Protein kinases Leeschtung wichteg Roll an entholl Entwécklung an Werdegang. Vill vun kinase inhibitors hunn an Maart koum an weisen villverspriechend Medeziner Virdeeler. Hei Rapport hu mir d'Entdeckung vun engem Roman kleng Protein, gutt-toleréiert, mëndlech aktiv kinase inhibitor, R1498, majorly souwuel angiogenic an mitotic Weeër fir d'Behandlung vun hepatocellular carcinoma (HCC) an gastric Kriibs (GC) gezielt. Eng Serie vum biochemical an Zell-baséiert assays uginn, datt d'Zil kinase Stärekoup vun R1498 abegraff Aurora kinases an VEGFR2 et al. R1498 zougedréckt moderéiert kënschtlech VerfÜgung Wuesstem inhibition op e Rot vum entholl Zellen mat IC50 vun micromole Gamme. D' zu VIVO VerfÜgung anti-entholl Efficacitéit vun R1498 war op engem Rot vu GC an HCC xenografts zu enger parallel Verglach mat anere multikinase inhibitor sorafenib bewäert. R1498 bewisen ausféieren Efficacitéit an toxicity Profil iwwer sorafenib an all Test Modeller mat > 80% entholl Wuesstem inhibition an entholl Réckgang zu puer xenogratfts. D'therapeutesch Potential vun R1498 war och duerch seng Efficacitéit op dräi Mënsch GC Primärschoul entholl ofgeleet xenograft Modeller mat 10-30% entholl Réckgang Taux ervirgehuewen. R1498 war d'Aurora Eng Aktivitéit fir aktiv inhibit dës zu VIVO VerfÜgung, an der vascularization zu erhéijen erofgoen. Ausserdeem, R1498 virgestallt gutt zu VIVO VerfÜgung aussetzt an therapeutesch Fënster vun der pharmacokinetic a Kribbelen Rei fannen Studien. Theses dofir weg, datt R1498 engem mächtegst ass, gutt-toleréiert, mëndlech aktiv multitarget kinase inhibitor mat engem eemolege antiangiogenic an antiproliferative Profil, an déi staark Vertrauen fir weider Entwécklung fir HCC an GC Therapie VerfÜgung Fro:. Zhang C, Wu X, Zhang M, Zhu L, Zhao R, Xu D, et al. (2013) Small Protein R1498 als Bien-toleréiert a mëndlech Aktiv Kinase Inhibitor fir Hepatocellular Carcinoma an Gastric Cancer Prefabrizéierten via gezielt Angiogenesis an Mitosis Weeër. PLoS NËMMEN 8 (6): e65264. Doi: 10.1371 /journal.pone.0065264 VerfÜgung Redakter: Claude Prigent, Institut de Génétique et Développement de Rennes, Frankräich VerfÜgung Arnaque: 22. Februar 2013; Akzeptéiert: 23. Abrëll 2013; Publizéiert: Juni 5, 2013 VerfÜgung Copyright: © 2013 Zhang et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Funding:. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisiounen ze publizéieren, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft VerfÜgung Wettsträit Interessen: All Auteurs sinn Mataarbechter oder fréiere Mataarbechter vun Roche R & d Center (China), ausser Taiping Chen. , deen en Employé vun enger CRO Firma Crown Bioscience Galaxy Peking, China genannt. Dëst heescht net de onvergläichleche 'Auteuren ofzeänneren un all déi Politiken PLOS NËMMEN op sharing Daten a Material. VerfÜgung Protein kinases déngen als Ziler fir therapeutesch Interventioun vun Cancers, déi validéiert ass a bewisen duerch den Erfolleg a breet Applikatioun vun FAQ kinase inhibitors zu Multiple Cancers, entweder als eenzeg Agent oder a Kombinatioun regimens. Mä, wéi eng heterogen vun accumulative Multi-Gentherapie kennen ëmmer Krankheet amplaz vun eenzelne kinase Mann-, Cancers gefuerene dat gutt Äntwert op eenzel Agent Therapie schätzen sin ganz limitéiert. Zousätzlech, hëllefe sech d'Société Resistenz vun erhéijen flüchten séier aus Chimiotherapie goen, dann Réckwee. Den Komplex aberrant sécher an Cancers klëmmt d'Entwécklung vun Strategien datt verschidde biologesch Weeër relevant ze entholl Biologie Zil- wéi Prolifératioun, Metastasen an Anti-apoptosis. Eng Strategie handelt konsequent Drogenofhängeger Kombinatiounen. Zum Beispill, cibléiert der Kombinatioun vun der VEGF monoclonal antibody mat konventionelle Chimiotherapie bedeitendst Iwwerliewe vu Virdeel Broscht, Colon, an haett Cancers [1] bewisen huet. Aner Strategie ass der awer ze entwéckelen, datt verschidde Mechanismen bannent engem eenzege