Sažetak pregled
MED30 je bitan član posrednika kompleksa koji tvore središte između transkripcijskih aktivatora i RNA polimeraze II. Međutim, izrazi i uloge MED30 su slabo naznačen time raka. U ovoj studiji ispitali smo funkcionalne uloge MED30 tijekom želučanog napredovanja raka. Nađeno je da MED30 je izraženo u želučanom tkivu raka i stanične linije. Osim toga, prekomjerna ekspresija MED30 povećava proliferaciju, migraciju i invaziju stanica raka želučanog dok MED30 obaranje inhibirao ove efekte. Nadalje, obaranje značajno inhibiraju torn smjeru u SCID miševa. MED30 također promovira izrazi gena koji se odnose na prijelaz epitela-mezenhimalne i izazvali fibroblasta nalik morfologiju. Ova studija pokazuje MED30 ima patofiziološke uloge u proliferaciju, migraciju i invaziju želučanih stanica raka te predlaže da se MED30 treba promatrati kao moćan terapijski cilj za maligni karcinom želuca pregled
Citation: Lee YJ, Han ME, Baek SJ, Kim SY, oh tako (2015) MED30 regulira proliferaciju i pokretljivosti želučane stanica raka. PLoS ONE 10 (6): e0130826. doi: 10,1371 /journal.pone.0130826 pregled
Urednik: Aamir Ahmad, Wayne State University School of Medicine, Sjedinjene Američke Države pregled
Primljeno: 22. rujna 2014.; Prihvaćeno: 26. svibnja 2015; Objavljeno: 25. lipnja 2015 pregled
Copyright: © 2015 Lee et al. Ovo je otvoreno pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan pregled
Podaci Dostupnost: sve relevantne podatke su u radu pregled
Financiranje:. Ovaj rad je podržan od strane bio & Medicinski program Technology Development (2012M3A9C6050213) i Basic Science Research Foundation (2012R1A1A3010521) iz National Research Foundation (NRF) financiranog od strane korejske vlade (MONT) i bespovratna sredstva iz Nacionalnog R &D program za kontrolu raka, Ministarstvo zdravstva, socijalne skrbi i obiteljska pitanja, Republika Koreja (0920050). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled
U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled
Uvod pregled
rak želuca je jedan od vodećih uzroka smrti od karcinoma svijetu [1, 2]. Oko 95% želučanih karcinoma su adenokarcinomi iu epidemiološkim istraživanjima raka želuca je razvrstan po anatomskom mjestu kao i cardia /proksimalnog ili noncardia /distalnom [3], a po histološkoj fenotipa kao crijeva, difuzni ili mješovite /klasificirati kao što je opisano od strane Lauren [4 ]. Nadalje, bolesnici s proksimalnog karcinoma želuca imaju slabiju opstanak neovisno o TNM stadiju [5]. Helicobacter pylori infekcija pregled je pokazao da se uzročnik karcinoma želuca, osobito raka nalaze u distalnom želuca starijih muškaraca, koji su uglavnom u intestinalnom tipa. U novije vrijeme, nekoliko molekularne klasifikacije karcinoma želuca predložene su na temelju nalaza cijelog genoma ekspresije gena studija i /ili broj kopija gena studija [6-10]. Pregled regulaciji transkripcije je ključni korak koji kontrolira stanica identitet, rast, diferencijaciju i razvoj. Ljudski posrednik (MED) kompleksa, koji sadrži ~ 30 proteine, ključan je koaktivator /aktivator izrazima RNA polimeraze II (Pol II) -transcribed gene [11]. MED kompleks olakšava prije inicijacije kompleks (PIC) sklop interakcijom s Pol II i gena specifičnih faktora transkripcije (TFS), kao što je, TFIIA, TFIIB, TFIID, TFIIE, TFIIF i TFIIH [12, 13]. MED Kompleks se sastoji od tri različite strukturne submodule (osnovnim, srednjim i