockdown vun cyclin D1 an Ets1 phenocopied (déi ähnlech phenotypes haat bis) Mir-9 iwwer-Ausdrock vun inhibiting d'Prolifératioun, Migratioun an Invasioun vun gastric Kriibs Zellen kënschtlech VerfÜgung. VerfÜgung}

Diskussioun VerfÜgung

Et gutt etabléiert ass dass d'Mir-9 Ausdrock Profil an Kriibs op Otemschwieregkeeten Verdeelung berout. An der Primärschoul Gehir erhéijen, ass Mir-9 nik an Funktiounen als e wesentleche Faktor Mä carcinogenesis [10]. Mir-9 ass och an cervical Kriibs iwwer-ausgedréckt [11], seng entholl Promoteur Roll an entholl Entwécklung an Werdegang suggeréiert. Allerdéngs ass Mir-9 zu méi mënschlech Cancers-verwandelt reegelen, dorënner pancreatic Kriibs [12], spillt Kriibs [13] an colorectal Kriibs [14], an ass mat der malignant Werdegang vun Broscht Kriibs [25] an colorectal Kriibs verbonne ( 14). Luo et al. VerfÜgung bemierken der verwandelt-Regulatioun vum Mir-9 an 24 gastric Kriibs uplanzen [15], déi duerno an 9 [16] bestätegt gouf, 72 [17], an 13 [18] gastric Kriibs Fäll. Allerdéngs, Inoue et al. VerfÜgung der upregulation vum Mir-9 Rapport 5 gastric Kriibs Patienten vun real-Zäit Hinnen alleguer-baséiert miRNA flamenden Ofgrond [26], an deem verschidden Opklärung an Mir-9 Ausdrock Profil kann wéinst ginn zu der heterogeneity vun limitéiert uplanzen. An dëser Etude, déi beweisen mir dat Mir-9 an 86 Primärschoul gastric Kriibs uplanzen bedeitend erof-reglementéiert ass wéi am bascht Net-neoplastic Stoffer, déi mat virdrun Conclusiounen konsequent ass [15] - [18]. Wichtegst, confirméieren mir och, datt Mir-9 Ausdrock inversely mat de Medeziner Etappen, Invasioun, an Metastasen vun gastric Kriibs verbonnen ass. An Mënschen, ass der eeler Mir-9 vun dräi onofhängeg Genen encoded, Mir-9-1, Mir-9-2 an Mir-9-3, Wëllt um chromosomes 1, 5 a 15, respektiv [27]. Virdrun Studie weisen, dass d'verwandelt-reegelen Mir-9 Ausdrock vun gastric Kriibs ass wéinst aberrant hypermethylation vun de Promoteur Regioun vum Mir-9 Zeechesaatz Genen [17]. Den Zerfall, ass aberrant hypermethylation vum Mir-9 Famill Genen och zu e puer Primärschoul erhéijen mat lymph Node Metastasen, wéi Colon Kriibs, haett Kriibs, Broscht Kriibs, an melanoma [14], gemellt [28]. Wichtegst, déi aktuell Etude confirméiert der ëmgedréit, et gesäit Korrelatioun tëscht Mir-9 Niveauen an den Ausdrock vun cyclin D1 an Ets1 zu gastric Kriibs Stoffer, dass déi zousätzlech cyclin D1 an Ets1 kann negativ duerch Mir-9 reglementéiert gin. VerfÜgung