Agent Cover. Dës Approche huet e puer potentiell Virdeeler iwwer geschéckt Strategien, dorënner Simplicitéit vun der Entwécklung Wee, Vitesse op de Maart, a manner iwwerlageren vun Säit Effekter. Moment, ass als éischt Linn Therapie fir fortgeschratt a metastatic HCC mat Verbesserung vun de Steiren Iwwerliewe Zäit vun 7,9 Méint (Placebo) zu 10,7 Méint sorafenib multikinase inhibitor benotzt [2]. Allerdéngs, Behandlung mat sorafenib Resultater am statistesch relevant, mee klinesch mëll, Verbesserungen an Punkto Iwwerliewe, Zäit fir Werdegang a Krankheet Kontroll Taux [3]. Mëttlerweil, traditionell cisplatin-baséiert Therapie nach ass verbreet am Medeziner Astellunge fir fortgeschratt a metastatic GC benotzt. Fir HER2 /neu gastric adenocarcinomas overexpressing, Stad a Kombinatioun mat Chimiotherapie prolongs der Steiren globale Iwwerliewe vu 11,1 Méint (Chimiotherapie eleng) zu 13,8 Méint [4]. Obwuel companioned diagnostic Methodik huet zu Écran Zil- Patienten gegrënnt gouf, huet Stad keng Aktivitéit zu engem groussen Ziel vun Patienten héijen Niveau vun HER2 /neu mat der Begrënnung, ausser identifizéiert ginn [5]. Sou héich veruerteelt vun HCC an GC an aktuell therapeutesch regimens mat limitéiert Resultat, et ass nach ëmmer grouss unmet medezinesch brauchen fir béid Kriibs Typen. VerfÜgung Angiogenesis baséiert Kriibs Therapie och anti-VEGFR-2 antibody, kleng Molekülle géint VEGFR -2 sécher [6], [7], an VEGFR chimeric FAQ [8], bewisen ass fir bestéet vu multiple Kriibs Zorte eng efficace Strategie ze ginn. Ausserdeem géif d'Efficacitéit vun multikinase inhibitors sunitinib an sorafenib deelweis zu VEGF sécher zougeschriwwen gin geblockt [9]. Allerdéngs, sinn eng Rei vu Patienten fest resistent oder entwéckelen Resistenz zu Anti-antiangiogenic Therapie no puer Behandlung Zykle [10], [11]. Sou, Medeziner Prozesser angiogenic inhibitors an Drogen mat alternative Mechanismus vun Aktioun kombinéiert ginn erwaart Efficacitéit ze verbesseren oder d'Resistenz zu antiangiogenic Behandlung iwwerwonne [12]. Et gouf unerkanntent dicht datt overexpression vun Aurora kinases zu verschiddenen Cancers am Prozess vun tumorigenesis Équipe ass [13], [14]. Aurora kinase inhibitor VX-680 gebass efficacer Kriibs Zellen Wuesstem kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung, an dono koum an de Medeziner Prozesser, suggeréiert, dass d'Aurora kinases sinn druggable Ziler [15] inhibit . VerfÜgung am Liicht vun der accumulative dofir vun angiogenesis an Aurora kinases zu Kriibs an hir therapeutesch Wäerter vun der biologescher an kleng Protein inhibitors bewisen, mir eng kinase inhibitor entdeckt, R1498, déi méi de Schlëssel Curriculum vun angiogenesis betraff an mitosis. R1498 huet eenzegaarteg kinase inhibition Profil, héich as, a gutt pharmacokinetic an toxicokinetic Profiler, deenen all weider Medeziner Entwécklung ënnerstëtzen. VerfÜgung IFLA- breakpoint VerfÜgung D'Benotzung an d Center (China); Pfleeg vun experminteller Déieren gouf vun de Finanzpolitiker Déieren Care an Benotzt Comité (IACUC), Roche R &guttgeheescht. Kroun Bioscience, eng Firma CRO Service engagéiert Patienten Privatsphär ze schützen an all déi ethesch Prinzipien fir Patient ofgeleet Material ze verfollegen, gesammelt frësch discarded Mënsch entholl Echantillonen, mat IRB (lokal Spidol zoustänneger Kommissioun) averstaane an Patient Zoustëmmung decken. All Zell Strecken aus ATCC kaaft, USA, oder Shanghai Instituter vun Biochimie a Zell Biologie, Chinese Academy vun Science VerfÜgung awer VerfÜgung R1498 (Rengheet > 98%). War vun Roche R Wierderbuch & D Center (China). Fir enzymatic assays a kënschtlech VerfÜgung Zell baséiert assays, war R1498 zu DMSO opgeléist wéi 0,01 mol /L Bourse Léisung. Fir Déier Studien, R1498 war vun 1% Klucel EF /0,1% polysorbate 80 /0.09% methylparaben /0,01% propylparaben Waasser, déi Léisung war bereet op enger wöchentlechen Basis opgeléist. Sorafenib war vun Roche R &Wierderbuch; D