rep). Glava modul izravno komunicira s Pol II, dok je izdužena rep modul komunicira s gena specifičnih regulatornih proteina [12, 13], a srednji modul djeluje u regulatornom prijenos signala na post vežu fazi [13]. Iako mehanizam nije potpuno razumljiv, MED kompleks čvrsto veže na pol II, mijenja konformaciju i utječe na transkripciju inicijacijski postupak [14, 15]. Od MED kompleks je bitna komponenta transkripcije strojeva, većina podjedinica u jezgri MED su potrebni za embrionalnog rasta i vijabilnost [16]. Pregled Rak genoma sekvenciranja studije su izvijestili mutacije ili promjena u RNA komponente transkripcije strojeva koji se nalaze u MED podjedinica, te korelacije između neke od tih promjena u MED podjedinica (MED1, MED12, MED19, MED23, MED28, CDK8 i ciklin C) i napredovanja raka su izvijestili iz raznih vrsta raka, iako mehanizama odgovornih za ove korelacije su nepoznati [17]. pregled Nedavno je objavljeno da je MED19 mogu sudjelovati u želučanom progresije raka, kao njegov obaranje značajno inhibira proliferaciju stanica i sposobnost stvaranja kolonija, a izazvana G1 faze staničnog ciklusa uhićenje dva staničnih linija raka želuca (SGC7901 i MGC803) [18]. Međutim, funkcionalne uloge i patološki značaj ostalih MED podjedinica u rak želuca ostaje nejasno. Pregled U ovom istraživanju, da bi se otkrilo funkcionalnu važnost MED30 tijekom želučanog raka progresije, ispitali smo svoje uloge u proliferaciji, migracija, invazija i torn smjeru od želučanih stanica raka. Prije funkcionalnom ispitivanju, provjerili smo ekspresije uzorka MED30 u želučanim stanica i tkiva. Pregled Materijali i metode Stanične kulture i transfekcije pregled rak želuca stanične linije (SNU1 , SNU16, SNU216, SNU620, SNU638 i N87) kupljeni su od korejskog stanične linije banke (Seoul). Stanice su uzgajane u RPMI1640 uz dodatak 25 mM HEPES, 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS) i 100 ug /ml penicilina /streptomicina (1 × P /S) u 5% CO 2/95% zraka u 37 ° C. Stanice su transficirane s siRNA korištenjem DharmaFECT reagensa 1 ili 3 (Dharmacon, Lafayette, CO), u skladu s uputama proizvođača. Sekvence siRNA korištene su kako slijedi: MED30 siRNA (Bioneer, Daejeon, Koreja), 5'-CGA OKS Acu UAU UCC AUA u (dTdT) -3 ', 5'-GCU GCC AAA UGG UGU CAC U (dTdT) - 3 ', i 5'-GAA CGA AUU GCU GAA GUA a (dTdT) -3'; izokrenut (SCR) siRNA (Dharmacon, Lafayette, CO), 5'GAU CCG CAA AAG AGC GAA A (dTdT) -3 '. pregled MED30 pojačanom ekspresijom pregled Kako bi se izgraditi MED30- preko vektoru ekspresije, koristili smo pLenti6.3-V5 /Odred lentivirusnog vektor (Invitrogen, Carlsbad, CA). Ukratko, MED30 cDNA je kloniran u pLenti6.3-V5 /DEST vektora pomoću in vivo Real-time PCR Želučani tkiva raka dobiveni su nakon primitka pismene suglasnosti od pacijenata koji su operirani resekcija na Pusan National University Hospital ili Yangsan bolnice Pusan National University. Istraživanje je odobreno od strane Pusan National University Hospital-Institutional Review Board (PNUH-IRB) i Pusan National University Yangsan bolnica-Institutional Review Board (PNUYH-IRB). Ukupna RNA je ekstrahirana iz tkiva ili stanica pomoću Trizol reagensa (Invitrogen) ili RNeasy Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA), u skladu s uputama proizvođača. cDNA bila je sintetizirana pomoću MMLV reverzne transkriptaze (Promega, Madison, WI), dNTP i oligo-dT primera. Sekvence primere koji se