Введение Культуры клеток и трансфекция MED30 суперэкспрессия Анализ пролиферации клеток Матригель нашествие анализ Гиперэкспрессия MED30 в желудке раковые ткани Для изучения роли MED30 в желудочном канцерогенезе, мы исследовали влияние MED30 нокдаун или избыточная экспрессия на пролиферацию, миграцию и вторжение в шести желудочных линиях раковых клеток (SNU1, SNUI16, SNU216, SNU620, SNU638 и NCI -N87 клетки). ПЦР в реальном времени и Вестерн-блот были использованы для анализа нокдаун и избыточная экспрессия MED30 в SNU216 и SNU638 клеток (рис 2A-2C). Когда эти клетки трансфицировали MED30 миРНК (100 нМ), экспрессия MED30 уменьшалась в белке и уровней мРНК примерно на 80% через два дня по сравнению с SCR миРНК и MED30 избыточной экспрессии кДНК трансфекции увеличилась мРНК MED30 и уровни белка в сравнении с контрольной пустой векторноподобных трансфицированные клетки (клетки) фиктивные более чем в 3 раза. влияние MED30 нокдаун на в естественных условиях
<р> рак желудка является одной из ведущих причин смерти от рака во всем мире [1, 2]. Около 95% рака желудка являются аденокарциномы и в эпидемиологических исследованиях рака желудка был классифицирован анатомической сайт как кардии /проксимального или некардиальных отделов /дистального [3] и гистологическим фенотипом как кишечная, диффузный или смешанный /неклассифицируемые как описано Lauren [4 ]. Кроме того, у пациентов с проксимальным раком желудка имеют более низкий уровень выживания независимо от стадии [5] TNM. Helicobacter Pylori
инфекция была продемонстрирована быть этиологическим агентом рака желудка, в частности раковых опухолей, обнаруженных в дистальных желудках пожилых мужчин, которые, как правило, типа кишечника. Совсем недавно, несколько молекулярных классификаций рака желудка, были предложены на основе результатов исследований экспрессии генов всего генома и /или количества копий гена исследований [6-10].
Регулирование <р> Транскрипционная является важным шагом, который контролирует идентичность клеток, рост, дифференцировку и развитие. Человек посредник (MED) комплекс, который содержит ~ 30 белков, является одним из ключевых коактиватор /активатор выражений РНК-полимеразы II (Pol II) -transcribed генов [11]. MED комплекс облегчает сборку предварительно Инициирующий комплекс (ПИК) путем взаимодействия с Pol II и генных специфических факторов транскрипции (TFS), например, TFIIA, TFIIB, TFIID, TFIIE, TFIIF и TFIIH [12, 13]. МЕД комплекс состоит из трех различных структурных подмодулей (голова, средней и хвостовой части). Модуль головки непосредственно взаимодействует с Pol II, в то время как удлиненный хвостовой модуль взаимодействует с геноспецифических регуляторных белков [12, 13], а средний модуль действует в регуляторной передачи сигнала на период после связывания стадии [13]. Хотя механизм до конца не изучен, MED комплекс прочно связывается с Pol II, меняет свою конформацию и влияет на процесс инициации транскрипции [14, 15]. Поскольку MED комплекс является одним из основных компонентов транскрипции машин, большинство из субъединиц в ядре MED необходимы для эмбрионального роста и жизнеспособности клеток [16].
<Р> исследования секвенирования генома рака сообщили мутации или изменения в РНК компоненты аппарата транскрипции, содержащиеся в MED субъединиц, а также корреляции между некоторыми из этих изменений в MED субъединиц (MED1, MED12, MED19, MED23, MED28, CDK8 и циклин C) и прогрессирование рака было зарегистрировано для различных видов рака, хотя механизмы, ответственные за эти корреляции неизвестны [17].
<р> Недавно было сообщено о том, что MED19 может участвовать в прогрессии рака желудка, так как его нокдаун значительно ингибирует клеточную пролиферацию и емкость колонии-образование, и индуцированные фазы G1 клеточного цикла арест в двух желудочных человеческих клеточных линий рака (SGC7901 и MGC803) [18]. Тем не менее, функциональные роли и патологическая значимость других подразделений МЭР при раке желудка остаются неясными.