Center (China) an zu cremophor EL /Ethanol opgeléist (50:50, Fläch) eng 5 mg /ml Bourse Léisung, zentraalt Ziel gewéckelt, an Buttek op Raumtemperatur ze preparéieren. Dëst Bourse Léisung war frësch all 3 Deeg virbereet. Finale Stärkungsmëttel Léisungen sech op den Dag vun benotzen virbereet vun der Bourse Léisung mat goen Waasser ze verwässeren. VerfÜgung Zell zesummeféieren VerfÜgung All Zell Linnen vum amerikanesche onmarkéierte Collection Center (ATCC) an Zell Bank, Shanghai Instituter vun Biochimie a Zell Biologie, goufen Chinese Akademie vun de Wëssenschaften op 37 ° C mat 5% CO 2 humidified Atmosphär am Wuesstem mëttelfristeg recommandéieren vun de Forainen an ënnerworf ze kënschtlech VerfÜgung assays tëscht Passage haten 8~15 der Zell Linnen fir Déier Studien, goufen tëscht Passage 5~10. Mënsch umbilical verfeelt endothelial Zell (HUVEC) kritt aus Allcells (Emeryville, CA) war an EGM-2 (LONZA, Allendale, NJ) mat endothelial Zell Wuesstem Olivier Martinez an 10% An et Bovine serum (Invitrogen, Karlsbad CA) gehaalen. Zell prolifération Assay VerfÜgung All Zell Linn fir aner 72 vun Massa zu engem 96-Meter Otemschwieregkeeten Kultur Plack (Corning, NY) op engem Prinzip Dicht vun 180 μL komplett mëttelfristeg, verbonnen Iwwernuechtung an behandelt rakommen war h. Dunn huet de mëttel- discarded an ersaat mat 10% CCK-8 (Dojindo, Kumamoto, Japan) zu komplett mëttelfristeg, dann incubated de Placke fir weider 2 h. D'sel 450 war mat SpectraMAX 190 spectrophotometer (MDS, Sunnyvale, CA) gemooss. A Hannergrond absorbance vun sel eidel war vun all Wells subtracted. Dunn inhibition Tarif (asetzen) war mat folgend Formule alles:. Asetzen (%) = (sel DMSO-sel Massa) /sel DMSO × 100% VerfÜgung An VEGF-entschlof HUVEC Prolifératioun assay, suspendéiert der HUVECs zu 170 μL EGM-2 mat 0,5% FBS sech rakommen an Iwwernuechtung incubated. Nom verbonnen Zellen, 10 μL 1 μg /ml recombinant Mënsch VEGF 165 (R & D Systemer, är ganz Famill, Punktzuel) war mat 20 μl Massa Léisungen zu EGM-2 mat 0,5% FBS bereet all gutt zesummen notéiert. D'CCK-8 assay wéi uewe fir Determinatioun vun Zell Nuetsvolen benotzt gouf. VerfÜgung Kinase Assays VerfÜgung d'Affinitéit vun R1498 géint 402 kinases vun KINOMEScan® (-Participatioun Biosciences, San Diego, CA) alles war an Donnéeën huet den dissociation konstant (Beien zB stéiert) Wäerter virgestallt [16]. D'inhibition op kinase Aktivitéit vun Aurora kinases an VEGFR2 war weider Zeeche vun Z'-Lyte kinase Aktivitéit assays ënner ATP Konzentratioune entspriechend. VerfÜgung HUVEC Tube Formatioun Assay VerfÜgung HUVEC Rouer Opstellung assay war zustane virdru gemellt [17]. Kuerz, war Matrigel ™ (BD Biosciences, Franklin sin, NJ) fir 3~4 h bei 4 ° C thawed. 100 μl flësseg Matrigel ™ ugebaut 96-gutt Otemschwieregkeeten Kultur zappen Pré-Iwwerleeungen, an der Schossel war bei 37 ° C incubated, 5% CO 2 humidified Atmosphär fir 1 h Matrigel ™ zu solidify. D'HUVECs sech cultured zu EGM-2 mat 0,5% Iwwernuechtung FBS, a géint zu 90 μL EGM-2 mat 0,5% FBS op eng Dicht vu ronn 2,2 × 10 Western Blot VerfÜgung Zell lysate war zu Ripa gefiermt an laachen virbereet vun der bicinchoninic Seier (BCA) Method (Pierce, Rockford, IL). Drësseg micrograms vun pro Prouf FAQ war op engem 4~12% NuPAGE® Novex SDS gelies (Invitrogen) iwwerlaascht. D'FAQ war duerch eng iBlot® dréchen blotting Apparat (Invitrogen) op nitrocellulose Schläimhait transferéiert. No erauszesichen mat TBS /Tween20 (0,1%) (TBS /T) mat 5% Nët-Fett Mëllech fir 1 h bei Raumtemperatur, war d'Membran an phospho-Aurora A (Thr288) incubated (C39D8) Kanéngchen monoclonal antibody nonspecific bindend ( Zell sécher Technology, CSTij9, Beverly, MA) oder phospho-Histone H3 (Ser10) Kanéngchen polyclonal antibody (CSTϊ1) (1:1000 zu TBS /T mat 3% Bovine serum albumin (BSA), a weider Hënt um Iwwernuechtung 4 ° C. d'Membran war mat TBS /T dräimol Katakombe der unbound antibody ze läschen, dann mat der Première antibody (HRP-conjugated Geess anti-Maus IgG oder Geess anti-Kanéngchen IgG incubated, 1:10000, KangChen Biotech, Shanghai, China) fir 1 h bei Raumtemperatur, bzw.. Protein Bands sech mat enger verstäerkter chemiluminescence (ECL) Kit (Pierce, Rockford, IL) visualized. VerfÜgung Immunofluorescence VerfÜgung BTS op Chamber géint drënner waren zu 4% paraformaldehyde bei Raumtemperatur fix, dann permeabilized mat 0,15% Triton-X100 am TBS an zu 3% BSA zu TBS /T. D'Primärschoul antibodies (phospho-Aurora a (Thr288) (CSTĵ7) gespaart, phospho -Histone H3 (Ser10) (CSTϊ1) an MPM2 (anti-phospho-Ser /dëss-Pro) Millipore-368) waren Nuecht op 4 ° C mat drënner an eng naass Chambre incubated. D'Première antibodies Alexa Fluor® 488 Geess anti-Kanéngchen IgG (H + L) oder Alexa Fluor® 594 Geess anti-Maus IgG (H + L) (Invitrogen) goufen respektiv fir eng Stonn applizéiert nom drënner mat TBS grëndlech gewäsch huet. No der unbound antibodies erausgeholl goufen, waren der drënner gedréchent a mat DAKO antifide Opriichte mëttelfristeg Descher. Déi Biller waren mat IX71 ënner entspriechend excitation an Emissioun Filter- ageholl. VerfÜgung Flow Cytometry VerfÜgung DNA Inhalt mat engem FACS-Calibur cytometer (Becton Dickinson, San Jose, CA) an Zell Zyklus Verdeelung gemooss gouf virdru ëmschriwwen gouf berechent [18]. VerfÜgung tubulin kënschtlech VerfÜgung gekräizt assay VerfÜgung an kënschtlech VerfÜgung tubulin gekräizt assay Leeschtung war wéi virdru beschriwwen [18 ] VerfÜgung Single Dose Pharmacokinetic (SDPK) Sécuritéit VerfÜgung D'Benotzung an Pfleeg vun experminteller Déier vun Finanzpolitiker Déieren Care an benotzt Comité, Roche R &ofgeseent gouf. D Center (China). Männlech Sauna Mais (Gewiicht: 19 bis 24 g) sech zu SDPK Etude benotzt. Virun der pharmacokinetic studéieren, Déieren sech un d'probéieren Gruppen zoufälleg uechtzéng (3 Déiere pro Zäit Punkt). Zéng zousätzlech Mais sech ze gesammelt Plasma eidel fir Eechung Kéiren benotzt. De Mais sech Iwwernuechtung, ier mëndlech Administratioun fasted. VerfÜgung Bluttprouwen vun Retro-Bunnen ofgehaangen am Précoce-Portioun gesammelt goufen an 0,033, 0,083, 0.25,0.5, 1, 2, 4, 6, 8, an 24 Stonnen Post-Portioun. D'Plasma Echantillonen an Dosis Formuléierung sech op -20 ° C bis bioanalysis gespäichert. D'Daten Acquisitioun a Kontroll System goufen Analyst 1,4 Software aus Abi Galaxy d'Konzentratioune vun Plasma ënner der Limit vun quantitation (LOQ = 1 Dummeldéng /ml) ugeluecht mat sech als Null designéierte. D'pharmacokinetic analyteschen war mat noncompartmental Analyse Moduler zu WinNonlin berufflech v5.2 gesuergt (Pharsight, USA) Éislek bioavailability als F berechent war (%) = (Dose IV × AUC po (0-∞)) /(Dose po × AUC IV (0-∞)) * 100%. Fir Grenzwäerter, Hond an Af SDPK, goufen d'Blutt Echantillon vun Halsschlagoder verfeelt ofgehaangen gesammelt. VerfÜgung Xenograft Efficacitéit Sécuritéit mat Zell zesummeféieren a Patienten- Ofgeleet Saachen VerfÜgung D'Benotzung an Pfleeg vun experminteller Déier Accord vun institutionell Déieren Care an Benotzt Comité, Roche R & d Center (China). Entholl Zellen an der rietser Ofwiersäit vun BALB /C inoculated waren Nu /Nu VerfÜgung weiblech Sauna Mais (5~6 Wochen, 16~18 g, kritt aus Sino-britesch SIPPR /BK déngt. Déierefrënn Ltd, Shanghai, China) um optimal Dicht baséiert op eise zu-Haus Confirmatioun studéieren. No der entholl gegrënnt gouf an erreecht 100~150 mm Am Mënsch Primärschoul entholl Modeller, frësch Mënsch gastric entholl Stoffer sech direkt un nonobese zockerkrank implanted an schwéieren kombinéiert immun-erhéijen (gewënnt-SCID) Mais bannent 5 Stonnen Post-Chirurgie mat 5 mm Immunohistochemistry VerfÜgung D'8 μm paraffin Ënnerbewosstsinn drënner entholl Otemschwieregkeeten bereet aus entholl vun zu VIVO VerfÜgung Efficacitéit Studien huet fir 1 Stonn an engem dréchnen Uewen um 60 ° C gehëtzt, deparaffinized dann an déi Leica autostainer XL ST5010 bei Raumtemperatur hydrolyzed. Antigen