koriste su sljedeći: MED30, 5'-ACC GGT TAA CAA AGC TAC AGG -3 '(osjećaj) i 5'-TAA GTT GCT CGA CTG GAA TGG G 3' (suprotnog smjera); CDH1, 5'TGG GCC AGG AAA TCA MAČKA CC -3 'i 5'-CTC AGC CCG AGT GGA AAT GG -3'; CDH2, 5'-CAC TGT GGA GCC TGA TGC CA -3 'i 5'-TCC CCA ATG TCT CCA GGG TG 3'; CDH3, 5'-CCC CCA GAA GTA CGA GGC CC -3 'i 5'-ACG CCA CGC TGG TGA GTT GG -3'; TWIST1, 5'CGG GAG TCC OKS GTC TTA -3 'i 5'TGG ATC TTG CTC AGC TTG TC -3'; TWIST2, 5'-CTT ATG TTT GGG GGG AGG TT -3 'i 5'-TAG CCA AGC AAT CAC GGA GA -3'; VIM, 5'-TGA GTA CCG GAG ACA GGT OKS G 3 'i 5'-TAG CAG CTT CAA CGG CAA AGT TC -3'; SNAI1, 5'-GAG GCG GTG OKS GAC TAG -3 'i 5'-GAC ACA TCG GTC AGA CCA G 3'; SNAI2, 5'-TAG GAA GAG ATC TGC CAG AC -3 'i 5'-CCC CAA GGC ACA TAC TGT TA -3'; GAPDH, 5'OKS GCC TCC CGC TTC GCT CT -3 'i 5'TGG TGA CCA GGC GCC CAA TAC G 3'. Real-time PCR je provedena korištenjem LightCycler TM 96 Real-time PCR sustav (Roche, Nutley, NJ, USA) sa FastStart Osnovni DNK Green Master (Roche), u skladu s uputama proizvođača. GAPDH je korišten kao unutarnje kontrole. Pregled Western blot analiza pregled Stanice su lizirane s RIPA puferom, dodan je koktel inhibitora proteaza, a koncentracije proteina određene su pomoću Bio-Rad protein assay kit ( Bio-Rad, Hercules, CA). Uzorci (80 | ig /jažica) su podvrgnuti SDS-PAGE i zatim preneseni na PVDF membrane. Anti-MED30 (1: 500, Protein Tech.787-1-AP, Chicago, IL), anti-E-kadherin (1: 1000, BD Bioscienceɢ.181, San Jose, CA), anti-N-kadherina (1 : 1000, BD Bioscienceɢ,92 tisuće), anti-P-kadherina (1: 1000, BD Bioscienceɢ.227), anti-Twist1 /2 (1: 750, Santa Cruz Biotechnology # sc-15.393, Santa Cruz, CA), anti -vimentin (1: 1000, DAKO # M7020, Carpentaria, CA) i anti-β-aktin (1: 2000, Santa Cruz Biotechnology # sc-47.778) antitijela su razrijeđena u 5% obranim mlijekom i inkubiraju s membranama na 4 ° C, preko noći. Odgovarajući sekundarno antitijelo je primijenjena (1: 2000, peroksidaza konjugirani anti-mišji ili anti-zečji) na sobnoj temperaturi 1 sat. Otkrivanje chemiluminescence (GE Health Care, Little Chalfont, Ujedinjeno Kraljevstvo) se koristi za vizualizaciju MED30, E-kadherina, N-kadherina, P-kadherina, Twist1, vimentin i β-aktin. Western blot analiza je provedena u triplikatu. Pregled Imunohistokemija pregled tkiva MicroArray Isječci koji sadrže želučanog tkiva raka od pacijenata su dobiveni od SuperBiochip (Seoul). Tireoidektomija dijagnoze izvode se na Zavodu za patologiju, Pusan National University Hospital, te kliničko inscenacije je izvedena na temelju klasifikacije TNM (AJCC, 7. ur.). Svi bolesnici histološki potvrdila rak želuca, te uzorci tumora su provjerene da se osigura je tumor sastavljen od više od 80% od uzoraka. Za imunohistokemiju stakalca su deparafmizirani i rehidrirane, tretira se sa 0,3% -tnim vodikovim peroksidom na 30 minuta kako bi se zaustavila Aktivnost endogene peroksidaze i blokirane s 10% normalnog seruma tovara (NDS) i 1% BSA u 1 × slanom otopinom puferovanom fosfatom (PBS). Rezovi su inkubirani preko noći na 4 ° C u puferu za blokiranje koji sadrži primarni protutijela (anti-ljudski MED30, 1:50, Proteintech). Sekundarna protutijela (HRP-konjugirani), vezanje se provodi pri razrjeđenju od 1: 200 u puferu za blokiranje tijekom 2 sata na sobnoj temperaturi. Rezovi su zatim obojene HRP (Vector Laboratories) uz kontrastnu boju hematoksilin bojenje pufera (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) kroz 