D'Funktioun an Zil- Genen vun mir-9 sinn entholl-spezifesch an ofhängeg op bewosst Kontext. Mir-9 ass gebass E-cadherin Ausdrock vun Broscht Kriibs [29], déi zu der Nuklearenergie br vun β-catenin a seng décisiv mat Transkriptiouns Faktoren T-Zell Faktor /lymphoid enhancer Faktor 1, an duerno weider-reegelen Transkriptiouns vun eraus Genen déi Zell Prolifératioun an angiogenesis [29] vereinfachen. Gezwongen Mir-9 Ausdrock zu Zell Broscht Kriibs Linnen Resultater och an bedeitend Ausdrock Ännerunge vun Multiple Genen vun der p53-Zesummenhang apoptotic Passerelle [30]. Duerch direkt gezielt NF-κB, ectopic Ausdrock vu Mir-9 bremst den kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung Wuesstem vun spillt Kriibs Zellen [31] an de Wuesstem an Metastasen vun melanoma [32] . An neuroblatoma, iwwer-Ausdrock vun Mir-9 bremst der Invasioun, Metastasen, an angiogenesis vun entholl Zellen duerch Matrixentgasung metalloproteinase gezielt 14 [33]. Wan et al. VerfÜgung gemellt, dass iwwer-Ausdrock vun Mir-9 der inhibited kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung Wuesstem vun gastric adenocarcinoma Zell Linn MGC803 duerch repressing NF-κB am Post-transcriptional Niveau [16]. Allerdéngs, an eng rezent Etude, Rotkrua et al. VerfÜgung uginn dass Mir-9 kéint zu gastric carcinogenesis duerch verwandelt-Regulatioun CDX2, an knockdown vum Mir-9 ofgeholl der kënschtlech Équipe ginn VerfÜgung Prolifératioun vu gastric Kriibs MKN-45 Zellen [19], während hir Conclusiounen muss weider mat Mir-9 iwwer-Ausdrock, Zil- Gentherapie Rettungsplang verstäerkt ginn, an zu VIVO VerfÜgung Studien. Ausserdeem, ass et am Moment kontrovers ob CDX2 spillt eng oncogenic oder entholl suppressor Roll an gastric carcinogenesis [34], [35]. Ausserdem, hun d'Potential Rollen vun Mir-9 an der Invasioun an Metastasen vun gastric Kriibs net sou wäit opgekläert ginn. Sou, d'Funktioun an direkter Ziler vum Mir-9 zu gastric Kriibs weider Enquête. VerfÜgung

An dëser Etude, hien huet mir dat iwwer-Ausdrock vun Mir-9 der Prolifératioun, Migratioun an Invasioun vun gastric Kriibs Zellen attenuated, dat war gläicht dofir deem vun cyclin D1 oder Ets1 knockdown, d'Potential Applikatioun vum Mir-9 als Zil fir d'therapeutics vun gastric Kriibs suggeréiert. Zousätzlech, bestätegt eis Daten dass Mir-9 cyclin D1 an Ets1 zu gastric Kriibs Zellen duerch 3'-UTR luciferase reporter assay direkt cibléiert. Zanter leschte Beweiser weist, datt bestëmmte miRNAs alternativ Gentherapie Ausdrock vun proposéiert mat Promoteuren well kann [36] - [38], d'Potential Rollen vun Mir-9 an der Reunioun vun cyclin D1 an Ets1 Regulatioun duerch mat Promoteuren proposéiert bleift kloer an Adjudant eis weider Enquête. Cyclin D1 ass eng proto-oncogene datt zu der Famill vun G gehéiert _{1 cyclins, a spillt eng wichteg Roll an der Zell Zyklus G 1 S Transitioun vun hire Partner cyclin ofhängeg kinase 4 verbindlechen a 6 bis phosphorylate an inactivate der RB FAQ [21]. Iwwer-Ausdrock vun cyclin ass D1 eng fréi Event zu carcinogenesis zu Mënsch colorectal, esophageal an gallbladder Cancers [39], an ass eng prognostic Luucht mat aarmséileg Iwwerliewe vun esophageal assoziéiert, Broscht, an Duerchfall Infektioun Cancers [39]. Cyclin D1 iwwer-Ausdrock vun mënschlecher Cancers ass duerch verschidde Mechanismen opgekläert, dorënner Frankräich hire Restaurant, post-transcriptional Regulatioun, an post-respektiv FAQ Stabiliséierung [39]. Rezent Beweiser weist dass Mir-16-1 represses cyclin D1 Ausdrock am Post-transcriptional Niveau via verbindlech seng 3'-UTR am Lava ausgetratt Zell lymphoma [40]. An der aktueller Etude, eis bruet huet dass Mir-9-mediated inhibition op Zell Zyklus Werdegang an Zell Prolifératioun vun Restauratioun vun cyclin D1 Ausdrock vun gastric Kriibs Zellen gerett huet, proposéiert, datt d'Identifikatioun vun cyclin D1 als Mir-9 Zil- Gentherapie, vläicht erklären, op d'mannst zu engem Deel, firwat iwwer-Ausdrock vun Mir-9 Trupen dem Zouhuelen vun gastric Kriibs Zellen. VerfÜgung}