retrieval war fir 5 min bei 95~99 ° C an citrate Prellbock (0.01 M, pH 6.0) gehëtzter vun engem medezineschen Schleck erëm bei 92-98 ° C duerchgefouert, gi si dann op Raumtemperatur verwandelt. Dunn peroxidase-Spären reagent (DAKO, wees-2600, Glostrup Dänemark) war de endogenous peroxidase Duuscht applizéiert. D'drënner waren am erauszesichen serum fir 20 min incubated, dann vun 100 μL Daach phospho-Aurora A (Thr288) (C39D8) Kanéngchen MAB- (CSTij9, 1:200 zu TBS /T) oder Kanéngchen anti-Mënsch CD31 polyclonal antibody ( Santa Cruz Biotech, sc-8306, Santa Cruz, CA, USA; 1:200 zu TBS /T) bei 4 ° C Iwwernuechtung, duerno zu 100 μL DAKO stellt + /HRP, Kanéngchen /Maus incubated der grëndlech mat TBS gewäsch ginn. Honnert Mikro Liter vu Realitéiten-chromogenic Léisung (botzt) sech un der drënner applizéiert a bei Raumtemperatur fir 10 min incubated. D'drënner waren fir 15 min weider mat fléissendem Waasser rinsed. Counterstain an eppes war vun XL ST5010 bei Raumtemperatur gesuergt. Endlech, waren der drënner mat Permount Opriichte mëttelfristeg (Fisher Wëssenschaftlech, Miami, FL) Descher. VerfÜgung Dose Range fannen an Toxicokinetic Sécuritéit VerfÜgung Dose Rei fannen an toxicokinetic Etude war an deër an Beagle duerchgefouert Hënn baséiert op kënschtlech VerfÜgung metabolites Identifikatioun. Wistar deër (männlech: 3, weiblech 3 vun all Grupp, vun Vital River, Peking, China) waren Iwwernuechtung fasted, an dobäi dann Test Artikelen wéi 0, 6,25, 50 an 100 mg /kg zweemol pro Dag pro mëndlech gavage fir eng 14 -day kontinuéierlech regimen. Motility Observatioun gouf op engem Dag Base applizéiert de Maximum tolerant Dosis fir d'Déieren ze fannen. D'Déiere goufen op D14 geaffert, an folgend parole observation goufen och Kierpergewiicht Ännerungen duerchgefouert, Medeziner Observatioun, consomméiert Becken, hematology Chimie an histopathology. Op Dag 1 a Dag 14, Bluttprouwen sech via Halsschlagoder verfeelt ofgehaangen aus all Déieren (wann lieweg, héich-K2 Krunn benotzt) kritt. Echantillon waren op Blesséierter naass-Äis bis centrifugation verbannen an Faarwe gemëscht, déi direkt duerchgefouert gouf. D'Echantillon sech fir ongeféier 15 Minutten bei 4 ° C 2.700 Ziichter centrifuged. D'entstoent Plasma war getrennt, transferéiert ze eendeiteg Fortgeschratten kloer polypropylene iech an direkt méi staark Kuelendioxid (dréchent Äis) gefruer bis zu ronn transferéiert -80 ° C. All Déier op de folgende Zäit Punkten Bled: ronn 5 min, 15 min, 30 min, 1, 2, 4, 8 an 24 Stonnen Post éischt Dosis op d'spezifesch Dag. Den Alkohol- Konzentratioune vun de Plasma sech duerch LC-MS /MS alles. D'pharmacokinetic Analyse huet mat WinNonlin Software (Version 5.2, Pharsight Corporation, CA, USA) gesuergt, an der pharmacokinetic Parameteren sech e Non-compartmental Modell Method berechent benotzt. VerfÜgung Beagle Muppen (ongeféier 8-10 Méint, aus qualifizéiere Marshall déi Co. Ltd., Peking, China) sech un d'Etude Protokoll ënnerworf wéi uewe beschriwwen. All Grupp huet eng männlech an eng weiblech Hond, den dosages vun Test Manifestatioun goufen: 0, 1, 7.5 an 15 mg /kg, bzw.. D'Benotzung an Pfleeg vun experminteller Déier vun Finanzpolitiker Déieren Care an Benotzt Comité, Roche R &guttgeheescht;. D Center (China) VerfÜgung analyteschen an Statistics VerfÜgung Onofhängeg t Test fir eng kontinuéierlech Daten benotzt gouf Analyse, an χ2 Test war bis Diskussioun Donnéeën applizéiert. Date goufen als bedeitendst wann p Wäerter waren &Si besteet;. 