1 min. Postoci obojenim stanicama na MED30 u odjeljcima su određena i sekcije su zatim ocijenjena koristeći skala 1-4 (1, < 24%, 2, 25-49%, 3, 50-74%, 4, 75-100% ). Intenzitet bojenja tumorskih stanica su klasificirani kao 0, 1, 2, ili 3, što odgovara bazalnih slaba, umjeren i jake redom. Sveukupno bojenje tada je zastupao kompozitnih rezultate, koji su izračunati množenjem ove dvije ocjene. Prema tome, ukupna obojeni ocijenjena od 0 do 12. pregled Test stanične proliferacije pregled Da bi ispitali učinak siRNA na proliferaciju stanica želuca raka, medij kulture zamijenjen s 1% FBS srednje jedan dan nakon siRNA ubacivanja. Pet dana nakon transfekcije, doda se 10 ul Ez-Cytox (ITSBIO, Seoul) i stanice su inkubirane kroz 0.5 do 2 sata pod normalnim uvjetima kultiviranja. Zatim se apsorbancija pri 450 nm upotrebom ELISA čitača (TECAN, Mannedorf, Švicarska). Ispitati učinak MED30 prekomjernom ekspresijom, stanice su posađene u 1% FBS medijem. Dodan je tri dana nakon zasijavanja 10 ul Ez-Cytox. pregled Boyden Test komora pregled Dno komore od prerastanja dvorana je bila ispunjena medij koji sadrži 10% FBS. Jedan dan nakon transfekcije kodirana (SCR) ili MED30 siRNA, želučanih kancerozne stanice su nasađene na gornju komoru u gustoći od 5 × 10 5 stanica /ml u 50 ul medija bez seruma. Ispitati učinke MED30 prekomjernom ekspresijom, stanice (lažno i MED30-over) nasađene su pri gustoći 1 × 10 5 stanica /ml. Eliminirati proliferacije povezane posljedice, mitomicin C (0,01 ug /ml, Sigma-Aldrich) je dodan. Stanice su ostavljene da migriraju tijekom četiri ili šest sati. Membrane su zatim fiksirane i obojene korištenjem Diff-Quik otopina (Sysmex, Kobe, Japan) i ispere s destiliranom vodom. Broj stanica u 10 nasumično izabranim poljima izbrojene su pomoću svjetlosnog mikroskopa. Pregled Matrigelovu invaziju Test pregled Sposobnost želuca stanica raka da napadnu istraživana je u 24-i Biocoat TM Matrigel TM komora umeci (BD bioznanosti, San Jose, CA, USA). Gornja površina umetka u invazije komore bile su obložene s 0,5 mg /ml faktora rasta sniženim Matrigel (BD Bioscience) i donje površine s 0,5 mg /ml fibronektina (Sigma-Aldrich). Jedan dan nakon transfekcije s SCR ili MED30 siRNA, stanice su nasađene u gustoći od 5 × 10 4 stanica /ml u mediju bez seruma u 8-p.m porozne Biocoat Matrigel komornim pločicama, i smještene u jažice ispunjen sa 750 ul u mediju s 10% FBS kao kemoatraktant. Ispitati učinke MED30 nadekspresije, stanice (lažno i MED30-ekspresirane stanice) nasađene su pri gustoći 1 × 10 4 stanica /ml. Ukloniti proliferacije povezano učinke, dodan je mitomicin C (0,01 ug /ml, Sigma-Aldrich). Nakon inkubacije od 24 sati, ne-invaziju stanica na gornje površine membrane su uklonjene struganjem. Invazivnih stanica na donjoj strani su fiksirane i obojene Diff-Quik rješenje. Eksperimenti su provedeni u triplikatu, i najmanje 5 polja su izbrojani po eksperimentu. Pregled Ksenograft test pregled SNU638 Stanice su transficirane s SCR ili MED30 siRNA. Nakon 2 dana, stanice su skupljene tripsinizacijom, ispere dva puta s PBS, te se subkutano (1 × 10 6 stanica u 100 ul PBS) u ozbiljno kombiniranom imunodeficijencijom (SCID) miševa. Volumen tumora je izračunat svaki tjedan od tri tjedna u tjedan sedam nakon ubrizgavanja primjenom sljedeće formule: volumen tumora (mm 3) = ( A pregled × b pregled 2 ) /2, gdje je a pregled = duljina u