<Р> В настоящем исследовании, выявить функциональное значение MED30 во время прогрессирования рака желудка, мы исследовали его роль в пролиферации, миграции, вторжение и туморогенности клеток рака желудка. Перед тем как функционального обследования, мы проверили характер экспрессии MED30 в желудочном раковых клеток и тканей.
Материалы и методы
<р> желудочной линий раковых клеток (SNU1 , SNU16, SNU216, SNU620, SNU638 и N87) были приобретены у корейской клеточной линии Bank (Сеул). Клетки культивировали в RPMI 1640, дополненной 25 мМ HEPES, 10% фетальной бычьей сыворотки (ФБС), и 100 мкг /мл пенициллина /стрептомицина (1 × P /S), в атмосфере 5% СО <югу> 2, /95% воздуха при 37 ° С. Клетки трансфицировали с использованием миРНК DharmaFECT реагента 1 или 3 (Dharmacon, Lafayette, CO), в соответствии с инструкциями изготовителя. Последовательности миРНК были использованы следующим образом: MED30 миРНК (Bioneer, Тэджон, Корея), 5'-CGA GCA ACU СХУ UCC AUA U (dTdT) -3 ', 5'-ГПА GCC AAA UGG UGU CAC U (dTdT) - 3 ', и 5'-CGA GAA AUU ГПА GAA ГУА а (dTdT) -3'; вскарабкался (SCR) миРНК (Dharmacon, Lafayette, CO), 5'- ГАУ CCG CAA AAG AGC GAA A (dTdT) -3 '.
<р> Для того, чтобы построить MED30- над вектором экспрессии, мы использовали pLenti6.3-В5 /DEST лентивирусов вектор (Invitrogen, Carlsbad, CA). Если коротко, то MED30 кДНК клонировали в pLenti6.3-В5 /DEST вектора с помощью в естественных условиях
рекомбинации на основе шлюза системы клонирования (Invitrogen). Вектор донор (pDONR221), содержащий кодирующую последовательность MED30 (MED30 кДНК) был приобретен у фирмы Ultimate, ТМ ORF Клоны (Invitrogen) и рекомбинируют с противотоком выбираемые БДКК
гена вектора назначения шлюза pLenti6.3-В5 /DEST с использованием Clonase ферментной смеси LR (Invitrogen). Пустой вектор pLenti6.3 /V5-НАЗН использовали в качестве контроля макете. Рекомбинантные лентивирусов были произведены в 293FT клеток, и использовали для заражения SNU638 клеток в соответствии с инструкциями изготовителя (ViraPower Лентивирусов Expression System; Invitrogen). Стабильные клеточные линии были созданы путем селекции с бластицидин (7,5 мкг /мл) (Invitrogen).