0,05 VerfÜgung 1. Characterization vun R1498 als Multikinase Inhibitor VerfÜgung Pyrazolobenzodiazepine Analog R1498, mat engem scaffold baséiert op der Fusioun vun engem benzodiazepine an pyrazole Ring (Dorënner 1A), virdrun eng schwaach cyclin-ofhängeg kinase 2 (CDK2) gin identifizéiert war inhibitor [19]. Dëst Protein zougedréckt der Natur vun engem multikinase inhibitor wann mir d'kinase inhibitor Bibliothéik analyséiert. D'kinase inhibition Profil vun R1498 (1 μM) war via KINOMEScan® am ATP Konzentratioun ronderëm de km vun all kinase charakteriséiert. D'inhibition Taux vun R1498 ass iwwer 80% géint 39 kinases aus 402 kinases, dorënner 359 Wildwest-Typ kinases an 43 kinase mutants (Dorënner S1). D'dissociation léisst (Beien zB stéiert) vun 39 Hit kinases sech dann alles, an der kinases mat Beien zB stéiert &Si besteet; 0,2 μM sech zu Dorënner 1B gewisen. Déi meescht vun de méigleche Hits gehéieren zu der tyrosine kinase (TkLanguage) Famill a AGC Famill. Ausserdeem war Z-Lyte assay fir weider Determinatioun vun der kinase inhibition Aktivitéit vun R1498 duerchgefouert. D'Resultater weisen, datt IC50s vun R1498 goufen 25 ± 6, 67 ± 4, 167 ± 13 nm géint VEGFR2, Aurora kinase A a B, bzw. (Dorënner 1c). Dunn eiser Etude iwwert d'Anti-angiogenic an Anti-mitotic Weeër majorly betraff vun R1498 do war. VerfÜgung A Rot vum 16. Kriibs Zell Linnen, dorënner hepatocarcinoma, gastric Kriibs an nasopharyngeal carcinoma Zell Linnen, war fréier d'ze bestëmmen kënschtlech VerfÜgung anti-Prolifératioun Fähegkeet vun R1498. Déi meescht vun de Zell Leitungen aus Asian Cancers gegrënnt, wéi d'asiatesch verwandelt Cancers eis konzentréieren sinn. D'hepatocarcinoma an octroyéiert gastric Kriibs Zell Linn sech méi sensibel op R1498 Behandlung wéi nasopharyngeal Kriibs Zell Linnen. Déi gesamt mengen IC50s waren 7,81, 7,55 an 30,07 μM, entspriechend carcinoma, gastric Kriibs ze epatocellular, an nasopharyngeal carcinoma Zell Linnen, bzw.. Der Empfindlechkeet vun Zell Linnen ofgeleet vun asiatësch Bevëlkerung (BEL-7402, QGY-7701 an QGY-7703) war fir d'Empfindlechkeet vun Hep3B ähnlecher déi vun Caucasian (Dorënner 1D) war. VerfÜgung 2. R1498 bremst Aurora Kinases an Induces Zell Cycle Arrest VerfÜgung Aurora kinase inhibition vun R1498 vun immunofluorescence zu gastric Kriibs Zell Linn SGC-7901 visualized war. Direct phosphorylation Siten phospho-Aurora kinase A (T288) an phospho-histone H3 (S10) huet vun Ufank un de kinase Aktivitéit vun Aurora A a B weg, respektiv [20], [21]. Phospho-Ser /dëss-Pro Mitotic FAQ monoclonal(MPM2) war als mitotic Bewaacher (rout) fir Etikette mitotic Zellen benotzt. Aurora kinase A (T288) phosphorylation existeiert an der centrosome vun mitotic Zellen (gréng). No der Zellen mat 5 μM MR1498 fir 24 h behandelt goufen, gouf de Aurora A T288 gréng Foci zu mitotic Zellen geschwächt oder verschwonnen (Dorënner 2A ieweschte Rot), weist, datt d'Aktivitéit vun Aurora kinase A op R1498 Behandlung ofgeholl. D'phosphorylation vun histone H3 (S10) ass haaptsächlech am centromeres vun mitotic Zellen en der. No der Zellen mat R1498 behandelt goufen, ofgeholl der phospho-histone H3 (S10) staark (gréng). Dëst observation ugeholl, datt d'Aktivitéit vun Aurora kinase B och op R1498 Behandlung ewechgelooss verwandelt. Dës Resultater aus immunofluorescence sech duerch westlech blot confirméiert. Als zu Dorënner 2B gewisen, ofgeholl der phosphorylation vun phospho-Aurora kinase A (T288) an phospho-histone H3 (S10) zu enger Konzentratioun-ofhängeg Manéier zu Fouss Behandlung vun R1498. VerfÜgung Inhibition vun Aurora kinases A an B produzéiert verschiddene phenotypic Ännerungen am Zell Zyklus. Ophiewe vun Aurora A entschlof G2 Phase verhaft Zell Zyklus [22], während inhibition op Aurora kinase B ass an Untersuchungshaft polyploidy vun Zellen wéinst endoduplication ouni cytokinesis ze féieren [15]. No der Zellen sech mat 10 μM R1498 behandelt, souwuel SGC-7901 (gastric Kriibs Zell) an BEL-7402 (hepatocellular carcinoma Zell) zougedréckt G2 /M Phase verhaft an Heefung vun polyploid Zellen. Fir BEL-7402, fräi verdeelt Zellen zu G2 /M Phasë vu 25,6% op 57,0%, an der Tëschenzäit, den Zellen mat > 4 N DNA Inhalt vun 6,7% op 17,6% geklommen. SGC-7901 war méi sensibel, mat der G2 /M Bevëlkerung vu 25,2% op 75,5% geklommen, an polyploid Zelle vu 3,1% op 21,6% (Dorënner 2C) fräi. Microtubule Stabilisator (zB ëmgedréint) an destabilizer (zB