mm i b pregled = širina u mm. U sedam tjedana, miševi su žrtvovani, a zabilježene su volumeni tumora i težine. Ovaj eksperiment je proveden u skladu sa strogim preporukama u Vodiču za njegu i korištenje laboratorijskih životinja izdanih od strane Nacionalnog instituta za zdravlje. Pusan National University Institucionalni Animal Care and Use odbor (PNUIACUC) odobrio je eksperimentalni protokol. Pregled Statistička analiza pregled Rezultati su prikazani kao srednje vrijednosti ± SDS-a. Neparametrijski Mann-Whitney U-testa ili na t-test (pojedinačna) korištena je za određivanje značajnosti razlika između srednjih vrijednosti dvije skupine, a jedan od načina je korištena analiza varijance (ANOVA), nakon čega slijedi Tukey je višestruke usporedbe analizirati tri ili više skupina. * Označava P Rezultati Prekomjerna ekspresija MED30 u želučani tkiva raka Da bi istražili ulogu igrao by MED30 kod raka želuca, prvo smo ispitali status ekspresije MED30 u tumorskim tkivima 23 bolesnika s rakom želuca. MED30 protein je utvrđeno da se široko izraženo u kancerogenih području tkiva (Slika 1A-1D), te je očito izraženo u invaziju želučane stanice raka (Slika 1C) i metastatskih stanica karcinoma unutar zahvaćenih limfnih čvorova (Slika 1D). Da bismo potvrdili naše rezultate imunohistokemijske proveli smo kvantitativno realnom vremenu PCR na želučanog tkiva raka koriste MED30-specifične početnice. Kao što je prikazano na slici 1F, DPY30 je izraženo u 10 slučajeva (10/23, 43%). Također smo ispitali ekspresije uzorka MED30 u želučanom staničnim linijama karcinoma u realnom vremenu PCR, i pronašao da se izraženo u pet od želučanog karcinoma ispitanih staničnih linija (osim SNU1), u usporedbi normalnim želučanog tkiva (Slika 1 E). Da bi istražili povezanost MED30 izražavanja i kliničke karakteristike, proveli smo imunohistokemija pomoću 41 uzoraka rak želuca tkiva (tablica 1). Zanimljivo je da je izraz MED30 je pozitivno korelirana s N fazi (Slika 1G), ali ne i preživljavanje pacijenta (podaci nisu prikazani). Pregled Uloge MED30 u proliferaciju, migraciju i invaziju želučanih stanica raka Kako bi se ispitala uloga MED30 u želučanom karcinogeneze, ispitali smo učinke MED30 obaranje ili pojačane ekspresije na proliferaciju, migraciju i invaziju na šest želučanih staničnim linijama karcinoma u (SNU1, SNUI16, SNU216, SNU620, SNU638 i NCI -N87 stanice). Real-time PCR i Western blot su korišteni za analizu obaranje i izražajnost MED30 u SNU216 i SNU638 stanica (Sl 2A-2C). Kada su te stanice su transfektirane s MED30 siRNA (100 nM), MED30 ekspresiju smanjena na razini proteina i mRNA od oko 80% nakon dva dana u odnosu SCR siRNA i MED30 prekomjernom ekspresijom pomoću cDNA transfekcija povećava MED30 mRNA i proteina u odnosu na praznu kontrolne vector- transfektirane stanice (lažna stanica) s više od 3 puta. pregled sljedeći ispitati ulogu MED30 u proliferaciju stanica raka. Proliferacije analize izvršene su 5 dana nakon transfekcije s SCR ili MED30 siRNA. Obaranje MED30 inhibiran proliferacija svih stanica raka želuca (testiranih SNU16, SNU216, SNU620 i SNU638), u usporedbi SCR od 18%, 68%, 98% i 42%, pojedinačno (Slika 2D). Slični su rezultati opaženi kada se izvodi proliferacije dva ili tri dana nakon transfekcije (podaci nisu prikazani). Dosljedno, MED30 prekomjerna ekspresija pojačan izrasline od SNU216 i SNU638 stanice 1,9 i 2,2 puta, odnosno, u odnosu na