ПЦР в реальном времени
<р> желудочные раковые ткани были получены после получения письменного информированного согласия пациентов, перенесших хирургическое резекция в Пусане Национальной университетской больнице или в Пусане национального университета Yangsan больницы. Исследование было одобрено Национальным советом Пусана университета Больница-Institutional Review (PNUH-IRB) и Национального совета Yangsan Пусана университета Больница-Institutional Review (PNUYH-IRB). Суммарную РНК экстрагировали из тканей или клеток с использованием тризола реагента (Invitrogen) или набору RNeasy Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA), в соответствии с инструкциями изготовителя. кДНК синтезируют с использованием обратной транскриптазы MMLV (Promega, Madison, WI), дНТФ и олиго-дТ праймеров. Последовательности праймеров, используемых были следующими: MED30, 5'- ACC GGT ТАА CAA AGC TAC AGG -3 '(смысловой) и 5'-ТАА GTT GCT CGA CTG GAA TGG G-3' (антисмысловой); CDH1, 5'- TGG GCC AGG AAA TCA CAT CC-3 'и 5'- CTC AGC CCG AGT GGA AAT GG-3'; CDH2, 5'- CAC TGT GGA GCC TGA ТГК CA-3 'и 5'- TCC CCA ATG TCT CCA GGG TG-3'; CDH3, 5'- CCC CCA GAA GTA CGA GGC CC-3 'и 5'- ACG CCA CGC TGA TGG GTT GG-3'; TWIST1, 5'- CGG GAG TCC GCA GTC TTA-3 'и 5'- TGG ATC TTG CTC AGC TTG TC-3'; TWIST2, 5'- СТТ ATG ТТТ GGG GGG AGG TT-3 'и 5'- TAG CCA AGC AAT CAC GGA GA -3'; ВИМ, 5'- TGA GTA CCG GAG ACA GGT GCA G-3 'и 5'- TAG CAG СТТ CAA CGG CAA AGT TC-3'; SNAI1, 5'- GAG GCG GTG GCA GAC TAG -3 'и 5'- GAC ACA TCG GTC AGA CCA G -3'; SNAI2, 5'- TAG GAA GAG ATC ТГК CAG AC-3 'и 5'- CCC CAA GGC ACA TAC TGT TA-3'; GAPDH, 5'- GCA GCC TCC CGC ТТС GCT CT-3 'и 5'- TGG TGA CCA GGC GCC CAA TAC G -3'. ПЦР в реальном времени проводили с использованием LightCycler TM 96 в режиме реального времени система PCR (Roche, Nutley, NJ, USA) с FastStart Essential ДНК Green Master (Roche) в соответствии с инструкциями изготовителя. GAPDH, был использован в качестве внутреннего контроля.
Вестерн-блот-анализ
<р> Клетки лизировали буфером RIPA, добавляли ингибитор протеаз, и концентрации белка определяли с использованием набора Bio-Rad Protein Assay ( Био-Рад, Геркулес, Калифорния). Образцы (80 мкг /лунку), подвергали SDS-PAGE, а затем переносили на мембраны ПВДФ. Анти-MED30 (1: 500, Protein Tech§87-1-AP, Чикаго, Иллинойс), анти-Е-кадгерин (1: 1000, BD Bioscienceɢ181, Сан-Хосе, Калифорния), анти-N-кадгерина (1 : 1000, BD Bioscienceɢ920), анти-P-кадгерин (1: 1000, BD Bioscienceɢ227), анти-Twist1 /2 (1: 750, Santa Cruz Biotechnology # SC-15393, Santa Cruz, CA), анти -vimentin (1: 1000, DAKO # M7020, Карпентария, Калифорния) и анти-β-актина (1: 2000, Santa Cruz Biotechnology # SC-47778) антитела разводили в 5% обезжиренным молоком и инкубируют с мембранами при температуре 4 ° с с ночевкой. Соответствующее вторичное антитело было применено (1: 2000, конъюгированного с пероксидазой хрена анти-мышь или анти-кролик) при комнатной температуре в течение 1 часа. Обнаружение Хемилюминесценция (GE Health Care, Little Chalfont, Соединенное Королевство) был использован для визуализации MED30, E-кадгерина, N-кадгерина, Р-кадгерина, Twist1, виментин и β-актина. Вестерн-блот-анализ проводили в трех повторностях.