colchicine) wäert och G2 /M Phase verhaft féieren. Ze verstoen ob R1498 engem microtubule geziilte reagent ass, kënschtlech VerfÜgung tubulin gekräizt assay war duerchgefouert. D'Daten zougedréckt datt R1498 weder stabiliséiert nach destabiliséiert microtubule gekräizt souguer ënnert héich R1498 Konzentratioun (40 μM) kënschtlech VerfÜgung (Dorënner 2D), suggeréiert, dass d'Zell Zyklus G2 /M verhaft net vun microtubule cytoskeleton Stéierung ëmmer war. Geholl zesummen, proposéiert dës Donnéeën, déi R1498 der Aurora kinases A a B an Zellen inhibited a produzéiert d'phenotypic Ännerungen an Zellen. VerfÜgung 3. R1498 Antagonizes der Angiogenesis Progress vun Mënscherechter Endothelial BTS VerfÜgung Angiogenesis vun secretion vun angiogenic Wuesstem Faktor vun entholl Zellen initialized war, an dann proliferate der endothelial Zellen, opgeholl a Form Zuchstreck iech an Äntwerte der VEGF Stimulatioun. Fir Adress sech d'Spezifizitéit vun R1498 der endothelial Zell Wuesstem stimuléiert vun VEGF, Mënsch umbilical verfeelt endothelial Zellen (HUVECs) antagonizing zu zwee verschidden stimuli ausgesat, VEGF an FBS, ënnert der Behandlung vun R1498 fir 72 h. Ënner der Kultur Konditiounen wouvun VEGF oder FBS, zougedréckt HUVECs verschiddene Äntwert ze R1498. D'IC50s goufen 89 an 2064 nm fir VEGF an FBS, bzw.; dës ugeholl datt R1498 der HUVEC Wuesstem Hausse vun VEGF méi mächtegst wéi vun FBS (Dorënner 3A) antagonized. An HUVEC Rouer Opstellung assay, no 8 HR aussetzt R1498, geformt HUVECs manner intakt Rouer meshes wéi DMSO behandelt Gruppen (Dorënner 3B). R1498 hutt Afloss net HUVEC Prolifératioun ënnert dëser Behandlung Bedingung (Daten dës net). VerfÜgung 4. Hien R1498 de Wuesstem vun de Mënscherechter Cancer Xenografts VerfÜgung D'pharmacokinetic Eegeschafte mat eenheetlechen Portioun R1498 zu Multiple Aarten sech huet. D'Halschent-Liewen Zäit (T1 /2) a mëndlech bioavailability (Oral BA%) favoriséiert weider Efficacitéit studéieren an Sauna Maus (Table S1) mat enger duebel-Dag mëndlech gavage Zäitplang. E Rot vun xenografts dorënner asiatësch gastric Kriibs, hepatocarcinoma an nasopharyngeal Kriibs war fir Verglach tëscht R1498 an aneren multikinase inhibitor sorafenib (Dorënner 4, Table S2) geschafft. Sorafenib ass als éischt Linn Therapie fir hepatocarcinoma guttgeheescht [2], an ass an de Medeziner Prozess fir combinatorial Therapie fir fortgeschratt gastric Kriibs [23]. Déi parallel Verglach bestoung vun entholl Wuesstem inhibition, Réckgang an Kierpergewiicht Ännerunge vum Déier mat Stärkungsmëttel vun 25 mg /kg, zweemol Dag pro mëndlech. An all getest xenografts, zougedréckt R1498 besser inhibition Taux entholl Wuesstem (TGI%) iwwer sorafenib. Fir hepatocarcinoma, ass de TGI% vun R1498 10-19% méi wéi TGI% vun sorafenib, fir gastric Kriibs, 2-12% iwwer TGI% vun sorafenib. De Réckgang Taux vun entholl war och den aneren therapeutesch Endpunkt afléissen. An hepatocarcinoma erschéngt, war an BEL-7402 Modell observéiert entholl Réckgang, 8/10 (80%) Déieren haten Réckgang an R1498 Grupp, während 1/10 (10%) Déiereschutz Réckgang an sorafenib Grupp haten (Dorënner 4, BEL-7402) . Fir gastric Kriibs erschéngt, MGC-803 an SGC-7901 xenografts haten d'selwecht Réckgang Taux an Äntwert op déi Test Artikelen: 5/10 (50%) fir R1498, an 2/10 (20%) fir sorafenib (Dorënner 4, SGC -7901; an Table S2). Baséiert op der Efficacitéit endpoints aus all 7 getest Modeller, huet R1498 besser Efficacitéit wéi Spillplang ënner der selwechter Behandlung sorafenib. Desweideren, R1498 nasopharyngeal carcinoma xenograft op eng gutt Efficacitéit gewisen, déi TGI% vun R1498 (90%, 25 mg /kg, zweemol-Dag, pro mëndlech gavage) war ausféieren iwwer Norm vun care- cyclophosphamide (60%, all 10 Deeg, intraperitoneal Sprëtz) (Dorënner 4, CNE-2). De Kierper Gewiicht Ännerungen déi an all Modeller fir toxicity Verglach opgeholl huet gewisen, datt d 'Sauna Maus méi tolerable zu R1498 während dem ganze Behandlung an