lažno stanica. Pregled Da bi se odredila ulogu MED30 u migraciji želučanih stanica raka, koristili smo Boyden komora test. Obaranje MED30 smanjio FBS-inducirane migracije SNU216 i SNU638 stanica za 90% i 52%, respektivno, u odnosu na SCR inficiranim stanicama (slika 3A i 3C). Štoviše, MED30 prekomjerna ekspresija povećana FBS-inducirane migracije SNU216 i SNU638 stanica na 3,2 i 2,8 puta, odnosno, u odnosu na lažno stanica (Slika 3b i 3c). Ovi rezultati doveli nas da ispita ulogu MED30 u invaziji želučanih stanica raka. Na invaziju u Matrigel pokus, MED30 siRNA inhibirana FBS-inducirane invazije u SNU216 i SNU638 stanice prema SCR siRNA 64% i 47%, pojedinačno (Slika 4A i 4C) i MED30 hiperekspresija ubrzanog FBS-inducirane invazije u SNU216 i SNU638 stanicama u odnosu na lažno stanica za 2,5 i 2,2 puta, odnosno (slika 4b i 4c). pregled utjecaj MED30 obaranje na In vivo pregled torn smjeru pregled Da bi ispitali učinak MED30 na rast tumora, mi subkutano injektira SNU638 stanice transficirane sa SCR ili MED30 siRNA u SCID miševa, te prati rast tumora sedam tjedana (Slika 5A). Opipljiv tumori otkriveni su u roku od tri tjedna u kontrolnim strane SCR. Međutim, stanice raka transfektirane s MED30 siRNA izlagao sporiji rast. Sedam tjedana nakon injekcije, miševi su žrtvovani, a volumeni tumora i težine izmjerene su (Slika 5b i 5c). Rezultati su pokazali MED30 obaranje značajno smanjena volumena tumora i težine. Pregled Regulacija EMT puta po MED30 pregled Da bi se odredio mehanizam u pozadini promociju želučanog karcinogeneze strane MED30, istražuju se izraz uzoraka gena uključen u epitelni-mezenhimalne prijelaz (EMT: ključni proces u metastazama i invaziji) u realnom vremenu PCR. Obaranje MED30 neznatno povećao razinu E-kadherina (CDH1) mRNA u SNU638 stanice prema SCR transfekcije, ali smanjio izraze N-kadherina (CDH2), P-kadherina (CDH3) i vimentin (VIM) za 42%, 36% i 41%, pojedinačno (Slika 6A). Dosljedno, MED30 prekomjerna ekspresija smanjena razina CDH1 mRNA za 35% u odnosu na lažno stanica, ali je povećao iskaza N-kadherina (CDH2), P-kadherina (CDH3), twist obitelj bHLH transkripcijski faktor 1 i 2 (TWIST1 /2), a vimentin (VIII) za 2,9, 3,3, 3,4, 2,4, 2,2, i 4,2 puta, odnosno (Slika 6A). Razine mRNA puž obitelji cinka prstu 1 i 2 (SNAI1 /2) su nepromijenjeni. Mi smo tada je potvrdio da MED30 pojačana ekspresija također povećana razina proteina E-kadherina, N-kadherina, P-kadherina, Twist1 i vimentin (Slika 6b). Uvidom u morfologiji SNU638 stanica otkrila da MED30 pojačana ekspresija izazvao prijelaz s cobblestone nalik na produljenom fibroblasta kao i morfologiji (Slika 6C), dok MED30 obaranje ne mijenja morfologiju (podaci nisu prikazani). Ovi rezultati ukazuju na to da MED30 pozitivno regulira EMT. Pregled Rasprava pregled funkcionalne uloge podjedinice MED30 MED (također poznat kao TRAP25) slabo razumio. U nedavnom izvješću, MED30 je utvrđeno da igraju značajnu ulogu u reguliranju mitohondrijske funkcije i integriteta u homozigotnom miševa [19]. U ovom istraživanju, ispitali smo funkcionalne uloge MED30 tijekom želučanog napredovanja raka. Utvrđeno je MED30 regulira proliferaciju, migraciju i invaziju želučanih stanica raka i njihovo in vivo pregled torn smjeru. Nakon osiguravanja obaranje i učinkovitost Prekomjerna ekspresija kvantitativnom realnom vremenu PCR i Western blot analize (Slika 2), otkrili smo da MED30 obaranje znakovito