Иммуногистохимия
<р> срезах тканей микрочипов, содержащих желудочные раковые ткани от больных, были получены из SuperBiochip (Сеул). Гистопатологические диагнозы были проведены в отделении патологии, Пусане Национального университетского госпиталя, а также клинико-патологический постановка была выполнена с использованием классификации TNM (AJCC, 7-е изд.). Все пациенты имели гистологически подтвержденный рак желудка, и образцы опухоли были проверены, чтобы гарантировать, что опухолевую ткань, состоящую более чем на 80% образцов. Для иммуногистохимии, слайды были депарафинировали и регидратации, обрабатывали 0,3% перекиси водорода в течение 30 мин для гашения эндогенной активности пероксидазы, и блокировали 10% нормальной сыворотки осла (NDS) и 1% БСА в 1 х фосфатно-буферным раствором (PBS). Срезы затем инкубировали в течение ночи при 4 ° С в блокирующем буфере, содержащем первичное антитело (анти-человеческий MED30; 1:50, Proteintech). Вторичное антитело (HRP-конъюгированные) связывание проводили при разведении 1: 200 в блокирующем буфере в течение 2 ч при комнатной температуре. Срезы затем окрашивают для HRP (Vector Laboratories) и контрастно гематоксилином окрашивания буфера (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури) в течение 1 мин. Процентное соотношение клеток, которые окрашиваются по MED30 в секции были определены и Срезы затем оцениваются с использованием шкалы 1-4 (1, &24; лт%; 2, 25-49%; 3, 50-74%; 4, 75-100% ). Интенсивности окрашивания клеток опухоли оценивались как 0, 1, 2 или 3, что соответствует базальной, слабой, умеренной и сильной соответственно. В целом окрашивание затем представлено композиционными баллов, которые были рассчитаны путем умножения этих двух классов. Соответственно, общая окрашивали оценивали от 0 до 12.
<р> Для изучения влияния миРНК на пролиферацию клеток рака желудка, питательные среды были заменены на 1% FBS среды одного день после трансфекции миРНК. Через пять дней после трансфекции добавляют 10 мкл Ez-Cytox (ITSBIO, Сеул) и клетки инкубировали в течение от 0,5 до 2 ч при нормальных условиях культивирования. Затем измеряли оптическую плотность при 450 нм с использованием ELISA-ридер (TECAN, Mannedorf, Швейцария). Для изучения влияния MED30 избыточной экспрессии, клетки были высеяны в 1% FBS среде. Через три дня после высева 10 мкл эз-Cytox был добавлен.
Бойден камеры анализ
<р> Нижняя камера из Transwell камеры была заполнена средой, содержащей 10% FBS. Через один день после трансфекции с яичницей (SCR), или MED30 миРНК, рака желудка клетки высевали в верхнюю камеру при плотности 5 × 10 5 клеток /мл в 50 мкл не содержащей сыворотки среде. Для изучения влияния MED30 избыточной экспрессии, клетки (фиктивные и MED30-над) высевали при плотности 1 × 10 5 клеток /мл. Для устранения распространения, связанных эффектов, митомицин С (0,01 мкг /мл, Sigma-Aldrich) добавляли. Клетки давали возможность мигрировать в течение четырех-шести часов. Мембраны затем фиксировали и окрашивали с помощью Diff-Quik раствора (Sysmex, Кобе, Япония) и промывают дистиллированной водой. Количество клеток в 10 случайным образом выбранных полей подсчитывали с помощью светового микроскопа.
<р> Способность клеток рака желудка вторгнуться исследовали с использованием 24-луночного Biocoat TM Матригель TM камерные вставки (BD Bioscience, Сан-Хосе, штат Калифорния, США). Верхняя поверхность вставок в инвазионных камерах покрывали 0,5 мг /мл фактора роста пониженной Матригель (BD Bioscience), а также на нижней поверхности с 0,5 мг /мл фибронектина (Sigma-Aldrich). Через один день после трансфекции с SCR или MED30 миРНК клетки высевали при плотности 5 × 10 4 клеток /мл в среде без сыворотки в 8 мкм пористую камеру вставками Biocoat Матригель и помещали в лунки заполнены 750 мкл в среде, дополненной 10% FBS в качестве хемоаттрактанту. Для изучения влияния MED30 избыточной экспрессии, клеток (фиктивных и MED30 сверхэкспрессией клеток) высевали при плотности 1 × 10 4 клеток /мл. Для удаления распространения ассоциированных эффектов добавляли митомицин С (0,01 мкг /мл, Sigma-Aldrich). После инкубации в течение 24 часов, не являющиеся вторгшиеся клеток на верхних поверхностях мембран удаляли путем соскоба. Вторгаясь клетки на нижних поверхностях фиксировали и окрашивали Diff-Quik раствором. Эксперименты проводились в трех экземплярах, и по меньшей мере 5 полей были подсчитаны на эксперимент.