BEL-7402, SGC-7901 an CNE-2 Modeller gewisen, obwuel Kierpergewiicht gewannen liicht 10 Deeg no Behandlung (Dorënner 4, Table S2). Allerdéngs, sorafenib ëmmer kontinuéierlech Lëscht vun den Déieren Kierpergewiicht. Fir sorafenib behandelt Maus an BEL-7402 an SGC-7901 Modeller, iwwerschratt de Prozentsaz vun Kierper Gewiichtsverloscht vun 15% op d'anze- Dag. Wéi an Table S2 gewisen, zougedréckt R1498 manner Impakt op Maus Kierpergewiicht wéi sorafenib gemaach, déi ugeholl datt R1498 besser Sécherheet Profil ofgehalen. VerfÜgung 5. R1498 Down-reguléieren Phosphorylation vun Aurora A a wiere Densitéit vun entholl VerfÜgung Phosphorylated Aurora A (T288) an CD31 zu erhéijen aus Efficacitéit Etude fir Determinatioun vun de op-Zil- Effet vun R1498 benotzt goufen. D'entholl Mass vum BEL-7402 xenograft Etude recoltéiert war an paraffin Ënnerbewosstsinn drënner virbereet a fir visualizing angiogenesis laanschtgaangen Mënsch CD31 zu immunohistochemisty ënnerworf an Aurora kinase Eng Aktivitéit Bewaacher phospho-Aurora A (T288). An BEL-7402 erhéijen, ofgeholl der CD31 staining vun R1498 Behandlung Gruppen zu enger Portioun-ofhängeg Manéier, wéi d'vascularization zu erhéijen ugeholl gouf inhibited (Dorënner 5A). Der Aktivitéit vun Aurora kinase E war och op R1498 Behandlung reduzéiert, déi vun de Rescht staining vun phospho-Aurora A (T288) zu R1498 behandelt erhéijen (Dorënner 5B) reflektéiert gouf. VerfÜgung Mënscherechter Primärschoul gastric entholl ofgeleet xenograft Modell war fréier d'Efficacitéit vun de Medeziner Iwwersetzung ze virauszesoen. D'kriibserreegend Stoffer vun dräi eenzel gastric Kriibs Patienten goufen an Maus engrafted, an xenografts verschiddene Wuesstem Kéiren zu VIVO VerfÜgung delineated. D'xenografts zougedréckt a verschiddene Impakt op d'Gewiicht Ännerunge vun de Gäscht. De Mais sech mat R1498 (25 mg /kg) fir d'uginn Period behandelt, Final TGI% 73,6 ~ 91,6%, mat Réckgang Tariffer 10~30%. D'limitéiert Kierpergewiicht Ännerunge proposéiert, datt d'entholl Mais sech gutt tolerant ze R1498 (Dorënner 6). VerfÜgung 6 dotéiert. R1498 huet Good Pharmacokinetic Profil (PK) an therapeutesch Fensteren VerfÜgung SDPK uginn, datt d'akzeptabel bioavailability an hallef-Liewen Eegeschafte vun R1498 ënnert Sauna Maus, Grenzwäerter an Hond (Table S1). Hinzeginn Liewer microsomes sech benotzt de groussen metabolites zu verschidden Aarten ze virauszesoen. Grenzwäerter an beagle Hond mat ähnlechen microsome metabolites vum Mënsch sech zu maximal tolerant Dosis (MTD) studéieren ze bestëmmen d'therapeutesch Fënster tëscht efficacious an gëfteg Luucht ginn (Table S4) benotzt. Weiblech an männlech deër zougedréckt a verschiddene Äntwert op d'escalated Dosis vun R1498.
Aféierung VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
Wéi Mass Screening Efforten gehollef hunn méi Fäll vun Zöliakie bei Kanner z'identifizéieren
Grouss Studie fënnt datt d'SARS-CoV-2 viral Last déi niddregst bei Kanner ass
Studie beschreift initial Baseline gesond Darmmikrobiom Datebank an Iwwerflossprofil
IBD vill méi heefeg wéi erwaart,
Eng schmuel Esophagus opmaachen
Zecken droen elo verschidde Krankheeten,
Geess Mëllech-baséiert Formel gutt fir Puppelcher Darmgesondheet
Fuerscher aus dem RMIT Lab hunn dGeessmëllechformel analyséiert a gekuckt op dOligosacchariden, déi et enthält. Dës einfach Zucker an dPrebiotika präsent an der Geessmëllech baséiert Puppelchersformel
Leit mat IBS Symptomer hu wahrscheinlech niddereg Niveaue vu Vitamin D,
Etude weist Wann Dir ee vun deenen zwee an zéng Leit sidd, déi un Irritabelen Darm Syndrom (IBS) Symptomer leiden wéi Blähungen, Bauchschmerzen a Verstopfung, et ass héchstwahrscheinlech datt Dir nidd
Perfectus Biomed fir op der IPS Konferenz zu Liverpool ze weisen
DPerfectus Biomed Team wäert op der Infection Prevention Society (IPS) Konferenz zu Liverpool dëse Mount ausstellen. DKonferenz fënnt an der Arena an dem Convention Center zu Liverpool den 22. - 24. S