potisnuti proliferaciju, migraciju i invaziju želučanih stanica raka, te da MED30 pojačana ekspresija imali suprotne učinke (Sl 2-4). Štoviše MED30 obaranje smanjena In vivo pregled torn smjeru (slika 5). Osim toga, mi također otkrili da MED30 je izraženo u želučanog tkiva raka i rak želuca staničnih linija (slika 1). Ovi rezultati ukazuju da bi MED30 igraju važne uloge u patofiziološke želuca karcinogeneze. Pregled S obzirom da se specifični MED podjedinica povezana sa signalnim aktivirani tanskripcijskih faktora i RNA polimerazom II (Pol II) [20] i djeluju kao cijevi te integratora za kanaliziranje različitih signalnih putova, kao što je, na receptor puta nuklearna hormona (preko MED1) [21], TGF-β-signalnog puta (preko MED12 ili MED15) [22, 23] je Wnt signalnog puta (preko MED12) [ ,,,0],24], a Ras-MAPK signalnog puta (preko MED23) [25-27]. Predloženo je da se ove signalne staze mogu inducirati EMT [28-32], koje je poznato da je povezan s metastazama, invazije, proliferaciju i kemijska otpornost epitelnog raka [29, 33, 34]. Stoga smo pitali da li MED30 aktivira EMT. MED30 izazvana iskaza EMT-vezanih gena (N-kadherina, CDH2, P-kadherina, CDH3, obrat povezan protein 1 i 2; TWIST1 /2, vimentin, VIM), ali inhibira ekspresiju E-kadherina (CDH1) a poznato tumorski supresor (Slika 6A i 6B). Nadalje, MED30 prekomjerna ekspresija inducira fibroblasta nalik morfologiju (slika 6c), što upućuje MED30 aktivira EMT u želučanim stanicama raka. Pregled Rezimirajući, ova studija podupire ideju da MED30 djeluje kao onkogena u želučanom karcinogeneze i predlaže MED30 može regulirati EMT u raka želuca. Iako su daljnja istraživanja potrebna kako bi se utvrdilo kako MED30 aktivira EMT, naši rezultati pokazuju da MED30 se smatrati novom molekularna meta za liječenje karcinoma želuca. Pregled Priznanja Ovaj rad je podržan od strane Bio & Medicinski program Technology Development (2012M3A9C6050213) i Basic Science Research Foundation (2012R1A1A3010521) iz National Research Foundation (NRF) financiranog od strane korejske vlade (MONT), a bespovratna sredstva iz Nacionalnog R &D program za kontrolu raka, Ministarstvo za zdravstvo , skrbi i obitelji, Republika Koreja (0.920.050). pregled
rekombinacije-based sustav za Gateway za kloniranje (Invitrogen). Donator vektor (pDONR221) koji sadrži kodirane sekvence MED30 (MED30 cDNA) je kupljen od Ultimate TM ORF Klonovi (Invitrogen), te recombined s ccdB suprotnom može birati
gena Gateway odredište vektora pLenti6.3-V5 /DEST pomoću LR clonase enzima smjesu (Invitrogen). Prazan vektor pLenti6.3 /V5-DEST je korišten kao tobožnje kontrolom. Rekombinantni lentivirusi su proizvedene u 293FT stanica i koristi se za infekciju SNU638 stanica prema instrukcijama proizvođača (ViraPower lentivirusne Expression System; Invitrogen). Stabilne stanične linije su postavljene po izboru s blasticidin (7,5 ug /ml) (Invitrogen). Pregled
vrijednost < 0.05. Vrijeme preživljavanja je definirano kao vrijeme koje je prošlo između liječenja i smrti, ili dok se zadnji cilj praćenje informacija se dobiva. Kaplan-Meier postupak se koristi za određivanje odnosa između opstanak i MED30 izražavanja. Krivulje su uspoređeni pomoću log-rank testa na razini signifikantnosti od 95%. P
vrijednosti 0,05 smatrane su statistički značajnima. Podaci su analizirani pomoću SPSS verzija softvera 12.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Pregled