ксенотрансплантата анализ
<р> SNU638 клетки трансфицировали SCR или MED30 миРНК. После 2-х дней, клетки собирали трипсином, промывали дважды PBS, и вводили подкожно (1 × 10 6 клеток в 100 мкл PBS) в тяжелый комбинированный иммунодефицит (SCID) мышей. Объемы опухолей рассчитывали каждую неделю от трех до семи недели недели после инъекции, используя следующую формулу: объем опухоли (мм 3) = ( а
× б
2 ) /2, где а
= длина в мм и б
= ширина в мм. В семь недель мышей умерщвляли и объемы опухолей и массы регистрировались. Этот эксперимент был выполнен в строгом соответствии с рекомендациями, приведенными в Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных, выданных Национальным институтом здравоохранения. Пусане национальный университет Институциональный Уход за животными и использование комитета (PNUIACUC) одобрил экспериментальный протокол.
Статистический анализ
<р> Результаты представлены как среднее значение ± SDs. Непараметрический Манна-Уитни U-тест или Т-тест Стьюдента (непарный) использовали для определения значимостей различий между средними значениями двух групп, а также один из способов был использован дисперсионный анализ (ANOVA) с последующим множественных сравнений Тьюки проанализировать три или более групп. * Обозначает P
значение &л; 0,05. Время выживания определяли как время, прошедшее между лечением и смертью или до получения последней задачей последующей информации. Метод Каплана-Мейера использовали для определения соотношения между выживанием и выражения MED30. Кривые сравнивали с помощью лог-рангового теста на уровне значимости 95%. P
значения &л; 0,05 считались статистически значимыми. Данные были проанализированы с помощью SPSS программного обеспечения версии 12.0 (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс, США).
Результаты
<р> Чтобы исследовать роль, которую играют по MED30 при раке желудка, мы сначала исследовали состояние экспрессии MED30 в опухолевых тканях 23 больных раком желудка. MED30 белок был найден широко избыточно экспрессируется в регионах раковой ткани (рис 1A-1D), и, очевидно, избыточно экспрессируется при вторжении клеток рака желудка (рис 1в) и в метастатических раковых клеток внутри пораженных лимфатических узлов (рис 1D). Для того, чтобы подтвердить наши результаты иммуногистохимии, мы провели количественный ПЦР в реальном времени на желудочных раковых тканей с использованием MED30-специфических праймеров. Как показано на рис 1F, DPY30 был избыточно экспрессируется в 10 случаях (10/23, 43%). Мы также исследовали характер экспрессии MED30 в желудочном линий раковых клеток с помощью ПЦР в реальном времени, и нашел, что это будет избыточно экспрессируется в пяти из желудка линий раковых клеток, протестированных (за исключением SNU1) по сравнению с нормальными тканями желудка (рис 1E). Для исследования корреляции между экспрессией MED30 и клиническими характеристиками, мы провели иммуногистохимии с использованием 41 образцов желудочного ткани рака (таблица 1). Интересно, что экспрессия MED30 положительно коррелировал с N стадии (рис 1G), но не с выживаемостью пациентов (данные не показаны).
Роль MED30 в пролиферации, миграции и инвазии рака желудка клеток <бр>
<р> Далее мы исследовали роль MED30 в пролиферации раковых клеток. Для анализа пролиферации проводили через 5 дней после трансфекции с SCR или MED30 миРНК. Нокдаун MED30 ингибирует пролиферацию всех раковых клеток желудка испытанных (SNU16, SNU216, SNU620 и SNU638) по сравнению с SCR на 18%, 68%, 98% и 42%, соответственно (рис 2D). Аналогичные результаты были получены, когда мы проводили анализ на пролиферацию двух или трех дней после трансфекции (данные не показаны). Последовательно, MED30 избыточная экспрессия усиливается наростов SNU216 и SNU638 клеток на 1,9 и 2,2 раза, соответственно, по сравнению с фиктивных ячеек.