Ets1, e Member vun der ETS Famill vun Transkriptiouns Faktoren, Photo'en ze bestëmmter DNA Message engem GGAA wouvun /T Kär Motif [22], a participéiert entholl Invasioun an Metastasen duerch transcriptional Regulatioun vun e puer Genen responsabel fir extracellular Matrixentgasung Remodeling, Migratioun, an Invasioun, wéi Matrixentgasung metalloproteinase an urokinase plasminogen activator [22]. Fir Datum, hunn eng waarden Zuel vun de Medeziner Studien déi wichteg Roll vun Ets1 zu entholl Entwécklung an Werdegang vun verschiddenen staark erhéijen dës [23], [24]. Virdrun Studie weisen, dass Ets1 Ausdrock fir d'clinicopathological Charakteristike vun gastric Kriibs Zesummenhang ass, dorënner entholl einfach an lymph Wirbelen oder distal Metastasen, seng kritesch Roll an der Invasioun an Metastasen vun gastric Kriibs suggeréiert [41]. Allerdéngs bleift d'Mechanisme vun der Ets1 iwwer-Ausdrock vun gastric Kriibs Basisdaten nach largement onbekannt. Rezent Ënnersichunge koume der Post-transcriptional Regulatioun vun Ets1 vum Mir-125b an Broscht Kriibs Zellen [42], a vum Mir-200b an endothelial Zellen [43]. An dëser Etude, hien huet mir dat als eng direkt Zil vum Mir-9, war Ets1 zu gastric Kriibs up-reglementéiert an dréit zu der Wanderung an Invasioun vu Kriibs Zellen. Knockdown vun Ets1 phenocopied deelweis d'Auswierkunge vun Mir-9 iwwer-Ausdrock vun gastric Kriibs Zell Linnen, iwwerdeems Restauratioun vun Ets1 Ausdrock de Kriibs Zellen aus Mir-9-mediated inhibition op der Migratioun an Invasioun gerett, e Roman Post-transcriptional Regulatioun Mechanismus demaskéierte vun Ets1 vum mir-9 a seng Krankheete Potenzialer vun gastric Kriibs. VerfÜgung

am Resumé, hu mir fir d'éischt Kéier bewisen, datt mir-9 den Ausdrock vun cyclin D1 an Ets1 duerch direkt hir 3 gezielt 'represses -UTR, inhibiting also d'Prolifératioun, Iwwerfall a Metastasen vun gastric Kriibs Zellen. Dës Etude Preventioun eisem Wëssen iwwer d'Regulatioun vun cyclin D1 an Ets1 am Post-transcriptional Niveau vun miRNA, a seet dass Mir-9 kann als Roman therapeutesch Zil fir gastric Kriibs vun Potential Wäerter ginn. VerfÜgung

spontan a Methode VerfÜgung

Patienten- Otemschwieregkeeten Echantillon VerfÜgung

Ministär dëser Etude op Exercice war vun der Finanzpolitiker Kritik Verwaltungsrot vun Tongji Medical College (: 2010-S003 averstaane Nummer) kritt. Paraffin-Ënnerbewosstsinn a frësch uplanzen vun 86 Primärschoul gastric Kriibs Fäll goufen aus de Chiffer vun befënnt, Unioun Hospital vun Tongji Medical College kritt. Hir agebousst Diagnos ass vun op d'mannst zwee pathologists bewisen. D'Demographie an clinicopathological Donnéeën vun all Patienten goufen an Table S1 zesummegefaasst. Niewendru gastric mucosa datt kee macroscopic entholl enthale war och kritt, an d'Net-neoplastic Beräicher sech dono duerch microscopic Histologie ubelaangt. Déi frësch entholl uplanzen an bascht Net-neoplastic mucosa sech bei -80 ° C bis benotzen gesammelt a gespäichert. VerfÜgung

Immunohistochemistry VerfÜgung

Immunohistochemical staining Leeschtung war wéi virdru beschriwwen [44], mat antibodies spezifesch fir cyclin D1, Ets1, MMP-9 an CD31 (Abcam INC, Cambridge, MA, 1: 200 dilutions). Déi negativ Kontrollen agebaut parallel Sektiounen mat ënnerlooss vun der Primärschoul antibody behandelt, zousätzlech zu enger bascht Sektioun vun der selwechter Spär vun deenen der Primärschoul antibody vun Kanéngchen polyclonal IgG (Abcam INC) als isotype Kontroll ersat gouf. D'ofbaubar Ofschloss gouf vun op d'mannst zwee pathologists ouni Wëssen vun den clinicopathological Charakteristike vun erhéijen évaluéieren. 5% Zellen positiv, (1+) 6-25% Zellen positiv, (2+) 26-50% Zellen positiv; - () &Si besteet: d'Ausmooss vun komm, war am Ufank wéi déi folgend no de Prozentsaz vun positive Kriibs Zellen klassifizéiert , an (Iwwer 3) > 50% Zellen positiv. Drënner mat moderaten positiv (2+) oder staark positiv (Iwwer 3) ofbaubar sech als e "héich Ausdrock" klassifizéiert hierkommen drënner mat negativen (-) oder schwaach positiv (1+) ofbaubar engem "niddereg Ausdrock" wéi se kleng waren, . VerfÜgung