<Р> Для определения роли MED30 в миграции клеток рака желудка, мы использовали камеру Бойдена анализ. Нокдаун MED30 снизилась ФБС-индуцированные миграции SNU216 и SNU638 клеток на 90% и 52%, соответственно, по сравнению с СКЛ трансфицированных клеток (фиг 3А и 3С). Кроме того, избыточная экспрессия MED30 увеличила FBS-индуцированной миграции SNU216 и SNU638 клеток на 3,2 и 2,8 раза, соответственно, по сравнению с фиктивных ячеек (рис 3B и 3C). Эти результаты привели нас исследовать роль MED30 во вторжении клеток рака желудка. В инвазии анализе Матригель, MED30 миРНК ингибирует ФБС-индуцированные инвазиях SNU216 и SNU638 клеток по сравнению с SCR миРНК на 64% и 47%, соответственно (Фиг.4А и 4С), а MED30 избыточная экспрессия ускорило ФБС-индуцированные инвазиях SNU216 и SNU638 клеток по сравнению с фиктивных ячеек в 2,5 и 2,2 раза соответственно (рис 4В и 4С).
туморогенность
<р> Для того, чтобы изучить влияние на MED30 опухолевого роста, мы вводили подкожно SNU638 клетки, трансфицированные SCR или MED30 миРНК в SCID мышей, а затем контролировать рост опухоли в течение семи недель (фиг.5А). Пальпации опухоли были выявлены в течение трех недель в стороны управления SCR. Тем не менее, раковые клетки, трансфицированные MED30 миРНК продемонстрировали более медленный рост. Через семь недель после инъекции мышей умертвили, и объемы опухолей и массы измерялись (фиг.5В и 5С). Результаты исследования показали, MED30 нокдаун значительно сократили объемы опухолей и массы.
Регулирование EMT пути от MED30
<р> Для того, чтобы определить механизм, лежащий в основе продвижения желудочного канцерогенеза MED30, мы исследовали паттерны экспрессии генов участвует в эпителиально-мезенхимальных перехода (EMT: ключевой процесс в метастаза и инвазии) путем ПЦР в реальном времени. Нокдаун MED30 слегка повысился уровень Е-кадгерина (CDH1) мРНК в SNU638 клетках по сравнению с SCR трансфекции, но снизились выражения N-кадгерина (CDH2), Р-кадгерина (CDH3) и виментин (ВИМ) на 42%, 36% , и 41%, соответственно (рис 6A). Последовательно, MED30 избыточная экспрессия пониженные уровни CDH1 мРНК на 35% по сравнению с фиктивных клеток, но увеличили выражения N-кадгерина (CDH2), Р-кадгерина (CDH3), твист семейство bHLH транскрипционный фактор 1 и 2 (TWIST1 /2), и виментину (ВИМ) в 2,9 раза, 3,3, 3,4, 2,4, 2,2 и 4,2 раза соответственно (фиг.6А). Уровни мРНК улитка семьи цинковый палец 1 и 2 (SNAI1 /2) не изменились. Затем мы подтвердили, что избыточная экспрессия MED30 также увеличили уровни белка Е-кадгерина, N-кадгерина, Р-кадгерина, Twist1 и виментину (рис 6б). Исследование морфологии клеток SNU638 показали, что избыточная экспрессия MED30 вызвала переход от булыжник, как к удлиненному фибробластами морфологией (рис 6C), в то время как MED30 нокдаун не изменяет морфологию (данные не показаны). Эти результаты свидетельствуют о том, что MED30 позитивно регулирует EMT.
Обсуждение
<р> Функциональные роли субблок MED30 MED (также известный как TRAP25) плохо изучены. В недавнем докладе MED30 было установлено, играет существенную роль в регуляции митохондриальных функций и целостности у гомозиготных мышей [19]. В настоящем исследовании мы рассмотрели функциональные роли MED30 во время прогрессии рака желудка. Было обнаружено MED30 регулируется пролиферацию, миграцию и инвазию клеток рака желудка и их В естественных условиях
туморогенность. После обеспечения нокдаун и эффективности избыточная экспрессия с помощью количественной ПЦР в реальном времени и вестерн-блот-анализа (рис 2), мы обнаружили, что MED30 нокдаун заметно подавлял пролиферацию, миграцию и инвазию клеток рака желудка, и что MED30 суперэкспрессия имели противоположные эффекты (рис 2-4). К тому же MED30 нокдаун снижается В естественных условиях
туморогенность (рис 5). Кроме того, мы также обнаружили, что MED30 был избыточно экспрессируется в раковых тканях желудка и желудочных линий раковых клеток (рис 1). Эти результаты свидетельствуют о том, что MED30 может играть важную роль в процессе патофизиологических желудка канцерогенеза.
<Р> Поскольку специфические субъединиц MED связаны с сигнальными активированных факторов транскрипции и РНК-полимеразы II (Pol II) [20] и функции, как трубопроводы и интеграторами для направляя различные сигнальные пути, такие как рецептор пути ядерного гормона (через MED1) [21], то TGF-β-сигнального пути (через MED12 или MED15) [22, 23] Wnt-сигнальный путь (через MED12) [ ,,,0],24], а сигнальный путь Ras-МАРК (через MED23) [25-27]. Было предложено, чтобы эти сигнальные пути могут индуцировать EMT [28-32], который, как известно, связаны с метастазирования, вторжения, пролиферации и химиорезистентности эпителиального рака [29, 33, 34]. Таким образом, мы спросили, вызывает ли MED30 EMT. MED30 побудила выражения EMT-родственных генов (N-кадгерин; CDH2, Р-кадгерина; CDH3, связанные с твист белок 1 и 2; TWIST1 /2, виментин; VIM), но ингибирует экспрессию E-кадгерина (CDH1) а известный супрессор опухоли (рис 6A и 6B). Кроме того, MED30 избыточная экспрессия индуцирует фибробластический морфологию (рис 6C), что говорит о MED30 запускает ЕМТ в желудочном раковых клеток.
<Р> Подводя итог, данное исследование подтверждает мнение, что MED30 действует как онкоген во время желудочного канцерогенеза и предлагает MED30 может регулировать EMT при раке желудка. Хотя необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить, каким образом MED30 триггеры EMT, наши результаты свидетельствуют о том, что MED30 считать новым молекулярной мишенью для лечения рака желудка.
Выражение признательности
<р> Эта работа была поддержана Bio &Amp; Программа Medical Technology Development (2012M3A9C6050213) и фундаментальных исследований научный фонд (2012R1A1A3010521) Национального исследовательского фонда (ПЗФ), финансируемой правительством Кореи (МЭПВ), а также за счет гранта Национального R &усилителя; D Программа по борьбе с раковыми заболеваниями, Министерство здравоохранения , социального обеспечения и по делам семьи, Республика Корея (0920050).
Микробы кишечника могут быть связаны с депрессией
Будут ли диеты на основе ДНК и персонализированные лечебные продукты - будущее для похудения?
Как укрепить свою иммунную систему для борьбы с коронавирусом
Микробиом человека сокращает гликаны слизистых оболочек,
Новый метод компьютерного моделирования предсказывает, как микробы кишечника меняются с течением времени
Женщины, рожденные с помощью кесарева сечения, имеют больший риск ожирения и диабета.
Правильно ли указаны уровни микробов на этикетках коммерческих кефирных продуктов?
Микробиом кишечника - важная часть человеческого организма, как это стало совершенно очевидно из множества исследований, проведенных за последние несколько десятилетий. Международная научная ассоциаци
Дырявый кишечник и микробный дисбактериоз могут способствовать цитокиновому шторму в тяжелых случаях COVID-19
По мере того, как мир приближается к мрачной вехе в три миллиона смертей от болезни COVID-19, новый препринт исследовательской работы размещен в bioRxiv * сервер показывает, что присутствие кишечных
Средиземноморская диета способствует здоровому старению с более здоровым микробиомом кишечника
Новое исследование опубликовано в журнале онлайн Кишечник в феврале 2020 года сообщается о поразительных оздоровительных эффектах перехода на средиземноморскую диету всего на один год. Результаты бы