Western blot VerfÜgung

bewosst FAQ mat 1 × Zell lysis Prellbock (Promega, Madison, allem) ofgebaut gouf. Protein (50 μg) aus all Prouf war haut zu 4-20% viraus-Goss polyacrylamide gelies (Bio-Rad, Hercules, CA) electrophoresis an transferéiert ze nitrocellulose Schläimhait (Bio-Rad). Fir cyclin D1, Ets1, MMP-9, pRB an β-actin (Santa Cruz Déi, Santa Cruz, CA) ze erkennen, sech de primären antibody dilutions 1:500, 1:500, 1:500, 1:500 an 1: 1000, respektiv déi, déi vun 1:3000 dilution vun Geess anti-Kanéngchen horseradish peroxidase-Label antibody (Bio-Rad) gefollegt. Verstäerkte chemiluminescence Realitéiten Kit (Amersham, Piscataway, NJ) war fir d'chemiluminscent erkennen Signaler mat autoradiography Film (Amersham) benotzt. VerfÜgung

RT-Hinnen alleguer an real-Zäit grouss RT-Hinnen alleguer VerfÜgung

Total RNS war mat RNeasy Mini Kit (QIAGEN Galaxy, Valencia, CA) isoléiert. De Géigendeel Transkriptiouns Reaktioune waren mat Transcriptor Éischt Strand cDNA Synthes Kit (Roche, Indianapolis, IN) gehaal. D'Hinnen alleguer primers fir cyclin D1, Ets1, MMP-9 an β-actin sech duerch Premier Primer 5.0 Software (Table S2) entworf. RT-Hinnen alleguer war standing wéi virdru beschriwwen [44]. Real-Zäit grouss RT-Hinnen alleguer mat SYBR Green Hinnen alleguer Master Mix (Obwuel Biosystems, Foster City, CA) war mat Abi Prism 7700 liichtkraaftarm heescht (Obwuel Biosystems) gesuergt. D'unisse Signaler sech während Extensioun Phase gesammelt, CT Wäerter vun der Echantillon waren berechent, an ët Niveau vun cyclin D1, Ets1 an MMP-9 waren déi 2 zu deene vun β-actin normalized -ΔΔCt Method. VerfÜgung

Quantification vum Mir-9 Ausdrock VerfÜgung

D'Niveaue vun alen Mir-9 am primäre Stoffer an Zell Strecken Ardennenoffensiv-Loop ™ miRNAs qPCR Primer Set (RiboBio Co. Ltd, lousoihong, China) sech benotzt. No cDNA mat engem miRNA-spezifesch Desaccord-Glück primer Wierderbuch war, war d'grouss Hinnen alleguer mat der konkreter primers (Table S2) gesuergt. De Mir-9 Niveau sech zu deene vun U6 snRNA normalized. VerfÜgung

miRNA Zil- Cepheid VerfÜgung

miRNA Ziler virausgesot sech mat der algorithms Miranda, miRDB, RNA22, an Targetscan [45]. Fir d'Genen Toast virausgesot déi véier verschiddene algorithms, d'Resultater vun virausgesot Ziler waren intersected benotzt miRWalk [46]. VerfÜgung

Zell Kultur an transfection VerfÜgung

Mënscherechter gastric Kriibs Zell Linnen (SGC-7901 identifizéieren an MKN-74) an SV40-transforméiert, normal an Net-tumorigenic gastric epithelial GES-1 Zellen [20] goufen aus der Type Kultur Collection vun Chinese Akademie vun de Wëssenschaften (Shanghai, China) kritt. Mënsch gastric Kriibs Zell Linn AGS (CRL-1739) war Form American Type Kultur Collection (Rockville, MD) kaaft. Zellen sech am RPMI1640 mëttelfristeg (Life Technologies, Inc., Gaithersburg, MD) ergänzt mat 10% An et Bovine serum (Life Technologies Galaxy), penicillin (100 U /ml) an streptomycin (100 μg /ml) ugebaut. Zellen sech op 37 ° C an enger humidified Atmosphär vu 5% CO _{2 haten.}

• PLOS NËMMEN: Association tëscht Reduktioun vu Plasma reguléieren Niveauen a Risk vun bakteriell Wonn no Gastric Cancer Surgery
• PLOS NËMMEN: Expression vun AFP an STAT3 zu Arsen Trioxide-entschlof Apoptosis an Inhibition vun Zouhuelen vun AFP-Och ginn Gastric Cancer Cells